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TLR2和TLR4在抗病毒天然免疫应答中的新作用
越来越多的研究表明TLR2和TLR4参与宿主细胞抗病毒感染的天然免疫应答,为了进一步了解TLR2和TLR4的新作用,本文重点归纳TLR2和TLR4的细胞定位、活化的信号途径和介导的细胞因子反应及其共受体,详细总结TLR2和TLR4识别的病毒及介导的抗病毒天然免疫应答,指出TLR2与TLR4互作的新方式,旨在为宿主抗病毒感染的新机制提供新思路.
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益生菌干预对患坏死性小肠结肠炎早产儿胃肠激素、炎症介质及Toll样受体4表达水平的影响分析
目的 分析益生菌对患坏死性小肠结肠炎(NEC)早产儿炎症介质、胃肠激素与Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 选取我院收治的患NEC早产儿60例,出生时体重均低于1500g,随机分成益生菌组与常规组各30例.常规组予以常规抗感染,益生菌组在常规组基础上给予益生菌口服,取30例健康足月儿为对照组,比较两组患NSE早产儿的治疗效果,并分析三组的炎性指标、胃肠激素、免疫功能水平与TLR4表达水平.结果 ①有效率:益生菌组为93.33％,常规组为70.00％,益生菌组疗效优于常规组,两组对比差异有统计学意义(P＜0.05);②益生菌组治疗后的胃泌素、胃动素水平上升,均比常规组高,对比差异有统计学意义(P＜0.05);③两组治疗前的TLR4呈现为高表达,均高于对照组(P＜0.05),益生菌组治疗后的TLR4表达下降,低于常规组,组别间差异具有统计学意义(P＜0.05);④两组治疗前的免疫功能较弱,比对照组低(P＜0.05),益生菌组于治疗后各项免疫功能水平显著提升,高于常规组,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);⑤两组治疗前的炎性水平较高,与对照组比较差异存在统计学意义(P＜0.05),经治疗,益生菌组的IL-1β、IL-10、TNF-α水平下降,且小于常规组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过对患NEC早产儿补充益生菌,有利于降低炎性水平,提升免疫功能,调节胃肠激素,改善TLR4高表达状态,值得临床推广.
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右美托咪定通过Toll样受体4减轻小鼠肺缺血/再灌注损伤
目的 探讨盐酸右美托咪定(Dex)对小鼠肺缺血/再灌注损伤(LIRI)的保护作用机制.方法 将野生型( WT)和Toll样受体4敲除(TLR4-/-) C57BL/6雌鼠,随机分为:假手术组(S组)、LIRI组(I/R组)、0.9% NaCl组(NS组)和Dex 干预组( D 组).肺组织 HE 染色;RT-qPCR 检测肺组织 TLR4 mRNA 的表达;ELISA 检测肺组织中TNF-ɑ、IL-6和IL-1β(WT和TLR4--)水平;Western blot检测肺组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体表达量.结果 Dex明显改善WT小鼠肺缺血/再灌注病理损伤,显著降低其肺组织中TLR4表达和多种前炎性因子的产生(P＜0.01),抑制NLRP3炎性小体的产生和活化(P＜0.01).但是在TLR4--小鼠中未观察到对各种炎性因子的抑制作用.结论 Dex可通过抑制TLR4的表达,减少前炎性因子释放和NLRP3炎性小体的形成与活化,达到保护LIRI的作用.
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LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化
目的：研究脂多糖（LPS）激活的Toll样受体4（TLR4）信号对骨形态发生蛋白9（BMP9）诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞（iMEFs）成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4／NF-κB信号通路的激活；LPS，BAY11-7082和BMP9处理iMEFs，ALP染色和活性检测iMEFs早期成骨分化能力；茜素红S染色检测晚期成骨分化能力；半定量PCR和Western blot检测晚期成骨基因OCN和OPN表达；Western blot 检测Smad1／5／8磷酸化水平；半定量PCR和Western blot检测成骨关键转录因子Runx2和Dlx5的表达。结果 LPS成功激活TLR4／NF-κB信号通路；LPS抑制BMP9诱导的ALP染色和活性（ P＜0.01）、钙盐沉积、OCN的mRNA和蛋白质表达（ P＜0.05）、OPN的mRNA （ P＜0.01）和蛋白质（ P＜0.05）表达、Smad1／5／8信号通路激活（ P＜0.01）、Runx2的mRNA和蛋白质表达（ P＜0.05）、Dlx5的mRNA（P＜0.01）和蛋白质（P＜0.05）表达，BAY11-7082可以部分逆转LPS的抑制作用（P＜0.05）。结论 LPS激活TLR4可以通过NF-κB信号通路抑制BMP9诱导的iMEFs成骨分化。
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熊果酸减轻LPS诱导的THP-1细胞损伤
目的 探讨熊果酸减轻脂多糖诱导的THP-1细胞损伤的作用及其机制.方法 以脂多糖诱导的THP-1炎性细胞为模型,MTT法检测不同浓度的熊果酸(0.1、1、5、10、20、40和80 μmol/L)对细胞增殖的影响,RT-PCR法检测TLR4、MCP-1和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测MCP-1和IL-6表达,Western blot法检测P65、磷酸化P65蛋白表达,荧光素酶报告系统检测核转录因子κB (NF-κB)活性.结果 与对照组比较,LPS作用组能显著增高MCP-1、TLR4、IL-6 mRNA和MCP-1、IL-6、P65、磷酸化P65蛋白的表达并上调NF-κB活性(P＜0.05);与LPS单独作用组比较,熊果酸(1和5μmol/L)干预组能够显著降低MCP-1、TLR4、IL-6mRNA和MCP-1、IL-6表达水平并下调NF-κB活性(P＜0.05).结论 熊果酸可能是通过下调NF-κB活化减轻脂多糖诱导的THP-1细胞的损伤.
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重组约氏疟MIF对小鼠BM-DC细胞表型与功能的影响
目的 探索约氏疟原虫来源重组巨噬细胞迁移抑制因子(PyMIF)对小鼠骨髓树突状细胞(BM-DC)表型和功能的影响.方法 分离小鼠骨髓细胞,并经GM -CSF和IL-4诱导,培养得到BM-DC;经PyMIF刺激后,流式细胞术检测其TLR2、TLR4、CD80、CD86、CD40和MHCⅡ分子表达,ELISA方法检测IL-12和IL-10分泌；经PyMIF刺激的BM-DC与CD4+T或CD8+T细胞共培养,检测T细胞CD69表达和IL-2分泌情况,并检测CD8+T细胞对靶细胞杀伤能力.结果 PyMIF可下调小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4的表达(平均荧光强度标准化后比值由1±0.001下降到0.81±0.02,P＜0.05)；但不能影响BM-DC细胞表面分子TLR2、CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达,也不改变BM -DC分泌IL-12及IL-10的功能.与PyMIF刺激的BM-DC共孵育后,CD8+T的CD69表达下降(平均荧光强度标准化后比值由2.6±0.8下降到2.0±0.7,P＜0.05),但未改变CD4+T细胞CD69表达、IL-2分泌,及CD8+T细胞IL-2分泌.结论 PyMIF可能是通过下调BM-DC细胞TLR4表达来抑制免疫细胞对疟原虫的识别,使之逃逸机体的攻击而存活.
关键词： 约氏疟来源巨噬细胞迁移抑制因子 骨髓树突细胞 TLR4 CD69 -
壳寡糖对脂多糖诱导肠上皮细胞炎症的保护作用
目的：研究壳寡糖对脂多糖（LPS）诱导肠上皮细胞炎症的影响。方法肠上皮细胞Caco?2分为5组：正常对照组、模型组、壳寡糖高、中、低浓度组。以1μg/L LPS刺激细胞48h建立炎症模型。药物干预组于LPS刺激前2 h，分别以0.25，0.5和1.0 g/L壳寡糖预处理细胞。MTT法检测细胞活力。以ELISA法检测培养上清中炎症相关因子肿瘤坏死因子（TNF）?α，白介素（IL）?8和前列腺素（PG）E2水平。以Western印迹法检测细胞Toll样受体（TLR）4、核因子κB（NF?κB）及环氧酶（COX）2的表达变化。结果壳寡糖和/或LPS处理后Caco?2细胞存活率不受影响。与模型组相比，壳寡糖在0.25，0.5和1.0 g/L剂量下呈浓度依赖性地降低Caco?2细胞TNF?α（352.5±21.6，298.4±25.1，203.4±20.0 vs 436.8±38.7μg/L）和PGE2的释放（632.2±35.6，522.6±26.7，402.4±30.2 vs 822.3±23.5μg/L）（P<0.05；P<0.01），0.5和1.0 g/L壳寡糖可降低细胞COX?2表达水平（P<0.05；P<0.01）。壳寡糖中、高浓度组TLR4表达明显低于模型组（P<0.05），壳寡糖各剂量组NF?κB的表达水平显著降低（P<0.05；P<0.01）。结论壳寡糖可对抗LPS诱导的肠上皮细胞炎症，对炎性肠病具潜在保护作用。作用机理可能与TLR4\NF?κB信号通路抑制有关。
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华支睾吸虫感染FVB小鼠不同组织CD4+T细胞TLR4表达变化
目的 观察华支睾吸虫感染小鼠不同组织CD4+ T细胞TLR4的表达变化. 方法 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,分别在感染2、4、8周剖杀小鼠,收集外周血、肝脏和脾脏组织并分离其单核细胞,运用流式细胞术检测CD4+T细胞TLR4表达水平变化. 结果 小鼠感染华支睾吸虫2周后,外周血、肝脏、脾脏CD4+T细胞TLR4表达水平显著高于正常对照组(t值分别为5.87,6.59,4.46,P＜0.05),感染4周时肝脏和外周血TLR4表达量达到了峰值,随后下降,但到8周时其表达量仍高于正常对照组(t值分别为8.93,17.17,P＜0.05);脾脏细胞TLR4表达量随着感染时间的延长其表达量逐渐升高,到8周时TLR4表达量高于4周TLR4表达量(t=5.83,P＜0.05). 结论 FVB小鼠感染华支睾吸虫后CD4+T细胞TLR4表达水平升高,且随着感染的持续,不同组织TLR4表达水平不同,提示高表达的TLR4在宿主抵抗华支睾吸虫感染及致病中发挥一定作用.
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TLR2和TLR4激动剂对人脐血CD34+细胞迁移能力的影响
本研究旨在探讨Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)和TLR4激动剂对人脐血CD34+细胞迁移功能的影响及其机制.采用流式细胞术检测脐血CD34+细胞表面TLR2和TLR4的表达情况;用趋化实验和黏附实验观察PAM3CSK4(TLR2激动剂)和LPS(TLR4激动剂)对人脐血CD34+细胞的迁移活性和黏附活性的影响.结果表明:人脐血CD34+细胞表面表达TLR2(14.2±3.8)%和TLR4(19.6±4.1)%.与对照组相比,LPS可明显抑制SDF-1诱导的CD34+细胞的趋化作用(p<0.01),但LPS对CD34+细胞的黏附能力,以及PAM3CSK4对CD34+细胞的趋化和黏附能力均无明显影响.进一步研究显示,LPS对CD34+细胞表面CXCR4的表达无明显影响,但可明显抑制CD34+细胞的自发迁移作用(p<0.05).结论:TLR4的活化可显著降低SDF-1诱导CD34+细胞的趋化功能,这可能与其抑制CD34+细胞的自发迁移作用具有一定的关系.
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TLR2和TLR4激动剂对人骨髓来源的间充质干细胞迁移能力的影响
本研究探讨Toll样受体2(Toll-like receptors2,TLR2)和TLR4激动剂对人骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)迁移能力的影响及其机制.采用流式细胞术检测MSC表面TLR2和TLR4的表达情况,应用趋化实验和黏附实验观察PAM3CSK4(TLR2激动剂)和LPS(TLR4激动剂)对人骨髓来源的MSC的趋化活性和黏附活性的影响.结果表明,人骨髓来源的MSC表面表达TLR2 (24.5±3.2)％和TLR4(91.3±5.2)％.与对照组相比,PAM3CSK4可明显抑制SDF-1诱导的MSC的趋化作用,并增强MSC的黏附作用;而LPS对MSC的趋化和黏附能力均无明显影响.进一步研究显示,PAM3CSK4可呈剂量依赖性抑制MSC的自发迁移作用,但对MSC表面CXCR4的表达无明显影响.结论:TLR2的活化可显著抑制MSC的迁移能力,这可能与其抑制MSC的自发迁移和增强MSC的黏附作用具有一定的关系.
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TLR2和TLR4活化的骨髓间充质干细胞对人脐血CD34+细胞迁移能力的影响
目的:本研究旨在探讨Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)和TLR4活化对人骨髓源性间充质干细胞(BM-MSC)诱导人脐血CD34+造血干/祖细胞迁移功能的影响及其机制.方法:流式细胞术检测健康供体BM-MSC表面TLR2和TLR4的表达情况;TLR2激动剂(PAM3 CSK4)和TLR4激动剂(LPS)活化人BM-MSC,收集培养上清,趋化实验测定BM-MSC培养上清对人脐血CD34+细胞的趋化作用;了解TLR2或(和)TLR4的活化对BM-MSC诱导CD34+细胞迁移活性的影响.ELISA法定量检测培养上清中趋化因子SDF-1的分泌水平.结果:人BM-MSC表面表达TLR2水平分别为(31.5±4.6)％和TLR4(85.6±6.7)％.与未加培养上清的空白组相比,对照组、LPS和/或PAM3 CSK4活化的MSC的培养上清对CD34+均有明显趋化作用(P＜0.01).进一步研究显示,与未加激动剂的对照组(MSC上清组)相比,LPS组、PAM3CSK4组、LPS和PAM3CSK4联合刺激组的MSC培养上清诱导CD34+细胞的迁移均有显著促进作用(P＜0.05),但LPS组、PAM3CSK4组、LPS和PAM3CSK4联合刺激组的培养上清中,SDF-1浓度与对照组相比未见明显变化(P＞0.05).结论:TLR2和/或TLR4的活化可显著增强骨髓BM-MSC诱导人脐血CD34+细胞的迁移作用,但与趋化因子SDF-1无明显关系.
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血小板TLR4表达介导LPS诱导的血小板活化
本研究探讨人血小板Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达及其在细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccsharide,LPS)诱导血小板活化中的作用.对15例健康人肘静脉抽血各20 ml,制备富含血小板血浆(PRP)和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的基础上加入LPS(0.2μ/ml)孵育30分钟,分别用流式细胞术和免疫印迹(Western blot)方法检测LPS作用前后血小板TLR4、CD62P和CD40L的表达.结果表明:流式细胞术检测静止血小板TLR4表达为25.44%,凝血酶刺激后明显升高(32.34%,p<0.05),LPS继续作用后TLR4的表达进一步增高(39.16%,p<0.01);在无凝血酶刺激下,LPS作用血小板后TLR4的表达接近于凝血酶刺激后结果.Western blot方法检测结果与流式细胞术相符;血小板CD62P和CD40L表达(流式细胞术)在静止血小板分别为6.39%和2.45%,凝血酶刺激后明显增高,分别为42.68%和14.8%,LPS进一步刺激后表达率进一步升高,分别为63.03%和13.94%,均明显高于仅用凝血酶的刺激组(p<0.001);抗TLR4抗体显著抑制了LPS诱导的血小板TLR4、CD62P、CD40L表达,但不影响凝血酶诱导的血小板膜CD62P、CD40L表达.结论:人血小板能够表达功能性TLR4,它直接参与了机体针对细菌的固有免疫反应.
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人TLR4的B细胞优势表位设计、合成及其免疫原性检测
目的鉴定TLR4的优势抗原表位,为抗人TLR4单克隆抗体制备奠定基础. 方法分别应用Hoop & Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数和抗原表位的软件分析对TLR4 B细胞表位进行预测,后用抗原性指数的方法进行综合评述.合成针对该表位的多肽,以此多肽为免疫原免疫小鼠,对其免疫原性进行检测. 结果预测TLR4的B细胞优势表位为189～202氨基酸序列:NH2-HKL TLR NNF DSL NV-COOH,此多肽能诱导机体产生较高的抗体滴度,多抗具有较高的特异性. 结论预测的TLR4短肽是B细胞的优势表位,以此制作抗人TLR4单克隆抗体是可行的.
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TLR4/PI3K信号相关分子在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞迁移功能中的作用
目的 探讨TLR4、PI3K和NF-kB在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)迁移中的作用.方法 细胞消化法培养原代哮喘ASMCs,TNF-α刺激上皮细胞系RTE细胞收集细胞培养上清液,ELISA检测上清液中IL-8和RANTES的含量,以TLR4抗体、渥曼青霉素(Wortmannin)、二硫代氨基吡咯烷(PDTC)作为工具药,改良Boyden趋化小室检测其在上皮细胞诱导的哮喘ASMCs跨膜迁移中的作用.结果 各TNF-α组RTE培养上清液中IL-8和RANTE水平均显著增高(P＜0.01),20 ng/ml组较其他组显著增高(P＜0.01).各哮喘组ASMCs的跨膜迁移数较正常组均显著增加(P＜0.01),各处理组哮喘ASMCs的跨膜迁移数亦较哮喘组明显增加(P＜0.01),TNF-α+TLR4抗体组、TNF-α +Wortmannin组和TNF-α+Wortmannin+PDTC组哮喘ASMCs跨膜迁移数较TNF-α组明显减少(P＜0.01)；TNF-α+Wortmannin +PDTC组ASMCs跨膜迁移数亦低于Wortmannin组(P＜0.05).结论 TLR4/PI3K信号相关分子参与哮喘气道上皮细胞诱导的ASMCs跨膜迁移,可能是哮喘气道重塑的机制之一.
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TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用
目的 研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路发挥的作用,以及沉默TLR4基因后,对TLR2信号通路的影响.方法 利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,将细胞随即分为正常组(N组)、正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4-siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢子刺激组[ TLR4(RNAi) +Af组],RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白的表达变化.结果 (1)TLR4基因沉默前:与N组比较,N+Af组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).(2)TLR4-siRNA( 100nmoL/L)转染RAW264.7细胞,沉默效率达83％.(3)TLR4基因沉默后:与N组比较,TLR4( RNAi)组TLR2、MyD88 mRNA的表达量均显著降低(P＜0.05);与N+Af组比较,TLR4( RNAi)+Af组的TLR2、MyD88 mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低(P＜0.05);与TLR4( RNAi)组比较,TLR4(RNAi)+ Af组MyD88 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),而TLR2 mRNA及TNF-α蛋白表达量却无显著变化(P＞0.05).结论 RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用;当沉默TLR4基因后,TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用,可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用.
关键词： TLR2 TLR4 TLR4-siRNA 烟曲霉孢子 调控机制 -
脂多糖诱导小鼠肺损伤模型巨噬细胞活化及共刺激分子CD40上调研究
目的 观察肺泡巨噬细胞(AM)活化过程和共刺激分子CD40表达变化,探讨其在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型中所发挥的作用.方法 BALB/c小鼠分为正常对照组和LPS处理组.光镜观察24、48 h肺组织病理变化;RT-PCR测定活化巨噬细胞(activated macrophage,AMψ)中TLR4表达;电泳迁移率变动分析(EMSA)检测AMψ核提取物中NF-kB的活性;Northern blot检测CD4O mRNA表达,流式细胞术检测CD40蛋白表达;ELISA测定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、MIP-2及IL-1β的含量.结果 小鼠吸入LPS后,肺泡隔断裂、肺间质充血及肺泡腔中性粒细胞浸润,并检测到AMψ表面TLR4的表达、核转录因子NF-kb活性增强、共刺激分子CD40 mRNA和蛋白显著表达,并随着时间延长出现增加趋势,BALF中炎症因子释放增加,正常对照组无明显变化(P＜0.05).结论 LPS诱导的ALI中,AM活化和共刺激分子CD40上调,导致瀑链式炎症反应,造成肺急性炎症损伤.
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4-1BB信号对小鼠树突状细胞表面TLR4表达的调节
目的 探讨4-1BB(CD137)激发型单克隆抗体2A对小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)表面TLR4表达的调节.方法 用不同剂量2A、LPS以及2A与LPS联合,或用LPS预刺激后再加入2A,以流式细胞术检测这些处理因素作用下DC表面TLR4表达情况.结果 LPS可下调DC TLR4的表达,下调作用可维持24 h,而2A可使DC TLR4的表达上调,上调作用可维持12 h,并可拮抗LPS对TLR4的下调作用.用LPS预处理DC后再加入2A,也可拮抗LPS的下调作用.结论 4-1BB信号可以上调DC表面TLR4的表达.
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Toll 样受体4对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究
目的：探讨Toll样受体4（ TLR4）对氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low density lipopro-tein，ox-LDL）诱导的巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究。方法体外培养THP-1细胞，用PMA（丙二醇甲醚醋酸酯）诱导成巨噬细胞，分别设立正常对照组、ox-LDL组、ox-LDL＋LPS组、衣霉素组，用MTT和流式细胞术检测细胞存活率及凋亡情况、油红O染色观察细胞吞噬脂质情况，q-RT-PCR、Western blot检测内质网应激相关基因及葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein78， GRP78）和CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（ CCAAT／enhancer-binding protein homologous protein ， CHOP ）的表达情况，并且用TLR4-siRNA抑制TLR4活性观察其对通路的影响。结果流式及MTT结果显示ox-LDL＋LPS组的凋亡细胞数较ox-LDL组明显增加（P＜0．01）， ox-LDL＋LPS组的内质网应激相关基因和蛋白GRP78、CHOP均较ox-LDL组增加，且两组都明显大于正常对照组（ P＜0．01），抑制TLR4活性后内质网应激程度明显减轻（ P＜0．05）。结论 TLR4加重ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡，其机制是加重内质网应激程度，增加CHOP表达，起到促凋亡作用。
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DEN2感染对小鼠髓源性树突状细胞膜表面分子TLR4、TLR7表达的影响
目的 探讨登革病毒2型(DEN2)感染对小鼠髓源性树突状细胞表面分子 TLR4、TLR7表达影响.方法 BALB/c乳鼠脑内接种及C6/36细胞增殖病毒,RT-PCR鉴定病毒核酸;rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导鼠源性DC;直接免疫荧光法观察DEN2感染DC;流式细胞术检测DC被DEN2感染后膜表面分子CD11c、CD86、I-A/I-E类分子表达的动态变化;RT-PCR动态检测DEN2感染DC后DEN2 RNA、TLR4和TLR7 mRNA水平表达的变化.结果 IL-4和GM-CSF诱导小鼠骨髓来源DC的纯度可达到70%;DEN2能够感染小鼠骨髓来源DC;与阴性对照组相比,接种病毒组[1×104半数组织培养感染剂量(TCID50)]的DC膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差异无统计学意义.与阴性对照组相比,接种病毒组(1×105TCID50)的DCs膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率差异均有统计学意义,但各组百分率的变化并未随着时间的延长呈现出明显的上升或下降的趋势;随着病毒剂量的增加,DC膜表面分子CD86、I-A/I-E的百分率呈现出上升的趋势;与阴性对照组比较,RT-PCR证明各组病毒mRNA水平随着病毒剂量的增大而逐渐升高.与阴性对照组比较,RT-PCR检测各组被DEN2感染的DC TLR4、TLR7 mRNA随着病毒剂量的增加,呈现下调的趋势.结论 DEN2可促进DC的成熟;DEN2感染DC后,TLR4、 TLR7 mRNA水平随病毒mRNA水平的增加而降低,提示TLR4、TLR7与病毒感染密切相关,在DEN致病中发挥了一定的作用和功能.
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早期 HIV-1感染者单核细胞对 TLR 配体反应性研究
目的：探讨HIV-1早期感染者体内单核细胞的成熟状态和对TLR配体的反应特点，了解HIV-1感染早期单核细胞功能状态和与疾病进展状态的相关性。方法选取35例HIV-1早期感染者和13例HIV阴性的健康人，采血分离外周血单个核细胞（ PBMC ）后纯化出单核细胞，流式细胞术检测单核细胞表面活化／抑制分子表达。用脂多糖（ LPS）和Pam3CSK4分别刺激单核细胞，培养20 h后，流式细胞术检测单核细胞表面活化／抑制分子表达，ELISA方法检测培养上清中促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平。结果 HIV-1早期感染者，单核细胞表面活化分子CD80、CD86、CD40和抑制分子PD-L1表达均升高（除CD86 P＝0．01外，P均＜0．001），CD40表达水平与血浆病毒载量正相关（P＜0．001，r＝0．553）。单核细胞受LPS和Pam3CSK4刺激后，活化成熟能力降低，HLA-DR、CD80、CD86、PD-L1表达增加均较健康对照低（P＜0．001），而促炎细胞因子 TNF-α（LPS：P＝0．004，Pam3CSK4：P＝0．012）和IL-6分泌（LPS：P＝0．006）增加。结论在HIV-1感染早期，单核细胞即处于免疫活化状态，受TLR配体刺激后促炎细胞因子分泌增加可能与HIV-1感染后的微生物移位和免疫活化相关。
