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小柴胡汤含药血清对肝癌HepG-2细胞的影响
目的:探讨小柴胡汤含药血清抑制HepG-2肝癌细胞增殖的作用机制.方法:大鼠灌服小柴胡汤3.69 g·kg-1,空白组给予等量蒸馏水,1次/d,连续7d,末次给药1h后腹主动脉取血制备小柴胡汤含药血清.以HepG-2肝癌细胞为研究对象,实验分为10％空白血清组,5％,10％,20％含药血清组.采用倒置显微镜观察含药血清对HepG-2细胞作用后的形态改变,噻唑蓝(MTT)法测定其对生长抑制的影响,流式细胞术分析细胞凋亡的情况,罗丹明123(Rh123)荧光染色观察细胞线粒体膜电位的变化.结果:与空白血清组比较,小柴胡汤含药血清能够抑制HepG-2肝癌细胞增殖,10％含药血清抑制细胞增殖具有时间依赖的特点；流式检测结果表明,10％小柴胡汤含药血清作用HepG-2肝癌细胞8h后,凋亡率从6.78％上升至19.51％;Rh123荧光染色显示,细胞线粒体膜电位明显降低.结论:小柴胡汤含药血清能够抑制HepG-2肝癌细胞增殖,促进其凋亡,线粒体途径参与了该过程.
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汉防己甲素对人肝癌HepG-2细胞能量代谢的影响
目的:研究汉防己甲素(TET)对人肝癌HepG-2细胞能量代谢的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:采用MTT法对细胞增殖进行检测,运用Seahorse Extracellular Analyzer对细胞能量代谢过称进行全时分析.同时,分别对线粒体膜电位变化、ATP含量、ROS含量和呼吸电子传递链复合酶Ⅰ-Ⅳ(NADH脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、细胞色素还原酶、细胞色素氧化酶)进行检测评价其功能变化.结果:TET可抑制HepG-2细胞增殖,IC50为21.96μmol/L.可减少细胞能量代谢,对细胞基础耗氧量、ATP产量、线粒体储备能、非线粒体产能存在不同程度影响.可破坏线粒体功能,降低跨膜电位、减少ATP含量、减少ROS含量、影响呼吸电子传递链复合酶Ⅰ-Ⅳ活力.结论:TET可通过破坏线粒体功能减少细胞能量代谢,发挥抑制HepG-2细胞增殖作用.
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载药纳米磁性碘化油微乳用于肝肿瘤综合治疗的体外评价
目的 制备担载抗肿瘤药物阿霉素(doxorubicin,DOX)和磁性纳米颗粒(magnetic nanoparticles,MNP)的复合磁性碘化油微乳.通过体外实验评价其生物相容性及作为肝肿瘤栓塞热化疗介质的可行性.方法 对MNP进行改性处理,采用超声乳化的方法,将DOX、改性后的MNP及碘化油制成复合微乳.将该微乳置于交变磁场下暴露并检测其升温性能.体外实验采用小鼠成纤维细胞L-929和人肝肿瘤细胞HepG-2,并以CCK-8试剂盒检测细胞活力.探讨磁场对细胞增殖能力的影响,不同浓度DOX对细胞的毒性作用,以及担载DOX的纳米磁性碘化油微乳与磁感应热疗联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用,并评价其是否具有热化疗协同增敏效应.结果 该介质在500 kHz、60 Gs的交变磁场下升温性能良好,满足热疗对温度的需求.生物相容性良好,符合医疗器械生物学评价国家标准的要求.磁感应热疗联合DOX化疗可更大力度地抑制肝肿瘤细胞的增殖,二者存在协同增敏效应.结论 本研究提出的载药纳米磁性碘化油微乳生物相容性良好,在交变磁场下可实现热化疗协同增敏效应,是一种肝肿瘤综合治疗的新型功能型介质.
关键词： 载药纳米磁性碘化油微乳 磁感应热疗 肿瘤综合治疗 HepG-2 -
脂多糖对肝癌细胞HepG-2增殖的研究
目的 探讨脂多糖(LPS)对HepG-2 细胞增殖的影响.方法 用LPS刺激HepG-2细胞,MTT方法检测HepG-2 细胞增殖的情况.结果 LPS刺激组与未加LPS刺激组的A值之间差异有显著性(P<0.01),前者细胞存活率明显高于后者(P<0.01).结论 LPS可以促进HepG-2细胞的生长.
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LPS对HepG-2细胞因子表达的影响
目的 探讨LPS对HepG-2细胞TGF-β1,VEGF,IL-6表达的影响.方法 用LPS刺激HepG-2细胞,RT-PCR和Western-blot方法检测TGF-β1,VEGF,IL-6基因的转录和蛋白的表达的情况,同时用HTA125阻断TLR4受体检测LPS对HepG-2细胞TGF-β1,VEGF,IL-6基因的转录和蛋白的表达的情况.结果 LPS刺激细胞后可以促进TGF-61、VEGF、IL-6基因的转录和蛋白的表达增加,抑制TLR4受体后LPS对细胞TGF-β1、VEGF、IL-6表达影响下降.结论 LPS可以通过TLR4受体来促进HepG-2细胞分泌TGF-131、VEGF、IL-6.
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干扰素α-1b对裸鼠HepG-2瘤形成的抑制作用
目的 比较干扰素α-1b(IFNα-1b)与聚乙二醇化干扰素α-1b(PEG IFNα-1b)抑制荷HepG-Z裸鼠肿瘤形成的效果.方法 取对数生长期的人肝癌HepG-2细胞接种于BALB/c雄性裸鼠背部皮下制备荷瘤动物模型.接种后14d按肿瘤大小将荷HepG-2瘤鼠随机分为溶剂对照组、PEG IFNα-1b组和IFNα-1b组3组,均连续5周皮下注射,每周1次.用电子数显卡尺测量肿瘤体积,第5周末全身麻醉处死裸鼠后测量体重、肿瘤体积和重量.结果 观察期内PEG IFNα-1b和IFNα-1b对肿瘤的抑制率分别达56%和42%,未见其对荷瘤鼠体重有明显影响.结论 PEG WNα-1b对裸鼠体内HepG-Z肿瘤生长有明显的抑制作用.
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马鞭草总黄酮诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及可能机制
目的 探讨马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及可能机制.方法 采用浓度为50、100和200 mg/L的马鞭草总黄酮处理体外培养的肝癌HepG-2细胞,流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测活性氧簇(ROS)和膜电位变化;Western印迹法分析Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和P53蛋白表达水平.结果 与未给药对照组比较,马鞭草总黄酮50、100和200 mg/L给药组均能促进肝癌HepG-2细胞凋亡(P<0.01),增加ROS水平(P<0.01),降低线粒体膜电位(P<0.05,P<0.01);马鞭草总黄酮50、100和200 mg/L可增加Caspase-3、Caspase-9和P53蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01).结论 马鞭草总黄酮可体外诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,其诱导凋亡的机制可能与其增加ROS水平、降低线粒体膜电位,并同时上调Caspase-3、Caspase-9、P53蛋白水平有关.
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TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2的表达
目的:探讨TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中的表达.方法:用RT-PCR和Western-blot方法检测肝癌细胞株HepG-2中TLR4基因的转录和蛋白的表达的情况.同时用免疫组化的方法检测肝癌组织中TLR4的表达的情况.结果:肝癌细胞株HepG-2中存在TLR4基因的转录和蛋白的表达.TLR4受体主要表达位于肝癌组织细胞的细胞膜上,其阳性率约为76.7%.结论:肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中均有TLR4的表达.
关键词： HepG-2 肝癌 TLR4 RT-PCR Western-Blot -
阿霉素丙二醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用研究
目的 以阿霉素为模型药物,制备新型的纳米级醇质体-丙二醇脂质体(A-PL),并考察其体外抗肿瘤作用.方法 制备A-PL,并通过透射电镜、激光粒度分析仪、电位测定仪等观察其微观形态、测定粒径和电位.以人肝癌细胞HepG-2为模型细胞株,采用MTT法考察A-PL体外细胞毒性,利用流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察HepG-2对A-PL的摄取,采用罗丹明试剂检测细胞的P-糖蛋白(P-gp)功能.结果 A-PL外观圆整,分散性好,无聚集.平均粒径为150 nm,Zeta电位为-5.78 mV,包封率为83.7％.A-PL的细胞毒性显著高于阿霉素溶液;A-PL能增加细胞对药物的摄取.此外,A-PL更容易进入细胞,且与细胞核有较强的亲和性.A-PL能抑制P-gp的过表达.结论 本研究制备的A-PL克服了传统脂质体易聚集的缺点,具有稳定、粒径小的优点,具有较好的抗肿瘤效果,作用机制则是主要依赖于A-PL的强内吞作用及泊洛沙姆对药物外排泵的抑制.
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自噬对乙型肝炎病毒x蛋白诱导的人肝癌细胞的作用
目的 观察白噬对乙型肝炎病毒(HBV)x蛋白(HBx)诱导的人肝癌细胞(HepG-2)的作用.方法 运用HBx转染HepG-2细胞,采用免疫印迹技术检测自噬标记蛋白LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ,beclin1及溶酶体相关蛋白lamp2a的表达,透射电镜观察细胞超微结构变化,MDC染色白噬囊泡,观察HBx对细胞白噬水平的影响.结果 HBx转染可上调LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ(对照组灰度值0.520±0.086,转染组灰度值0.760±0.078,P＜0.05),beclin1(对照组灰度值0.220±0.087,转染组灰度值0.875±0.093,P＜0.05)及lamp2a(对照组灰度值0.120±0.064,转染组灰度值0.320±0.061,P＜0.05)的表达;电镜下可见Hep-G2细胞胞质中出现大量独立双层膜结构的自噬体,溶酶体深染及线粒体损伤.结论 HBx转染可上调Hep-G2细胞的自噬水平,提示在HBV感染所致的原发性肝癌的自噬中发挥了重要作用.
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RPMI-1640培养基和DMEM培养基中HepG-2细胞生长状况
目的:比较含12％新生牛血清的RPMI-1640培养基与含12％新生牛血清的DMEM培养基培养HepG-2细胞的效果.方法:采用含12％新生牛血清的RPMI-1640培养基与含12％新生牛血清的DMEM培养基培养HepG-2细胞,观察细胞的生长状态,细胞的贴壁情况,并进行细胞计数.结果:含12％新生牛血清的RPMI-1640培养基中的细胞生长状态更好,细胞的存活率更高.结论:在对HepG-2细胞进行细胞培养时建议首选含12％新生牛血清的RPMI-1640.
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鬼臼毒素衍生物Lg-2对人肝癌细胞系HepG-2凋亡的诱导作用
目的 研究N-(1-烃氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基氧羰基)-L丙氨酸-4′-去甲-4-脱氧鬼臼酯(Lg-2)对人肝癌细胞系HepG-2的诱导凋亡作用及机制.方法 分别设阴性对照组(只加HepG-2细胞)、VP-16处理组及Lg-2处理组3组,采用MTT法检测Lg-2对HepG-2细胞生长的影响,流式细胞术检测Lg-2对HepG-2细胞周期和凋亡的影响,荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测Lg-2对HepG-2细胞凋亡相关基因p53、Bax、Bc1-2、p21、Caspase 3表达的影响;设阴性对照组及Lg-2处理组2组,Hoechs33258染色检测Lg-2对HepG-2细胞形态学的影响.结果 MTT法证实Lg-2对HepG-2细胞增殖有明显的抑制作用,药物处理48 h,随药物浓度增加(同一时间时)抑制效应增强,Lg-2处理组各浓度HepG-2抑制率均高于VP-16处理组(P＜0.05).随药物作用时间的延长(同一浓度时)抑制效应增强,Lg-2处理组各作用时间HepG-2抑制率均高于VP-16处理组(P＜0.05).流式细胞术显示,Lg-2作用于HepG-2细胞24和48 h时,Lg-2处理组S期细胞比例与阴性对照组及VP-16处理组比较均明显增高,而G2/M期细胞显著减少.qRT-PCR检测细胞凋亡相关基因,结果 表明Lg-2处理组与VP-16处理组相比Bc1-2 mRNA的表达显著降低(P＜0.05),而p53、Bax、p21、Caspase3 mRNA的表达显著增高(P＜0.05).Hoechst33258染色显示Lg-2处理组细胞核固缩、碎裂,呈凋亡样改变.结论 Lg-2可抑制肝癌细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,该过程可能与其上调p53、bax、p21、caspase3表达和下调bc1-2基因的表达有关.
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小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2影响的实验研究
目的 探讨小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2的影响效果,为提高肝癌患者临床疗效提供可靠依据.方法 将人肝癌细胞HepG-2分别与培养基+细胞(对照组)、小白菊内酯(小白菊内酯组)、顺铂(顺铂组)、顺铂+小白菊内酯(联合组)融合后检测其细胞凋亡率,记录检测结果,给予统计学分析后得出结论.结果 联合组肝癌细胞HepG-2凋亡率显著高于其他三组,对比结果具有统计学意义(P＜0.05).结论 小白菊内酯可显著提高顺铂对人肝癌细胞HepG-2凋亡率,从而提高恶性肿瘤患者经化疗治疗临床疗效,保障患者生活质量及生命安全.
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中药柴胡对肝癌细胞的抑制作用
目的:探讨中药柴胡提取物柴胡皂苷(SSd)对肝癌细胞HepG-2的抑制作用方法:通过提取中药柴胡的主要成分柴胡皂苷,以肝癌细胞HepG-2作为实验对象,分为空白对照组,不同浓度梯度的SSd组,然后对细胞进行MTT试验测定细胞活力,细胞凋亡形态学检测,流式细胞仪细胞凋亡检测.结果:与空白对照组相比较,含有0.5mM SSd的培养基HepG-2组受到活力抑制为明显,并且流失细胞仪测出在此浓度时凋亡率高,高内涵筛选系统观察出在此浓度时线粒体膜电位明显变化不明显.结论:中药柴胡提取物柴胡皂苷对肝癌细胞生长抑制明显.
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苦参水提物促进L02和HepG-2细胞增殖的研究
目的:探讨不同浓度苦参水提液对细胞增殖的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(5、2、1、0.5、0.05、0.025、0.005 mg/mL)的苦参水提物在不同的时间点(24、48、72 h)对HepG-2、L02细胞增殖的影响.10 g/(kg·d)的苦参水提液予ICR小鼠灌胃,10％含药血清培养L02细胞,MTr比色法检测不同的时间点(24、48、72 h)对细胞增殖的影响.以△OD值(各组加药平均值-正常组平均值)表征抑制或促进作用.结果:苦参水提物浓度≤2 mg·mL-时对细胞增殖有一定促进作用,尤其以0.5、1 mg·mL-1的促进作用明显(P＜0.01),当苦参水提物浓度达到2 mg·mL-1,处理72 h时,细胞增殖出现抑制作用.含药血清能显著促进L02细胞的增殖.结论:苦参水提物在一定浓度范围内促进细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.
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TLR4在肝癌细胞株HepG-2的表达
Toll样受体(toll-like receptors,TLR)是炎症信号传递的门户蛋白,在免疫防御反应中起重要作用.TLR4(Toll-like receptors 4,TLR4)是第一个发现的哺乳动物的Toll样受体,TLR4主要表达在淋巴样组织(如脾)和外周血白细胞如单核巨噬细胞、树突状细胞、小部分的表皮细胞系以及T、B淋巴细胞系上[1].
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党参皂苷D对HepG-2细胞增殖时间效应和细胞周期的影响
目的:观察党参皂苷D对HepG-2细胞增殖时间效应和细胞周期的影响,探讨轮叶党参抗癌活性成分及作用机制.方法:不同浓度(5、10、15、20和25 mg·L-1)党参皂苷D作用于体外培养的人肝癌HepG-2细胞,同时设空白对照组；采用MTT法检测党参皂苷D对HepG-2细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期变化.结果:25 mg· L-1党参皂苷D作用12、24、48和72 h后,HepG-2细胞增殖抑制率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).党参皂苷D作用48、72、96及120 h后,各组细胞总数明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；党参皂苷D5、15、20及25 mg·L-1组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着党参皂苷D浓度增加,HepG-2细胞增殖速度缓慢.细胞周期检测结果表明,党参皂苷D浓度为10、15、20和25 mg·L-1时,G0/G1期细胞所占百分比分别为55.97％±0.42％、57.16％士0.13％、57.48％±0.15％及60.39％±0.32％,与空白对照组(53.22％±0.28％)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；此浓度范围内S期细胞所占百分比分别为27.47％士1.42％、26.15％士2.71％、26.34％士0.67％及24.81％士0.46％,与空白对照组(33.47％±0.25％)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).党参皂苷D组的细胞周期发生了G0/G1期阻滞.结论:党参皂苷D在体外明显抑制HepG-2细胞生长,并能引起癌细胞DNA合成代谢紊乱.
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结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6和分泌蛋白Hsp16.3体外对人肝癌细胞HepG-2的作用
目的:探讨结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6及分泌蛋白Hsp16.3对人肝癌细胞HepG-2的作用.方法:将已构建的舍3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hsp16.3.分别转入宿主菌E.coli DH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6和Hsp16.3三种蛋白,采用Ni2+亲和层析柱进行纯化,并用透析方法进行目的蛋白的复性.复性的蛋白按照不同浓度和作用时间分别与肝癌细胞HepG-2反应,用MTT法检测细胞生长情况.结果:三种蛋白被成功纯化并复性.MTT数据统计分析显示,终浓度10ng/ml的三种蛋白对HepG-2细胞生长没有明显作用,当三种蛋白的终浓度分别为20、40、80μg/ml时均能够抑制HepG-2细胞的生长,并且抑制作用随着蛋白终浓度的增大以及作用时间的延长而增强.不同类别的蛋白抑制作用没有明显差别.结论:结核分枝杆菌的部分分泌蛋白能够抑制肝癌细胞HepG-2的生长.
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内皮抑素恩度联合化疗对人肝癌细胞作用研究
目的 研究人重组内皮抑素(recombinant human endostatin)(简称内皮抑素)对人肝癌单独及联合化疗的作用.方法 在体外单独应用内皮抑素或者联合细胞周期特异性化疗药物氟尿嘧啶( flurouracil,5-Fu)作用于HepG-2细胞,用cck-8检测及流式细胞技术研究内皮抑素对HepG-2作用.结果 cck-8检验结果显示药物作用24h,单独内皮抑素仅在100 μg/mL的剂量时对HepG-2细胞在体外有轻度杀伤作用,细胞死亡率为20.7％,在其余浓度无明显杀伤作用；作用48 h,内皮抑素在50μg/mL、100μg/mL、200 μg/mL对HepG-2均有一定杀伤作用,细胞死亡率分别为20.8％、46.3％、15.8％；在各时间段和浓度的内皮抑素对HepG-2杀伤作用显著小于相应内皮抑素+5-Fu组(P＜0.05)；流式细胞技术检验100μg/mL浓度内皮抑素诱导HepG-2凋亡的作用；内皮抑素100 μg/mL在48 h对人脐静脉内皮细胞有诱导凋亡作用,凋亡率为19.5％(对照组为11.7％).结论 内皮抑素对人肝癌HepG-2细胞有一定的杀伤作用,但并非在所有浓度和作用时段对人肝癌HepG-2细胞及脐静脉内皮细胞有凋亡诱导作用.
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Apoptin对肝癌细胞的体内、外抑制效应
目的:探讨Apoptin对人肝癌细胞株HepG-2及C57BL/6小鼠H22移植瘤的抑制作用.方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin转染HepG-2细胞,应用Western blotting检测Apoptin蛋白在转染后HepG-2细胞中的表达,应用MTT检测Apoptin对HepG-2细胞生长的抑制作用,通过AO/EB染色法检测pVAX1-Apoptin致肿瘤细胞凋亡作用.建立C57BL/6小鼠H22荷瘤模型,瘤内注射pVAX1-Apoptin,观察pVAX1-Apoptin对体内肿瘤的抑制作用. 结果:Apoptin基因可在HepG-2细胞中有效表达,pVAX1-Apoptin能够诱导HepG-2细胞凋亡,并显著地抑制其生长,48 h抑制率为69.28%.pVAX1-Apoptin瘤内注射能够有效抑制移植肿瘤的生长,抑制率为46.71%;治疗后39 d小鼠生存率为40%,显著高于对照组(P<0.05).结论:Apoptin转染可抑制HepG-2细胞的生长,重组质粒pVAX1-Apoptin瘤内注射对移植肿瘤有显著的抑制作用.
