中国药理学与毒理学杂志
Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology 중국약리학여독리학잡지
- 主管单位： 军事医学科学院
- 主办单位： 军事医学科学院毒物药物研究所,中国药理学会,中国毒理学会
- 影响因子： 1.18
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-3002
- 国内刊号： 11-1155/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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依非韦伦的肝细胞毒性作用及对蛋白质表达谱的影响
目的 探讨依非韦伦对肝细胞的毒性作用及对蛋白质表达谱的影响.方法 人肝癌细胞系Huh7中分别加入依非韦伦1.25,2.5,5和10 mg·L-1,培养5h后采用原位比色法测定细胞内活性氧类(ROS)的含量；依非韦伦2.5mg·L-1与细胞作用5h后,用膜联蛋白-Ⅴ/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒染色.用流式细胞仪测定细胞凋亡；依非韦伦2.5 mg·L-1处理细胞5h,获得全细胞蛋白质进行二维凝胶电泳,采用ImageMaster软件分析差异蛋白质点,应用纳升级液相色谱串联电喷雾离子阱质谱进行差异蛋白质鉴定.结果 随着依非韦伦浓度的增加,细胞内ROS的含量逐步升高(r=0.9740,P＜0.05).依非韦伦2.5 mg·L-1与细胞作用5h后,与正常对照组比较,细胞凋亡百分率无显著变化,但有7种蛋白质表达量显著降低,其中线粒体热激蛋白75和抗氧化蛋白l的表达量分别降低了76.7%和85.5%；抗胰蛋白酶及其S突变体、细胞角蛋白9、剪接体相关蛋白和磷酸丙糖异构酶的表达被完全抑制.结论 依非韦伦对Huh7细胞具有明显的细胞毒性,可能通过调节热激蛋白75和抗氧化蛋白1等的表达影响线粒体的功能,终导致肝毒性的发生.
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甲氧滴滴涕及其代谢产物2,2-二(4-羟基苯基)-1,1,1-三氯乙烷在大鼠体内的毒代动力学
目的 探讨甲氧滴滴涕(MXC)及其代谢产物2,2-二(4-羟基苯基)-1,1,1-三氯乙烷(HPTE)在大鼠体内的毒代动力学.方法 雄性SD大鼠单次ig给予MXC500mg·kg-1染毒后,于不同时间点收集血液样本.应用高效液相色谱-紫外法测定大鼠血浆中MXC和HPTE的含量,用DAS 2.0软件的房室模型进行拟合,计算代谢动力学参数.结果 MXC的毒代动力学参数血浆大浓度(cmax)为(5.52±1.21)mg·L-1；分布半衰期(t1/2α)为(4.12±1.21)h;消除半衰期(t1/2β)为(22.54 ±6.31)h;曲线下面积[AUC(0 -t)]为(65.97±17.94) mg·h·L-1；AUC(0-∞)为(69.06±18.61)mg·h·L-1；清除率(Cl)为(7.94 ±2.31)L·h-1·kg-1；和表观分布容积(Ⅴ)为(66.16±20.21)L·kg-1.代谢产物HPTE的毒代动力学参数cmax为(1.32±0.37)mg·L-1,t1/2α为(3.13±0.91)h; t1/2β为(31.12±10.91)h,AUC(0-t)为(14.69±2.99) mg·h·L-1,AUC(0-∞)为(17.23±3.66) mg·h·L-1,Cl为(30.14±6.09) L·h-1·kg-1,Ⅴ为(232.55±36.44)L·kg-1.结论 MXC及其代谢产物HPTE的毒代动力学均符合二室模型.MXC和HPTE的清除半衰期均较长,易发生体内蓄积.
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丹皮酚对高脂血清损伤的人内皮细胞的保护作用
目的 观察丹皮酚对高脂血清损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 20%高脂血清作用于HUVECs细胞24h制备高脂血清损伤模型.丹皮酚组细胞加入20%高脂血清24h后再分别加入丹皮酚124,247和495 μmol·L-1.采用倒置显微镜观察HUVECs形态学变化；MTT法检测细胞存活率；用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量；用RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA的表达.结果 与正常对照组相比,模型组中大部分细胞出现片状分离和脱落,然而丹皮酚干预后细胞形态趋于正常.丹皮酚能够显著提高细胞存活率(P＜0.01).经丹皮酚124,247和495 μmol·L-1干预后,细胞存活率从模型组的(53.0±10.1)%依次升高至(68.4±9.1)%,(84.5±6.7)%,(98.1±7.5)%.丹皮酚能够显著提高NO含量和eNOS mRNA水平(P ＜0.01).NO含量从模型组的(54±4)μmol·L-1依次升高至79±6,115±5和(136±6) μmol ·L-1；eNOS mRNA的表达水平由模型组的0.215±0.060增加至0.451 ±0.045,0.563 ±0.013,0.704±0.068.结论 丹皮酚可能通过上调高脂血清损伤人脐静脉内皮细胞eNOS的表达促进NO的合成,从而发挥其对高脂血清损伤内皮细胞的保护作用.
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反式激活蛋白-氧依赖性降解结构融合结构域介导蛋白跨膜转运和氧依赖性降解作用
目的 研究反式激活蛋白(TAT)蛋白转导结构域介导的融合蛋白的跨膜转运,以及氧依赖性降解(ODD)结构域介导融合蛋白在体内外不同氧分压环境中的降解作用.方法 将TAT,ODD以及增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列进行融合,构建了TAT-ODD-EGFP融合蛋白基因.将该序列克隆到原核表达载体pET28a中,在BL21工程菌中进行表达,通过亲和柱层析法纯化,得到高纯度的融合蛋白.同方法制备EGFP和TAT-EGFP融合蛋白作为对照.在20% O2和1%O2将融合蛋白与A549,H1299和MDA-MB-231细胞系孵育,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞中的分布以及稳定性.小鼠尾静脉注射不同融合蛋白( 10 mg·kg-1),分别在注射后1,6和12 h处死动物,取脏器在荧光显微镜下观察融合蛋白的分布及稳定性.结果 由于EGFP相对分子质量大,无法穿透细胞及组织.TAT可以有效地介导TAT-EGFP进入细胞和动物实体组织,其稳定性不受细胞或组织中氧分压的影响,而TAT-ODD-EGFP进入细胞或组织后,在20% O2条件下迅速降解,但可稳定存在于1% O2细胞及组织中.结论 TAT可以有效地转导融合蛋白穿过细胞膜.引入ODD,20%O2下融合蛋白TAT-ODD-EGFP迅速降解,但可以稳定存在于1% O2细胞和组织中,说明TAT-ODD可以转导蛋白进入并靶向存在于低氧的肿瘤组织中.
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小补心汤总黄酮对慢性应激大鼠星形神经胶质细胞的保护作用
目的 研究小补心汤总黄酮( XBXT-2)对海马及前额皮质神经胶质细胞的影响.方法 采用连续28 d每天给予大鼠1或2种不可预测的刺激建立慢性应激模型,同时每日单次ig给予XBXT-2 25和50 mg·kg-1.采用免疫组化方法观察大鼠海马齿状回颗粒下层、CA3区和前额皮质星形胶质细胞的影响.结果 免疫组化结果表明,慢性应激大鼠海马齿状回颗粒下层、CA3区和前额皮质星形胶质细胞数目减少,形态萎缩,吸光度值显著降低(P＜0.01).伴随给予XBXT-2 25和50 mg· kg-1可显著逆转这一改变,吸光度值显著增加(P＜0.01),阳性药丙米嗪具有同样的作用.结论 XBXT-2可逆转海马齿状回颗粒下层、CA3区和前额皮质星形胶质细胞的应激性损伤,这可能是其抗抑郁作用的重要细胞分子机制之一.
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乙酸阴道热敏凝胶剂在家兔阴道内的药动学
目的 研究乙酸阴道热敏凝胶剂经阴道给药后药物在家兔阴道内的药代动力学特征,探索适合阴道用药的新剂型.方法 3 ml含乙酸36.23 mg的乙酸阴道热敏凝胶剂推入家兔阴道内,给药后0.25,0.5,1,1.5,2,4,8,12,16,20和24h,对家兔阴道进行灌洗并测定灌洗液中乙酸的含量、用微电极插入阴道测定阴道pH值、取阴道组织匀浆后测定组织中乙酸含量.采用非线性小二乘法进行计算机拟合获得药动学参数.结果 乙酸阴道热敏凝胶剂置入家兔阴道后,阴道pH值由给药前中性(pH 6.67)转变为酸性( pH 3.56),阴道pH 3.5 ～4.0可保持约6h；pH 3.5 ～4.5可保持约12h；pH3.5～5.0可保持19 h；给药后24h,pH值为5.32±0.24,乙酸含量为(0.38±0.15)g·L-1,为给药量的11%.阴道组织中乙酸浓度峰值为600μg·g-1,达峰时间为2h,平均保留时间为7.73 h,药物动力学参数符合二室模型.结论 乙酸阴道热敏凝胶剂符合阴道用药的要求.
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urantide抑制动脉粥样硬化大鼠单核细胞趋化蛋白-1的表达
目的 研究urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉及血管平滑肌细胞(VSMC)中单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)的表达的影响.方法 (1)在体实验:采用给予高脂饮食及ip给予维生素D3制备AS模型.AS大鼠分别尾静脉注射urantide 30 μg·kg-1·d-1,分为3,7和14 d组.于各实验结束时间点测量体质量,检测血中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和Ca2+；免疫组化法检测胸主动脉中MCP-1表达.(2)体外实验:贴块法制备的血管平滑肌细胞(VSMC)中加入尾加压素Ⅱ(UⅡ) 10 μmol·L-1+ urantide 0.1,1,10 nmol·L-1,0.1和1μmol·L-1作用48 h,ELISA法检测细胞中MCP-1含量.结果 (1)在体实验:与AS模型组比较,只有14 d urantide给药组的体质量显著增加(P＜0.05)；3 d组、7d组及14 d组血清中Ca2+,TG,TC,HDL及LDL均随给药时间的延长呈现逐渐降低的趋势(P＜0.01),达到或接近阳性药氟伐他汀组水平；在大鼠胸主动脉内膜及中膜斑块内,与AS模型对照组相比,urantide 3 d组、7d组及14 d组MCP-1阳性染色强度和范围均减少.(2)体外实验:urantide各浓度组对VSMC培养上清中MCP-1的表达均有下调趋势(P＜0.05).结论 urantide在大鼠动脉粥样硬化中可抑制炎症因子MCP-1的表达.
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地塞米松和淀粉样β蛋白片段25-35对PC12细胞损伤和凋亡的影响
目的 探讨地塞米松(DEX)和淀粉样β蛋白片段25 - 35(Aβ25 -35)联合作用对PC12细胞损伤和凋亡的影响.方法 采用单独或联合应用DEX 0.1 ～ 10 μmol·L-1和Aβ25-35 1～5μmol·L-1作用PC12细胞24h,MTT法测定细胞活力；膜联蛋白-V,PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞凋亡峰；逆转录-PCR检测胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平.结果 MTT结果显示,与正常对照组相比,DEX 5和10 μmol·L-1,Aβ25-351,5和10 μmol·L-1,DEX 5+Aβ25-351,5和10 μmol·L-1及DEX 10+Aβ25-35 5,10 μmol· L-1组均可明显降低PC12细胞存活率,而DEX联合Aβ25-35能明显减少PC12细胞数(P＜0.01).流式细胞仪结果显示,DEX 5μmol·L-1和Aβ25-35 1μmol·L-1单独作用对PC12细胞凋亡率和亚二倍体凋亡峰有一定的增加作用(P＜0.05),两者联合作用能明显增加PC12细胞早期和中晚期凋亡率,增加亚二倍体凋亡峰(P＜0.01)；RT-PCR结果显示,DEX 5μmol·L-1和Aβ25-35 1μmol·L-1单独作用对PC12细胞胱天蛋白酶3mRNA的表达水平没有明显影响,它们联合作用能明显增加PC12细胞胱天蛋白酶3mRNA的表达水平(P＜0.05).结论DEX和Aβ25 -35联合作用能明显增加对PC12细胞的损伤,促进胱天蛋白酶3 mRNA表达,诱导PC12细胞凋亡.
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非诺贝特对凝胶包埋培养的原代大鼠肝细胞的毒性
目的 研究非诺贝特对凝胶包埋培养的原代大鼠肝细胞内氧化压力和脂质含量的影响.方法 将收获得到的新鲜原代大鼠肝细胞进行胶原凝胶包埋,构建肝细胞体外凝胶包埋培养模型,同时构建传统平板模型作为对照.在肝细胞培养过程中加入非诺贝特25和100 μmol· L-1,分别于培养3和7d后,检测细胞内活性氧类(ROS)、丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)含量,并用尼罗红和油红O对细胞内中性脂滴进行定量分析和染色观察.结果 平板模型非诺贝特各组之间没有显著性差异,而凝胶包埋模型非诺贝特各组之间差异明显.对于凝胶包埋模型,非诺贝特25和100 μmol·L-1均导致细胞内ROS增加,其中非诺贝特处理3d组细胞内ROS分别为对照组的(131±19)%和(149±10)%,非诺贝特处理7d组细胞内ROS分别为正常对照组的(121±8)%和(117±5)%(P＜0.01)；非诺贝特还导致了胞内MDA含量、TG和中性脂含量的显著增加(P＜0.05).结论 凝胶包埋培养原代大鼠肝细胞作为体外培养模型相对于平板模型能更好地反映非诺贝特的肝毒性作用.
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硫化氢通过抗氧化作用改善脑缺氧导致的小鼠空间记忆障碍
目的 观察外源性H2S对缺氧性脑损伤小鼠空间学习记忆障碍的影响,并探究其作用机制.方法 连续4dsc给予NaNO2 120 mg·kg-1·d-1制备缺氧模型；氢硫化钠(NaHS)治疗组在制备模型的同时ip给予NaHS 1 mg· kg-·d-1.每天给药前进行Morris水迷宫实验,测定逃避潜伏期、原平台象限停留时间和穿越平台次数.比色法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶( SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.HE染色观察海马组织切片CA1区神经元形态学改变.结果 水迷宫实验第3天和第4天,模型组小鼠逃避潜伏期分别为(26.0 ±7.3)s和(23.3 ±8.7)s,明显长于正常对照组的(16.1±9.6)s(P ＜0.05)和(11.1±6.2)s(P＜0.01).第5天,模型组小鼠穿越平台次数为4.1±1.9,在原平台象限停留时间为(20±8)s,与正常对照组穿越平台次数(7.2±1.6)次和在原平台象限停留时间(28±8)s比较明显减少(P＜0.01).与正常对照组相比,模型组小鼠脑组织中SOD活性降低12.6% (P ＜0.01),MDA含量升高43.9% (P ＜0.01).在模型组小鼠海马CA1区,锥体细胞出现明显的核固缩、胞浆深染和排列紊乱等变性改变.与模型组比较,NaHS组小鼠在水迷宫实验的第3天和第4天逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),分别为(17.9±7.0)s和(15.8±8.5)s；在平台所在象限停留时间和穿越平台次数明显增加(P＜0.01),分别为(30±9)s和(6.7±2.5)次；SOD活性升高了8.9%(P＜0.05),MDA含量显著下降了29.6% (P ＜0.01)；海马CA1区神经元变性改变较模型组得到显著缓解.结论 NaHS减轻了脑缺氧损伤诱发的小鼠学习记忆的损害,其作用机制可能与H2S衰减海马区神经元损伤和抗氧化作用有关.
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mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响
目的 构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白( mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响.方法 利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体.将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度.结果 质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确.载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象.c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生.结论 成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc.载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能.
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扩展的简单串联重复位点诱发突变在遗传毒理学的应用进展
扩展的简单串联重复(ESTRs)序列是基因组DNA上高不稳定的一类重复序列.由于其自发突变和诱发突变率高,因而在生殖细胞诱发突变中的研究中得到广泛的应用.随着研究的深入,目前发现有3类重复序列——小卫星、微卫星和ESTRs,主要通过系谱法和单分子PCR法来研究这些重复序列的变化.但迄今为止,这些重复序列的突变机制还不明确.本文主要综述了目前国内外对这3种重复序列的异同、ESTRs突变研究方法的优缺点以及突变机制.
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小克银汉霉属微生物模型在体外药物代谢研究中的应用
药物代谢在药效和安全性评价中是非常重要的,而利用微生物转化为药物体外代谢模型则具有很多优势.小克银汉霉属的许多菌株具有与人体类似的Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶,其微生物模型能对多种底物进行高效转化.本文对其在药物代谢方面的应用进行综述,并对其未来的发展进行了展望.
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高血糖素样肽1(9-36) NH2的生理学功能
许多研究表明,高血糖素样肽1 (9-36) NH2[ GLP-1 (9-36) NH2]是GLP-1 (7-36) NH2被二肽基肽酶快速降解后的主要体内存在形式,具有许多的生理学功能.GLP-1 (9-36) NH2中除了具有非依赖于胃排空和胰岛素分泌所致的降低餐后血糖的作用外,GLP-1 (9-36) NH2更多的是直接对外周器官的保护作用,包括快速逆转心力衰竭、改善舒张末期压、快速刺激心肌葡萄糖摄取及减少缺血再灌注对心脏的损伤；以及它具有不依赖于GLP-1受体的血管系统的抗氧化作用和抑制肝脏糖原异生、促进肝糖原的合成.因此,可以说明GLP-1( 9-36) NH2在体内是一个具有重要生理功能的活性肽,而不仅仅是GLP-1 (7-36) NH2的代谢产物.GLP-1 (9-36) NH2对糖尿病及其包括胰岛素抵抗、心血管疾病、肝脏脂肪变性等并发症的治疗将会起到非常重要的作用.
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肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析
目的 制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体.方法 应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体.亲和层析纯化抗体蛋白；ELISA测定抗体滴度.纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231[p53(mutant)]和[H1299,p53(null)]肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性.结果 对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化.SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上；ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上.免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度高,可以达到5 ng.Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合.结论 成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度佳.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
