多廿醇对高脂血症大鼠血清胆固醇水平的影响

目的 观察多廿醇对高脂血症大鼠的降胆固醇作用并探讨其作用机制.方法 大鼠分为正常对照组、多廿醇4 mg·kg~(-1)预防组、高脂模型组、多廿醇4,6和8 mg·kg~(-1)治疗组和洛伐他汀阳性对照组;后5组大鼠在实验前4周给予高脂饲料制备高脂大鼠模型,从第5周开始,除正常对照和高脂模型组外,各给药组ig给予不同浓度的多廿醇或洛伐他汀,每天1次,连续6周.多廿醇预防组喂饲高脂饲料的同时ig多廿醇,每天1次,连续10周.用全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,并测定粪便总胆汁酸(FBA)排出量,紫外分光速率法测定肝脏微粒体3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶活性,荧光配体标记法测定外周血淋巴细胞低密度脂蛋白受体(LDL-R)活性.结果 与高脂模型组比较, 多廿醇预防组、多廿醇治疗组和洛伐他汀阳性对照组大鼠血清TC含量明显下降(39.1%～46.4%),LDL-C含量明显下降(66.6%～80.7%), 粪便FBA明显升高(9.7%～19.0%), 肝脏微粒体HMG-CoA还原酶活性明显下降(13.8%～23.6%), 外周血淋巴细胞LDL-R活性升高(27.5%～129.6%);多廿醇预防组、多廿醇8 mg·kg~(-1)组和洛伐他汀组HDL-C水平明显升高(12.2%～16.7%);洛伐他汀组TG水平明显下降.结论 多廿醇具有明显降低胆固醇的作用,其机制包括增加胆汁酸的排泄、抑制胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶活性和促进低密度脂蛋白受体活性的表达.

富含生育三烯酚的棕榈油对动脉粥样硬化小鼠糖代谢的影响

目的 探讨富含生育三烯酚的棕榈油(TRF)对动脉粥样硬化小鼠糖代谢的影响及其可能的作用机制.方法 载脂蛋白E基因缺陷(ApoE~(-/-))小鼠分为模型对照组、TRF 0.05%和0.2%(W/W) 组.TRF均匀混于饲料中,各组饲料中添加10%(W/W) 的脂肪和0.2%(W/W)的胆固醇诱导动脉粥样硬化的形成.小鼠经TRF处理12和14周后分别进行口服葡萄糖耐量实验 (OGTT) 和胰岛素耐量实验 (ITT);用相应试剂盒检测血清中总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、游离脂肪酸 (FFA) 和胰岛素的含量;实时荧光定量PCR分析白色脂肪组织 (WAT) 中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂联素和葡萄糖转运体4(Glut4)的mRNA水平;利用荧光素酶报告系统检测TRF对PPRAγ的激活作用.结果 OGTT和ITT实验显示,在非禁食和禁食的情况下,TRF均能够降低ApoE~(-/-)小鼠的血糖,改善胰岛素的敏感性;TRF组小鼠血清中TG和FFA的水平均低于模型对照组;在WAT中,与模型对照组相比,TRF 0.2%组上调脂联素mRNA水平(1.73±0.32)倍,TRF 0.05%和0.2%组分别增加Glut4 mRNA水平(1.89±0.24)和(2.01±0.61)倍,PPARγ mRNA水平没有改变.荧光素酶报告系统检测结果显示,TRF对PPARγ-配体结合结构域、PPARγ1和PPARγ2的激活作用分别是溶剂对照组的(2.7±0.2), (6.1±0.6)和(5.3±0.1)倍.结论 TRF能够很好地改善动脉粥样硬化小鼠的糖代谢, TRF发挥这些作用的部分原因是通过激活PPARγ来实现的.

L-精氨酸通过抑制凋亡途径对脂多糖导致的急性肺损伤的作用

目的 探讨一氧化氮供体L-精氨酸(L-Arg)对大鼠不同病程阶段的急性肺损伤(ALI)的影响及机制.方法 采用注射内毒素脂多糖(LPS)的方法制备大鼠肺损伤模型.健康雄性SD大鼠,随机分为:① 对照组;② LPS组;③ L-Arg治疗组.各组按治疗时间又分为给LPS 1 h后治疗3 h(1 h+3 h)组和给LPS 6 h后治疗3 h(6 h+3 h)组,并在给予LPS 1和6 h后再分别ip给予生理盐水(对照组及LPS组)和L-Arg 500 mg·kg~(-1) (L-Arg治疗组)治疗3 h.采用流式细胞术检测肺细胞凋亡率;Western 蛋白印迹法检测胱天蛋白酶3(caspase 3)蛋白的表达;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达;电镜观察肺组织病理变化.结果 与对照组比较,LPS 1 h+3 h及LPS 6 h+3 h组细胞凋亡率和caspase 3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达下降, Bax表达增加,Bcl-2/Bax比值降低,肺组织出现明显的病理变化.与LPS 1 h+3 h组相比,L-Arg 1 h+3 h组细胞凋亡率[(23.8±2.8) % vs (15.4±2.3)%],caspase 3 (0.80±0.06 vs 0.67±0.10)和Bax蛋白表达(0.115±0.012 vs 0.091±0.014)显著降低,Bcl-2蛋白表达(0.067±0.011 vs 0.075±0.009)和Bcl-2/Bax比值(0.586±0.114 vs 0.833±0.142)显著升高;肺组织病理改变明显减轻.L-Arg 6 h+3 h组细胞凋亡率和caspase 3蛋白表达低于LPS 6 h+3 h组,肺组织病理改变稍有减轻.结论 较早给予L-Arg可减轻ALI,其机制可能与降低caspase 3和Bax蛋白表达、增强Bcl-2蛋白表达有关.

第208位异亮氨酸对人细胞色素P4502A6尼古丁代谢活性的影响

目的 探讨人体尼古丁主要代谢酶细胞色素P450 (CYP)2A6及其同族成员CYP2A13肽链结构中,影响其尼古丁5′-羟化代谢活性的关键性氨基酸残基.方法 使用前期制备的CYP2A6和CYP2A13系列氨基酸互换突变体: CYP2A6V117A, CYP2A6G164H, CYP2A6I208S, CYP2A6R372H和CYP2A6S465P以及CYP2A13A117V, CYP2A13H164G, CYP2A13S208I,CYP2A13H372R和CYP2A13P465S,比较其与相应野生蛋白酶的尼古丁5′-羟化催化反应的动力学参数.结果 各突变体对2个CYP2A蛋白酶的尼古丁代谢活性影响不同.对于CYP2A6,I208S突变对酶活性的影响显著,导致表观反应常数Km及大反应速度Vmax由野生型62.25 μmol·L~(-1)和6.53 mol·min~(-1)·moL~(-1)变化为345 μmol·L~(-1)和2.19 mol·min~(-1)·moL~(-1),但该位点对CYP2A13酶活性无显著影响;对于CYP2A13,H372R突变对酶活性的影响为显著,导致Km 及Vmax由野生型的26.01 μmol·L~(-1)和24.51 mol·min~(-1)·moL~(-1)变为148.7 μmol·L~(-1)和6.11 mol·min~(-1)·moL~(-1), 此位点对CYP2A6无显著影响. 其他位点突变对酶活性影响较小或不显著.结论 CYP2A家族蛋白中,I208与H372分别是影响CYP2A6和CYP2A13对尼古丁代谢的关键残基.对于同家族蛋白酶而言,关键性氨基酸的作用并不总是一一对应.

δ阿片受体激活对过氧化氢损伤的心肌细胞的保护作用

目的 研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮-(5)-脑啡肽(DADLE)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的心肌细胞的保护作用及其机制.方法 分离乳大鼠心肌细胞,培养48 h后分为正常对照、H_2O_2(200 μmol·L~(-1))、H_2O_2+DADLE(1 μmol·L~(-1))、H_2O_2+DADLE+纳曲吲哚(10 μmol·L~(-1))和H_2O_2+DADLE+U0126(10 nmol·L~(-1))组,继续培养48 h.用[~3H]TdR掺入法检测心肌细胞增殖反应,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒测定培养上清LDH活性,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK)水平.结果 ①与正常对照组比较,H_2O_2组心肌细胞[3H]TdR掺入值明显降低, 细胞凋亡率升高;培养上清LDH活性和MDA含量明显增加,SOD活性和A_(p-ERK)/A_(ERK)的比值降低.②与H_2O_2组比较,DADLE可使心肌细胞[~3H]TdR掺入值升高, 细胞凋亡率下降;培养上清LDH活性和MDA含量降低,SOD活性和A_(p-ERK)/A_(ERK)的比值升高.③分别加入δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚和ERK拮抗剂U0126,DADLE对上述指标的逆转作用被抑制.结论 δ阿片受体激活对H_2O_2损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其增强心肌细胞的抗氧化功能及促进ERK磷酸化有关.

骨髓移植对小鼠芥子气中毒的治疗作用

目的 将骨髓移植应用于芥子气全身吸收中毒小鼠的治疗,探索芥子气中毒治疗的新方法.方法 Balb/c小鼠sc芥子气20 mg·kg~(-1)染毒,建立芥子气诱导的造血系统抑制模型.染毒后4 h、第1天和第2天3次尾静脉输注雄性小鼠骨髓细胞悬液(每次约1×10~6细胞),染毒后第3, 5, 7和10天取血和股骨,计数外周血白细胞和骨髓有核细胞.另一组实验小鼠在染毒后4 h及次日2次尾静脉输注骨髓细胞的同时合并使用重组粒细胞集落刺激因子(G-CSF)74 μg·kg~(-1),观察上述指标的变化.结果 与模型组比较,骨髓移植组小鼠血白细胞数呈升高趋势,至第10天有显著性差异;骨髓有核细胞数量升高明显,从第5天起有显著性差异.伍用G-CSF后,早期即可显著升高白细胞数.结论 骨髓移植可有效改善芥子气中毒引起的造血系统抑制.芥子气是糜烂性毒剂的主要代表,自发现至今已有百余年历史.国内外对芥子气中毒的机制进行了广泛而深入的研究,但迄今为止仍未得到特效的预防和救治芥子气中毒的药物,临床上主要采用对症和支持疗法[1].芥子气中毒影响机体的各组织系统,造血系统对芥子气尤为敏感,外周血白细胞数减少,骨髓有核细胞分化受抑制是芥子气全身吸收中毒的主要症状, 也是中毒后死亡的主要原因之一[2].

吡格列酮对脂多糖引起大鼠大脑皮质神经元损伤的抑制作用

目的 探讨吡格列酮对脂多糖 (LPS) 引起的神经元损伤的抑制作用,并探讨其信号传导机制.方法 取培养7 d的大鼠大脑皮质神经元细胞,除正常对照组外,其余各组先给予相应的处理30 min～1 h后,再加LPS 10 mg·L~(-1)处理4～24 h.MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;免疫荧光染色法测定磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)细胞内定位;Western蛋白印迹法检测活性胱天蛋白酶3(caspase 3)蛋白表达和磷酸化JNK1水平;Griess法测定细胞培养上清液中一氧化氮(NO) 含量.结果 与对照组相比,LPS可使体外培养神经元细胞存活率明显下降,(100.0±10.9)% vs (72.3±2.1)%;凋亡细胞百分率明显增加,(11.5±4.2)% vs (39.5±8.2)%;活性caspase 3蛋白表达和磷酸化JNK1水平增加;细胞培养上清液中NO 含量明显增加.吡格列酮0.01, 0.1和1 μmol·L~(-1)可明显对抗LPS引起的培养神经元细胞存活率下降,并呈一定浓度依赖性.吡格列酮0.1和1 μmol·L~(-1)也可明显对抗LPS引起的培养神经元凋亡细胞百分率、活性caspase 3蛋白表达、磷酸化JNK1水平和NO 含量增加.LPS+吡格列酮(1 μmol·L~(-1))组,细胞存活率为(97.8±9.7)%,凋亡细胞百分率为(20.6±5.0)%,NO 含量为(6.8±1.3)μmol·L~(-1).过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662不能去除吡格列酮对LPS引起的神经元细胞损伤的抑制作用,在LPS+吡格列酮(1 μmol·L~(-1))+GW9662(10 μmol·L~(-1))组,细胞存活率为(90.7±6.9)%,凋亡细胞百分率为(23.4±4.1)%, NO含量为(5.8±0.7)μmol·L~(-1).GW9662 10 μmol·L~(-1)对 LPS引起的细胞存活率降低没有影响.与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP600125 5 μmol·L~(-1)可明显对抗LPS引起的神经元损伤,细胞存活率明显增加,(72.3±2.1)% vs (109.8±11.8)%;凋亡细胞百分率降低,(39.5±8.2)% vs (19.1±4.8)%;NO含量降低,(21.1±5.0)μmol·L~(-1) vs (4.0±1.3)μmol·L~(-1).结论 吡格列酮能明显抑制LPS引起的皮质神经元损伤,这种作用可能与抑制JNK信号传导通路有关,与PPARγ激活无关.

人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3, CYP3A4.4, CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性

目的 重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3, CYP3A4.4, CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源.方法 应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性.结果 在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3, CYP3A4*4, CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录.感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢.结论 应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3, CYP3A4.4, CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白, 其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似.

尿促皮素诱导乳大鼠心肌细胞肥大的作用及信号传导机制

目的 探讨尿促皮素(urocortin)诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其信号传导机制.方法 实验分8组,正常对照组、尿促皮素0.1 μmol·L~(-1)组、星形孢菌素(Sta)1 μmol·L~(-1)、H89 0.1 μmol·L~(-1)和维拉帕米(Ver)1 μmol·L~(-1)组及尿促皮素分别加Sta, H89和Ver组.采用体外培养的乳大鼠心肌细胞,应用尿促皮素0.1 μmol·L~(-1)诱导心肌肥大,观察Sta 1 μmol·L~(-1), H89 0.1 μmol·L~(-1)和Ver 1 μmol·L~(-1)的作用,进一步探讨尿促皮素0.1 μmol·L~(-1)诱导心肌肥厚的作用机制.用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞直径;[~3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质的合成;用Lowry法检测心肌细胞蛋白质含量;用Western蛋白印迹法测定心房钠尿肽(ANP)表达;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca~(2+)]_i瞬间变化.结果 尿促皮素使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别增加30.9%,36.3%,35.5%和34.7%;尿促皮素+Sta组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了16.5%,22.1%,18.1%和21.3%;尿促皮素+H89组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了16.6%, 21.5%, 19.5%和20.6%;尿促皮素+Ver组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了 17.1%,20.9%,17.9%及19.9%;尿促皮素能够使心肌细胞[Ca~(2+)]_i瞬间变化水平增高, Sta, H89和Ver能够降低尿促皮素引起的心肌细胞[Ca~(2+)]_i瞬间变化升高.结论 尿促皮素可能通过蛋白激酶C和蛋白激酶A信号途径影响L-型Ca~(2+)通道,进而影响细胞[Ca~(2+)]_i瞬间变化水平,诱导乳大鼠心肌细胞肥大.

硫普罗宁钠与硫普罗宁对小鼠急性肝损伤预防和治疗作用的比较

目的 观察并比较硫普罗宁钠(MPG-Na)及硫普罗宁(MPG)对急性肝损伤的预防和治疗作用.方法 采用D-氨基半乳糖(Gal) (800 mg·kg~(-1),ip) 制备小鼠急性肝损伤模型.预防性给药时,分别ip给予小鼠MPG-Na或MPG 37.5,75和150 mg·kg~(-1),共7 d,于后一次给药后30 min,用Gal染毒造模.治疗性给药时,在Gal染毒造模30 min后分别 ip MPG-Na或MPG 37.5,75和150 mg·kg~(-1),共2 d.预防性给药小鼠Gal染毒24 h、治疗性给药小鼠染毒48 h后,检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、 总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和Alb/球蛋白比值(A/G).取肝脏组织,常规石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察肝脏组织病理变化.结果 与正常对照组比较,模型组小鼠血清GPT和GOT活性明显升高,肝脏组织出现明显的脂肪变性、肿胀或肝细胞变性坏死.预防性给予MPG-Na 150 mg·kg~(-1)小鼠血清GPT和GOT活性与模型组比较显著降低,治疗性给予MPG-Na 3个剂量血清GPT活性与模型组比较均明显降低,TP, Alb和A/G比值均无明显变化.预防性和治疗性给药后,肝脏组织病理损伤均明显减轻.另外,预防性和治疗性给药2种条件下,MPG-Na的作用与MPG相当.结论 MPG-Na对Gal引起的急性肝损伤具有预防和治疗作用,与MPG作用相当.

α突触核蛋白磷酸激酶的研究进展

α突触核蛋白(α-Syn)的异常聚集常被看成是帕金森病(PD)的重要致病因素之一.近年来研究发现,沉积于PD患者脑组织路易小体的α-Syn磷酸化的程度达到90%以上,表明磷酸化的α-Syn参与了PD的发生.虽然已发现多种磷酸激酶可以磷酸化α-Syn,但这些激酶在PD发生中的作用至今仍未阐明.

黄酮类化合物对脂氧合酶活性的影响及其生物学作用

脂氧合酶(LOX)与急慢性炎症、动脉粥样硬化、高血压和肿瘤等多种疾病的发生发展有关,抑制其活性可能对这些疾病的预防和治疗起重要作用.多种黄酮类化合物,如查耳酮、黄酮醇、黄酮和黄烷醇等对5-LOX, 12-LOX和15-LOX具有抑制作用,其机制可能为抑制LOX的表达、与酶结合或与酶活性中心产生的自由基反应等,且抑制作用与结构有关.黄酮类化合物对LOX的抑制作用可能是其具有抗炎、抗肿瘤和抗心脑血管疾病等生物学作用的原因之一.

《中国药理学与毒理学杂志》毒理学专辑征稿通知