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Urantide减轻高脂饮食引起的大鼠非酒精性脂肪肝损伤
目的 探讨多肽化合物urantide对高脂饮食引起动脉粥样硬化大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用.方法72只SD大鼠随机分为:对照组(Con)、模型组( Mod) [用腹腔注射维生素 D3( VD3)及高脂饮食方法复制大鼠动脉粥样硬化模型] 、阳性药组(辛伐他汀,Sim) 、urantide 3( Ut 3) 、 7( Ut 7)及 14 d组( Ut 14) ,给药剂量为30 μg/kg.给药结束后,检测血清学及肝功能指标;HE染色胸主动脉、肝脏;RT-qPCR检测肝脏中尾加压素Ⅱ(UⅡ) 、G蛋白偶联受体14( GPR14)的 mRNA表达;免疫组织化学检测肝组织 UⅡ、GPR14 蛋白质表达.结果 模型组大鼠血清中谷丙转氨酶氨酶( ALT) 、谷草转氨酶( AST)等水平较对照组显著升高( P<0. 05);urantide治疗组大鼠上述各项指标较模型组均显著回降( P<0. 05) ;模型组大鼠肝脏中 UⅡ及 GPR14 mRNA与蛋白表达均较对照显著增高( P<0. 05);与模型组大鼠相比,urantide治疗组随着给药时间的增加,UⅡ及GPR14 mRNA与蛋白表达显著回降( P<0. 05) .结论 Urantide对高脂饮食所引起动脉粥样硬化大鼠非酒精性脂肪肝具有明显的保护作用.
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UⅡ/UT系统对急性肝衰竭小鼠肝组织自噬水平的影响
目的 探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,UⅡ)及其受体系统(urotensin Ⅱ receptor,UT)对急性肝衰竭(acute liver failure,ALE)小鼠肝脏自噬水平的影响.方法 ♂Balb/c小鼠随机分为4组(每组6只).A组:健康对照组;B组:预处理对照组;C组:模型组;D组:预处理模型组.B组和D组给予0.6 mg/kg Urantide 尾静脉注射预处理.30 min后,C组和D组立即以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)联合D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-GaIN)腹腔注射诱导急性肝衰竭.LPS/D-GalN攻击6h后采集小鼠血清和肝组织样本.测量血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平以评价肝损伤情况.采用实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测Beclin-1、Atg5(autophagy related 5)、Atg7、Sqstml(sequestosome 1)/p62和LC3 mRNA(microtubule-associated protein 1 light chain 3)水平,采用免疫印记技术(Western blot)检测LC3及p62蛋白质含量.结果 模型组和预处理模型组ALT和AST水平与健康对照组和预处理对照组相比较均明显增高(P＜0.01),其中预处理模型组较模型组明显降低(P＜0.01).RT-PCR结果显示模型组和预处理模型组小鼠肝组织中Beclin-l、Atg5、Atg7、p62和LC3 mRNA水平均较健康对照组和预处理对照组低(P＜0.05);而模型组和预处理模型组、健康对照组和预处理对照组各自间比较均无统计学差异(P＞0.05).Western blot 结果也显示,模型组和预处理模型组小鼠肝组织中LC3和p62蛋白水平均较健康对照组和预处理对照组低(P＜0.05);而模型组和预处理模型组、健康对照组和预处理对照组各自间比较均无统计学差异(P＞0.05).结论 UⅡ/UT系统对LPS/D-GalN诱导ALF小鼠下调的肝组织自噬水平无明显影响.
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Urantide对心肌缺血性损伤的保护作用
研究UT受体拮抗剂--urantide对心肌缺血性损伤的保护作用及其机制.小鼠心肌缺血采用皮下注射(sc)异丙肾上腺素(Iso)法,观察心电图ST段的变化,测定小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)的活性以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量, HE染色观察心肌组织病理损伤情况.建立乳鼠原代心肌细胞缺氧再给氧模型,采用ELISA法观察urantide对细胞培养上清液中肌钙蛋白I(cTnI)的影响,比色法测LDH活性;MTT法观察细胞存活率及激光共聚焦检测细胞内钙离子浓度的变化.实验揭示urantide (3～30 μg·kg-1)可明显抑制小鼠心电图ST段的抬高; urantide (10及30 μg·kg-1)可显著降低小鼠血清中LDH活性和MDA含量,明显升高NOS活性和NO含量,同时减轻异丙肾上腺素诱导的心肌病理损伤.在乳鼠原代心肌细胞缺氧再给氧模型中, urantide (1×10-6和1×10-7 mol·L-1)能明显增加细胞存活率,降低培养上清液中LDH的活性; urantide (1×10-6～1×10-9 mol·L-1)能显著降低细胞培养上清液中cTnI的增高和细胞内钙离子浓度的上升.上述结果表明, urantide对心肌缺血及缺氧再给氧所致心肌细胞的损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与增加NOS活性、促进NO合成及抑制钙超载有关.
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Urantide对缺血/再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡的影响
目的:探讨urantide对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)或缺氧/复氧损伤(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其相关机制.方法:①在体实验采用冠状动脉左前降支缺血30min/灌注60min法建立大鼠在体心肌I/R模型.Urantide 3,10和30ug·kg-1分别于缺血前10 min经舌下静脉给药.TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学方法检测心肌细胞内Bcl-2和Bax蛋白的表达水平.②离体实验乳大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧3h处理制备H/R模型.Urantide 0.1,1和10 nmol·L(-1)分别于缺氧前加入.Hoechst33258染色和流式细胞术检测心肌细胞凋亡.结果:①在体实验与假手术组相比,I/R组TUNEL阳性细胞数量明显升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达量轻度升高,但无统计学差异,Bax蛋白表达量显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01).与I/R组相比,urantide 10,30ug·kg-1组心肌凋亡细胞显著降低,分别较模型组降低36.6%和57.2%(P<0.05);Bax蛋白表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.05);同时,urantide 30 ug·kg-1组Bcl-2蛋白表达量也明显升高(P<0.05),②离体实验与正常对照组相比,H/R组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);Hoechst33258结果显示,与模型组相比,urantide 0.1,1和10 nmol·L(-1)组细胞凋亡率分别显著降低了27.9%,59.0%和75.4%(P<0.05).流式细胞术结果显示,urantide 1和10 nmol·L(-1)组细胞凋亡率显著降低,分别较H/R模型组降低32.8%和64.7%(P<0.01).结论:Urantide可减轻I/R或H/R损伤诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与增加Bel-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达有关.
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urantide抑制动脉粥样硬化大鼠单核细胞趋化蛋白-1的表达
目的 研究urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉及血管平滑肌细胞(VSMC)中单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)的表达的影响.方法 (1)在体实验:采用给予高脂饮食及ip给予维生素D3制备AS模型.AS大鼠分别尾静脉注射urantide 30 μg·kg-1·d-1,分为3,7和14 d组.于各实验结束时间点测量体质量,检测血中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和Ca2+；免疫组化法检测胸主动脉中MCP-1表达.(2)体外实验:贴块法制备的血管平滑肌细胞(VSMC)中加入尾加压素Ⅱ(UⅡ) 10 μmol·L-1+ urantide 0.1,1,10 nmol·L-1,0.1和1μmol·L-1作用48 h,ELISA法检测细胞中MCP-1含量.结果 (1)在体实验:与AS模型组比较,只有14 d urantide给药组的体质量显著增加(P＜0.05)；3 d组、7d组及14 d组血清中Ca2+,TG,TC,HDL及LDL均随给药时间的延长呈现逐渐降低的趋势(P＜0.01),达到或接近阳性药氟伐他汀组水平；在大鼠胸主动脉内膜及中膜斑块内,与AS模型对照组相比,urantide 3 d组、7d组及14 d组MCP-1阳性染色强度和范围均减少.(2)体外实验:urantide各浓度组对VSMC培养上清中MCP-1的表达均有下调趋势(P＜0.05).结论 urantide在大鼠动脉粥样硬化中可抑制炎症因子MCP-1的表达.
关键词： urantide 尾加压素Ⅱ 单核细胞趋化蛋白-1 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 -
urantide对小鼠急性肝细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨urotensinⅡ(UⅡ)特异性受体(UT)特异性拮抗剂urantide对急性肝细胞凋亡的影响及其机制.方法 雄性BALB/c小鼠按随机排列表法随机分为4组(每组6只):健康对照组、预处理对照组、模型组和预处理模型组.预处理对照组和预处理模型组给予尾静脉注射0.6 mg/kg urantide预处理,健康对照组和模型组则给予相同体积生理盐水.30min后模型组及预处理模型组立即以脂多糖联合D-半乳糖胺( D-GalN)腹腔注射诱导急性肝细胞凋亡小鼠模型,健康对照组和预处理对照组则给予相应体积的生理盐水.用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术分析和半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3活性测定检测肝细胞凋亡程度；用反转录(RT)-PCR及酶联免疫吸附试验( ELISA)方法检测肝组织及血浆前炎细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-1β的表达与分泌水平.结果 模型组可见大量肝细胞凋亡,而预处理模型组肝细胞凋亡指数和caspase-3活性均明显低于模型组[(26±11)％比(77±20)％,(2.50±0.83) pmol·min-1·mg-1比(3.76±0.42) pmol·min -·mg-1,均P＜0.01]；肝组织前炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的mRNA相对表达水平及蛋白分泌水平也均明显低于模型组[1.69±0.47比3.57±0.79、0.31±0.02比0.46±0.06、2.81±0.72比3.35±0.84,(233±36) pg/ml比(441±157) pg/ml、(228 ±21) pg/ml比(364±20) pg/ml、(93.8±5.2) pg/ml比(180.3±4.3) pg/ml,均P＜0.01].结论 urantide可通过抑制前炎细胞因子的表达与分泌抑制脂多糖/D-GalN诱导的急性肝细胞凋亡.这表明UⅡ/UT受体系统在急性肝衰竭免疫炎性损伤中起关键性的作用,并有可能成为ALF药物治疗的新靶点.
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UⅡ／UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响
目的：探讨Urotensin Ⅱ（ UⅡ）/UT系统对脂多糖（ Lipopolysaccharide ，LPS）刺激枯否细胞（ Kupffer cell ，KC）固有免疫炎症信号通路Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）-干扰素调节因子3（Interferon regulatory factor 3，IRF3）的影响。方法：体外分离培养大鼠肝KCs，KCs培养上清液促炎性细胞因子IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平采用ELISA分析检测，细胞表面TLR4的表达采用流式细胞技术分析，IRF3基因和蛋白表达情况分别采用real-time PCR和Western blot 分析方法检测。结果：LPS刺激后，KCs培养上清液IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平、细胞表面TLR4表达阳性细胞率及细胞内IRF3 mRNA表达水平均显著升高，UT拮抗剂urantide预处理抑制了LPS刺激诱导KCs对上述分子的上调表达；LPS的应用也造成了KCs胞核内IRF3蛋白表达水平升高，而使胞浆内IRF3蛋白表达水平降低，urantide预处理后，抑制了LPS诱导KCs核内IRF3蛋白上调和胞浆水平下调。结论：UⅡ/UT系统通过对TLR4-IRF3通路的正性调控作用，介导了或至少部分介导了LPS刺激KCs的免疫性炎症分泌效应。
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Urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠白细胞介素-6表达的影响
目的 观察Urantide对大鼠动脉粥样硬化白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.方法 采用高脂饲料喂养及腹腔注射VD3损伤动脉内膜的方法建立大鼠动脉粥样硬化模型,随机分为4组:对照组、模型组、氟伐他汀组、Urantide组,免疫组织化学法检测主动脉壁内IL-6的表达水平,以Introduction to Image-Proplus 6.0软件进行图像分析；体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC),随机分为4组:对照组、尾加压素Ⅱ组、氟伐他汀组、Urantide组,酶联免疫吸附法检测各组IL-6的浓度.结果 在胸主动脉内膜及中膜斑块内,模型组IL-6阳性颗粒较对照组微量表达,Urantide各实验组及氟伐他汀均可增加IL-6的表达；Urantide各浓度组对VSMC培养上清中IL-6的表达均有下调趋势.结论 IL-6在体内和体外的实验结果并不相一致,体内实验表现为抗炎症性,Urantide对其表达无下调作用；而体外实验其表现为致炎性,Urantide对IL-6表达有下调作用.
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urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠胸主动脉损伤的影响
目的:观察urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉损伤的影响,探讨其防治AS的作用机制.方法:采用高脂饲料喂养及腹腔注射维生素D3损伤动脉内膜的方法建立大鼠AS模型,随机分为正常组、AS模型组、阳性药组及urantide组.全自动生化分析仪检测大鼠血清中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和Ca2+的水平；胸主动脉HE染色观察各组大鼠胸主动脉形态学变化.RT-PCR方法检测大鼠胸主动脉中尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体G蛋白偶联受体14 (GPR14)mRNA的表达.结果:与正常组比较,AS模型组大鼠血清中Ca2+、TG、TC、HDL及LDL水平明显升高(P＜0.01)；urantide 组大鼠在给药后,血清中上述各项指标均随给药时间的延长呈现逐渐降低的趋势,达到或接近阳性药组大鼠的水平,与AS模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).与正常组比较,AS模型组大鼠胸主动脉出现典型AS病变；与AS模型组比较,urantide组大鼠AS病理改变逐渐减轻.与正常组比较,AS模型组大鼠UⅡ及GPR14mRNA的表达水平增高(P＜0.01)；与AS模型组比较,urantide组大鼠随给药时间的增加,UⅡ及GPR14mRNA表达水平降低(P＜0.01).结论:urantide对AS大鼠胸主动脉损伤有一定的保护作用.
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urantide对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨在尾加压素Ⅱ(UⅡ)受体拮抗剂urantide干预下,UⅡ在大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达,阐明其可能的作用机制.方法:采用贴块法对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞进行体外培养,实验分为正常对照组(C组)、UⅡ组(M组)、阳性药对照组(Flu组)及urantide干预组(浓度分别为1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×107和1×10-6 mol·L-1),采用MTT法检测VSMC增殖活性,采用流式细胞术测定VSMC增殖指数(PI)及S期细胞分数(SPF).结果:与正常对照组比较,UⅡ组在各时间点VSMC增殖活性均增加(P＜0.01)；PI及SPF明显增加(P＜0.01)；与UⅡ组比较,1×10-10～10-6 mol·L-1 urantide组VSMC增殖活性明显降低(P＜0.05或P＜0.01),PI及SPF均明显减少(P＜0.05或P＜0.01),其中以1×10-6 mol·L-1 urantide作用明显.结论:urantide可阻断UⅡ对动脉粥样硬化(AS)主要病变细胞VSMC的促丝裂作用,本研究为临床应用urantide治疗AS提供了新的视角和实验依据.
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UT受体拮抗剂urantide对急性肝功能衰竭小鼠肝组织NF-κB信号通路分子的影响
目的 探讨urantide对急性肝功能衰竭(ALF)小鼠肝内NF-κB信号通路分子的影响.方法 24只雄性BALB/c小鼠被随机分为4组(6只/组),分别行urantide或0.9％氯化钠溶液尾静脉注射预处理.半小时后,以脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-GalN)或0.9％氯化钠溶液腹腔注射进行攻击.12h后采集肝组织标本,分别进行胞质蛋白和核蛋白抽提；蛋白质表达采用Western印迹方法；NF-κB与DNA的结合活性通过EMSA检测.结果 胞质IκB-α蛋白水平在4组之间的差异无统计学意义(P＞0.05),而p-IκB-α蛋白水平在模型组(urantide-,LPS/D-GalN+)和预处理模型组(urantide+,LPS/D-GalN+)较正常对照组(urantide-,LPS/D-GalN-)和预处理对照组(urantide+,LPS/D-GalN-)显著升高[(0.63±0.10)、(0.31±0.05)比(0.14±0.02)、(0.14±0.01),P＜0.01],且在预处理模型组较模型组显著降低[(0.31±0.05)比(0.63±0.10),P＜0.01]；NF-κB p65蛋白水平在模型组和预处理模型组较正常对照组和预处理对照组显著升高[(1.11±0.32)、(0.69±0.14)比(0.10±0.03)、(0.13±0.01),P＜0.01],而与模型组相比,预处理模型组p65蛋白水平降低[(0.69±0.14)比(1.11±0.32),P＜0.05]；NF-κB与DNA的结合活性在模型组和预处理模型组较正常对照和预处理对照组显著升高[(4.68±1.03)、(1.60±0.37)比(1.00±0.16)、(1.01±0.10),P＜0.01],而与模型组相比,预处理模型组NF-κB的DNA结合活性则显著降低[(1.60±0.37)比(4.68±1.03),P＜0.01].结论 UT受体拮抗剂urantide可抑制LPS/D-GalN攻击诱导的NF-κB通路分子的表达和活性.
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人urotensin Ⅱ对大鼠心肌缺血缺氧性损伤的保护作用机制
目的:探讨人urotensin Ⅱ(hU Ⅱ)抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制.方法:在大鼠冠状动脉左前降支结扎再灌注模型上,观察心电图变化,测定心肌梗死体积及心肌组织中诱导型一氧化氮舍酶(inducible NO synthesis,iNOS) mR-NA表达.结果:0.47、1.4和4.2 μg/kg hUⅡ可明显抑制缺血再灌注损伤大鼠心电图ST段抬高和心肌梗死体积;4.2 μg/kg hUⅡ显著地改善冠状动脉结扎再灌注大鼠心肌细胞超微结构的变化,并增强大鼠心肌组织中iNOS mRNA表达;urotensin Ⅱ受体(UT)拮抗剂urantide 10 nmol/kg可明显地拮抗1.4和4.2 μg/kg hUⅡ对缺血再灌注大鼠心电图ST段抬高和心肌梗死的抑制作用.结论:HUⅡ抗大鼠心肌缺血性损伤作用可能与激动UT及促进NO合成有关.
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Urantide对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 研究UT受体(urotensin Ⅱ receptor,UTS2R)拮抗剂--urantide对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制. 方法大鼠心肌缺血/再灌注损伤采用冠状动脉左前降支结扎和松开法(LAD法).实验大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、urantide 3、10、30 μg·kg-1 3个剂量组,以及1.6 mg·kg-1维拉帕米(Verapamil,Ver)阳性药对照组.除假手术组外,其余组别大鼠均实施30 min缺血,60 min再灌注.受试药于缺血前10 min经舌下静脉给药,记录心肌缺血/再灌注过程中各组心率和心电图ST段变化值.实验结束后,测定大鼠血清中MDA、NO的含量以及NOS、LDH的活性;取心脏行伊文思兰和TTC双染色,计算IS/AAR.另取一批大鼠,实验方法同前.实验结束后剪取左心室缺血区,提取蛋白后采用Western blot方法检测iNOS的蛋白表达情况. 结果 urantide(10, 30 μg·kg-1)对心率无明显影响,但可明显抑制缺血/再灌注后心电图ST段的抬高;明显降低血清中MDA的含量和LDH的活性,明显升高血清中NO总量和总的NOS活性;同时明显降低IS/AAR.3 μg·kg-1 urantide 预处理对上述指标均无影响.Western blot显示urantide(10, 30 μg·kg-1)能抑制iNOS的表达.结论 urantide对心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,作用机制可能与抗脂质过氧化、促进NO合成有关.
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Urantide对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡的作用及机制研究
目的 观察urantide对大鼠缺血/再灌注心肌组织氧化应激损伤的作用和心肌细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt及PKC信号通路的关系.方法 可逆性冠脉左前降支结扎造成心肌缺血/再灌注模型,给予大鼠心脏缺血30 min再灌注90 min.80只大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注(I/R)组、urantide低、中、高剂量组(3,10,30 μg·kg-1)、维拉帕米对照组(1.6 mg·kg-1)、urantide+CHE组(30 μg·kg-1+1 mg·kg-1)、urantide+LY294002组(30 μg·kg-1+0.3 mg·kg-1).Urantide低、中、高剂量组中urantide于缺血前5 min舌下静脉1 min内一次性推注,urantide+CHE组与urantide+LY294002组中,在穿线稳定后舌下静脉分别快速推注CHE与LY294002,5 min 后舌下静脉快速推注urantide 30 μg·kg-1,稳定10 min后再行缺血/再灌注操作.实验结束后测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力和丙二醛(MDA)含量以及一氧化氮(NO)含量.TUNEL法检测凋亡细胞指数(AI),免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax的蛋白表达.结果与I/R组相比,urantide 30 μg·kg-1能明显升高SOD活性(P<0.01),明显减少血清中MDA的含量(P<0.05),明显提高NOS活力(P<0.01),使NO含量增加(P<0.01);Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡指数降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05);urantide+CHE组与urantide+LY294002组与urantide 30 μg·kg-1组相比,SOD活力和NO含量下降,MDA含量上升,心肌组织中Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡指数上升,而Bcl-2蛋白表达下降,与I/R组比较差异无统计学意义(P>0.01).结论 Urantide能够通过激活PKC和PI3K/Akt信号转导通路,减少心肌组织氧自由基的含量,进一步调控Bcl-2和Bax蛋白的表达,抑制心肌缺血/再灌注大鼠心肌细胞的凋亡,从而对大鼠心肌缺血/再灌注具有一定保护作用.
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尾加压素Ⅱ对大鼠肺动脉平滑肌细胞胶原合成的影响
目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂Urantide (UR)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法 以组织贴块法培养的大鼠PASMCs为研究对象,采用BrdU掺入实验观察不同浓度UⅡ(1×10-10～1×10-7 mol/L)及Urantide对PASMCs增殖的影响；采用Western blotting及Real-timePCR法,分别在蛋白和基因水平检测不同浓度UⅡ及Urantide对Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.结果 UⅡ(1×10-9～1×10-7mol/L)浓度依赖性地促进PASMCs增殖(P＜0.05,P＜0.001,P＜0.001),增加PASMCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达(P＜0.01,P＜0.001),而1×10-10 mol/L UⅡ对PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原基因和蛋白表达无明显作用(P＞0.05)；UⅡ受体拮抗剂Urantide可拮抗UⅡ的上述作用(P＜0.01).结论 UⅡ通过与大鼠PASMCs的UⅡ受体UT结合而发生一系列诱导作用,终引起PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,Urantide通过竞争性结合UT而阻断UⅡ与UT的结合,使UⅡ无法发挥诱导作用.
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Urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠C反应蛋白表达的影响
目的 观察urantide对动脉粥样硬化大鼠C反应蛋白表达的影响,探讨其防治动脉粥样硬化的作用机制.方法 采用高脂饲料喂养及腹腔注射维生素D3损伤动脉内膜的方法建立大鼠动脉粥样硬化模型,随机分为四组:对照组、模型组、氟伐他汀组、urantide组,免疫组织化学法检测主动脉壁内C反应蛋白的表达水平.体外培养血管平滑肌细胞,随机分为四组:对照组、尾加压素Ⅱ组、氟伐他汀组、urantide组,酶联免疫吸附法检测各组培养上清中C反应蛋白浓度.结果 在胸主动脉内膜及中膜斑块内,模型组C反应蛋白阳性颗粒较对照组表达明显增加,urantide组及氟伐他汀组C反应蛋白的表达减少;urantide各浓度组对血管平滑肌细胞培养上清中C反应蛋白的表达均有下调趋势,其中10-6 mol/L urantide下调作用强(P<0.01).结论 尾加压素Ⅱ在动脉粥样硬化中能促进炎症反应标志因子C反应蛋白的大量表达,而这种促进作用可以被尾加压素Ⅱ受体拮抗剂urantide抑制,该研究为临床应用urantide治疗动脉粥样硬化提供新的视角和实验依据.
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Urantide对动脉粥样硬化大鼠肾组织中STAT3表达的影响
目的 探讨UⅡ受体拮抗剂——Urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠急性肾损伤(AKI)中信号传导与转录激活因子3(STAT3)表达的影响.方法 采用经腹腔注射维生素D3(Vit D3)及饲以含高脂成分特制饲料的方法复制AS大鼠模型,按照随机原则分为4组:正常组、模型组、辛伐他汀组、Urantide组.采用HE染色观察各组大鼠肾小球形态结构变化;全自动生化分析仪检测大鼠血清中尿素氮(BUN)含量变化;Western blotting检测肾组织中STAT3、p-STAT3蛋白表达水平.结果 模型组HE染色显示肾小管间质水肿,部分肾小球萎缩,肾小球囊壁与周围组织粘连;模型组大鼠血清中BUN含量及肾组织中STAT3、p-STAT3蛋白表达水平较正常组升高(P<0.05).与模型组比较,辛伐他汀组大鼠肾小球和肾小管间质的形态学变化趋于正常组,大鼠血清中BUN含量降低(P<0.05),肾组织中STAT3、p-STAT3蛋白表达水平升高(P<0.05);Urantide组大鼠肾小球萎缩和肾小管间质水肿的形态学变化有所改善,大鼠血清中BUN含量降低(P<0.05),肾组织中STAT3、p-STAT3蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 Urantide可通过调节STAT3的表达缓解AKI,以及改善肾小球的功能.
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UⅡ/UT系统在LPS刺激大鼠肝枯否细胞前炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达与分泌中的作用研究
目的 探讨UⅡ/UT系统在LPS刺激大鼠肝枯否细胞(Kupffer cell,KC)TNF-α和IL-1β表达和分泌中的作用.方法 采用胶原酶灌注消化和密度梯度离心分离大鼠KC.细胞分组和处理方法:正常对照组urantide(-)LPS(-)、urantide或UⅡ处理组urantide/UⅡ (+)LPS(-)、LPS刺激组urantide(-)LPS(+)、urantide或UⅡ预处理组urantide/UⅡ(+)LPS(+);细胞内基因表达采用RT-PCR和real-time PCR方法检测,细胞培养上清液中蛋白质分泌水平采用ELISA分析方法检测.结果 LPS刺激后,KC内UⅡ、UT mRNA相对表达水平和细胞培养上清液UⅡ多肽水平显著升高,但urantide预处理组显著低于LPS刺激组(P＜ 0.01).Urantide处理组细胞UⅡ/UT mRNA和上清液UⅡ多肽水平与正常对照组之间无明显统计学差异(P＞ 0.05); LPS刺激后(LPS刺激组、UⅡ预处理组和urantide预处理组),TNF-α和IL-1β mRNA表达和蛋白质分泌水平较正常对照组明显升高(P＜0.01),但urantide预处理组较LPS刺激组和UⅡ预处理组显著降低(P＜0.01),LPS刺激组与UⅡ预处理组之间无明显统计学差异(P＞0.05).UⅡ或urantide处理组KC上述前炎细胞因子的表达和分泌水平与正常对照组之间无明显统计学差异(P＞0.05).结论 UⅡ/UT信号系统可能在LPS刺激肝KC前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的表达和分泌中起重要作用.
关键词： Urotensin Ⅱ UT urantide 肝枯否细胞 前炎细胞因子
