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MiR-21调控雌激素缺乏导致的小鼠骨质疏松BMSCs成骨能力的研究
目的:寻找雌激素缺乏所导致的骨质疏松环境下调控小鼠骨髓基质干细胞( mouse bone marrow stromai stem ceiis , mBMSCs )成骨的关键miRNA,并探讨此miRNA在雌激素缺乏所导致的骨质疏松微环境下是否参与调控mBMSCs成骨及其在此种微环境下对成骨的调控作用. 方法:建立卵巢切除动物模型,通过生物信息学技术以及miRNA基因芯片技术对卵巢切除组和假手术组的C57BL/6J小鼠来源的mBMSCs进行对比筛选,确定调控mBMSCs成骨的关键miRNA;利用实时定量RT-PCR技术验证此miRNA在两组mBMSCs成骨分化过程中的表达差异;通过细胞转染技术上调和下调此miRNA,实时定量RT-PCR、Western biot、茜素红和碱性磷酸酶染色等技术观察转染后mBMSCs的成骨能力. 结果:生物信息学技术以及miRNA基因芯片技术筛选确定调控mBMSCs成骨的关键miRNA为miR-21;实时定量RT-PCR显示miR-21在卵巢切除组mBMSCs成骨分化中的水平较假手术组低;转染miR-21至卵巢切除组mBMSCs,能部分恢复其成骨分化能力. 结论:miR-21是雌激素缺乏所导致的骨质疏松环境中调控mBMSCs成骨分化的关键miRNA;miR-21在雌激素缺乏所导致的骨质疏松环境中能促进mBM-SCs的成骨分化.
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MicroRNA-21表达调控研究
MicroRNAs (miRNAs)是一类广泛存在于真核细胞中的长约22 nt的非蛋白编码的、单链RNA,具有转录后基因调控的功能,与细胞分化、生长以及代谢等多种生物学过程的调节有关.研究发现,人体很多肿瘤中都存在miRNA的差异表达.而在这些差异表达的miRNA中,又以miR-21( miRNA-21)较为特殊.因为miR-21在几乎所有实体肿瘤中都存在高表达,而且高表达的miR-21可能发挥类似原癌基因的作用.miR-21通过负调节靶基因增加肿瘤细胞的增殖、凋亡以及肿瘤侵入转移,这些靶基因有PTEN、PDCD4、RECK等等.该文主要介绍miR-21在肿瘤中的作用、调节机制,以及作为靶基因在肿瘤的治疗中的临床意义.
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microRNAs 224和21对人胶质瘤干细胞存活的影响及相关的分子机制
目的：探讨microRNAs 224和21对人胶质瘤干细胞存活的影响及相关的分子机制。方法 qPCR检测恶性胶质瘤样品、人GBM干细胞、人工建立的GBM干细胞系和人体组织中microRNAs的失调表达情况。 GBM神经球干细胞系、GBM干细胞系（0822、0308和A172）、人工建立的细胞系U373及永生化人星形胶质细胞分别转染miR－21，miR－224模拟物或抑制剂，然后通过膜联蛋白Ⅴ染色及Caspase 3／7活性检测细胞凋亡，活细胞计数检测细胞生长情况。利用TargetScan 生物学软件预测miR－21和miR－224的靶基因，并利用荧光素酶报告检测microRNAs对Bim基因的靶向作用。 Western blot 检测细胞转染miR－21或 miR－224模拟物或抑制剂后对Caspase 3，Caspase 9及Bim蛋白表达的影响。结果 qPCR检测结果表明，GSC、人肿瘤组织和GBM神经球干细胞中，miR－21和miR－224显著上调表达（ P＜0．05）。细胞凋亡和细胞生长检测结果表明，miR－224和miR－21能调控GSC细胞凋亡和生长。靶基因预测分析Caspase 3，Caspase 9和Bim 3’－UTR序列为miR－224和miR－21潜在的靶基因，荧光素酶实验进一步证实Caspase 3，Caspase 9和Bim 3’－UTR序列为miR－224和miR－21的直接靶点。进一步的实验证明，miR－224和miR－21通过直接靶向Caspases和Bim调控细胞生长和凋亡。结论上述结果表明miR－224和miR－21是GSC的凋亡抗性的重要生理驱动因子，其为胶质瘤的治疗提供了新的靶标。
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miR-21、miR-29c和miR-182鉴别诊断良恶性胸腔积液
目的:评价miR-21、miR-29c和miR-182在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用价值.方法:应用荧光定量PCR检测65例恶性胸腔积液患者及61例良性胸腔积液患者胸腔积液标本中miR-21、miR-29c和miR-182的表达水平,并比较三者在良、恶性胸腔积液中的表达差异.构建ROC曲线,获取曲线下面积(AUC),确定诊断恶性胸腔积液的临界值,计算敏感度、特异度等指标,并与癌胚抗原进行比较.结果:恶性胸腔积液中miR-21和miR-182的表达水平均明显高于良性胸腔积液(P＜0.05),而miR-29c的表达水平则显著低于良性胸腔积液(P＜0.05).ROC曲线显示miR-21、miR-29c和miR-182的AUC值分别为0.873 (95％ CI:0.808 ～0.939)、0.856(95％ CI:0.790～0.920)和0.841 (95％ CI:0.772 ～0.911),高于癌胚抗原(0.822,95％ CI:0.703 ～0.873).miR-21、miR-29c和miR-182诊断恶性胸腔积液的敏感度分别为83.1％、78.5％、83.1％,特异度分别为85.2％、81.5％、73.4％,亦高于癌胚抗原诊断恶性胸腔积液的敏感度及特异度(75.4％和71.2％).联合检测胸腔积液中miR-21、miR-29c、miR-182和癌胚抗原可提高诊断的敏感度(93.8％)和特异度(90.2％).结论:miR-21、miR-29c和miR-182有可能成为临床鉴别诊断良恶性胸腔积液的标志物.
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MiR-21和MiR-137的表达对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响
目的:研究microRNA-21(MiR-21)和microRNA-137(MiR-137)在膀胱癌细胞的表达,分析其对细胞增殖和侵袭的影响.方法:选择2014年1月至2017年10月期间,在我院经病理检查确诊,并行手术切除治疗的96例膀胱癌患者为研究对象,通过PCR等检测技术,检测膀胱癌肿组织及癌肿周围组织(癌旁)内MiR-21和MiR-137的表达,研究MiR-21和MiR-137对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响.结果:膀胱癌肿组织MiR-21、MiR-137表达量显著高于癌肿周围组织,随着膀胱癌恶性度的增加而增加;癌肿细胞内TRAP-1、KPNA 2、TRPM 8的mRNA表达量高于癌旁组织,CBX 7、CDH 13低于癌旁组织;MiR-137和MiR-21高表达的膀胱癌细胞的24 h、48 h和72 h后增殖速率均明显增快;Transwell实验显示过表达组细胞过膜数量为(402±25/视野),高于空白对照组和抑制组(P<0.05).结论:MiR-21和MiR-137的表达量与侵袭和增值能力相关,表达增多可显著提高膀胱癌细增殖和侵袭,可为临床上检查、诊断、治疗膀胱癌提供科学依据.
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miR-21在早产儿呼吸窘迫综合征患儿血清中表达水平的研究
目的:探讨早产儿呼吸窘迫综合征(respiratory distress syndrome,RDS)患儿外周血血清中miR-21的表达水平及其临床意义.方法:选取2015年6-12月入住南京医科大学第一附属医院新生儿监护病房的RDS患儿30例;对照组为非RDS早产儿共21例,使用逆转录PCR法检测外周血血清中miR-21的表达水平,并分析各组病例的临床特点.结果:RDS患儿血清中miR-21表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).中重度RDS组miR-21表达水平有明显增加趋势,但目前尚未发现差异有统计学意义.RDS患儿中使用肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)组miR-21表达水平明显增加(P＜0.05).结论:血清miR-21表达水平与RDS密切相关,提示miR-21在RDS发病机制中起一定作用.
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miR-21在大肠癌中的表达及其靶基因探讨
目的:探讨微小RNA (microRNA,miRNA)-21在大肠癌(colorectal cancer,CRC)组织和细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路中各蛋白的影响及miR-21可能调控的靶基因.方法:运用实时荧光定量PCR和免疫组化分别测定CRC组织中的miR-21和PTEN水平.通过反义寡核苷酸技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证.通过蛋白质免疫印迹法检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变.利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因实验检测PTEN活性.结果:miR-21在CRC组织中增高(P＜0.05),PTEN在CRC组织中表达减低(P＜0.05).而且miR-21与PTEN的表达之间呈负相关(r=-0.396,P＜0.05).miR-21在HCT116中表达高,在SW480中表达低.miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调(P＜0.05),PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调(P＜0.05).筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一.结论:PTEN 可作为miR-21的靶基因参与调控CRC过程.miR-21在大肠癌中表达增高,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移.
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丙烯酰胺对SH-SY5Y神经细胞凋亡和miR-21表达的影响
目的:探讨丙烯酰胺(AA)对人SH-SY5Y神经细胞凋亡和miR-21表达的影响.方法:不同浓度丙烯酰胺作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定丙烯酰胺对SH-SY5Y细胞活力的影响,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡,real-time PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测PTEN、p-AKT、AKT、Bcl-2、Bax、caspase 9和caspase 3蛋白表达.结果:丙烯酰胺剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活性,Hoechst 33258染色显示明显细胞凋亡形态变化；丙烯酰胺显著降低SH-SY5Y细胞miR-21的表达,同时升高PTEN、Bax、caspase 9、caspase 3水平并降低p-AKT和Bcl-2表达.结论:丙烯酰胺可通过线粒体途径诱导SH-SYSY神经细胞凋亡,其机制可能与丙烯酰胺引起miR-21表达下调有关.
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抑制miR-21对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能机制探讨
目的:探讨抑制miR-21表达对非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法:应用Real-time PCR技术分别检测人非小细胞肺癌细胞株A549及其耐药株A549/DDP中miR-21的表达;将miR-21抑制剂(miR-2[inhibitor) ASO-21转染至A549/DDP中,下调其miR-21的表达,在不同时间点使用MTT检测细胞的增殖,流式细胞仪Annexin-FITC检测细胞凋亡;使用生物信息学和miR的预测软件预测miR-21在非小细胞肺癌中的可能靶点.结果:①miR-21在A549/DDP细胞株的表达均为A549的3倍;②A549/DDP细胞株中转染ASO-21孵育,加入顺铂后,与对照组相比,其凋亡增加,增殖能力明显降低;③生物信息学软件分析后发现miR-21在非小细胞肺癌A549有多个调节靶点,一些蛋白分子可以调节miR-21的表达,组成肿瘤细胞的调节网络而影响肺癌细胞对顺铂的敏感性.结论:抑制miR-21可以促进顺铂耐药细胞A549/DDP的凋亡增加及抑制其增殖,miR-21可能成为逆转肺癌对顺铂耐药的新靶点.
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全身microRNA-21基因敲除小鼠的繁育和鉴定
目的 利用Cre/loxp基因敲除技术制备全身microRNA-21(miR-21)基因敲除小鼠,并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究宿主miR-21在血吸虫感染后发挥的调控作用提供研究平台.方法 将引进的miR-21 flox/flox小鼠和全身表达Cre重组酶的小鼠分别进行繁殖和鉴定,两种小鼠进行杂交,对其子代小鼠(F1)的基因型进行鉴定;将基因型为miR-21flox/-Cre的F1小鼠与亲代miR-21flox/flox小鼠进行杂交,对其子代小鼠(F2)的基因型进行鉴定.结果 共繁殖亲代miR-21flox/flox小鼠20只,经鉴定均为miR-21 flox纯合子小鼠,繁殖表达Cre重组酶的亲代小鼠17只.亲代小鼠杂交并繁殖,得到基因型为miR-21flox/-Cre的F1小鼠10只.将miR-21flox/-Cre的F1小鼠与亲代miR-21flox/flox小鼠杂交并繁殖,得基因型为miR-21 flox/-Cre或miR-21flox/-Cre的F2小鼠,miR-21flox/flox Cre小鼠即为本实验所需要构建的全身miR-21基因敲除小鼠.这种基因敲除小鼠与正常小鼠身长、体重无明显差异.结论 本研究利用Cre/loxp技术成功繁育出全身miR-21基因敲除小鼠.
关键词： 基因敲除小鼠 Cre/loxp技术 miR-21 -
乌索酸通过抑制miR-21表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制
探讨乌索酸通过调控miR-21表达从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制.采用MTT方法检测乌索酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;qPCR检测肝癌细胞中miR-21的表达水平及乌索酸对HepG2细胞中miR-21表达的调控作用;转染miR-21 mimics进HepG2细胞中上调miR-21的表达后,MTT、流式细胞检测法、RT-PCR方法分别分析miR-21在乌索酸对细胞的增殖、凋亡以及对凋亡相关基因的调控过程中的作用.结果显示,与肝正常细胞L-02以及肝癌SMCC-7721、Bel-7402细胞相比较,乌索酸对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效果强,且HepG2细胞中miR-21的表达水平高.乌索酸可下调HepG2细胞中miR-21的表达,且在24h的下调作用强.miR-21的表达上调可以部分抵消乌索酸对HepG2细胞的抑制增殖及促进凋亡,部分抵消下调凋亡抑制基因Bcl-2、survivin表达和上调促凋亡基因Bax表达的作用.结果提示,乌索酸通过抑制miR-21的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡.
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miR-21慢病毒干扰载体的构建及其对胆管癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 构建miR-21慢病毒干扰载体,并观察其对胆管癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 针对目标序列,设计2条合适的PCR引物进行退火得到插入片段序列.将慢病毒干扰载体双酶切,纯化后与退火产物进行定向连接,产生慢病毒干扰质粒和阴性对照质粒,将其与慢病毒包装质粒混合物共转染293T,包装产生慢病毒.使用收获的慢病毒感染胆管癌细胞HUCCT1,荧光显微镜观察感染效率,细胞增殖和划痕实验分别检测HUCCT1下调miR-21后细胞增殖能力和迁移能力的改变.结果 成功构建了miR-21慢病毒干扰载体.感染胆管癌细胞HUCCT1后,miR-21表达降低;下调miR-21(LV-anti-miR21)组和感染空白慢病毒载体(LV-GFP)组相比,LV-anti-miR21组增殖能力和迁移能力均明显下降(P＜0.05).结论 成功构建miR-21慢病毒干扰载体;下调miR-21能够抑制胆管癌细胞的增殖,降低胆管癌细胞的迁移能力.
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miR-21通过PTEN/AKT通路抑制白血病细胞K562的迁移和增殖
目的 miR-21在多种肿瘤中的研究已有大量文献报道,但其对白血病细胞迁移和增殖的影响及其可能机制尚未完全阐明,文中旨在探讨抑制miR-21对白血病K562细胞迁移和增殖能力的影响及可能的作用机制.方法 将miR-21 inhibitor用LipofectamineTM2000转染K562细胞,荧光定量PCR检测miR-21的表达水平;Transwell 迁移实验和Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法测细胞迁移和增殖变化;Western blot检测PTEN、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达变化.结果 抑制miR-21表达后K562细胞的迁移和增殖能力均受到明显抑制;抑制miR-21能明显增强PTEN蛋白和减低p-AKT蛋白表达水平,对AKT蛋白水平无明显影响.结论 抑制miR-21表达可能通过调控PTEN/AKT通路抑制白血病K562细胞迁移和增殖.
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miR-21在肺癌血管生成中的作用及培美曲塞对其影响
目的 肺癌死亡率居肿瘤相关疾病死因的首位.肿瘤组织中血管异常增生,与肿瘤的分级、转移和预后不良密切相关.文中利用体内外血管生成模型评价肺癌细胞不同miR-21表达水平肺癌细胞在肿瘤血管生成中的作用及其可能机制,并探讨培美曲塞对其影响.方法 采用划痕实验研究不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清对血管内皮细胞增殖能力的影响.采用Luminex检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清中的表达水平.采用免疫组化法检测CD31(亦称血小板内皮细胞黏附分子-1)、血管内皮生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)及磷酸化VEGFR2蛋白在不同miR-21表达水平肺癌实体瘤组织的表达水平差异.结果 划痕实验表明,miR-21高表达的人肺癌A549(A549-21H)细胞划痕修复能力明显强于miR-21低表达的人肺癌A549(A549-21L)细胞,表现为划痕直径明显缩小.Luminex检测VEGF在不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清的表达水平,实验结果表明,A549-21H细胞培养上清中VEGF含量显著高于A549-21L.采用IHC法检测裸鼠肺癌移植瘤中CD31、VEGFR2及磷酸化VEGFR2蛋白表达变化研究结果表明,A549-21H瘤体CD31表达明显高于A549-21L(P＜0.01),A549-21H瘤体VEGFR2表达与A549-21L比较无显著性差异,A549-21H瘤体Tyr951磷酸化VEGFR2表达明显高于A549-21L(P＜0.01).结论 miR-21可能通过调节VEGF表达水平及VEGFR2磷酸化水平参与肿瘤血管生成的调控,培美曲塞对肿瘤血管生成具有一定的抑制作用.
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miR-21 miR-205联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值
目的 探讨联合检测血液中microRNA-205(miR-205)和microRNA-21(miR-21)对非小细胞肺癌的诊断价值.方法 收集27例非小细胞肺癌患者术前及术后血清,并收集29例健康志愿者血清作为对照.应用实时荧光定量PCR法检测以上标本中miR-205和miR-21的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性,评估miR-205和miR-21联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值.结果 非小细胞肺癌患者术前血清中miR-205和miR-21的表达水平均高于健康人群(P＜0.05),其中23例非小细胞肺癌患者术后血清中miR-205的表达水平较术前明显降低(P＜0.01),术前与术后miR-21表达水平无显著性差异(P＞0.05).而术前血浆中miR-205和miR-21的表达水平与患者淋巴结转移及Dukes分期存在相关性(P＜0.05).miR-205和miR-21的受试者(ROC)曲线下面积为0.968,非小细胞肺癌患者和健康人群的敏感度和特异度分别为96.3％和89.7％.结论 血清miR-205和miR-21作为新的生物学指标,两者联合检测对非小细胞肺癌的诊断和预后监测有一定价值.
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miR-21促进肺癌EGFR-TKI耐药细胞株上皮—间质细胞转化的研究
[目的]研究miR-21是否可以调控上皮—间质转化(EMT)而参与肺癌获得性耐药.[方法]使用HCC827细胞(EGFR基因19外显子缺少的肺腺癌细胞株),在此细胞的基础上培养吉非替尼耐药细胞株HCC827/GR.检测耐药细胞株中miR-21的表达,同时观察耐药细胞的形态变化,及在耐药细胞株中抑制miR-21表达后检测耐药细胞株的侵袭能力及EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达.[结果]与敏感细胞株HCC827相比,HCC827/GR细胞株对吉非替尼的耐药倍数约为100倍;同时在耐药细胞株中我们发现miR-21较敏感株表达增高约5.3倍,同时细胞形态发生了明显变化.通过检测EMT相关蛋白,我们发现耐药细胞株中间质相关蛋白Vimentin明显高表达,而上皮相关蛋白E-cadherin明显低表达,当miR-21被抑制后,耐药细胞株侵袭能力下降,同时Vimentin表达量下降,而E-cadherin表达量增高.[结论]miR-21可能通过促进EMT参与肺癌EGFR-TKI的获得性耐药.
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miR-21、PDCD4表达对Ⅱ期食管鳞癌术后患者生存期的影响
[目的]探讨微小RNA 21(microRNA-21,miR-21)和细胞程序性死亡蛋白(programmed cell death protein 4,PDCD4)在Ⅱ期食管鳞癌术后患者癌组织中表达,分析其与临床病理特征的关系及对预后的影响.[方法]收集胸巾段Ⅱ期食管癌术后患者标本97例,将样本组织脱蜡提取总RNA;应用实时免疫荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测所有标本癌组织、癌旁组织miR-21的表达情况;免疫组化法检测测癌组织和癌旁组织PDCD4蛋白表达水平.[结果] miR-21在Ⅱ期食管鳞癌术后患者癌组织中的表达较癌旁组织升高(t=-12.06,P＜0.01),PDCD4在癌组织中的表达较癌旁组织降低(t=8.36,P＜0.01).miR-21和PDCD4在癌组织中的表达呈负相关(r=-0.41,P＜0.01),在癌旁组织中的表达呈正相关(r=.51,P＜0.01).癌组织中miR-21的表达与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移、内镜下病变长度呈正相关(r=0.23,P=0.02;r=0.22,P=0.03;r=0.38,P＜0.01)、与分化程度呈负相关(r=-0.60,P＜0.01),PDCD4蛋白的表达与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移、内镜下病变长度负相关(r=-0.21,P=0.04;r=-0.24,P=0.01;r=-0.37,P＜0.01)、与分化程度呈正相关(r=-0.53,P＜0.01),二者与年龄、性别、位置不相关(P＞0.05).COX回归模型发现Ⅱ期食管鳞癌患者肿瘤浸润深度、淋巴结转移、分化程度、内镜下病变长度、miR-21表达、PDCD4表达均为影响患者PFS的因素(x2=10.36,P=0.01;x2=7.89,P＜0.01;x2=6.48,P=0.02;x2=5.32,P=0.03;x2=9.56,P=0.01;x2=5.40,P=0.02). miR-21对于术后3年PFS、OS预测曲线下面积分别为73.5％、81.0％ (P＜0.01);PDCD4对于术后3年PFS、OS预测曲线下面积分别为77.3％、73.2％(P＜0.01).miR-21、PDCD4高、低表达组PFS差异有统计学意义(x2=19.6,P＜0.01;x2=1 1.45,P＜0.01),OS差异也有统计学意义(x2=27.84,P＜0.01;x2=21.35,P＜0.01).[结论]Ⅱ期食管鳞癌术后患者癌组织与癌旁正常组织中miR-21、PD-CD4蛋白表达存在明显差异.高表达miR-21提示预后较差,而高表达PDCD4提示预后较好.
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碱烧伤诱导小鼠角膜新生血管中miR-21与VEGF表达相关性
目的 观察microRNA-21 (miR-21)在碱烧伤诱导小鼠角膜新生血管(CorNV)模型中的变化规律及其与血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的关系.方法 实验研究.68只BALB/c小鼠,右眼制备碱烧伤诱导CorNV模型作为实验组,左眼作为正常对照组不予任何处理.碱烧伤后第4、7、14、21、28天行眼前节照相测量CorNV面积.分别在碱烧伤后第4、7、14、28天分别随机处死3只小鼠取眼球制石蜡切片,通过苏木素-伊红(HE)染色观察角膜的组织病理学改变,免疫组织化学(IHC)染色检测角膜VEGF-A表达;各时间点随机处死14只小鼠行实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测角膜miR-21及VEGF-A mRNA的表达.数据分析采用单因素方差分析、配对样本t检验、直线相关分析.结果 小鼠CorNV于碱烧伤后第4天开始出现,14天时生长达高峰,21天后逐渐消退.HE染色显示实验组角膜第14天呈现较多粗大CorNV,28天时明显减少.同期IHC染色显示实验组角膜在第4、7、14天时VEGF-A阳性表达均高于对照组(t=19.47、61.86、44.18,P＜0.05),28天时差异无统计学意义(t=2.52,P＞0.05).实验组第7天时角膜VEGF-A阳性表达明显,14天后表达相对减弱,差异具有统计学意义(F=649.4,P＜0.05).实验组角膜在第4、7、14、28天时miR-21表达均高于对照组(t=4.60、14.74、9.78、5.69,P＜0.01);VEGF-A mRNA实验组角膜在第4、7、14天时高于对照组(t=5.82、14.11、3.41,P＜0.05),28天时差异无统计学意义(t=0.76,P＞0.05);且两者表达均于第7天时达高峰,差异均具有统计学意义(F=62.1、64.5,P＜0.05).miR-21与VEGF-A mRNA及其蛋白表达均呈正相关(r=0.62、0.66,P＜0.05).结论 碱烧伤诱导小鼠角膜CorNV形成中miR-21、VEGF-A表达均升高,且miR-21、VEGF-A mRNA和蛋白表达高峰较CorNV形成高峰早,提示miR-21可能通过VEGF信号通路参与CorNV形成.
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姜黄素通过调节miR-21干预伊马替尼耐药K562/IM细胞的化疗敏感性
目的 研究姜黄素对伊马替尼耐药的K562细胞(K562/IM)多药耐药性的逆转作用,并探讨其机制.方法 采用MTT法分析姜黄素对于K562/IM细胞的增殖抑制作用,并选取非毒性浓度姜黄素联合伊马替尼作用于K562/IM,分析其增殖抑制效应;流式细胞术检测其协同诱导细胞凋亡的作用;实时荧光定量PCR和Western blot法检测姜黄素对于miR-21和Bcl-2蛋白表达水平的改变;并采用microRNA转染技术,观察miR-21对细胞增殖抑制和Bcl-2蛋白表达的影响.结果 非毒性浓度(25 μmol·L-1)姜黄素能显著增强K562/IM细胞对伊马替尼的敏感性,并能增强伊马替尼诱导细胞凋亡的作用,使K562/IM细胞平均凋亡率由6.3％提高到23.6％(P＜0.05);姜黄素作用后,miR-21和Bcl-2蛋白水平显著降低;miR-21抑制剂转染K562/IM细胞后,可显著降低Bcl-2表达,提高K562/IMM细胞对伊马替尼的敏感性.结论 姜黄素可增强K562/IM细胞对伊马替尼的敏感性,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调miR-21表达水平、抑制靶基因Bcl-2蛋白表达有关.
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miR-21在人骨肉瘤细胞系U2OS体外侵袭中的作用及其机制
目的:探讨miR-21在人骨肉瘤细胞系U2OS体外侵袭中的作用及其机制.方法:培养人正常成骨细胞系hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞系U2OS,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)比较2组细胞miR-21的表达差异.通过miR-21-up慢病毒感染U2OS细胞,qRT-PCR检测感染前后U2OS细胞中miR-21的表达变化.Transwell侵袭实验检测miR-21对U2OS细胞侵袭的影响,并通过Western blot检测验证在U2OS细胞中miR-21对于靶基因PTEN是否具有调控作用及miR-21对U2OS细胞中侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响.结果:qRT-PCR结果表明miR-21在骨肉瘤细胞系U2OS中高表达(P<0.05).Transwell检测结果表明上调miR-21的表达能够明显促进U2OS细胞的侵袭(P<0.05).Western blot检测表明PTEN在骨肉瘤细胞中低表达,且与miR-21表达呈负相关(P<0.05).miR-21可促进侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达(P<0.05).结论:miR-21可通过抑制PTEN蛋白的表达,进而促进侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达,促进人骨肉瘤细胞系U2OS的侵袭.
