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结直肠癌中miR-21的表达及其临床病理学意义
目的 分析结直肠癌组织中miR-21的表达及其临床病理学意义.方法 选取我院2010年1月——2010年12月间手术切除的结直肠癌标本30例作为研究对象,通过采用TaqMan实时定量RT-PCR法对该组标本中的结直肠癌组织miR-21的表达进行检测,并与其癌旁正常组织miR-21的表达进行对比观察,从而探讨结直肠癌临床病理因素与miR-21的表达之间的关系.结果 通过与对比癌旁正常组织miR-21的表达进行对比观察发现,结直肠癌组织miR-21的表达明显要高很多,差异具有统计学意义(P＜0.05).结直肠癌组织miR-21的表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位等情况没有较大的关联,而与其淋巴结转移、肿瘤病理学分级、及术后生存率三个方面有着紧密的关系.结论 结直肠癌组织miR-21的表达要高于正常组织,并且它可能与大肠癌的发生及肿瘤的生长有着密切的联系.
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胰腺癌患者血浆中MicroRNA的表达及临床意义
目的 检测胰腺癌患者血浆中miR-21、miR-155的表达水平,评价其临床意义.方法 分别收集性别、年龄相匹配的32例胰腺癌患者,27例正常对照组的血浆标本和临床资料,采用RT-PCR法检测血浆中miR-21、miR-155的相对表达量,采用电化学方法检测同样本中的CA19-9含量,评估其临床诊断价值.结果 胰腺癌患者血浆中两种miRNAs的表达量较正常对照组均明显升高(P<0.05);2个特异性miRNA联合CA19-9,诊断胰腺癌的敏感性和特异性均显著提高.结论 血浆中miR-21、miR-155检测可为胰腺癌的早期诊断提供一个新方法.
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慢性肾脏病患者尿液 miR -21表达及与间质纤维化相关性的研究
目的：探索准确、无创伤的生物标志物来反映慢性肾脏病患者肾间质纤维化。方法：以慢性肾脏病患者为研究介入点，拟通过探索尿液 miR -21表达水平与肾纤维化程度、肾小球滤过率及气虚血瘀证积分等指标之间的关系。结果：（1）慢性肾脏病患者尿沉渣 miR -21水平与健康组比较有所升高，但差异无统计学意义；（2）IgA 肾病患者与健康组比较，尿沉渣的 miR -21水平明显升高，差异有统计学意义（P ﹤0．05），但与非 IgA 肾病患者比较，差异无统计学意义；非 IgA 肾病患者与健康组比较，差异亦无统计学意义。（3）肾间质纤维化分别与尿沉渣 miR -21、气虚血瘀证积分呈正相关关系，与 eGFR呈显著负相关；尿沉渣 miR -21与肾间质纤维化、气虚血瘀证积分呈正相关关系。结论：尿沉渣 miR -21可能是 IgA 肾病合并肾间质纤维化患者尿沉渣中的特异性指标之一；尿沉渣 miR -21与气虚血瘀证积分呈正相关关系。
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启膈散协同顺铂抑制食管癌EC9706细胞生长与miR-21的关系
目的:观察启膈散含药血清联合顺铂对人食管癌细胞EC9706的增殖效应,从miR-21探讨其作用机制.方法:制备启膈散含药血清,MTT法筛选其佳作用浓度;PCR检测miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mR-NA的表达情况;Western-blot检测蛋白PDCD4、PTEN的表达水平.结果:5％含药血清的浓度作用效果为显著(q＞1).与5％对照血清组比较,除5％含药血清PDCD、PTEN mRNA和0.5μg/mL顺铂组的PTEN mRNA表达量下降外,其余各组的miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA表达均升高(P＜0.05);顺铂联合含药血清后,两组miR-21表达和联合高浓度顺铂组的PDCD4 mRNA均比其单用下降(P＜0.05),而两组PTEN mRNA和联合低浓度组的PDCD4 mRNA的表达则升高(P＜0.05).与对照组相比,各组PDCD4蛋白表达量升高P＜0.05;高浓度顺铂联合含药血清组比单用高顺铂组PDCD4蛋白表达量升高(P＜0.05),低浓度顺铂的两组变化不明显(P＞0.05);两个浓度顺铂联合含药血清时PTEN的表达量均高于单独使用顺铂(P＜0.05).结论:启膈散能够增加EC9706对顺铂的敏感性,可能是通过miR-21与其调控的下游基因PDCD4与PTEN共同参与完成.
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人脑胶质瘤中miR-21调控FASLG基因表达的作用及机制
目的 研究miR-21在人脑胶质瘤细胞中调控FASLG基因表达的作用效果及分子机制.方法 应用实时定量PCR方法检测人脑胶质瘤及其癌旁组织中miR-21及FASLG基因的表达.转染miR-21的前体(miR-21precursor)至人脑胶质瘤U87MG细胞,然后应用Western blot法检测FASLG蛋白的表达.应用荧光素酶报告基因表达分析实验分析miR-21能否与FASLG基因的3’非翻译区(3'UTR)特异性结合.结果 人脑胶质瘤组织中的miR-21mRNA的表达水平明显比癌旁组织少,而FASLG mRNA则增加显著,二者的表达水平呈明显的负性相关.转染miR-21 precursor能够显著上调胶质瘤U87MG细胞中miR-21的表达,而在miR-21高表达的胶质瘤U87MG细胞中,FASLG的蛋白表达下调显著.miR-21能够特异性地与FASLG基因的3'UTR中的种子区结合,负性调节荧光素酶报告基因的表达.结论 miR-21与FASLG基因与人脑胶质瘤的发生相关,miR-21在胶质瘤细胞中能够靶向沉默FASLG基因.
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MiR-21在大肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖侵袭的影响
目的 检测microRNA-21 (miR-21)在大肠癌患者中的表达情况,并探讨miR-21对大肠癌SW480细胞增殖和侵袭的影响.方法 收集大肠癌患者标本32例,同时收取癌组织及相应的癌旁组织.通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组织中miR-21的表达水平.以脂质体为载体将miR-21抑制剂转染至SW480细胞,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后SW480细胞的增殖侵袭能力变化,利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测第10号染色体同源缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN) mRNA和蛋白水平的改变.结果 miR-21在32例患者癌组织及正常黏膜组织中的表达量分别为(1.57±0.79)与(0.56±0.32),差异有统计学意义(P＜0.01).下调miR-21的表达能够显著抑制SW480细胞的增殖和侵袭能力,PTEN mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P＜0.01).结论 microRNA-21在大肠癌中高表达,下调microRNA-21表达抑制大肠癌SW480细胞增殖和侵袭可能与上调PTEN表达相关.
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miR-21靶向FasL对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控
目的 探讨miR-21是否能够通过靶向抑制FasL基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖.方法 利用荧光素酶报告基因实验验证FasL基因是否为miR-21的靶基因,应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-21 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞FasL mRNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化.结果 荧光素酶报告基因实验证实FasL基因为miR-21的靶基因.与对照组相比,转染miR-21 mimics后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显升高(P＜0.01);与对照组相比,转染miR-21 inhibitor后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显降低,P＜0.01.结论 miR-21可能通过靶向FasL基因促进人骨肉瘤MG-63细胞增殖.
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氧糖剥夺诱导原代大鼠星形胶质细胞miR-21的表达变化
目的 研究原代大鼠星形胶质细胞氧糖剥夺不同时间miR-21的表达,探讨miR-21是否参与了缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的活性变化.方法 原代大鼠星形胶质细胞随机分为正常组和氧糖剥夺组,分别培养3、6、9和12h.CCK-8法检测各组星形胶质细胞的活力,real-time PCR方法检测各组星形胶质细胞miR-21的表达.结果 氧糖剥夺组miR-21的表达水平随培养时间延长呈先升高后降低的动态变化,3h开始高于对照组水平(P＜0.05),6h达高峰(P＜0.05),随后下降,9h与对照组无差异(P＞0.05),12h显著低于对照组(P＜0.05).氧糖剥夺不同时间星形胶质细胞活力变化与miR-21的变化趋势一致.结论 miR-21可能参与了缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞的活性变化,发挥促增殖和抗凋亡的作用.
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miR-21在脑出血患者外周血中表达特点的研究
目的 研究脑出血患者外周血中microRNA的表达特点,探讨miR-21在脑出血患者外周血中的表达与脑出血后时间相关性.方法 采用病例对照研究方法,病例组选择基底节区脑出血患者作为研究对象,正常对照组来自健康志愿者,并要求年龄和性别等因素与病例组匹配.采集4例病例组患者和与之相匹配的4例对照组患者外周静脉血,提取血清,抽提RNA,采用microRNA芯片技术分析microRNA在各组间的表达情况,运用统计学方法分析病例组与对照组临床资料的差异性及microRNA表达的差异性.运用靶基因预测软件及文献复习,挑选出可能与ICH相关的microRNA(miR-21)及其靶基因,采集31例病例组患者在脑出血后6h、24h、72h及7d的外周血,采集1 1例对照组患者外周血,提取血清,抽提RNA,采用real-time PCR方法扩大样本量进一步研究miR-21在脑出血患者外周血中的表达与出血时间的相关性,探讨其可能的分子作用机制.结果 microRNA芯片结果显示,脑出血患者外周血中,共有101种microRNA表达下调(fold change＞ 1.5),53种microRNA有统计学差异;表达上调的microRNA共有10种,其中2种呈差异性表达;通过靶基因预测软件及文献复习,分析miR-21可能与脑出血的多个病理机制相关;real-time PCR验证实验结果与芯片结果一致,miR-21在脑出血患者外周血中表达下调;且miR-21在发病6h、24h、72h及7d各个时间点表达随时间呈曲线变化趋势.结论 脑出血患者血清中存在着特异性的micoRNA表达谱;miR-21在脑出血患者外周血中随时间变化表达下调,且其变化趋势与脑出血后水肿程度相一致.
关键词： 脑出血 外周血 microRNA芯片 Real-time PCR miR-21 出血时间 -
miR-21在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖及迁移的影响
目的 探讨miR-21在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖迁移的影响.方法 用实时荧光定量PCR方法检测39例胶质瘤组织及其对应癌旁组织miR-21的表达;利用LipofectamineTM2000将miR-21模拟物或抑制剂及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖及迁移能力.结果 胶质瘤组织中miR-21的相对表达量为4.58±1.55,癌旁组织的miR-21相对表达量为1.87±0.59,胶质瘤组织中miR-21的表达显著高于癌旁组织(R＜0.01).与对照组相比,miR-21模拟物能够显著上调胶质瘤U87细胞系的增殖以及迁移能力(P＜0.01);miR-21抑制剂则能够显著降低胶质瘤U87细胞系的增殖以及迁移能力(P＜0.01).结论 miR-21可能是治疗胶质瘤的潜在靶点.
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miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响
背景:骨髓间充质干细胞移植后凋亡成为治疗化疗性卵巢早衰效果欠佳的主要原因.miR-21参与细胞增殖与凋亡的调控,有重要的抗凋亡作用.目的:构建miR-21慢病毒载体并感染骨髓间充质干细胞,观察其对化疗药物磷酰胺氮芥诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的影响.方法:构建携带miR-21基因慢病毒表达载体LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,双酶切及基因测序鉴定证实载体构建成功.对载体进行包装、测定病毒滴度.将慢病毒颗粒以不同感染复数(20和40)感染骨髓间充质干细胞,检测感染效率,使用real-time PCR法检测骨髓间充质干细胞中miR-21的表达.流式细胞仪、Hoechst33342染色检测骨髓间充质干细胞在磷酰胺氮芥模拟的化疗微环境中的凋亡率.结果与结论:①成功构建miR-21慢病毒载体,病毒滴度约为6×1011 CFU/L;②载体转染骨髓间充质干细胞效率达90％以上;③miR-21组1(感染复数为20)、miR-21组2(感染复数为40)miR-21表达量明显高于骨髓间充质干细胞组及空载组(P=-0.000);④转染组骨髓间充质干细胞的凋亡率、凋亡指数均低于空载组及骨髓间充质干细胞组(P=0.001);⑤实验成功构建大鼠miR-21慢病毒载体系统,miR-21上调能抑制骨髓间充质干细胞凋亡,促进细胞增殖.
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miR-21/Sprouty1功能轴调控绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨能力
背景:成骨分化是一个复杂的网络,包括多种信号通路转录水平和转录后水平的调控,具体机制仍不清楚.研究关键miRNA对骨髓间充质干细胞成骨分化的调控作用对于治疗骨质疏松和骨缺损具有重要意义.目的:探索miR-21/Sprouty1功能轴调控绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨能力.方法:分离培养正常人和绝经后骨质疏松患者的骨髓间充质干细胞,比较2组细胞的成骨能力.Real time RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中miR-21和Spry1的表达.利用转染的方法上调绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞中的miR-21水平,检测其成骨能力及Spry1的表达变化,Real time RT-PCR和Western Blot检测成骨标志性基因Runx2和Osterix的表达.结果与结论:①与正常人骨髓间充质干细胞相比,绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨能力明显减弱,而且miR-21表达下降,Spry1表达上升,miR-21-Spry1功能轴受到抑制;②通过转染miR-21,下调Spry1,增加Runx2和Osterix的表达,能够部分恢复绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨分化能力.
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Notch信号通路和miR-21在周围神经损伤修复中的交互作用机制
背景:神经损伤修复是外科临床和基础研究的主要热点之一.小间隙套管治疗周围神经损伤的作用在前期研究中已经得到证实,但详细机制未能明确.同时Notch信号通路和微小RNA系统逐渐成为该领域的潜在热点,但二者的相关作用尚未得到明确报道证实.目的:观察携带骨髓间充质干细胞的小间隙套管对周围神经损伤的治疗作用,探究Notch信号通路和miR-21在治疗过程中的相互作用关系.方法:体内实验中制造SD大鼠喉返神经8 mm缺损模型,分为假手术组、小间隙组和小间隙+骨髓间充质干细胞组,治疗后测定电生理结果,Western blot测定Notch信号通路和微小RNA表达情况.体外实验中在小间隙套管内培养骨髓间充质干细胞并行神经元方向诱导,通过改变Notch/miR21表达情况,检测神经标记物的表达情况,分析骨髓间充质干细胞活性变化.结果与结论:神经染色和肌电图结果均确认了骨髓间充质干细胞的治疗效果.在骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中,Notch信号表达明显增强,miR-21表达明显上扬.通过进一步调控两因素表达发现,人为激活Notch信号或使miR-21过表达后骨髓间充质干细胞向神经分化的能力明显增强,抑制Notch信号后,骨髓间充质干细胞神经分化能力减弱,同时miR-21的促进作用失效.发现Notch信号通路和miR-21为骨髓间充质干细胞联合小间隙套接治疗周围神经损伤可能的重要促进机制,其中Notch信号通路具有更高级别的促进或抑制作用等级.
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肾透明细胞癌中microRNA21和PDCD4的表达和生物学意义
目的 检测microRNA-21(miR-21)和PDCD4在肾透明细胞癌组织和不同侵袭潜能细胞中的表达特点,探讨二者的相关性及临床意义. 方法 常规提取组织和细胞总RNA和蛋白质,应用定量PCR技术检测肾透明细胞癌组织及癌旁正常组织miR-21表达水平. 免疫组织化学方法检测癌组织和癌旁组织中PDCD4蛋白表达水平. 统计表达数据,分析二者间表达的相关性. 结果 对比正常癌旁组织和肾小管上皮细胞系HK-2 少量表达,肾癌组织和肾癌细胞系 ACHN和786-0 中miR-21表达水平显著升高,表达水平随细胞系侵袭力的增高而升高,差异具统计学意义. PDCD4蛋白在肾癌组织和癌旁组织均有表达,癌组织中的表达阳性率30. 3%,显著低于癌旁正常组织的阳性表达率95%. 中、高分化肿瘤PDCD4蛋白阳性表达率显著高于低分化肿瘤组织,差异具统计学意义. 相关性分析结果显示在肾癌组织中,miR-21和PDCD表达呈负相关(r= -0. 795,P<0. 01). 结论 在肾癌组织中,miR-21呈高表达,PDCD4呈低表达,两者呈负相关,其表达与肿瘤的分化程度密切相关.
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MicroRNA-21与实体肿瘤关系的研究进展
微小RNA(miRNAs)作为一类内源性非编码小分子RNA,是高等生物生长发育的重要调节因子.miR-21被认定为miRNA转录的主要驱动力,其在人类多种实体肿瘤中高表达,参与细胞增殖、分化、凋亡,且与肿瘤生长、侵袭、转移等密切相关.
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姜黄素对乳腺癌细胞株MCF-7中miR-21的影响及其意义研究
目的:探讨姜黄素对人乳腺癌细胞株(MCF-7)中miR-21表达的影响及其意义.方法:采用浓度分别为2.5 μmol/L,5μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L的姜黄素处理MCF-7细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)的方法检测其miR-21的表达.免疫印迹法(Western blot)方法检测miR-21调控的目的蛋白PDCD4的表达.结果:随着姜黄素浓度的升高,miR-21的表达量明显下降,目的蛋白PDCD4的表达量明显上升.结论:在乳腺癌细胞中,姜黄素通过调控miR-21及其目的蛋白的表达而发挥明显抑制肿瘤细胞增殖的作用.
关键词： 姜黄素 乳腺癌 miR-21 PDCD4 Western blot -
下调miR-21抑制PI3K/AKT信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响
目的:探讨 miR-21对白血病 K562细胞增殖凋亡的影响及对 PI3K/AKT信号通路的调控作用.方法:将K562细胞分为对照组、miR-21 NC组和miR-21干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染miR-21 inhibitor和miR-21 negative control.转染48 h后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA的表达情况,采用MTT比色法检测miR-21对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21对各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT和p-AKT表达的影响.结果:miR-21干扰组中细胞的miR-21 mRNA表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC组均明显降低;与对照组和miR-21 NC组比较,流式细胞仪检测miR-3干扰组中G0/G1期所占细胞比例明显升高,S期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高.Western blot检测p-AKT的表达水平较对照组和miR-21 NC组明显下降,但PI3K和AKT蛋白的表达水平变化不大.结论:下调miR-21能够抑制白血病K562细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/AKT信号通路有关.
关键词： miR-21 白血病 细胞增殖 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
宫颈癌宫颈脱落细胞中miR-21的表达及其诊断价值的探讨
目的 比较正常组与宫颈上皮内瘤变组、宫颈癌组宫颈脱落细胞中miR-21的相对表达水平是否在各组间存在明显差异.方法 收集宫颈脱落细胞标本,正常对照组与宫颈上皮内瘤变组、宫颈癌组各30例,以U6为内参miRNA,用SYBR Green荧光定量PCR法测定各组中miR-21的表达水平,并评估miR-21对宫颈癌的诊断效能.结果 宫颈上皮内瘤变组、宫颈癌组宫颈脱落细胞中miR-21的表达上调.miR-21区别正常组与宫颈上皮内瘤样病变组的ROC曲线面积为0.87(95％CI:0.7935-0.9621;P＜0.000 1),miR-21区别正常组与宫颈癌组的ROC曲线面积为0.92(95％CI:0.8590-0.9899;P＜0.000 1).结论 宫颈粘液脱落细胞中的miR-21对宫颈癌筛查诊断有潜在临床应用价值.
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血清miR-21对结直肠癌肝转移预测价值的评价
目的 探讨血清miR-21对结直肠癌肝转移预测的诊断价值,以期为临床的结直肠癌肝转移的预测提供一种潜在的辅助诊断方法.方法 检测146例晚期结直肠癌无肝转移患者和124例晚期结直肠癌伴肝转移患者血清中CEA的含量和miR-21的相对表达值,评价其单独检测和联合检测对于结直肠癌肝转移的预测的诊断价值.结果与结直肠癌无肝转移组相比,结直肠癌伴随肝转移组的CEA和miR-21均显著升高(P<0.05).当CEA和miR-21单独区分结直肠癌无肝转移组和结直肠癌伴随肝转移组的诊断价值时,CEA的敏感性和特异性分别为54.84％和58.22％,miR-21的敏感性和特异性分别为69.35％和85.62％.当CEA和miR-21联合区分结直肠癌无肝转移组和结直肠癌伴随肝转移组的诊断价值评价,其敏感性和特异性分别为91.94％和51.23％,其AUC与CEA和miR-21的AUC相比较,均显著提高(P<0.05).结论 miR-21 对于结直肠癌肝转移具有一定的辅助诊断价值,与CEA联合检测可以为临床结直肠癌肝转移的预测提供一种潜在的辅助诊断方法.
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多发性骨髓瘤患者 miR-21和 miR-32的表达及临床应用
目的：探讨 microRNA-21（miR-21）和 microRNA-32（miR-32）在多发性骨髓瘤（MM）骨髓单个核细胞中的表达水平及意义。方法选取2010年1月至2014年1月在我院血液科及骨科就诊的多发性骨髓瘤患者46例和正常对照的骨髓标本30例作为研究对象，患者均符合多发性骨髓瘤的诊断标准，采用实时荧光定量 PCR 法检测骨髓单个核细胞中 miR-21和 miR-32的表达水平。结果 miR-21和 miR-32在 MM 中的表达水平明显高于正常对照组，难治组 miR-21和 miR-32表达水平明显高于初治组，差异均有统计学意义（P ＜0．05）。治疗缓解组 miR-21和 mR-32的表达水平低于初治组，差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论 miR-21和 miR-32的表达可以对 MM 患者疾病进展和预后进行预测。
