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胃癌中高表达的miR-21对胃癌细胞生物学行为的影响
目的:研究miR-21在胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:通过实时荧光定量PCR检测30例胃癌手术切除组织和周围正常组织中以及10株胃癌细胞中miR-21的表达情况.通过CCK8法、Annexin-V+PI、流式细胞仪检测、划痕实验.观察过表达miR-21对胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等生物学行为的影响.结果:定量real-time PCR结果显示miR-21在胃癌组织中高表达(P＜0.01).流式细胞仪检测发现,miR-21过表达对细胞凋亡和细胞周期影响不明显(P＞0.05),miR-21过表达细胞株增殖能力增强,与阴性对照组和空白对照组对比差别具有统计学意义(P＜0.01),miR-21转染细胞划痕愈合速度较对照组快.结论:miR-21在胃癌中呈高表达,过表达miR-21可以促进BGC-823胃癌细胞的增殖能力和迁移能力,但对凋亡和细胞周期影响不明显.
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miR-21通过调节PTEN及Wnt信号通路介导Huh7细胞对顺铂的耐药性
目的 探讨microRNAs(miRNAs)介导肝细胞癌(HCC)对顺铂的耐药机制.方法 采用miR-21 mimics及miR-21抑制剂来调节Huh7细胞miR-21表达量.人DKK 1与bpv(phen)分别是Wnt信号通路抑制剂及PTEN抑制剂.相关mRNA及蛋白水平采用RT-PCR及蛋白质免疫检测.结果 miR-21过表达将减弱顺铂(5和10 μg/mL)对Huh7细胞增殖的抑制作用.当Huh7细胞经miR-21 mimics处理后,Wnt4的mRNA及蛋白质表达均显著上升,且miR-21过表达可逆转DKK-1对Wnt4和细胞增殖的抑制作用.另外,miR-21过表达还上调了PTEN的mRNA及蛋白表达,并可提升经bpv(100和200nmol/L)抑制的Huh7细胞增殖速率.结论 miR-21在Huh7细胞对顺铂的耐药中发挥作用,且通过活化Wnt信号通路及PTEN调节Huh7细胞增殖.
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MicroRNA-21在胃癌细胞中促进上皮-间质转化的研究
目的 探讨MicroRNA-21在胃癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制.方法 利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-21 mimics、miR-21 inhibitor转染入AGS细胞中;Real-time聚合酶链反应(RT-PCR)法测定AGS细胞内miR-21的表达;采用划痕法、Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting方法柃测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达的表达变化.结果 AGS细胞转染miR-21 mimics后,细胞的迁移和侵袭能力均高于对照组(P＜0.05),Western blot结果显示E-Cadherin、PTEN表达下降,Vimentin表达升高;AGS细胞转染miR-21 inhibitor后,细胞的迁移和侵袭能力均低于对照组(P＜0.05);E-Cadherin、PTEN表达升高,Vimentin表达降低.结论 miR-21可以诱导AGS胃癌细胞迁移和侵袭.E-cadherin和PTEN表达下调和上调Vimentin可能是miR-21作用的分子机制.miR-21在胃癌肿瘤转移中可能起着重要作用,可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点.
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肿瘤组织microRNA-21高表达增加淋巴结转移的荟萃分析
目的:分析不同肿瘤组织中microRNA-21(miR-21)的异常表达及其与淋巴结转移的相关性.方法:检索PubMed、Web of Science、EMbase、CBM数据库,截至2017年10月.采用随机效应模型,计算肿瘤组织miR-21表达高、低两组淋巴结转移的OR、95％CI.同时,本研究也运用异质性检验、敏感性分析和出版偏移等统计学分析.结果:终纳入16篇文献共1 492例.miR-21表达水平较高组(OR=2.01,95％CI=1.36～2.97,P＜0.001)明显增加淋巴结转移.亚组分析结果表明,miR-21高表达组在消化系统肿瘤(OR=2.22,95％CI=1.49～3.30),膀胱和宫颈癌(OR=5.48,95％CI=1.84～16.30)中明显增加淋巴结转移风险,其中也发现病人样本数＜60例,OR=2.39,95％CI=1.44～3.98,P＜0.001;≥60例,OR=1.78,95％CI=1.04～3.05,P=-0.036.乳腺癌、喉和肺癌的miR-21表达,未发现与淋巴结转移的关系.结论:本研究发现,肿瘤组织miR-21高表达组明显增加淋巴结转移的风险.亚组分析结果表明,miR-21在消化系统肿瘤以及膀胱和宫颈癌中,可作为淋巴结转移的标志物.
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下调MicroRNA-21对胃癌细胞生物学行为及PTEN表达的影响
目的:探讨抑制MicroRNA 21 (miR-21)的表达对胃癌细胞的生物学行为及PTEN表达的影响,并分析miR-21参与肿瘤发生、发展的可能机制.方法:应用细胞瞬转的方法将miR-21 inhibitor转染课题组前期试验证实的miR-21高表达胃癌细胞株,应用细胞增殖试验(CCK8方法)、流式细胞技术(Annexin-Ⅴ标记)、Transwell试验检测抑制胃癌细胞株中miR-21表达后,对其细胞增殖、凋亡、周期、迁移的影响;并用Western印迹技术和双荧光素酶报告载体技术检测下调miR-21后,胃癌细胞株PTEN表达的变化.结果:体外增殖试验显示,下调miR-21后对胃癌细胞株的增殖抑制作用明显(P＜0.05);体外凋亡试验显示,下调miR-21能增加胃癌细胞株的凋亡(P＜0.05);在整个周期中以G1/S期为主;Transwell试验证实miR-21下调后,胃癌细胞株迁移能力明显下降(P＜0.05);Western印迹试验显示,抑制miR-21表达后胃癌细胞株PTEN蛋白表达明显增加,荧光素酶相对活性明显增加(P＜0.05).结论:下调miR-21的表达对胃癌细胞株的增殖有明显的抑制作用,且促进其凋亡,能降低其体外迁移能力;下调miR-21后,PTEN活性明显增加;PTEN可能是miR-21参与胃癌发生、发展的靶标之一.
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下调miR-21表达抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖和侵袭
背景与目的：miR-21在人类多种肿瘤中异常高表达。本研究探讨干扰miR-21表达对鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：使用脂质体将miR-21 inhibitor转染CNE2细胞，以无关序列(NC inhibitor)作为阴性对照。采用qRT-PCR技术验证miR-21 inhibitor转染的CNE2细胞中miR-21的表达水平；通过MTS法、细胞划痕、Transwell侵袭实验观察下调miR-21表达对CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞中miR-21的表达明显下调，并且呈浓度依赖性。表明转染miR-21 inhibitor能有效抑制CNE2细胞中miR-21的表达。转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞与对照细胞相比，增殖速度明显减慢，差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验显示，下调miR-21表达抑制CNE2细胞迁移(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示，下调miR-21表达抑制CNE2细胞侵袭(P<0.05)。结论：miR-21能促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭，其可能在鼻咽癌的发生、发展中发挥重要作用。
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抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响
目的:探讨抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响.方法:实验分为3组,以miR-21抑制剂转染HCT116细胞为转染抑制组(IN),另设阴性对照组(NC)、空白对照组(MOCK),以Real-time PCR检测转染后HCT116细胞中miR-21的表达,应用MTT法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移;以Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性.结果:miR-21抑制剂转染后,HCT116细胞中miR-21的表达较NC和MOCK组细胞明显降低.下调miR-21后,HCT116细胞的增殖能力明显降低[72 h时:(1.05±0.45) vs (1.43±0.02),(1.45 ±0.01);t=13.83,P=0.000 159;t=14.88,P=0.000119],细胞凋亡率显著增加[(16.30±1.00)％ vs (1.87±0.53)％,(1.86±0.12)％;t =25.01,P =0.000 015 2;t =24.985,P=0.000 015 2],细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞的侵袭[(50±2.0) vs (115±3.0),(111±3.0)个;t=29.09,P=0.000 008 31;t=31.23,P=0.000 006 27]和迁移能力[(22±2.0) vs (52.3±2.5),(53.0±1.0)个;t=24.01,P=0.000 017 8;t=16.34,P=0.000082 0]明显下降.miR-21抑制剂转染的HCT116细胞中PTEN的表达及其荧光素酶相对活性均显著增加.结论:miR-21可能通过抑制PTEN进而调控大肠癌细胞生物学行为,PTEN可能是miR-21的靶基因之一.
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TLR4信号通过对miR-21的表达调控影响乳腺癌4T1细胞的凋亡和增殖
目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响.方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化.Western blotting检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化.转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况.结果:LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时:2.07 ±0.33 vs1;t=5.61,P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14 ±0.32;t=-7.357,P=0.002).与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高[(24.2±2.4)％ vs (14.8±5.1)％;t=2.891,P=0.044],4T1细胞的增殖能力明显降低(0.42 ±0.02 vs0.55 ±0.01;t=-8.528,P=0.001).结论:TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖.
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结直肠癌患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的检测及其临床意义
目的:探讨结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平及其临床意义.方法:收集2016年7月至2017年5月在海南省中医院就诊的63例CRC患者,根据CRC有无远处转移将患者分为无转移组(n=35)和转移组(n=28);另选取同期体检的30例健康志愿者纳入对照组.采集所有受试者的血清、粪便及CRC组织,用RT-PCR检测标本中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平,并进行比较分析.结果:CRC患者血清中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P＜0.05),以转移组中表达水平高(P＜0.05).CRC患者粪便中miR-21、miR-217和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P＜0.05),无转移组miR-217表达水平显著低于转移组(P＜0.05),而miR-21、miR-29b和miR-92a-1在无转移组和转移组的差异无统计学意义(P＞0.05).无转移组CRC组织中miR-21、miR-29b和miR-92a-1均明显低于转移组(均P＜0.05),而miR-217表达水平显著高于转移组(P＜0.05).结论:miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1在CRC患者的血清、粪便和癌组织中异常表达,多种miRNAs的联合检测有利于对CRC的发生、诊治和预后的评估.
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血浆miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210对胰腺癌的早期诊断价值
目的:探讨血浆微RNA-155(microRNA-155,miR-155)、miR-196a、miR-21和miR-210对胰腺癌早期诊断的临床价值.方法:采用实时荧光定量PCR法检测60例胰腺癌患者、20例慢性胰腺炎患者、10例健康对照者的血液标本及10例胰腺癌患者的组织标本中miR-155、miR-196a、 miR-21和miR-210的表达水平,同时对血清肿瘤标志物癌抗原199 (carbohydrate antigen 199,CA199)、CA242和癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)进行检测.统计分析3组血浆中4种miRNA的相对表达量差异,以及胰腺癌组织与血浆中4种miRNA相对表达量的关系.后评估血浆miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210对胰腺癌的诊断价值.结果:胰腺癌患者血浆中miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210的相对表达量均明显高于慢性胰腺炎组及健康对照组(P值均＜ 0.01);胰腺癌组织中这4种miRNA的相对表达量均高于胰腺癌血浆组,但差异尚无统计学意义(P值均＞0.05).将血浆中miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210水平用于诊断胰腺癌的受试者工作特征(received operating characteristic,ROC)曲线下面积显示,4种miRNA均有独立诊断能力(P值均＜0.001),其中miR-155的诊断效能高.经二分类Logistic回归模型分析发现,在临床分期为I期的患者中,血浆miR-196a联合miR-210用于诊断胰腺癌的敏感性明显高于CA199 (P＜0.05).结论:血浆miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210水平可有效区分胰腺癌和非胰腺癌患者.血浆miRNAs,尤其是miR-196a联合miR-210有望成为胰腺癌的早期诊断标志物.
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微小RNA-21与肿瘤关系的研究进展
已有资料显示,一群长度为22～24个核甘酸(nucleotide,nt)的内源性、短小非编码RNA-微小RNA (microRNA,miRNA,miR),不仅广泛存在于多种生物体中,而且参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生过程.近年来的研究发现,miRNAs家族成员miR-21与肺癌、胃癌和宫颈癌等多种肿瘤的发生、生长、转移以及预后等密切相关,推测其可作为多种肿瘤临床诊治的新靶标.本文就miR-21与这些肿瘤的发生关系、调控机制以及诊断和治疗等相关的研究进展作一综述.
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下调miR-21表达对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响
目的:探讨下调miR-21表达对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响及可能机制.方法:体外培养SCC15和CAL27口腔鳞癌细胞,根据转染不同,分别将细胞分为miR-21抑制物组、miR-阴性对照物组和空白对照组.MTT法检测不同转染组细胞增殖情况,检测不同转染组细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-21、β-catenin、C-myc和Dkk1表达,Western blot法检测细胞中β-catenin、C-myc和Dkk1蛋白表达.结果:SCC15和CAL27细胞中,miR-21抑制物组细胞转染48 h和72 h时,细胞增殖活性均低于miR-阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);SCC15和CAL27细胞中,miR-21抑制物组细胞凋亡率均显著高于miR-阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);SCC15和CAL27细胞中,miR-21抑制物组细胞中miR-21、β-catenin基因和蛋白、C-myc基因和蛋白表达量均低于miR-阴性对照组和空白对照组,而Dkk1基因和蛋白表达量均高于miR-阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:下调miR-21可显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖,促使细胞发生凋亡,可能与促进Dkk1基因表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
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miR-21促进脐带血间充质干细胞血管向分化的体外研究
目的:体外研究miR-21对脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells,UCBMSCs)血管向分化的促进作用.方法:培养UCBMSCs(来源于同济大学干细胞库);构建Lenti-LacZ-Luciferase和Lenti-miR-21-Luciferase慢病毒载体;目的基因转染UCBMSCs后0、1、4、7及14d,分别采用实时荧光定量PCR及Western印迹法检测关键成血管因子的表达.用第3代UCBMSCs分别转染Lenti-LacZ-Luciferase和Lenti-miR-21-Luciferase后,接种于Matrigel上培养,显微镜下观察其管样结构形成情况.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:成功培养脐带血骨髓间充质干细胞并成功转染目的基因;qPCR以及Western印迹法结果表明,miR-21组HIF-1α和VEGF在第4天开始显著高表达,并持续到7d和14 d;Matrigel结果显示,Lenti-miR-21-Luciferase组管状结构多,长度长.结论:MiR-21具有促进UCBMSCs血管向分化的作用.
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miR-21和miR-15b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征和化疗疗效的关系
目的 探讨miR-21和miR-15b在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与临床病理特征和化疗疗效的关系.方法 纳入2014年2月至2016年8月在我院接受治疗的83例NSCLC患者为研究对象,同时选取30例健康志愿者作为对照组.所有患者均采用顺铂联合吉西他滨的化疗方案治疗.采集化疗前后受试者血浆,实时荧光定量PCR检测miR-21和miR-15b表达,并分析其与患者临床病理特征的关系.根据化疗疗效将患者分为疾病控制组和疾病进展组,分析miR-21和miR-15b与化疗疗效的关系.结果 NSCLC患者血浆miR-21表达高于对照组(P＜0.05),miR-15b表达低于对照组(P＜0.05).miR-21在TNM分期高、有淋巴结转移及有吸烟史的患者中表达更高(P＜0.05);miR-15b在TNM分期高、腺癌及有淋巴结转移的患者中表达更低(P＜0.05).疾病控制组患者miR-21降幅和miR-15b增幅均大于疾病进展组患者(P＜0.05).相关性分析显示,miR-21降幅和miR-15b增幅与化疗疗效呈正相关性(r=0.705,r=0.673,P＜0.05).结论 NSCLC患者血浆miR-21高表达,miR-15b低表达,且其与患者肿瘤TNM分期、淋巴结转移和化疗疗效相关.
关键词： miR-21 miR-15b 非小细胞肺癌(NSCLC) 临床病理特征 化疗疗效 -
miR-21反义寡核苷酸对U937细胞中地西他滨抗白血病效应的影响及可能机制
目的 研究miR-21反义寡核苷酸对地西他滨(DCA)抗白血病效应的影响及可能机制.方法 将miR-21反义核苷酸(AMO)和无义寡核苷酸(SCR)通过脂质体转染导入U937细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证转染效率,再分别与DCA0.5、2.0和4.0 μmo1·L-1作用48 h.采用qRT-PCR检测人节律基因hPer3 mRNA表达,Annexin V/PI法检测凋亡,流式细胞仪检测CD14和CD11b平均荧光强度(MFI)和细胞周期.结果 AMO转染组的miR-21表达(0.67±0.09)均低于空白组(1.10±0.06)和SCR转染组(1.04±0.08),差异有统计学意义(P＜0.01).AMO转染组的U937细胞DCA的IC50[(2.36±0.26) μmol·L-1]低于空白组[(4.32±0.61) μmo1·L-1]和SCR转染组[(4.02±0.45) μmol·L-1](P ＜0.01).同一浓度下,AMO组的早期凋亡率、CD14 MFI、CD11b MFI、细胞Sub-G1期、hPer3 mRNA均高于同一浓度药物作用的空白组和SCR组,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 miR-21 AMO能显著促进DCA体外抗白血病效应,其机制可能和hPer3的激活有关.
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抑制miR-21表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生存和凋亡的影响
microRNA(miRNA)是一种广泛存在的非编码小分子RNA,在重要生命过程如细胞生长、发育、代谢中等扮演着重要角色,其表达异常与肿瘤的发生发展关系密切,可能发挥促进或抑制癌细胞生长的重要作用.miR-21是一种较早在人体中发现、并且存在相对广泛的miRNA,在多种肿瘤细胞及组织中都具有较高水平的表达[1-3].研究发现乳腺癌患者血清中miR-21水平较健康对照组明显增高,且miR-21水平升高与癌细胞在内脏中的转移显著相关[1],提示miR-21可能作为一种致癌miRNA在乳腺癌的发展过程中发挥重要作用.本研究以反义寡核苷酸技术(ASODN)抑制miR-21在乳腺癌中的表达,观察了miR-21下调后乳腺癌细胞的存活和凋亡情况以及肿瘤抑制相关蛋白TIMP-1、Caspase 3和肿瘤增殖相关蛋白Bcl-2的表达变化,为探寻乳腺癌的基因治疗靶点提供依据.
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miR-21和miR-93表达水平与三阴性乳腺癌发生发展的相关性研究
目的 探讨miR-21和miR-93的表达水平与三阴性乳腺癌(TNBC)发生发展的相关性.方法 选择行乳腺癌根治术的女性患者86例,收集癌组织与正常乳腺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-21和miR-93的相对表达量,并分析其与临床病理特征的相关性.结果 miR-21和miR-93在TNBC组织中相对表达量高于癌旁组织;TNBC组织中,miR21高表达54例,占62.79％,miR-93高表达50例,占58.14％;miR-21和miR-93在肿瘤直径＞5 cm、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期以及淋巴结转移的患者中高表达率显著增高(P＜0.01);miR-21和miR-93的表达水平与患者年龄、月经状态、病理分级无明显相关性.癌组织中miR-21与miR-93表达水平呈显著正相关(r=0.761,P＜0.01).结论 miR-21与miR-93在TNBC中表达异常增高,且与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关,可作为TNBC诊断及判断预后的辅助指标.
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SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测宫颈癌血清中miR-21的表达
目的 建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测宫颈疾病患者血清中miR-21的表达水平,探讨miR-21在宫颈癌临床监测中的意义.方法 设计miR-21、U6茎环逆转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参,用实时荧光定量PCR检测32例不同宫颈疾病患者血清中miR-21表达水平.结果 建立的实时荧光定量PCR法能特异地检测血清中的miR-21扩增信号,熔解曲线单一,产物特异.宫颈癌患者血清中miR-21水平明显高于子宫肌瘤、宫颈炎等其他良性宫颈疾病(P＜0.05),而宫颈癌患者手术切除后血清中miR-21水平明显下降(P＜0.05).结论 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR是一种快速简便、敏感性高、特异性好的检测方法,对宫颈癌早期诊断、分子分期和预后判断有很好的应用前景.
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miR-21与舌鳞癌SCC9细胞干细胞样特性及顺铂敏感性的实验研究
目的 观察舌鳞癌SCC9细胞干细胞样特性、顺铂敏感性以及miR-21表达对其影响.方法 选取人舌鳞癌SCC9细胞分别通过贴壁、悬浮培养法培养获得SCC9a和SCC9f细胞;体外转染法将miR-21 mimics、miR-21 inhibitor分别转染至SCC9f细胞,设为SCC9m和SCC9i细胞.实时荧光定量PCR(QPCR)法检测干细胞相关转录因子(Oct3/4、Sox2、Nanog)及miR-21表达水平,ALDEFLOR kit检测ALDH阳性细胞的比例.MTT法、Annexin Ⅴ/PI双染法分别检测顺铂对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响.结果 SCC9f细胞中Oct3/4、Sox2和Nanog表达以及ALDH阳性比例高于SCC9a细胞(P＜0.05).顺铂对SCC9f细胞的增殖抑制率、凋亡率均低于SCC9a细胞.miR-21表达在SCC9f细胞中高于SCC9a细胞(P＜0.05),而在SCC9m、SCC9i细胞中表达分别较SCC9f细胞明显升高与降低(均P＜0.05).Oct3/4、Sox2和Nanog在SCC9m细胞中表达高于SCC9f细胞,其中Oct3/4上调差异具有统计学意义(P＜0.001);而Oct3/4、Sox2和Nanog在SCC9i细胞中表达均较SCC9f细胞呈显著下调(P＜0.05).SCC9a、SCC9m和SCC9i细胞中ALDH阳性率分别与SCC9f细胞中ALDH阳性率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).SCC9m、SCC9i细胞的凋亡率分别较SCC9f减低与增高(均P＜0.05).结论 舌鳞癌SCC9细胞采用悬浮培养法培养获得的SCC9f细胞具有干细胞特性,对顺铂更为耐受;抑制miR-21表达可增强SCC9细胞对顺铂的敏感性,可能与miR-21调节其肿瘤干细胞相关转录因子表达有关.
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反义miR-21通过调控hTERT表达抑制胶质瘤细胞生长
目的 探讨敲低miR-21表达对人胶质瘤细胞系U87细胞功能的影响以及相关作用机制.方法 脂质体介导转染miR-21反义寡聚核苷酸(miR-21 inhibitor)敲低U87细胞miR-21的表达.使用实时荧光定量PCR鉴定转染后U87细胞miR-21表达水平；MTT法检测转染后细胞增殖水平,流式法评价转染后细胞周期分布及凋亡变化,并结合Western印迹及RT-PCR验证在U87细胞中miR-21和hTERT间关系.结果 体外转染反义miR-21寡聚核苷酸能明显抑制U87细胞生长,诱导其凋亡,并且能够明显下调hTERT表达.结论 反义miR-21可能通过下调hTERT表达抑制胶质细胞生长,miR-21可作为胶质瘤基因治疗的靶点.
