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miR-21在山核桃叶总黄酮抑制人脐静脉内皮细胞增殖中的作用研究
[目的]探讨山核桃叶总黄酮对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的作用,以及miR-21在山核桃叶总黄酮抑制HUVECs增殖中的作用,进一步探讨山核桃叶总黄酮抑制血管生成的作用机制.[方法]不同浓度山核桃叶总黄酮孵育HUVECs后,采用Cell Counting Kit (CCK-8)法检测HUVECs的生长情况;采用SYBR定量PCR检测miR-21的转录水平及Western blot法测定其靶基因PDCD4的蛋白表达水平.[结果]CCK-8法检测结果表明,山核桃叶总黄酮可以剂量依赖性地抑制HUVECs的增殖;SYBR定量PCR结果表明山核桃叶总黄酮孵育过的HUVECs中miR-21的表达量呈浓度依赖性降低,而PDCD4蛋白的表达量呈浓度依赖性升高.[结论]miR-21可能通过PDCD4参与了山核桃叶总黄酮抑制HUVECs增殖的过程.
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原发性结肠癌组织中miR-21基因的表达及其临床意义
目的 检测原发性结肠癌组织中miR-21基因的表达,并探讨其表达与临床病理因素的相关性.方法 采用实时定量PCR的方法检测112例原发性结肠癌组织和对应正常结肠组织中miR-21的相对表达差异,根据患者年龄、性别、病理分型以及Dukes分期将患者分组,分析miR-21的组织表达差异与临床病理因素间的关系.结果 实时定量PCR结果显示,相对于癌旁正常结肠组织,miR-21在82.1％ (92/112)的结肠癌组织中呈高表达状态,miR-21在结肠癌组织中的表达差异与患者性别、年龄以及临床病理分型差异无统计学意义(P＞0.05);随着Dukes分期的增加,miR-21在癌组织中的表达呈增加趋势.结论 miR-21的表达在原发性结肠癌组织中较癌旁正常组织显著增加,对结肠癌临床分期和病理诊断具有重要的意义.
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微滴数字PCR检测血清miR-21和miR-4429在肝癌诊断中的应用
目的 应用微滴数字PCR检测血清中miR-21和miR-4429的水平,并探讨联合AFP检测在诊断肝细胞肝癌中的临床价值.方法 收集69例肝癌、47例慢性活动性乙肝以及40例健康体检者血清标本,应用微滴数字PCR检测血清miR-21和miR-4429水平,化学发光法检测血清中AFP水平,并用ROC曲线和Spearman相关进行分析.结果 肝癌组患者miR-21水平明显高于健康对照组和慢性活动性乙肝组(均P＜0.05),miR-4429水平高于健康对照组(P＜0.05).ROC曲线分析显示:miR-21、miR-4429和AFP 3者联合检测的灵敏度(95.0％)、特异度(92.5％)和准确度(92.7％),较单独检测或两项联合检测有较大提升.miR-21、miR-4429表达与患者年龄、性别、有无HBsAg感染或肝硬化、PLT或AFP水平、TNM分期和疾病状态均无相关性(均P＞0.05).结论 血清miR-21和miR-4429对肝癌的诊断具有良好的灵敏度和特异度,联合AFP检测可以提高诊断的效能.
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结直肠癌中miR-21表达与临床病理因素及预后的关系
目的 探讨结直肠癌组织中miR-21表达与临床病理因素及预后的关系.方法 取59例结直肠癌组织标本及癌旁正常黏膜组织标本,采用茎环逆转录实时荧光定量PCR方法检测结直肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miR-21的相对表达量,并分析癌组织中miR-21表达与临床病理因素的关系.用Kaplan-meier法计算生存率,采用log-rank检验、Cox比例风险回归模型分析结直肠癌预后影响因素.结果 结直肠癌组织中miR-21的相对表达量明显高于其癌旁正常黏膜组织(P＜0.05).结直肠癌组织miR-21表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期有关(均P＜0.05);与性别、远处转移、分化程度、浸润深度和肿瘤位置无关(均P ＞0.05).远处转移、分化程度、miR-21表达水平是影响患者预后的独立危险因素(均P＜0.05),其RR值及95％CI分别为5.053(1.395～5.787)、3.998(1.395～18.305)、3.837(1.266～11.631).结论 miR-21与结直肠癌患者预后和疾病进展密切相关.
关键词： 结直肠癌 miR-21 预后 Cox比例风险回归模型 -
HOTAIR-siRNA通过miR-21对肝癌侵袭、转移的影响
目的 探讨长链非编码HOTAIR靶控miR-21对肝癌细胞侵袭的影响及相关机制.方法 采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测30例肝癌组织中miR-21的表达,及其与临床病理特征的相关性;HOTAIR的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,采用Transwell小室法检测HepG2细胞的侵袭活性;应用qRT-PCR法检测HepG2细胞中miR-21的表达;采用Western blot法检测MMP-2蛋白的表达,并分析其与miR-21的相关性.结果 qRT-PCR检测发现miR-21在肝癌组织中的表达水平均明显高于癌旁组织(P ＜0.05);miR-21表达与肿瘤恶性程度、分化程度及侵袭转移均呈正相关;与患者AFP、肿瘤大小及肿瘤数目无关.沉默HOTAIR基因后,HepG2细胞侵袭能力下降,miR-21基因和MMP-2蛋白的表达均下调且两者呈正相关.结论 miR-21在肝癌组织中呈高表达,并与肝癌恶性程度、肿瘤分化、门静脉癌栓及侵袭转移有关;HO-TAIR可能通过靶控miR-21的表达抑制肝癌细胞的侵袭与转移.
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miR-21通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭
目的 探讨miR-21在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达及其可能调控的靶基因.方法 检测miR-21在HCC组织和细胞系中的表达,使用miR-21抑制剂后,观察HCC细胞活力和侵袭能力的变化;运用生物信息学分析预测miR-21可能的靶基因.应用miR-21抑制剂后,双荧光素酶报告基因系统检测其对靶基因活性的影响.结果 HCC组织中miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P ＜0.05);HCC细胞中miR-21的表达水平显著高于肝细胞(P＜0.01).抑制miR-21后,HCC细胞的活力和侵袭能力降低(P＜0.01).抑癌基因程序性死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P＜0.01),在肝癌细胞中的表达水平显著低于肝细胞(P＜0.01).干扰PDCD4后,肝癌细胞的活力和侵袭能力提高(P＜0.05).双荧光素酶报告基因检测显示,使用miR-21抑制剂后,PDCD4表达上调(P＜0.01),肝癌细胞的侵袭和增殖能力降低(P＜0.01).干扰PDCD4后,肝癌细胞的侵袭和增殖能力升高(P＜0.001).结论 miR-21可通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭.
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前列腺癌组织中miR-21的表达及临床意义
目的 探讨miR-21在前列腺癌组织中的表达及临床意义.方法 采用原位分子杂交技术检测90例前列腺癌组织及69例良性前列腺增生组织中riR-21的表达,并复习相关文献.结果 miR-21在90例前列腺癌及69例良性前列腺增生中的阳性率分别为71.1％、24.6％.miR-21在前列腺癌组织中的表达明显高于良性前列腺增生组织(P＜0.05).miR-21表达与Gleason评分有关(P＜0.05),与其他临床病理学因素无关.结论 miR-21在前列腺癌组织中表达上调,提示miR-21可能在前列腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
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结直肠癌中miR-21的表达及其临床病理学意义
目的 探讨结直肠癌组织中miR-21的表达及其临床病理学意义.方法 采用TaqMan实时定量RT-PCR法检测43例结直肠癌组织及其癌旁正常组织中miR-21的表达,分析miR-21的表达与结直肠癌临床病理因素之间的关系.结果 miR-21在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05),结直肠癌组织中miR-21的表达与肿瘤病理学分级、淋巴结转移及术后生存率密切相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位等无明显相关性(P>0.05).结论 miR-21在结直肠癌中表达升高,miR-21高表达同结直肠癌病理学分级、淋巴结转移及术后生存率密切相关,miR-21可能在大肠癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
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姜黄素对miR-21靶控的信号转导蛋白K-ras的影响
目的：探讨姜黄素对miR-21靶控的信号转导蛋白K-ras的影响。方法18只SD雄性大鼠,随机分为对照组、模型组和姜黄素组,每组6只。除对照组外,模型组和姜黄素组用二乙基亚硝胺( DENA)连续灌胃18周,姜黄素组于第9周用姜黄素灌胃,每周2次,连续10周；对照组先用生理盐水灌胃8周,9~18周用生理盐水+0．5%羧甲基纤维素钠灌胃。应用qRT-PCR技术检测miR-21的表达；Western blot法检测K-ras蛋白的表达。结果肝癌模型组miR-21基因的相对表达量较正常对照组明显增加( P<0．05)；姜黄素组miR-21基因相对表达量较肝癌模型组明显降低( P<0．05),与对照组相比表达量增加,差异有统计学意义( P<0．05)；与对照组相比,模型组和姜黄素组肝癌组织中K-ras蛋白相对表达量均明显升高(P<0．05),姜黄素组大鼠肝癌组织中K-ras蛋白相对表达量较模型组均明显降低( P <0．05)。Pearson相关分析显示,实验各组K-ras蛋白及miR-21的表达量均呈正相关( P<0．05)。结论姜黄素可能通过调控miR-21靶控的信号转导子K-ras蛋白表达促进肝癌的发生、发展及侵袭转移,对肝癌生物靶向治疗及预后判断具有潜在临床应用价值。
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miR-21对HepG2细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响
目的 研究miR-21对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养HepG2细胞,并将细胞分为增强组、抑制组和对照组,分别给予Lipofectamine 2000和Hsa-miR-21 mimics(50 nm/L)、Lipofectamine 2000和Has-miR-21 inhibitor(100 nm/L)转染或者给予Lipofectamine 2000处理干预.采用Western blot法检测B细胞异位基因2(BTG2)蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞增殖,使用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡变化.结果 增强组细胞BTG2蛋白表达水平低,抑制组细胞BTG2蛋白表达水平高,对照组细胞BTG2蛋白表达水平强于增强组而低于抑制组,组间差异比较有统计学意义(P<0.05);抑制组细胞增殖率较增强组和对照组明显降低(P<0.05),增强组较对照组明显增强(P<0.05);与增强组或对照组比,抑制组细胞周期S期明显减少(P<0.05),而G2期则明显增多(P<0.05),与对照组比,增强组S期明显增加,而G2期明显较少(P<0.05);与增强组和对照组比,抑制组细胞凋亡率显著增加(P<0.05),而与对照组比,增强组细胞凋亡率显著减少(P<0.05).结论 miR-21可能通过直接靶向调控BTG2表达而影响HepG2细胞的生长,可能成为干预肝癌生长的新途径.
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白藜芦醇调节STAT3与miR-21表达抗肝癌作用的初步研究
目的 初步探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)的抗肝癌作用及其分子机制.方法 建立移植性肝癌小鼠模型,口服给予Res进行干预,分析肿瘤生长状况.然后采用Real-time PCR、RT-PCR等方法检测转录因子Foxp3及微小核糖核酸-21 (miR-21)的基因表达,Western blot分析信号转导子与转录激活子3(STAT3)的活性表达,流式细胞术观察CD4+CD25+T细胞数量的变化.结果 与荷瘤对照组相比,Res给药组CD4+CD25+T细胞数量和Foxp3表达均明显降低,同时miR-21表达减少,该效应或许与其下调STAT3磷酸化活性水平密切相关.结论 Res可能通过调控STAT3信号分子及 miR-21表达,抑制调节性T细胞产生,改变肿瘤微环境,从而发挥抗肝癌作用.
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miR-21诱导犬BMSCs骨向分化的体外实验研究
目的 体外研究检测miR-21诱导拉布拉多犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用.方法 构建LentimiR-21-Luciferase与Lenti-LacZ-Luciferase慢病毒载体,分别转染犬BMSCs,将研究分为miR-21组与LacZ组.利用体外细胞划痕实验来比较转染后BMSCs的爬行迁移能力.在转染后的第0、1、4、7、14天分别提取miR-21组与LacZ组BM-SCs的mRNAs和蛋白.通过Real time-PCR技术和Westernblot检测成骨分化关键因子骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的表达.结果 Lenti-miR-21-Luciferase与Lenti-LacZ-Luciferase慢病毒载体成功转入BMSCs后,miR-21组的BMSCs细胞爬行迁移能力显著增强(P＜0.001);Real time-PCR和Western blot结果显示,miR-21可以显著上调BMSCs成骨分化关键因子OCN和OPN的表达(P＜0.05).结论 miR-21可以显著促进BMSCs的成骨分化,为进一步的体内实验奠定基础.
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miR-21介导肠上皮细胞凋亡维持肠道稳态参与溃疡性结肠炎相关癌变研究
目的 观察溃结癌变小鼠结肠黏膜miR-21、Caspase-8、肠上皮细胞凋亡及β-防御素表达,探讨溃结相关癌变的可能发病机制.方法 40只雄性清洁级Balb-c小鼠按体质量随机分2组即正常组和模型组,其中正常组10只,模型组30只.采用二甲肼/葡聚糖硫酸钠(DMH/DSS)复合法制备溃结癌变相关模型,造模30周结束后处死全部小鼠,应用光镜检测小鼠结肠黏膜组织形态学变化,电镜检测超微组织结构及上皮细胞凋亡变化;应用现代分子生物学技术检测miR-21、Caspase-8及β-防御素表达变化.结果 与正常组比较,溃结相关癌变小鼠结肠黏膜光镜下见结肠黏膜不同程度缺损,表面渗出及坏死物,细胞形态异型,呈浸润癌改变;电镜下见肠黏膜层上皮细胞表面微绒毛稀疏,长短不一,细胞连接间隙增宽,见大量上皮细胞凋亡小体及细胞自噬,线粒体肿胀,结构不清,嵴结构消失,造模成功率约70%.与正常组比较,溃结癌变小鼠结肠黏膜miR-21、Caspase-8、β-防御素蛋白及mRNA表达均呈明显上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05).结论 溃结相关癌变的发生及发展可能是由于溃疡性结肠炎(UC)炎症持续,诱导miR-21、Caspase-8及β-防御素表达增加,破坏肠道免疫平衡,导致肠黏膜通透性增加,肠上皮细胞凋亡凋亡/自噬加剧,造成恶性循环,进一步破坏肠道稳态,上皮细胞异型增生,甚则癌变.
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丹皮酚通过miR-21介导的p38MAPK信号通路下调氧化低密度脂蛋白诱导的大鼠血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α释放
目的 观察微RNA-21(microRNA-21,miR-21)对p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38-MAPK)信号通路的调控作用,探究丹皮酚(paeonol,Pae)抑制血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)损伤的机制.方法组织块预消化贴壁法培养大鼠VEC;氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导VEC的损伤;用HiPerFect试剂将miR-21模拟物或抑制剂转染进入VEC;免疫印迹法检测p38 MAPK信号通路相关蛋白的表达;酶联免疫吸附试验检测VEC中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平.结果 ox-LDL明显提高VEC中Ras、p-MKK3/6、p-p38蛋白表达水平,并诱导VEC分泌TNF-α;miR-21高表达可升高TNF-α水平及Ras、p-MKK3/6、p-p38蛋白表达水平;Pae明显降低损伤的VEC分泌TNF-α水平,且抑制由miR-21高表达引起的TNF-α水平上升及p38 MAPK信号通路的激活.结论 Pae可抑制miR-21介导的p38 MAPK信号通路,减少ox-LDL诱导的VEC中TNF-α的分泌.
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微小RNA-21在非小细胞肺癌中的研究进展
肺癌在全球范围内发病率占恶性肿瘤的首位,并且每年处于上升趋势. 肺癌中约80%为非小细胞肺癌( NSCLC) ,以男性居多,城市多于农村,中老年人多见. 近些年,肺癌发病年轻化且女性肺癌(尤腺癌)的发病率明显增加,大部分NSCLC患者发现时已处于晚期,失去手术机会,化疗及分子靶向治疗为其主要治疗手段. 越来越多的学者对NSCLC的微小RNA( miRNA)进行深入研究以期找出其发生的机制,使指导有效的化疗方案、通过miRNA检查筛选早期NSCLC以及指导靶向药物治疗等成为可能. 本文就 miRNA-21 (miR-21)在NSCLC中的研究进展作一综述.
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PTEN、PI3K和miR-21在胃癌中的表达及相关性研究
目的 探讨第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和miR-21在胃癌中的表达及相互关系.方法 收集77例胃癌患者手术切除的胃癌组织及胃黏膜组织标本,应用荧光定量RT-PCR及Western blot-ting技术检测miR-21、PTEN和PI3K蛋白的表达水平,并分析miR-21与PTEN/PI3K信号通路之间的关系,以及与临床病理参数之间的相关性.结果 胃癌组织中miR-21及PI3K蛋白的表达水平均明显高于胃黏膜组织(P<0.05),PTEN蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05);胃癌组织中PTEN蛋白的表达与肿瘤浸润深度、分化、TNM分期、淋巴转移有关(P<0.05),PI3K蛋白的表达与肿瘤淋巴转移和TNM分期有关(P<0.05);胃癌组织中PTEN蛋白的相对表达水平与miR-21和PI3K蛋白表达呈负相关(r=-0.428,P<0.05;r=-0.517,P<0.05).结论 miR-21可能通过抑制PTEN,激活P13K信号通路参与胃癌的发生发展.
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非小细胞肺癌38例血清miR-21、miR-146a表达的临床意义
目的 研究非小细胞肺癌患者血清中miR-21和miR-146a的表达水平,探讨其在肿瘤发生、发展中的作用.方法 采用RT-qPCR技术检测观察组非小细胞肺癌38例及正常对照组38例血清中miR-21、miR-146a的表达.结果 非小细胞肺癌患者血清中miR-21的表达较正常人血清上调,miR-146a的表达较正常人血清下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-21和miR-146a参与非小细胞肺癌的发生、发展,miR-21和miR-146a可能成为早期诊断非小细胞肺癌的重要生物学指标.
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SAP患者PTX3、TFPI、mIR-21的表达变化及与患者炎症反应的关系
目的 探讨急性重症胰腺炎(SAP)患者血清正五聚蛋白3(PTX3)、组织因子途径抑制剂(TFPI)、miR-21水平变化及与患者炎症反应的关系.方法 选取2016年3月至2017年5月我院消化内科收治的118例急性胰腺炎患者作为研究对象,其中SAP患者43例(SAP组)、轻症胰腺炎患者75例(MAP组),再另选取同期健康对象60例作为对照组,检测各组的血清PTX3、TFPI、miR-21、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并进行相关性分析.结果 ①SAP组患者血清PTX3、TFPI、miR-21水平均显著高于MAP组、 对照组(P<0.05),MAP组血清PTX3、TFPI、miR-21水平均显著高于对照组(P<0.05).②SAP组患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著高于MAP组、对照组(P<0.05),MAP组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05).③SAP组患者血清PTX3、TFPI、miR-21与其血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均呈显著正相关关系(P<0.05).结论 SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21水平较MAP及健康人群升高更加显著,并且与炎症反应程度有关.
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复发性流产蜕膜组织MIR-21、MIR-31的表达研究
目的 探究复发性自然流产蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达情况.方法 研究对象为选取进行清宫的49例女性患者,其中24例复发性自然流产者设为观察组,25例计划外怀孕要求终止妊娠者设为对照组,取两组绒毛及蜕膜组织进行研究,采用实时荧光定量PCR检验蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达情况,并采用蛋白免疫印迹法检验插头样转录因子P3(FOXP3)的表达情况,对比两组的差异性,并分析MIR-21、MIR-31和FOXP3表达的相关性.结果 观察组MIR-21、MIR-31、FOXP3的表达与对照组相比均有显著差异(P<0.05),MIR-21和FOXP3表达增高,而MIR-31表达下降;MIR-21、MIR-31的表达均与FOXP3的表达相关(r=0.593,-0.669,P<0.05).结论 蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达异常会导致FOXP3基因出现表达异常,可能是导致机体免疫机制紊乱并引发自然流产的重要原因.
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miR-21表达与肝细胞癌患者预后的相关性
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性实体肿瘤之一,在肿瘤相关疾病死亡率中排第二[1].临床上急需一种能够准确预测HCC患者疾病复发、转移和预后的标志物以改善患者临床疗效.报道表明在多种人类肿瘤中miR-21表达增加能够促进肿瘤细胞增殖、转移和侵入[2],且部分研究证实miR-21可以作为某些肿瘤诊断和预后标志物[3-5],然而HCC患者的miR-21表达情况及其对疾病预后的影响尚不清楚.本研究旨在探讨miR-21对评估HCC患者疾病预后的价值.
