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甲状腺乳头状癌组织中 miR-21的表达与临床预后的关系
目的：检测甲状腺乳头状癌(PTC)肿瘤组织miR-21的表达，探讨miR-21在PTC表达对患者预后的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT- PCR)检测手术切除的68例PTC肿瘤组织及癌旁正常组织中miR-21表达情况，分析甲状腺癌组织中miR-21的表达与临床病理参数的关系以及对患者预后的影响。结果 PTC患者肿瘤组织中miR-21的表达水平显著高于癌旁正常组织（P <0.05），PTC肿瘤组织中miR-21的表达水平与肿瘤腺外侵润有关（P <0.05），PTC患者肿瘤组织中 miR-21表达水平高者，其术后的复发转移率高于低表达者（P <0.05）。结论 miR-21在PTC患者肿瘤组织中的表达明显升高，其表达水平与肿瘤腺外侵润、术后复发转移有关。
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多发性骨髓瘤中miR-21与SPRY2基因表达的相关性研究
目的：检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血miR-21的表达水平，研究MM中miR-21与SPRY2基因表达的相关性。方法选择30例MM患者、15例意义未明单克隆丙种球蛋白病（MGUS）患者及20例正常对照（NC）的门诊患者，用实时荧光PCR定量检测miR-21和SPRY2表达水平；Western blot检测miR-21和SPRY2在MM细胞系中表达；在荧光显微镜下观察：U266用脂质体转染荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor后miR-21的表达。结果 MM组血清循环miR-21的表达水平较MGUS组和NC组显著增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；在miR-21内源性高表达的MM细胞株中，SPRY2明显低表达；反之，明显高表达；荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor，转染效率90%以上，转染mimics细胞miR-21表达量（98.6±14.2）较未处理的U266细胞miR-21表达量（0.82±0.13）升高了120.2倍（差异有显著的统计学意义，P＜0.001），转染inhibitor细胞miR-21表达量（0.37±0.06）较未处理细胞降低了61.9%（差异有明显的统计学意义，P＜0.05）。结论 miR-21可能是导致SPRY2在MM中表达下调的一个负性调控因子。miR-21与MM 的发生发展和疾病预后有密切关系，可作为判断MM 患者预后不良指标之一。
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miR21对心脏微血管内皮细胞PDCD4/AP1通路的调节作用
目的 探讨柯萨奇B3病毒(CVB3)感染离体培养的大鼠心脏微血管内皮细胞(CMVECs)后,miR-21对PDCD4和转录因子AP1构成的调节通路的影响.方法 (1)CVB3感染CMVECs 48h,实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-21表达;(2) CVB3病毒感染CMVECs48h后,Western Blot法检测各组细胞中PDCD4蛋白表达;(3) CMVECs瞬时转染miR-21模拟物48h后,WesternBlot法检测各组细胞中PDCD4蛋白表达;(4)双荧光素酶报告基因法研究miR-21与PDCD4基因靶向结合位点;(5) CMVECs细胞共转染PDCD4和AP1-Luc质粒,检测AP1-Luc荧光素酶活性以观察PDCD4基因对AP1活性的影响;(6)提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验(EMSA实验)检测AP1和DNA的结合活性.结果 (1) CMVECs感染CVB3病毒48小时后,与对照组比较,病毒感染组miR-21表达上调4.12倍;(2)CMVECs感染CVB3病毒48小时后,与对照组比较,病毒感染组PDCD4蛋白表达明显下调;(3)CMVECs过表达miR-21后PDCD4蛋白表达下调;(4) CMVECs过表达miR-21后显著抑制野生型PDCD4基因3'UTR活性,而对突变型3' UTR活性无影响;(5) CMVECs过表达PDCD4基因48h后AP1-Luc荧光素酶活性与对照组相比明显下调;CMVECs过表达miR-21 48h后AP1-Luc荧光素酶活性与对照组相比显著上调;(6) EMSA实验结果显示CMVECs过表达PDCD4 48h后AP1与DNA结合活性明显下调,过表达miR-21后AP1与DNA结合活性明显上调.结论 CVB3感染CMVECs后上调miRNA-21表达.miR-21通过与靶基因PDCD4的3'非翻译区(3' UTR)靶向结合抑制PDCD4表达、上调AP1活性及AP1与DNA结合活性.
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糖尿病慢性肾脏疾病与血浆中miR-21及载脂蛋白的相关性研究
目的 探讨糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)与血浆中miR-21、载脂蛋白表达相关性.方法 回顾性分析2012年6月至2014年4月河南省中医院内分泌科168例T2DM患者(T2DM组)和76名健康志愿者(NC组)的临床资料.将T2DM组再分为正常GFR组(NGFR)和CKD组.全自动生化仪检测各组血肌酐(Scr)、HbA1c、载脂蛋白A1 (ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)水平,根据99 Tcm-DTPA肾动态显像测定体表面积标准化GFR(sGFR).RT-PCR测定血浆中miR-21的表达.Logistic回归分析CKD与ApoA1、ApoB及miR-21相关性.结果 CKD组BUN、FPG、Scr、UAER、sGFR、SUA、ApoA1、ApoB等与NGFR组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,NC组miR-21表达量均高于其他两组.通过条带显示,CKD组miR-21几乎无表达,NGFR组该因子表达量弱于NC组.Pearson相关性分析结果显示,sGFR与miR-21、ApoB呈正相关(r=0.792、0.879,P＜0.05),与ApoA1呈负相关(r=-0.647,P=0.004).Logistic回归分析发现,ApoA1、miR-21是CKD发生发展的影响因素.受试者工作特征(ROC)曲线显示,miR-21、ApoA1及ApoB三者联合检测时,敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值均高于上述任何一项单一检测.结论 CKD与ApoA1、ApoB及miR-21有一定相关性,ApoA1、ApoB与miR-21联合检测能提高临床对CKD的诊断价值.
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2型糖尿病心血管并发症与血浆中 miR-21及胱抑素 C 表达的相关性研究
目的：探讨T2DM 心血管并发症与血浆中miR‐21、胱抑素C（Cys‐C）表达的关系。方法选取T2DM患者148例，根据诊断结果，分为 T2DM ＋心血管疾病组（T2DM ＋ CVD ）和单纯 T2DM 组（T2DM ），另选取健康体检者作为NC组。检测各组血清中Cys‐C等相关因子，RT‐PCR测定血浆中miR‐21含量。结果各组Cys‐C水平差异有统计学意义（P＜0.05）。RT‐PCR检测结果显示，NC组miR‐21表达量均高于其他两组。Cys‐C、miR‐21联合检测结果显示，T2DM 心血管并发症敏感性为89.6％（60／67），阳性预测值为81.1％（61／74），特异性为82.7％（67／81），阴性预测值为90.5％（67／74）。相关分析结果显示，T2DM心血管并发症与Cys‐C呈正相关，与miR‐21呈负相关。结论 T2DM 心血管并发症与Cys‐C、miR‐21有相关性，Cys‐C与miR‐21联合检测能提高临床对于T2DM心血管并发症的敏感性和特异性。
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MiR-21与肿瘤的研究进展
MieroRNA(miRNA)是一类内源性具有调控功能的小分子非编码RNA,长度18～23 nt,主要在转录后水平调节基因表达.近,大量研究表明,miR-21可作为原癌基因在多种肿瘤中高表达并参与细胞的增生、分化、凋亡等过程,在肿瘤的发生发展中具有重要作用.本文从miR-21的自身合成与表达调控、靶基因的验证及临床意义等方面作一综述,以便为将来的研究及临床应用提供可参考的重要资料.
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微小RNA-21对脊髓缺血再灌注损伤后神经元细胞凋亡的影响
目的:探讨微小RNA-21 (miR-21)能否抑制FASL的表达进而减少脊髓缺血再灌注损伤后神经元细胞的凋亡.方法:通过慢病毒载体转染PC-12细胞,测定佳的感染复数(MOI).分别转染不同的慢病毒载体建立并验证上调miR-21、下调miR-21和对照的PC-12细胞体系,经过氧糖剥夺以及复糖复氧处理模拟脊髓损伤后缺血再灌注损伤过程.利用Hoechst/PI染色技术检测上调以及下调miR-21对PC-12细胞凋亡情况的影响;利用qRT-PCR技术以及Western blot技术检测上调以及下调miR-21表达对PC-12细胞中FASL表达水平的影响.在293T细胞中,通过质粒转染技术分别建立miR-21/miR-21阴性对照和FASL野生型/FASL突变型/FASL阴性对照的共转染体系,利用双荧光素酶实验验证miR-21和FASL的靶向关系.结果:MOI=20为佳的感染复数.在该条件下进行慢病毒转染72h后,荧光显微镜下可观测到绝大多数PC-12细胞中有明显的绿色荧光,通过qRT-PCR技术检测miR-21的水平发现:上调组的miR-21水平较对照组明显提高(P＜0.05);但是下调组miR-21水平和对照组相比却没有明显变化(P＞0.05).转染三种不同慢病毒的PC-12细胞经过氧糖剥夺及复氧处理后,Hoechst/PI双染法检测结果证实上调组细胞凋亡较对照组明显减少(P＜0.05),而下调组的细胞凋亡比例较对照增高(P＜0.05).另外,氧糖剥夺及复氧处理后,三组PC-12细胞中FASL表达水平均较处理前增高,而上调组的FASL水平较对照组均下降(P＜0.05),下调组的FASL水平较对照组有所升高(P＜0.05).双荧光素酶实验结果发现miR-21在FASL野生型(3'UTR-WT)组间有显著差异(P＜0.05),而miR-21在FASL对照组以及FASL突变型组间无显著差异(P＞0.05).结论:miR-21能够通过靶向抑制FASL表达,减少脊髓缺血再灌注损伤后神经元的凋亡.
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AS-miR-21对鼻咽癌转移潜能及其对Bcl-2调控作用研究
目的 探讨AS-miR-21对鼻咽癌转移潜能及其对Bcl-2调控作用机制.方法 应用MTT检测鼻咽癌细胞增殖抑制率;Giemsa染色检测鼻咽癌细胞克隆形成;细胞划痕实验检测鼻咽癌细胞迁移能力;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA表达;免疫组化方法和蛋白质印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平.结果 结果显示,AS-miR-21、miR-21和miR-NC组24hA值分别为0.12±0.01、0.23±0.02和0.22±0.02,F=106.47,P＜0.000 1:48hA值分别为0.21±0.02、0.53士0.03和0.52±0.02,F=340.01,P＜0.000 1;72 hA值分别为0.43±0.03、0.75±0.03和0.66±0.02,F=209.45,P＜0.000 1;96 h A值分别为0.74±0.02、0.95±0.03和0.93±0.01,F=114.52,P＜0.000 1.Giemsa染色结果显示,AS-miR-21组克隆形成率为(0.35±0.02)％,比对照组的(0.65±0.06)％减少46.2％,t=8.215 8,P=0.001 2;miR-21组克隆形成率为(0.82士0.08)％,比对照组的(0.65士0.06)％增加20.7％,t=2.944 5,P=0.042 2.划痕实验结果显示,12 h后AS-miR-21组愈合率为(0.207±0.015)％,比对照组的(0.487±0.032)％减少57.49％,F=185.68,P＜0.000 1;24 h后AS-miR-21组愈合率为(0.471±0.002)％,比对照组的(0.810±0.036)％减少41.85％,F=264.96,P＜0.000 1.RT-PCR结果显示,AS-miR-21组Bcl-2 mRNA表达为0.252土0.053,比对照组的1.000士0.095减少74.8％,t=11.909 6,P=0.000 3;miR-21组Bcl-2 mRNA表达为1.837±0.152,比对照组的1.000土0.095增加83.7％,t=8.087 9,P=0.001 3.免疫组化结果显示,AS-miR-21组Bcl-2蛋白表达灰度值为196.2±11.8,比对照组的126.9±7.3减少54.6％,t=15.793 7,P＜0.000 1.蛋白质印迹结果显示,AS-miR-21组Bcl-2蛋白表达为0.125±0.073,比对照组的1.000±0.163减少87.5％,t=15.492 7,P＜0.000 1;miR-21组Bcl-2蛋白表达为2.018±0.182,比对照组的1.000±0.095增加101.8％,t=13.176 1,P＜0.000 1.结论 AS-miR-21能抑制鼻咽癌迁移及增殖并促进其凋亡,此外,AS-miR-21通过负调控Bcl-2有可能成为鼻咽癌新靶点之一.
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miR-21与肿瘤研究进展
目的:总结国内外关于miR-21与肿瘤发生机制、肿瘤诊断、治疗、预后的研究进展.方法:以“microRNA、miR-21、肿瘤和靶基因”为关键词,应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,检索2000-01- 2011-11的相关文献,共检索到英文文献126篇,中文文献62篇.纳入标准:1)miR-21在肿瘤发生发展中的作用机制；2)miR-21已证实的部分靶基因的功能；3)miR-21在肿瘤的诊断、治疗和预后中的作用.排除与本研究无关的文献,终纳入分析29篇文献.结果:miR-21的基因定位决定了其与肿瘤的发生发展密切相关；部分靶基因如pdcd4、pten和tpm1参与肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡、血管浸润和转移等生物学过程,因此检测miR-21表达变化可作为肿瘤诊断、治疗和预后的重要生物学指标.结论:miR-21与多种肿瘤的发生发展密切相关,未来可作为肿瘤诊断,治疗和预后的重要生物学指标.
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miR-21调控非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究
目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)中高表达的miR-21对细胞增殖和凋亡的影响及其调控机制.方法 采用荧光定量聚合酶链反应检测miR-21在人NSCLC组织、癌旁组织和A549细胞系中的表达.通过序列分析预测被miR-21调控的抑癌基因,通过荧光素酶活性检测和Western blot 检测验证miR-21对靶基因表达调控的影响.采用RNA干扰技术抑制miR-21和程序性细胞死亡因子4(PDCD4),以台盼蓝染色和流式细胞术检测A549细胞增殖和凋亡的变化.结果 NSCLC组织和A549细胞中miR-21的表达水平分别为癌旁组织的2.24倍和3.06倍.序列预测和基因表达调控研究表明,miR-21可以在NSCLC中反向调控PDCD4的表达(P＜0.01).荧光素酶活性检测结果显示,共同转入Wt 3'UTR和miR-21会显著抑制A549细胞中的荧光素酶表达(P＜O.001).Western blot检测结果显示,导入反义寡核苷酸抑制miR-21的功能后,PDCD4的表达水平明显上升.抑制miR-21的作用可以显著抑制A549细胞的增殖,并使细胞凋亡率由2.6％上升到10.9％,而抑制PDCD4的表达可以在很大程度上消除miR-21介导的细胞增殖障碍,抑制细胞凋亡.结论 在NSCLC中,抑制抑癌基因PDCD4的表达可能是miR-21介导肿瘤细胞增殖、抵抗凋亡的重要途径之一.
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电子胃镜联合miR-21检测对胃癌诊断的意义
目的 探讨电子胃镜检查联合组织miR-21表达水平检测对胃癌诊断的意义.方法 纳入2011年6月至2012年12月进行胃镜检查的患者96例,胃镜检查同时胃镜下钳取患者胃内病变组织,通过对比胃镜诊断与病理诊断结果计算胃镜确诊率及漏诊率;应用实时荧光定量PCR对组织进行miR-21表达水平检测,对比胃镜下不同表现的各种疾病的miR-21表达水平.结果 胃癌、胃溃疡、慢性浅表性胃炎、胃食管反流性胃炎、慢性萎缩性胃炎检出率分别为28.12％(27/96)、30.21％(29/96)、18.75％(18/96)、10.42％(10/96)、12.50 ％(12/96),胃镜检查胃癌确诊率为100.00％,漏诊率6.90％(2/29);胃癌组miR-21相对表达量为54.41±6.66,明显高于胃溃疡组及其他疾病组(P＜0.01).结论 电子胃镜检查能较好地对胃癌患者进行筛查,胃镜下钳取组织行miR-21表达水平检测能提高胃镜对胃癌筛查的准确率,两者联合对胃癌诊断具重要价值.
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反义miR-21抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖的体外研究
目的 探讨敲低miR-21表达抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖能力的效果和机制.方法 脂质体介导转染反义寡聚核苷酸(AS-miR-21)下调U251人脑胶质瘤细胞株miR-21的表达.使用实时定量PCR和原位杂交法鉴定转染后U251细胞miB-21表达水平下调;MTY法评价AS-miR-21抑制U251细胞生长效果;流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布和凋亡;采用细胞免疫荧光技术(PCNA、CyelinD1、Bcl-2、PTEN和Septin-7)评价转染后U251细胞肿瘤生物学性状改变.结果 MTT结果显示AS-miR-21转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组与无义寡核苷酸(F=78.926,P=0.000)组;实时定量PCR法:AS-miR-21转染组miR-21表达下调为对照组0.042±0.012;LNA-miR-21原位杂交显示AS-miR-21转染组miR-21表达水平较对照组与无义寡核苷酸组下调;流式细胞术检测可见AS-miR-21转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞(X2=14.160,P=0.007)且凋亡比例高于对照组与无义寡核苷酸组(F=23341.25,P=0.000);细胞免疫荧光法表明AS-miR-21治疗后U251细胞PCNA、CyclinD1、Bcl-2表达下调,PrEN、Septin-7表达上调.结论 以miR-21作为靶点抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长结果肯定,miR-21可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点.
关键词： miR-21 反义寡聚核苷酸 U251人脑胶质瘤细胞株 基因治疗 -
前列腺癌组织中miR-21和PDCD4mRNA的临床分析
目的:研究前列腺癌组织中miR-21和程序性死亡因子-4(PDCD4) mRNA的表达水平.方法:临床纳入我院2013年10月至2016年4月期间行手术治疗的26例前列腺癌患者,术中分别取患者前列腺癌组织及癌旁正常前列腺组织各26对.采用荧光定量PCR对所取组织进行检测,检测所取标本中miR-21以及PDCD4 mRNA表达情况,采用Western印迹检测前列腺癌及癌旁组织中PDCD4蛋白的表达水平,分析miR-21与PDCD4表达水平的关系.结果:前列腺癌中miR-21表达水平相对于癌旁组织来说更高(P＜0.05);而PDCD4 mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.05).癌旁组织PDCD4蛋白表达灰度值比值明显高于前列腺癌(P＜0.05).前列腺癌miR-21与PDCD4 mRNA表达水平呈显著负相关(P＜0.05);与PDCD4蛋白表达水平也呈明显负相关(P＜0.05).结论:miR-21可能通过下调PDCD4表达水平从而参与前列腺癌的发病机制,从而引起前列腺癌的发生和发展.
关键词： 前列腺癌 miR-21 PDCD4 mRNA 表达 蛋白 -
间充质干细胞过表达miR-21对卵巢颗粒细胞凋亡的影响
目的 探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMMSCs获得稳定表达miR-21的BMMSCs(miR-21-BMMSCs).培养Wistar大鼠卵巢颗粒细胞,实验分为5组:正常组、磷酰胺氮芥(PM)组、miR-21组、BMMSCs组、miR-21-BMMSCs组.正常组为颗粒细胞不加药,PM组加入30μmol/L的磷酰胺氮芥,miR-21组加入PM诱导颗粒细胞凋亡后转染LV-miR-21,BMMSCs组、miR-21-BMMSCs颗粒细胞培养基中加入PM 24h后分别与BMMSCs、miR-21-BMMSCs以1:1比例共培养.48h后采用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测miR-21、程序性死亡因子4(PDCD4)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)mRNA的表达量,Western blotting检测PTEN、PDCD4蛋白表达水平.结果 正常组、PM组、miR-21组、BMMSCs组、miR-21-BMMSCs组的细胞凋亡率分别为10.4％±1.8％、33.4％±4.2％、27.0％±2.5％、28.0％±2.0％、19.6％±1.5％,5组间比较差异有统计学意义(F=59.35,P=0.00),其中miR-21-BMMSCs组细胞凋亡率明显低于miR-21组、BMMSCs组,但仍高于正常组.miR-21-BMMSCs组miR-21的表达量(4.0310±0.2314)明显升高,而PTEN、PDCD4的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05).结论 BMMSCs过表达miR-21可明显减少卵巢颗粒细胞的凋亡,其机制可能与对靶基因PTEN、PDCD4的调控作用有关.
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miR-21对运动性右室心肌纤维化发生的影响
目的:研究在长期大强度运动引起的右室心肌纤维化中miR-21表达水平的变化,探讨miR-21在运动性心肌纤维化中的作用.方法:72只雄性SD大鼠,随机分为安静对照组(Sed,n=24)、中强度运动组(ME,n=24)和大强度运动组(IE,n=24),每组按照训练周期又分为8周、12周和16周,各8只.安静对照组自由活动,中强度组和大强度组分别以速度15.2 m/min、坡度5°和速度28 m/min、坡度10°的条件每天运动1h,每周运动5天.各组后一次运动结束24小时后,下腔静脉采血并处死,迅速分离心脏取右心室.天狼星红染色测定右心室的胶原容积分数(CVF);免疫荧光检测Ⅰ胶原蛋白(Col Ⅰ)的含量;RT-PCR检测miR-21的表达水平.结果:12周(P＜0.05,P＜0.05)和16周(P＜0.01,P＜0.01)大强度运动后大鼠右室心肌胶原容积分数显著高于安静对照组与中强度运动组;与安静对照组和中强度运动组比,12周(P＜0.01,P＜0.01)和16周(P＜0.01,P＜0.01)大强度运动使右室Ⅰ胶原蛋白的含量显著增多.与安静对照组相比,8周、12周和16周大强度运动都可使大鼠miR-21表达水平显著升高(P＜0.01、P＜0.05和P＜0.05),且在16周时miR-21的表达水平与Ⅰ胶原蛋白的含量正相关(r=0.443,P=0.03).结论:长期大强度运动后右室心肌纤维化与miR-21表达水平增高有关,miR-21是潜在的运动性心肌纤维化的新生物标志物和干预靶点.
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辐射对恶性脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制
目的 观察辐射对人脑恶性胶质瘤细胞株SHG-44辐射敏感性的影响,并探讨辐射抗性产生的机制.方法 使用胶质瘤细胞株SHG-44及经单次照射10 Gy后连续培养15代的辐射后细胞株SHG-4410 Gy,采用集落形成实验评估辐射对两种细胞株辐射敏感性的影响,流式细胞仪检测两种细胞株的辐射前后细胞周期时相分布及凋亡率,并用RT-PCR法检测cyclin B1 mRNA和miR-21的表达水平,Western blot法检测信号转导子和转录激活子3(Stat3)蛋白表达水平.结果 比较D0、SF2,SHG-44细胞(D0 =2.35、SF2=0.62),低于SHG-4410 Gy细胞(D0=3.22,SF2=0.74).与SHG-44细胞相比,SHG-4410 Gy细胞G2/M期比例减少,S期比例增多(F =22.21,P＜0.05).照射前后SHG-4410 Gy cyclinB1 mRNA相对量大于SHG-44细胞株(t=3.1、4.1,P＜0.05).照射前后的早期凋亡率分别为SHG-44 (17.60±0.26)％和(28.00±0.36)％,SHG-4410 Gy(4.20±0.30)％和(5.17±0.65)％,SHG-4410 Gy细胞与SHG-44细胞相比,早期凋亡率明显下降(t=58.0,P＜0.01).qRT-PCR及Western blot法检测SHG-4410 Gy细胞的miR-21表达及Stat3蛋白表达均较SHG-44升高.结论 照射后SHG-44细胞辐射抗性增加,可能与辐射上调细胞周期信号传导通路中的靶基因cyclinB1导致的G2/M期细胞比例减少有关；同时,辐射导致细胞miR-21表达增高,降低细胞的凋亡.
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电离辐射对肺癌A549细胞miR-21体内外表达的影响及意义
目的 研究miR-21在肺癌组织及血清中的表达与肺癌预后及放疗因素的关系,进而探讨电离辐射对人肺癌A549细胞体内外表达miR-21的影响.方法 收集肺癌患者病理组织及血清样本,检测不同病理类型肺癌组织及血清中的miR-21的表达水平,同时检测是否接受放疗的非小细胞肺癌患者血清中miR-21的表达水平,并进行生存分析;以2、4GyX射线照射体外培养的A549细胞,并以A549细胞制备裸鼠肺转移癌模型,分别检测A549细胞与裸鼠血清及肺中miR-21的表达水平.结果 肺癌组织中miR-21高表达占60.0％;肺癌血清中miR-21高表达占50.5％,腺癌与鳞癌检出率差异有统计学意义(x2=5.766,P＜0.05);87例非小细胞肺癌中放疗患者miR-21检出率66.7％显著高于非放疗患者39.6％(x2=6.321,P＜0.05);Kaplan-Meier法生存分析显示,miR-21高表达患者预后明显低于低表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05);Cox回归模型分析显示,miR-21高表达、区域淋巴结转移及放疗均为影响患者预后的独立危险因素.2、4GyX射线照射A549细胞后不同时间点miR-21表达显著升高(t=-7.552 ～-1.206,P＜0.05),miR-21在裸鼠血清及肺组织中的表达水平显著升高(t=-47.845～-2.356,P＜0.05).结论 电离辐射可上调A549细胞体内外miR-21的表达水平,可能与增强A549细胞侵袭转移能力相关.
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miR-21在小儿神经胶质瘤中的检测意义
目的：探讨 mir-2在小儿神经胶质瘤中发挥作用。方法收集我院30例小儿神经胶质瘤术中新鲜瘤组织及瘤旁组织标本，利用 rt-Pcr 法分别检测其 mir-21水平变化，并统计分析。结果 mir-21水平在瘤组织中表达高于瘤旁组织，差异具有统计学意义（p<0.05）；mir-21表达水平与病理分级具有相关性（p<0.05）。结论 mir-21在小儿神经胶质瘤中上调，与病理分级密切相关，有望作为预后指标及生物治疗靶点。
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miR-21及其靶蛋白RASA1在寻常型银屑病患者皮肤组织中的表达及意义
目的 探讨miR-21在寻常型银屑病患者皮损组织、皮损旁组织以及正常健康人群皮肤组织中的表达水平,同时研究其下游靶蛋白RASA1在寻常型银屑病患者皮损组织和正常人群皮肤组织中的表达水平及意义.方法 采用实时荧光定量PCR法检测miR-21在12例寻常型银屑病患者皮损组织、皮损旁组织以及15例正常人群皮肤组织中的表达水平,差别倍数用2-△△Ct值表示.利用免疫组织化学Envision法检测45例寻常型银屑病患者与20例正常人群皮肤组织中RASA1蛋白的表达情况,RASA1阳性显色主要为细胞质显示棕黄色或棕褐色颗粒.结果 经过实时荧光定量PCR检测后分析显示:寻常型银屑病患者皮损组织中miR-21的表达水平显著高于正常皮肤组织,差异具有统计学意义(P＜0.01).免疫组化结果表明:RASA1蛋白在正常皮肤组织中的阳性表达率为60.00％,显著高于寻常型银屑病患者皮损中的阳性表达率(10.00％),差异具有统计学意义(x2=14.009,P＜0.001).结论 miR-21在寻常型银屑病皮损组织中的表达高于正常组织,其靶蛋白RASA1在寻常型银屑病患者皮肤组织中的阳性表达显著低于正常皮肤组织;可能是由于miR-21的差异表达调控RASA1基因,导致RASA1蛋白表达受到抑制,从而参与指向寻常型银屑病的发病过程.
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miR-21降解PTEN影响香烟提取物诱导的PASMCs的增殖与迁移
目的 探讨微小RNA-21(miR-21)的表达对香烟提取物诱导的肺动脉平滑肌细胞中的PTEN/PI3K/AKT通路及增殖与迁移的影响.方法 分离雄性SD大鼠的肺细小动脉平滑肌细胞(PASMC),10％ CSE处理PASMCs 24h后分别在PASMCs中转染miR-NC、miR-21、anti-miR-NC、anti-miR-21,通过real-time-PCR检测转染效率.Western blot法检测4组PASMCs增殖及凋亡蛋白PCNA、Bcl-2、caspase-3以及PTEN和相关信号通路中AKT/P-AKT的表达量.通过MTT实验比较4组细胞增殖的变化.用细胞划痕和Transwell实验检测4组细胞迁移能力的变化.结果 转染miR-21组的miR-21表达量与转染miR-NC组的比较表达量上升(P =0.000),而anti-miR-21组的比anti-miR-NC的miR-21表达量下降(P=0.000).在10％ CSE处理后,过表达miR-21后抑制了PTEN的表达从而上调了AKT/P-AKT,进而使PCNA和Bcl-2的表达上升,caspase-3的表达被抑制,相反敲降miR-21后PTEN表达上升,AKT/P-AKT活性下降,PCNA以及Bcl-2的表达被抑制,caspase-3表达上升.在10％ CSE作用下过表达miR-21后PASMCs的增殖能力显著增强(P＜0.01),而敲降miR-21后PASMCs的增殖能力减弱(P＜0.01).在10％ CSE作用下过表达miR-21后PASMCs的迁移能力增强,而敲降miR-21后PASMCs的迁移能力减弱.结论 miR-21通过负向调控PTEN从而活化PI3 K/AKT信号通路促进了香烟提取物诱导的PASMCs的增殖迁移.
关键词： miR-21 香烟提取物 肺动脉平滑肌细胞 PTEN/PI3K/AKT
