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NF-κB及其调控的miRNA在宫颈癌移植瘤及癌旁组织中的活化和表达
目的 分析宫颈癌移植瘤小鼠的癌与癌旁组织中miR-15b和miR-16的表达状况以及NF-κB信号通路在宫颈癌癌旁组织活化情况,为宫颈癌的诊断和治疗提供新思路.方法 建立小鼠宫颈癌移植瘤模型,取癌组织与癌旁组织,以及正常的脂肪组织,用实时荧光定量PCR方法检测miR-15b和miR-16的表达,用免疫组化检测NF-κB(P65)蛋白的表达及定位.结果 移植瘤造模成功.miR-15b在宫颈癌组织中表达为32.21±3.67,明显高于癌旁组织的25.16±1.86和正常组织的1.00 ±0.12(P ＜0.05),癌旁组织也显著高于正常组织(P＜0.05);miR-16在宫颈癌组织中表达为28.63±2.34,明显高于癌旁组织的22.16±1.76和正常组织的1.00±0.12(P ＜0.05),癌旁组织也显著高于正常组织(P＜0.05).在正常脂肪组织中,NF-κB(P65)蛋白主要定位于胞质,而在癌组织与癌旁组织中,NF-κB (P65)蛋白主要位于胞核.结论 NF-κB通路及其相关的miR-15b和miR-16可能参与了宫颈癌发生的早期分子事件.
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MiR-15b对人脑胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响
目的 观察miR-15b对人胶质瘤细胞株A172细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其对RAS/MEK/ERK1/2信号通路的作用.方法 合成miR-15b寡聚核甘酸拟似物(miR-15b mimics)转染A172细胞株,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞术评价miR-15b对A172细胞增殖和凋亡的作用,以Western blot法检测miR-15b对RAS及其下游信号通路的影响.结果 转染miR-15b mimics后,应用实时定量PCR检测空白对照组、阴性对照组、miR-15b mimics组的△Ct值分别为15.25±1.12、15.92±0.98和10.58±0.87,提示miR-15b在A172细胞中表达水平明显升高.Western blot结果显示,miR-15b mimics可显著抑制RAS、MEK、ERK1/2及pERK1/2蛋白的表达水平(均P＜0.05).MTT法检测结果显示,miR-15b mimics转染A172细胞24 h、48 h、72 h后,细胞相对存活率分别为(72.28±6.52)％、(61.86±5.79)％和(59.38±5.97)％;miR-15b mimics组的细胞存活率较空白对照组和阴性对照组明显下降(P＜0.05).细胞周期分析发现,miR-15b mimics组细胞G1/G0期为66.84％,miR-15b mimics诱导A172细胞阻滞在G0/G1期.磷脂结合蛋白/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染法检测显示,空白对照组、阴性对照组、miR-15b mimics组的细胞凋亡率分别为(2.7±0.83)％、(2.5±0.81)％和(18.2±1.58)％;miR-15b mimics组A172细胞凋亡率较空白对照组和阴性对照组明显升高(P＜0.05).结论 miR-15b可显著抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡.miR-15b针对RAS/MEK/ERK1/2信号通路的靶向治疗有望成为胶质瘤治疗的新途径.
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miR-15b在恶性黑色素瘤A375细胞中的表达及其对细胞转移和侵袭的影响
目的 研究微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)在恶性黑色素瘤A375细胞中的表达,以及miR-15b对恶性黑色素瘤细胞转移和侵袭能力的影响.方法 应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reac-tion,qRT-PCR)方法检测恶性黑色素瘤A375细胞与正常黑素细胞HM中miR-15b的表达水平.沉默恶性黑色素瘤A375细胞中miR-15b的表达后,应用划痕实验检测miR-15b对恶性黑色素瘤A375细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-15b对恶性黑色素瘤A375细胞转移和侵袭能力的影响.结果 miR-15b恶性黑色素瘤A375细胞中的表达水平显著高于正常黑素细胞.沉默恶性黑色素瘤细胞中miR-15b的表达后,细胞迁移距离、细胞转移和侵袭能力均受到显著抑制.结论 miR-15b在恶性黑色素瘤A375细胞中表达显著升高并可促进恶性黑色素瘤A375细胞转移和侵袭.
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miR-15b通过靶向ABCG2信号通路抑制胶质瘤干细胞迁移及侵染
背景:miR-15b在肿瘤起始和发展过程中发挥重要作用,于是作者推测miR-15b可能参与调解胶质瘤干细胞细胞的迁移和侵染,而这目前尚无相关报道,并且其机制也不清楚.目的:探讨miR-15b对胶质瘤干细胞迁移和侵染的影响及相关分子机制.方法:实时荧光定量PCR检测胶质瘤组织、正常成人脑组织,胶质瘤干细胞及非胶质瘤干细胞中miR-15b的表达情况.①分别以ABCG2特异性siRNA、对照siRNA转染胶质瘤干细胞;②分别以miR-15抑制物、miR-15模拟物及miR-对照分别转染胶质瘤干细胞.转染后48 h,Transwel检测细胞迁移和侵染能力,ELISA法和明胶酶谱实验检测细胞培养上清中基质金属蛋白酶2/9蛋白量及活性变化.将胶质瘤干细胞及非胶质瘤干细胞分别注入裸鼠皮下,30 d内观察成瘤情况.结果与结论:①与正常脑组织相比,胶质瘤中miR-15b的表达明显较低且与胶质瘤所处阶段呈负相关性.与非胶质瘤干细胞相比,胶质瘤干细胞中miR-15b的表达显著下调;②与miR-对照组比较,miR-15b模拟物组细胞迁移及侵染能力显著下降(P<0.01),miR-15b抑制物组细胞迁移及侵染能力显著增加(P<0.01);TargetScan生物学软件预测表明ABCG2为miR-15b潜在的靶基因;③与对照siRNA组比较,ABCG2 siRNA组细胞迁移及侵染能力显著下降(P<0.01);④ELISA检测表明,上调miR-15b基因表达显著抑制基质金属蛋白酶2/9蛋白的表达;⑤ELISA法和明胶酶谱实验检测结果表明,ABCG2 siRNA转染可显著抑制基质金属蛋白酶2/9蛋白的活性,但不影响其表达量;⑥裸鼠体内实验表明,胶质瘤干细胞具有更强的成瘤能力;⑦结果表明,miR-15b通过靶作用于ABCG2调控胶质瘤干细胞的迁移和侵染,上调miR-15b表达可抑制胶质瘤干细胞的迁移和侵染.
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miR-15b对口腔鳞癌细胞Cal27增殖与凋亡能力影响研究
目的 研究口腔鳞癌(OSCC)中miR-15b的表达及其对OSCC Cal27细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 实时定量PCR检测2013年1月至2015年1月期间中国医科大学附属口腔医院外科50例住院患者OSCC组织中miR-15b基因的表达水平.培养OSCC Cal27细胞,将miR-15b的前体转染Cal27细胞,MTT法及双标流式法检测转染前后Cal27细胞的增殖和凋亡能力.结果 与癌旁组织相比,miR-15b在OSCC组织中的表达显著下调,且与OSCC的分级相关.miR-15b的前体能够使Cal27细胞的增殖能力明显下降,且能够诱导Cal27细胞发生凋亡.结论 miR-15b的异常表达与OSCC相关,miR-15b能够抑制OSCC细胞增殖并诱导其凋亡,在OSCC中发挥肿瘤抑制基因的作用.
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微小RNA-15b及其靶蛋白BMI1的表达与舌鳞癌患者化疗耐药、预后的关系
目的:探讨miR-15b及其靶蛋白BMI1的表达与舌鳞癌患者化疗耐药和预后的关系.方法:选取86例晚期舌鳞癌患者的石蜡组织切片,分为顺铂敏感组(34例)和顺铂耐药组(52例).采用原位杂交法检测miR-15b的表达,并采用免疫组织化学染色法检测miR-15b的靶蛋白BMI1的表达,结合患者的临床病理特征,包括临床分期、淋巴结转移、化疗敏感性和生存状况等,应用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与顺铂敏感组相比,顺铂耐药组的舌鳞癌组织中,miR-15b显著低表达(P＜0.001),而BMI1则显著高表达(P＜0.001);舌鳞癌miR-15b低表达组患者与高表达组患者相比,预后较差(P=0.001),BMI1则反之,BMI1高表达组患者预后较差(P=0.029).结论:miR-15b在舌鳞癌中扮演了抑癌基因角色,其异常低水平表达和癌基因BMI1高表达与舌鳞癌化疗耐药和预后不良相关,可能参与了舌鳞癌的化疗耐药机制.
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miR-21和miR-15b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征和化疗疗效的关系
目的 探讨miR-21和miR-15b在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与临床病理特征和化疗疗效的关系.方法 纳入2014年2月至2016年8月在我院接受治疗的83例NSCLC患者为研究对象,同时选取30例健康志愿者作为对照组.所有患者均采用顺铂联合吉西他滨的化疗方案治疗.采集化疗前后受试者血浆,实时荧光定量PCR检测miR-21和miR-15b表达,并分析其与患者临床病理特征的关系.根据化疗疗效将患者分为疾病控制组和疾病进展组,分析miR-21和miR-15b与化疗疗效的关系.结果 NSCLC患者血浆miR-21表达高于对照组(P＜0.05),miR-15b表达低于对照组(P＜0.05).miR-21在TNM分期高、有淋巴结转移及有吸烟史的患者中表达更高(P＜0.05);miR-15b在TNM分期高、腺癌及有淋巴结转移的患者中表达更低(P＜0.05).疾病控制组患者miR-21降幅和miR-15b增幅均大于疾病进展组患者(P＜0.05).相关性分析显示,miR-21降幅和miR-15b增幅与化疗疗效呈正相关性(r=0.705,r=0.673,P＜0.05).结论 NSCLC患者血浆miR-21高表达,miR-15b低表达,且其与患者肿瘤TNM分期、淋巴结转移和化疗疗效相关.
关键词： miR-21 miR-15b 非小细胞肺癌(NSCLC) 临床病理特征 化疗疗效 -
口腔鳞状细胞癌组织中miR-15b的表达及意义
目的 探讨microRNA-15b(miR-15b)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织及其对应癌旁组织中的表达及其临床诊断意义.方法 收集46例经病理证实为OSCC组织及对应的癌旁组织,分别提取组织内的mRNA,采用qRT-PCR技术检测组织中miR-15b的表达；分析OSCC癌灶组织内miR-15b表达及与临床病理参数的相关性.结果 OSCC癌灶组织内miR-15b表达与对应癌旁组织相比明显下降(P=0.004 1)；OSCC癌灶组织内miR-15b表达与患者WHO病理分级有关(P =0.042),而与患者性别、年龄、TNM分期、吸烟、淋巴结转移及癌灶组织内炎症细胞浸润均无相关性(P＞0.05).结论miR-15b在OSCC癌灶组织内低表达,且与肿瘤分化相关；miR-15b有望成为OSCC早期诊断的潜在指标.
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miR-34a和miR-15b在NSCLC患者血清表达及与病理特征的关系
目的 探讨微小RNA-34a(miR-34a)和微小RNA-15b(miR-15b)在非小细胞肺癌(non-small-cell lung car-cinoma,NSCLC)患者血清中的表达及与病理特征的关系.方法 选取93例NSCLC患者为观察组,30例体检健康的志愿者为对照组.采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)检测血清miR-34a和miR-15b表达,分析其与病理特征的关系.结果 与对照组比较,观察组血清miR-34a表达增加,而miR-15b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).TNM分期Ⅳ期、有淋巴结转移、有吸烟史的患者miR-34a表达[(1.73±0.92)、(1.69±0.86)、(1.64±0.84)]比TNM分期Ⅲb期、无淋巴结转移、无吸烟史患者[(1.09±0.61)、(1.12±0.68)、(1.20±0.63)]高,TNM分期Ⅳ期、有淋巴结转移的患者miR-15b表达[(0.14±0.04)、(0.12±0.05)]比TNM分期Ⅲb期、无淋巴结转移患者[(0.33±0.15)、(0.37±0.18)]低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 NSCLC患者血清miR-34a表达增加,而miR-15b表达降低,且与病理特征有关.
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miR-15b对MPP+损伤SH-SY5Y细胞中α突触核蛋白表达的影响
目的 研究miR-15b对MPP+(1-甲基-4-苯基-吡啶离子)损伤SH-SY5Y细胞中α突触核蛋白表达的影响以及在帕金森病(Parkinson disease,PD)发病机制中的作用.方法通过CCK-8检测出MPP+诱导SH-SY5Y细胞为PD细胞模型的适浓度和时间,然后将过表达和沉默miR-15b的质粒转染到PD细胞模型内,再通过Real Time-PCR和Western Blot检测miR-15b和α突触核蛋白的表达量.结果SH-SY5Y细胞经MPP+诱导后细胞形态发生改变、细胞增殖能力降低,过表达miR-15b后α-synuclein和α突触核蛋白的表达量均降低(P＜0.05),沉默miR-15b后α-synuclein和α突触核蛋白的表达量均升高(P＜0.05).结论 miR-15b可以抑制PD细胞模型内αt-synuclein和α突触核蛋白的表达.miR-15b可能参与了帕金森病患者中脑黑质多巴胺能神经元内α突触核蛋白的富集调节机制.
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地塞米松诱导急性T淋巴细胞白血病细胞耐药及对miR-15b表达的影响
目的 建立地塞米松(DEX)诱导急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞糖皮质激素获得性抵抗的实验模型,探讨DEX诱导对miR-15b表达的影响.方法 用不同浓度DEX、时长作用糖皮质激素敏感T-ALL细胞系CEM/C7-获得耐药细胞系CEM/C7R;采用Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒检测细胞凋亡率;同时处理提取CEM/C7、CEM/C7R及耐药细胞系CEM/C1细胞总RNA,利用荧光定量RT-PCR检测三个细胞系miR-15b表达情况.结果 CEM/C7细胞系经10nmol/L DEX诱导4周可以获得DEX耐药细胞系CEM/C7R;停用DEX诱导后,检测CEM/C7R细胞株凋亡率仅为(5.87±1.21)％,较CEM/C7细胞凋亡率(87.16±2.28)％明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);DEX处理后,CEM/C7R细胞中miR-15b表达明显较CEM/C7细胞以及固有耐药细胞系CEM/C1减低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CEM/C7经长期低剂量DEX处理可获得GC耐药性;miR-15b在DEX耐药细胞系中表达水平减低,提示miR-15b对急性淋巴细胞白血病DEX反应性可能具有调控作用.
关键词： 糖皮质激素 急性T淋巴细胞白血病 miR-15b
