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补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA4区Hes-1和Hes-5表达的影响
目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠海马CA4区Hes-1和Hes-5表达的影响.方法:63只SD大鼠随机分为补阳还五汤(BYHWT)组、脑缺血再灌注损伤模型(I/R)组和假手术(Sham)组3组.大脑中动脉阻塞线栓(MCAO)法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型.脑缺血2h后再灌注10、19和28d,显微镜观察阳性细胞形态特点,免疫组化法检测CA4区Hes-1和Hes-5阳性细胞数目.结果:10d和19d BYHWT亚组Hes-1及Hes-5阳性细胞数目分别高于I/R和Sham组(P＜0.01);28d BYHWT亚组显著低于I/R与Sham组(P＜0.01).I/R和BYHWT的19d亚组分别高于其对应的10d亚组(P＜0.01).结论:补阳还五汤在脑缺血再灌注损伤早中期通过上调海马CA4区Hes-1和Hes-5表达,晚期通过下调其表达,从而对局灶性脑缺血再灌注损伤产生神经修复作用.
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GATA-2过表达对小鼠胎肝造血干细胞功能的影响
本研究探讨GATA-2过表达对小鼠胎肝造血干细胞功能的影响.应用带GFP绿荧光的逆转录病毒载体介导的病毒感染实验将GATA-2基因引入小鼠胎肝细胞,通过流式免疫荧光术、细胞周期检测及集落形成实验等技术手段研究这些GATA-2过表达胎肝造血干细胞的生物学功能变化.研究结果表明:过表达GATA-2的胎肝细胞中Lin-Scal+ C-Kit+(LSK)细胞比例显著增加,LSK细胞周期未受太大影响,但其定向克隆形成能力受抑.结论:过表达GATA-2引起小鼠胎肝造血干细胞LSK比例增加,并抑制其定向分化能力,其机制可能与HES-1表达上调导致细胞在干/祖细胞阶段受阻滞有关.
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Hes-1和干扰素在丙型肝炎病毒感染中的检测意义
目的 探讨 Notch信号通路中的靶基因 Hes-1 和 IFN-α、IFN-β、IFN-γ 三种干扰素与丙型肝炎病毒( HCV)感染的关系. 方法 选取2012年11月—2014年10月在我院就诊的125例HCV感染患者,根据是否转归为肝硬化分为HCV感染组和HCV肝硬化组,同期选取100例健康人为对照组. 采集HCV肝硬化组、HCV感染组和对照组晨起空腹静脉血3 ml,分离出单个核细胞,提取RNA,将其反转录为cDNA,应用实时定量RT-PCR技术检测Hes-1和IFN-α、IFN-β、IFN-γ. 结果 3组Hes-1和IFN-α、IFN-β、IFN-γ水平之间比较,差异具有统计学意义( P<0. 05 ).结论 Notch信号通路中的靶基因Hes-1和IFN-α、IFN-β、IFN-γ在HCV慢性感染时明显升高,且在HCV感染导致的肝硬化中,Hes-1和IFN-α、IFN-β、IFN-γ的水平更高.
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Notch信号传导系统在补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经修复中的调节作用
目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠不同时期海马CA4区Hes1和Hes5表达的影响,阐明Notch信号传导系统在补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经修复作用中的调节作用.方法:清洁级SD大鼠63只随机分为补阳还五汤组(Group BYHWT)、脑缺血再灌注损伤模型组(Group CIRI)、假手术组(Group Sham).采用大脑中动脉阻塞线拴法(MCAO法)建立BYHWT组和CIRI组的局灶性脑缺血再灌注大鼠模型.脑缺血2h,分别再灌注10 d、19d和28 d,采用免疫组化SP法检测海马CA4区Hes1和Hes5表达的阳性细胞数目,并进行单因素方差分析(one way ANOVA),两组间均数差异性比较采用t检验.结果:术后10 d和19 d,CIRI组大鼠海马CA4区的Hes1和Hes5阳性细胞密度较Sham组大(P＜0.01).BYHWT组大鼠海马CA4区Hes1和Hes5阳性细胞密度较CIRI组及Sham组都大(P＜0.01);而在术后28 d,则显著低于CIRI组与Sham组(P＜0.01).CIRI组和BYHWT组术后19 d大鼠海马CA4区阳性细胞密度分别较术后10天增加(P＜0.01);而术后28天阳性细胞密度较术后19天降低(P＜0.01).结论:补阳还五汤在脑缺血再灌注损伤早中期通过上调大鼠海马CA4区Hes1和Hes5的表达,而在晚期通过下调其表达,而对局灶性脑缺血再灌注损伤产生神经修复作用,该作用的发挥可能是通过控制Hes1和Hes5的表达水平来调控Notch信号传导系统,进而调节NSCs的增殖与分化.
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Notch信号通路和miR-21在周围神经损伤修复中的交互作用机制
背景:神经损伤修复是外科临床和基础研究的主要热点之一.小间隙套管治疗周围神经损伤的作用在前期研究中已经得到证实,但详细机制未能明确.同时Notch信号通路和微小RNA系统逐渐成为该领域的潜在热点,但二者的相关作用尚未得到明确报道证实.目的:观察携带骨髓间充质干细胞的小间隙套管对周围神经损伤的治疗作用,探究Notch信号通路和miR-21在治疗过程中的相互作用关系.方法:体内实验中制造SD大鼠喉返神经8 mm缺损模型,分为假手术组、小间隙组和小间隙+骨髓间充质干细胞组,治疗后测定电生理结果,Western blot测定Notch信号通路和微小RNA表达情况.体外实验中在小间隙套管内培养骨髓间充质干细胞并行神经元方向诱导,通过改变Notch/miR21表达情况,检测神经标记物的表达情况,分析骨髓间充质干细胞活性变化.结果与结论:神经染色和肌电图结果均确认了骨髓间充质干细胞的治疗效果.在骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中,Notch信号表达明显增强,miR-21表达明显上扬.通过进一步调控两因素表达发现,人为激活Notch信号或使miR-21过表达后骨髓间充质干细胞向神经分化的能力明显增强,抑制Notch信号后,骨髓间充质干细胞神经分化能力减弱,同时miR-21的促进作用失效.发现Notch信号通路和miR-21为骨髓间充质干细胞联合小间隙套接治疗周围神经损伤可能的重要促进机制,其中Notch信号通路具有更高级别的促进或抑制作用等级.
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橙皮素对舌癌细胞的生长抑制作用及其机制
目的:检测橙皮素对舌癌细胞生长及Notch1活化的影响,探讨橙皮素抑癌作用机制.方法:将培养的Tca8113细胞分为DMSO对照组和25、50、75、100和125 μmol·L-1橙皮素处理组.MTT法检测不同浓度橙皮素作用后Tca8113细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期分布,定量PCR和免疫印迹分别用于分析橙皮素作用前后Tca8113细胞中Notch1和Hes-1 mRNA及蛋白表达.结果:与DMSO对照组比较,125 μmol·L-1橙皮素处理组24、48和72 h Tca8113细胞增殖抑制率明显升高(7.88％±1.90％、26.28％±2.2％和47.05％±1.90％)(P＜0.05);在橙皮素处理72 h后,25、50、75、100和125 μmol·L-1橙皮素处理组细胞增殖抑制率分别为(6.14±1.20)％、(28.69±2.10)％、(28.33±2.60)％、(45.26±3.00)％和(47.05±1.90)％,橙皮素对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间剂量依赖性.流式细胞术,橙皮素作用72 h后,0、50和100 μmol· L-1橙皮素处理组细胞凋亡百分率从2.9％±0.5％升高至23.4％±1.7％和35.1％±1.9％(P＜0.05);G0/G1期细胞由(18.6±1.3)％升高至(33.4±1.5)％和(40.5±1.9)％(P＜0.05),S期细胞百分率由(70.3±2.5)％下降至(56.8±2.0)％和(48.7±1.8)％(P＜0.05).定量PCR和免疫印迹分析,与DMSO对照组比较,橙皮素作用后Tca8113细胞中Notch1和Hes-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论:橙皮素能够抑制Tca8113细胞增殖并诱导其发生细胞凋亡和细胞周期G0/G1期阻滞,其机制可能与活化Notch1有关联.
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Notch信号通路与胶质瘤细胞上皮间充质转化的相关性
目的 探讨Notch信号通路与胶质瘤细胞上皮间充质转化的关系.方法 采用免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织分离脑胶质干细胞,进行体外培养,使用免疫荧光技术鉴定细胞;构建Notch-1基因的RNA干扰反转录病毒载体(pSiRNA-Notch-1),试验分为3组,空白对照组(不转染质粒)、阴性对照组(转染空白质粒)和干扰组(转染pSiRNA-Notch-1),观察3组细胞增殖、分化,采用RT-PCR和Western blot检测Notch-1和Hes-1 mRNA和蛋白表达.结果 干扰组培养第7天细胞增殖及细胞分化吸光度值(A)分别为(1.332±0.614)和(1.203±0.783),明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);细胞增殖培养3 d后,干扰组Notch-1和Hes-1 mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.189±0.021)和(0.301±0.121),(0.422±0.022)和(0.091±0.032),明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);细胞分化培养3 d后,干扰组Notch-1和Hes-1 mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.253±0.071)和(0.192±0.043),(0.178±0.022)和(0.101±0.012),明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).结论 Notch信号通路在胶质瘤细胞增殖分化过程中有重要作用,其中Notch-1和Hes-1可能参与了增殖、分化的调控,需进一步研究.
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PICK1对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
目的：检测蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICKl)在肝癌、癌旁组织中的表达,初步探讨 PICK1对人肝癌细胞HepG2增殖的作用及其可能机制。方法应用 qRT-PCR、Western blot、HE和免疫组织化学染色法分析比较人肝癌和癌旁组织中PICK1蛋白的表达；培养HepG2细胞,体外给予不同浓度的FSC-231(PICKl的PDZ结构域小分子抑制剂),通过MTT法检测HepG2细胞的活力；采用流式细胞术检测HepG2细胞周期变化；进一步采用Western blot法检测G1/S-特异性周期蛋白-D1( CyclinD1)、原癌基因C-myc和Notch信号通路蛋白表达。结果肝脏病理组织学检测提示肝癌组织病变明显。免疫组化结果显示,肝癌组织中相比癌旁组织中的PICKl抗原阳性细胞显著增多( P<0．05),且多分布在肝实质细胞质区域；qRT-PCR和Western blot结果显示肝癌组织中PICK1 mRNA及蛋白水平与癌旁组相比显著升高(P<0．05)；体外实验证明,与阴性对照组相比,FSC-231能够抑制HepG2细胞的增殖,并且明显抑制 CyclinD1、C-myc和Notch1同源蛋白1(Notch1)、Hes-1蛋白表达(P<0．05)。结论提示PICK1可能参与肝癌的发生发展,PICK1的PDZ结构域抑制剂可以抑制肝癌细胞的增殖,此作用可能与Notch信号通路相关。
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两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织Hes-1、Hes-5表达的动态影响
目的:探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧额顶叶皮质Hes-1、Hes-5蛋白表达的动态影响.方法: 采用线栓法复制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型.随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组.脑缺血2 h,分别再灌注1,2,3周,采用免疫组织化学SABC法检测Hes-1、Hes-5蛋白表达的阳性面积和平均吸收光密度值.结果:在缺血区额顶叶皮质,再灌注1,2周时,模型组Hes-1、Hes-5表达阳性面积单位、平均吸收光密度值较假手术组明显增加(P<0.05,或P<0.01).再灌注1周时,益气活血方和补肾生髓方组Hes-1、Hes-5蛋白表达阳性面积及平均光密度值显著高于模型组(P<0.05,或P<0.01),益气活血方组Hes-1和Hes-5蛋白表达平均光密度值显著高于补肾生髓方组(P<0.01).再灌注2周时,除补肾生髓方组Hes-5外,益气活血方组和补肾生髓方组Hes-1和Hes-5蛋白表达阳性面积及平均光密度值显著高于模型组(P<0.05,或P<0.01),益气活血方组Hes-5表达阳性面积显著高于补肾生髓方组(P<0.01).再灌注3周时,补肾生髓方组Hes-1表达阳性面积,补肾生髓方组和益气活血方组Hes-5表达阳性面积及益气活血方组Hes-5表达平均光密度值显著高于模型组(P<0.05).结论:两种中药复方均能通过增强缺血侧脑组织额顶叶皮质Hes-1和Hes-5的表达,促进局灶性脑缺血后内源性神经干细胞的增殖分化.
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Hes-1与哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的关系研究
目的：观察Sprague-Dawley（SD）大鼠哮喘模型中Notch信号通路靶基因Hes-1的表达变化及与气道炎症和气道重塑的关系，初步探讨其在支气管哮喘发病中的作用。方法将48只SD大鼠随机分成对照组和哮喘组，采用卵白蛋白致敏及激发建立哮喘模型，对照组以生理盐水替代致敏液，两组依据激发后不同处理时间点各分为4周、8周、12周3个亚组，每组8只大鼠。光镜观察肺组织病理变化并检测支气管平滑肌厚度（Wam）；ELISA法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4和INF-γ水平；分别采用免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测Hes-1蛋白及mRNA的表达水平。结果随着激发后时间的延长，哮喘组大鼠Wam逐渐增加，血清和BALF中INF-γ水平逐渐降低、IL-4水平逐渐增加，且与同时间点对照组相比差异均有统计学意义（均P<0.05）。哮喘大鼠Hes-1蛋白及mRNA的水平随着激发时间延长而逐步增高，且均高于同时间点对照组（均P<0.05）。哮喘组Hes-1蛋白及其mRNA的表达与Wam呈正相关，与血清及BALF中IL-4的浓度亦呈正相关，而与血清及BALF中INF-γ的浓度呈负相关（均P<0.05）。结论 Hes-1蛋白及其mRNA的表达增加与哮喘大鼠气道炎症因子水平和气道平滑肌重塑密切相关，并可能参与了哮喘的发生。
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LPA2和Hes-1在中分化胃腺癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨LPA2和Hes-1蛋白在中分化胃腺癌发生发展中的作用及与临床病理学的联系,为今后开展胃癌临床分子病理诊断及分子靶向治疗提供理论依据.方法:使用免疫组化SP法检测LPA2和Hes-1在所收集的中分化胃腺癌组织及对应的癌旁组织中的表达.结果:LPA2和Hes-1在中分化胃癌组织中的高阳性表达率分别为73.1％、79.1％,显著高于癌旁组织,且具有统计学意义(P<0.01);LPA2及Hes-1的表达水平与中分化胃腺癌淋巴结转移、肿瘤浸润深度相关(P<0.05);通过计算Spearman相关系数可以得到LPA2和Hes-1在中分化胃腺癌组织中的表达存在正相关(r=0.673,P<0.05).结论:LPA2和Hes-1的高表达与中分化胃腺癌发生、发展、转移有关,联合应用LPA2和Hes-1可作为今后临床胃癌分子病理诊断及胃癌患者预后的潜在标志物,并在胃癌分子靶向治疗中提供新的靶点.
