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6′-羟基爵床素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其机制
目的：探讨6′-羟基爵床素 A(JR6)对人肝癌 HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法体外培养人肝癌 HepG2细胞,采用 MTT 法观察不同浓度的 JR6和5-氟尿嘧啶(5-FU)对 HepG2细胞存活的作用,荧光显微镜观察 Hoechst33258染色后细胞核形态改变,用流式细胞仪检测 AnnexinⅤ-FlTC/ Pl 双染后 HepG2细胞的凋亡率,JC-1荧光染色观察药物对细胞线粒体膜电位的影响,Western 蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白细胞色素 c、Bax 和 Bcl-2蛋白的表达。结果 JR66.1～196μmol??L-1和5-FU 3.4～192μmol??L-1分别作用 HepG2细胞48 h,对 HepG2细胞 存 活 具 有 抑 制 作 用, lC50分别为74.90和49.75μmol??L-1。 JR612.3,49和196μmol??L-1作用 HepG2细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,由正常对照组的(6.9±2.0)%增加至(13.8±2.0)%,(18.6±4.3)%和(32.4±3.2)%( P <0.05, P <0.01)。Hoechst33258染色结果显示,JR649和196μmol??L-1作用 HepG2细胞48 h,部分细胞出现细胞核固缩和染色质凝集等凋亡变化。线粒体膜电位检测结果发现,JR649和196μmol??L-1作用48 h 能使 HepG2细胞线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05, P<0.01)。线粒体凋亡相关蛋白的检测结果表明,JR612.3,49和196μmol??L-1作用 HepG2细胞48 h,胞浆细胞色素 c 表达增加,促凋亡蛋白 Bax 表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,且 Bax / Bcl-2比值增加(P<0.05, P<0.01)。 JR649μmol??L-1和5-FU 组上述蛋白表达无明显差异。结论 JR6可能通过促进细胞色素 c 释放、打破 Bcl-2/ Bax 平衡诱导 HepG2细胞凋亡。
关键词： 6′-羟基爵床素 A HepG2 细胞 细胞凋亡 线粒体 -
EGCG 和红茶多酚对 HepG2 细胞脂质代谢相关基因表达的影响
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和红茶多酚对人肝细胞癌HepG2细胞脂质代谢相关基因表达的影响.方法:HepG2细胞经EGCG(5 μmol/L),红茶多酚(5 μg/ml)或0.1%二甲亚枫(对照组)处理8 h后,抽提RNA,并杂交至人14k cDNA芯片进行基因表达谱分析.应用实时RT-PCR技术对芯片结果进行验证.结果:HepG2细胞经EGCG和红茶多酚处理后表达差异的脂质代谢相关基因数分别为13条和29条,其中表达差异一致的基因有6条.实时RT-PCR结果与芯片结果一致.结论:EGCG和红茶多酚影响脂质代谢的机制是复杂的,此次实验发现的新靶标为今后茶多酚降脂作用研究提供了新的依据.
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齐墩果酸诱导人肝癌 HepG2细胞凋亡及其作用机制研究
目的：探讨齐墩果酸对人肝癌 HepG2细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用，并考察其作用机制。方法采用 MTT法检测齐墩果酸对 HepG2细胞增殖的影响，吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双重染色法进行细胞形态学观察，流式细胞仪检测细胞凋亡、活性氧（ROS）水平和线粒体膜电位（MMP）的变化。结果随着齐墩果酸浓度的升高，抑制率显著增加，呈现明显的时间与剂量相关性；齐墩果酸在25.0、50.0、100.0μmol/L 作用12 h 时，细胞形态学发生改变，细胞的总凋亡率随着齐墩果酸浓度的增加而升高，细胞中 ROS 水平随着齐墩果酸浓度的增加而升高，细胞内的 MMP 水平随着齐墩果酸浓度的增加而降低。结论齐墩果酸通过调节 ROS 和 MMP 体外抑制人肝癌 HepG2细胞的增殖和诱导其凋亡。
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十子代平方对胰岛素抵抗 HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响
目的：探讨十子代平方（SZDPF）溶液对胰岛素抵抗 HepG2细胞模型的保护作用及机制。方法采用高浓度胰岛素体外诱导法，建立 HepG2细胞的胰岛素抵抗模型，采用 SZDPF 溶液干预细胞模型，并以吡格列酮为对照药，观察各组 HepG2细胞的葡萄糖消耗量及细胞增殖的影响。结果各组 SZDPF 溶液对细胞的增殖无影响（P ﹥0.05），但对其葡萄糖消耗量具有一定的促进作用（P ﹤0.01），与西药比较无明显差异（P ﹥0.05）。结论 SZDPF 溶液与吡格列酮具有同等的改善 HepG2细胞模型胰岛素抵抗的作用，可能是与其增加 IR-HepG2细胞模型的葡萄糖消耗量，促进葡萄糖的摄取有关。
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海南美登木对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨海南美登木提取物在体外对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法海南美登木提取物0、10、40μg/ml分别作用 HepG2细胞24 h后，以Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化；分别用海南美登木提取物0、10、20、40、60、80μg/ml在24、48、72 h 对人肝癌HepG2细胞进行处理，细胞生长的抑制率采用MTT法检测，对各时间点的IC50进行计算；流式细胞仪检测海南美登木提取物0、20、60μg/ml作用人肝癌HepG2细胞24 h后对细胞周期的影响，对细胞凋亡的作用采用Annexin-V-FITC/PI双染法检测。结果海南美登木提取物能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖，且呈时间和浓度依赖性，抑制率较阴性对照组有显著差异；HepG2细胞在海南美登木提取物干预后染色观察，呈典型的核质浓缩、核碎裂、凋亡小体形成的凋亡变化，且依赖于浓度变化；细胞数量在G2/M期增加，而 G0/G1期明显减少，与0μmol/L 组相比，呈浓度依赖性的凋亡峰有显著差异。双染法检测细胞凋亡率发现与0μmol/L组相比呈浓度依赖性明显增加。结论海南美登木提取物可能通过使肝癌细胞滞留在G0/M期及诱导细胞凋亡等机制，抑制肝癌细胞的增殖。
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萱草花总黄酮含药血清对肝癌 HepG2细胞增殖和凋亡的影响
目的：探讨萱草花总黄酮（HCBF）含药血清对人肝癌 HepG2细胞增殖和凋亡的影响，阐明其作用机制。方法：HepG2细胞分为空白对照组及低（900 mg·kg－1）、中（1800 mg·kg－1）和高（2700 mg·kg－1）剂量 HCBF 组。采用 MTT 法检测 HepG2细胞生长抑制率，倒置显微镜下观察 HepG2细胞形态表现， AnnexinⅤ-PI双染和流式细胞术检测细胞凋亡率，酶联免疫吸附法检测细胞中凋亡蛋白 Bax、bcl-2和 Caspase-3表达水平。结果：与空白对照组比较，中和高剂量 HCBF 组 HepG2细胞生长抑制率明显升高（P ＜0.05或 P ＜0.01）。倒置显微镜下观察，HCBF 组 HepG2细胞体积缩小，形状不规则，细胞核呈浓缩和破碎状态。与空白对照组比较，中和高剂量 HCBF 组 HepG2细胞凋亡率升高（P ＜0.05或 P ＜0.01），bcl-2蛋白表达水平明显降低（P ＜0.05或 P ＜0.01），Bax 蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05或 P ＜0.01）；高剂量 HCBF 组 Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）。结论：HCBF 含药血清可以诱导 HepG2细胞凋亡，其机制可能与线粒体途经有关联。
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鹰嘴豆中3种异黄酮及其溴乙基化衍生物与胰岛素体外协同降糖活性研究
目的：通过对鹰嘴豆中3种异黄酮类化合物染料木素、鹰嘴豆芽素 A、刺芒柄花素进行溴乙氧基化结构修饰，研究其对正常 HepG2细胞糖消耗及胰岛素抵抗 HepG2细胞糖消耗的影响及与胰岛素的协同作用。方法对3种异黄酮类化合物进行溴乙氧基化结构修饰，检测其对正常 HepG2细胞糖消耗的影响；建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型作为降糖活性筛选模型，研究衍生物降糖活性，并给予生理胰岛素浓度以研究其之间存在的协同作用。结果合成了4个溴乙氧基化衍生物，其中化合物 b 具有较好的降糖活性，与阳性药盐酸二甲双胍相比，差异无统计学意义（P ﹥0.05），母体化合物及衍生物与胰岛素均存在协同作用，可明显增加化合物的降糖活性。结论通过溴乙氧基化，获得了降糖活性较好的异黄酮类衍生物，并且可以与胰岛素产生协同作用，为基于中药的创新型降糖药物的研发提供了一定的参考和借鉴。
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齐墩果酸衍生物对胰岛素抵抗的改善作用及机制
目的：研究齐墩果酸衍生物Bio对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用，并探讨其作用机制。方法通过高浓度胰岛素诱导HepG2细胞，建立胰岛素抵抗模型。采用葡萄糖氧化酶法，检测不同浓度化合物对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗的影响。 RT-PCR测定化合物对 PPARγmRNA转录水平的影响。 Western blot检测化合物对PPARγ蛋白表达的影响。结果 HepG2细胞经1．72×10-5 mol · L-1的胰岛素诱导后，葡萄糖消耗量明显降低(P<0．05)，胰岛素抵抗模型建立成功。10-5、10-6、10-7 mol · L-1的 Bio均可增加HepG2胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗( P<0．05)，增加率分别为135%、62%、39%。 RT-PCR检测显示Bio可提高胰岛素抵抗细胞PPARγmRNA的表达。 Western blot结果显示Bio可上调胰岛素抵抗细胞中PPARγ蛋白的表达。结论 Bio对HepG2细胞的胰岛素抵抗具有改善作用，其作用机制与上调PPARγ的表达相关。
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脂肪酸参与糖尿病状态下肝细胞上 CYP1A2功能与表达的上调
目的：糖尿病上调肝脏 CYP1 A2的功能与表达，但机制尚未明确。本研究拟从脂肪酸角度，通过体外研究初步探索糖尿病上调肝脏 CYP1 A2功能与表达的作用机制。方法通过测定 CYP1 A2底物非那西丁代谢水平考察肝细胞HepG2和 Fa2N-4细胞上 CYP1 A2的酶活性，通过荧光实时定量 PCR 方法检测细胞上 CYP1 A2 mRNA 表达水平。分别用糖尿病大鼠（Ⅰ型和Ⅱ型）和正常大鼠血清培养 HepG2细胞48 h，考察细胞上 CYP1 A2的功能。在培养基中加入不同浓度的饱和脂肪酸（软脂酸和硬脂酸）和不饱和脂肪酸（油酸和亚油酸）培养 HepG2和 Fa2N-4细胞48 h，测定细胞上CYP1 A2的功能与表达。结果Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病大鼠血清培养的 HepG2细胞上 CYP1 A2酶活性明显增高。高浓度的脂肪酸均可增加2种细胞上 CYP1 A2功能与表达。结论糖尿病状态下脂肪酸浓度的异常变化可能是影响肝脏CYP1 A2功能与表达上调的原因之一，本研究为进一步探索糖尿病状态下肝脏 CYP1 A2改变机制提供了一定的基础。
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蜂毒素对人肝癌 HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其部分机制研究
目的：研究蜂毒素对人肝癌 HepG2细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其作用和 HDAC2及 Hedgehog 信号通路的关系。方法给予不同浓度蜂毒素，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测 HepG2细胞的增殖变化，Hoechst33258染色和流式细胞术检测 HepG2细胞凋亡变化；qRT-PCR 检测 SHH、PTCH1、SMO、Gli1、HDAC2 mRNA 的表达；Western blot 检测 SHH、PTCH1、SMO、Gli1、HDAC2蛋白的表达。结果不同浓度的蜂毒素在作用48 h 后，能明显抑制 HepG2细胞的增殖，促进其凋亡；Hedgehog 信号通路中 SHH、PTCH1、SMO、Gli1 mR-NA 及蛋白水平均明显降低，并与蜂毒素浓度呈负相关。同时检测到细胞内 HDAC2 mRNA 及蛋白水平均降低，与蜂毒素剂量呈负相关。结论蜂毒素可明显抑制人肝癌 HepG2细胞增殖，促进其凋亡，其作用与抑制 HDAC2，下调 Hedge-hog 信号通路密切相关。
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PICK1对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
目的：检测蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICKl)在肝癌、癌旁组织中的表达,初步探讨 PICK1对人肝癌细胞HepG2增殖的作用及其可能机制。方法应用 qRT-PCR、Western blot、HE和免疫组织化学染色法分析比较人肝癌和癌旁组织中PICK1蛋白的表达；培养HepG2细胞,体外给予不同浓度的FSC-231(PICKl的PDZ结构域小分子抑制剂),通过MTT法检测HepG2细胞的活力；采用流式细胞术检测HepG2细胞周期变化；进一步采用Western blot法检测G1/S-特异性周期蛋白-D1( CyclinD1)、原癌基因C-myc和Notch信号通路蛋白表达。结果肝脏病理组织学检测提示肝癌组织病变明显。免疫组化结果显示,肝癌组织中相比癌旁组织中的PICKl抗原阳性细胞显著增多( P<0．05),且多分布在肝实质细胞质区域；qRT-PCR和Western blot结果显示肝癌组织中PICK1 mRNA及蛋白水平与癌旁组相比显著升高(P<0．05)；体外实验证明,与阴性对照组相比,FSC-231能够抑制HepG2细胞的增殖,并且明显抑制 CyclinD1、C-myc和Notch1同源蛋白1(Notch1)、Hes-1蛋白表达(P<0．05)。结论提示PICK1可能参与肝癌的发生发展,PICK1的PDZ结构域抑制剂可以抑制肝癌细胞的增殖,此作用可能与Notch信号通路相关。
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LPS 对肝癌细胞株 HepG2增殖、凋亡及分泌炎症因子的影响
目的：体外观察不同浓度细菌内毒素脂多糖(LPS)对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及分泌炎症因子的影响,并探讨可能的机制。方法按照随机数字法将细胞分为对照组及1、10、50、100μg/ ml LPS 处理组。用 MTT 检测刺激24、48、72和96 h 后细胞的增殖能力；用流式细胞术检测刺激24 h 后细胞的凋亡情况；用 RT-PCR 法检测刺激24 h 后白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8) mRNA 的表达含量；用化学发光法检测刺激24 h 后 IL-6和 IL-8的表达量,后用 SPSS 19．0对数据进行统计学分析。结果与对照组比较,各处理组刺激24 h 和48 h 后细胞增殖活性明显升高(P <0．05),而在72、96 h 差异无统计学意义(P >0．05)；刺激24 h 后,1、10、50和100μg/ ml LPS 处理组以及对照组之间的细胞凋亡率差异无统计学意义(P >0．05)；刺激24 h 后,与对照组比较,随着刺激浓度的升高,IL-6和 IL-8的表达量明显升高(P <0．05)。结论 LPS 可以在48 h 内促进 HepG2的增殖,对HepG2细胞的凋亡没有影响,并且 LPS 作用可以上调 IL-6和 IL-8水平。
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特异性信号转导阻滞剂 AG490对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制
目的：探讨特异性信号转导阻滞剂 AG490对人肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将培养好的人肝癌细胞株 HepG2用4、6、8 mg／kg 的 AG490（AG4904 mg／kg 组、AG4906 mg／kg 组、AG4908 mg／kg 组）进行处理，另设对照组（仅加 PBS）。AG490干预24 h，MTT 法测算细胞增殖抑制率；流式细胞术测算细胞周期及凋亡率；采用 Hoechst 33342染色法观察细胞形态学变化；采用 Western blotting 法检测 HepG2细胞中 P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表达。结果 AG490干预24 h，与对照组比较，AG4904 mg／kg 组、AG4906 mg／kg 组、AG4908 mg／kg 组细胞增殖抑制率、G0／G1期细胞比例、细胞凋亡率逐渐升高（P 均＜0．05），且呈浓度依赖性（P 均＜0．05）；HepG2细胞核染色质固缩浓集、碎裂，凋亡小体形成，蓝色荧光增强，且 AG490浓度越高以上变化越明显；P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Survivin 蛋白表达降低，而 Bax、Caspase-3蛋白表达升高（P 均＜0．05）。结论 AG490可能通过抑制 JAK2／STAT3信号通路表达抑制人肝癌 HepG2细胞增殖并促进其凋亡。
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AF0.3启动子调控的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤作用
背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichia coli purine nucleoside phosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应.本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用.方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞.RT-PCR检测二者在细胞中的表达.台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性.结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感.在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应.HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性.结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用.
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叶下珠复方Ⅱ号对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用及机制
目的：观察叶下珠复方Ⅱ号对肝癌 HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用，并探讨其作用机制。方法建立 BALB/C 裸鼠肝癌 HepG2细胞皮下移植瘤模型，随机分为模型组，叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组（17.28，8.64，4.32 g·kg-1）和氟尿嘧啶（5-Fu）组（0.025 g·kg-1），给药6周后处死裸鼠，剥离瘤组织称质量。体外观察叶下株复方Ⅱ号对 HepG2细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞凋亡的影响，观察药物作用后 Wnt1和β-catenin 基因 mRNA 表达的改变。结果叶下珠复方Ⅱ高、中、低剂量组对裸鼠 HepG2肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用明显，与模型组比较，肿瘤质量均明显减轻（P <0.01），但与5-Fu 组比较，差异均无统计学意义（P >0.05）。叶下珠复方Ⅱ号体外在10 mg·mL-1以上浓度能明显抑制肝癌 HepG2细胞的增殖，呈明显的量-效关系和时-效关系；叶下珠复方Ⅱ号在2 mg·mL-1以上浓度，对 HepG2细胞集落形成呈明显的抑制作用；叶下珠复方Ⅱ号以15，20 mg·mL-1浓度作用 HepG2细胞48 h 后， G0/G1期细胞比例明显降低， S 期细胞比例显著增加，与细胞对照组比较，差异均具有统计学意义（P <0.01）；叶下珠复方Ⅱ号在10，15，20 mg·mL-1浓度，作用于 HepG2细胞48 h，细胞早期凋亡率和总凋亡率明显增加，与细胞对照组比较，差异均具有统计学意义（P <0.01）。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组（20，10 mg·mL-1）作用于 HepG2细胞48 h 后， Wnt1和β-catenin 基因 mRNA 的表达量均明显低于细胞对照组（P <0.01， P <0.05）。结论叶下珠复方Ⅱ号对 BALB/C 裸鼠肝癌HepG2细胞皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用，作用机制与抑制 Wnt1/β-catenin 基因表达和信号通路活化，从而阻滞细胞周期、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。
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法尼醇 X 受体对 HepG2 细胞蛋白 C 表达的影响及机制的初步研究
目的 观察法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)的天然激动剂鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)对HepG2细胞蛋白C(protein C,PC)表达的影响,探讨其引起变化的可能机制. 方法 以不同浓度(25、50、75 μmol/L)FXR激动剂CDCA刺激HepG2细胞,RT-PCR分别检测各组细胞FXR特异性靶基因小异源二聚体伴侣分子 (small heterodimer partner,SHP)及PC mRNA表达变化,并用实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析各组PC的表达量;ELISA检测各组细胞培养上清液中PC蛋白分泌量的变化;瞬时转染结合报告基因检测在人胚肝L02细胞中转入组成性活化的FXR表达质粒(VP-FXR),观察PC启动子活性的改变. 结果 经FXR配体CDCA刺激的HepG2细胞,随着CDCA浓度的增高,SHP、PC mRNA的表达逐渐增高,细胞培养上清液中PC蛋白表达也逐渐升高,呈剂量依赖性;在人胚肝L02细胞中,活化的FXR可增强PC启动子的活性约2.9倍. 结论 CDCA活化FXR引起HepG2细胞中PC mRNA和蛋白表达的升高,其调控机制与PC启动子的活化相关.
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二甲基亚砜（DMSO）对人肝癌 HepG2细胞的诱导分化作用的实验研究
目的：探讨二甲基亚砜（DMSO）对人肝癌 HepG2细胞的诱导分化作用。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞，用 DMSO 干预细胞，MTT 法检测药物对细胞增殖活力的影响；倒置相差显微镜和瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化；放射免疫法检测细胞甲胎蛋白（AFP）和清蛋白（ALB）的分泌量；酶促反应试剂盒检测细胞中γ-谷胺酰转肽酶（γ- GT）、碱性磷酸酶（ALP）的活性。结果：用 DMSO 处理 HepG2细胞72h后，能显著抑制细胞的增殖（P ﹤0.05）；细胞的形态向成熟细胞分化；细胞 AFP 的分泌量和γ- GT 酶的活性明显降低，ALP 活性和 ALB 含量则显著升高（P ﹤0.05）。结论：DMSO 具有诱导人肝癌 HepG2向正常细胞分化的作用并抑制细胞增殖。
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靶向人多药耐药基因 mrp1特异性小分子干扰 RNA 有效序列筛选
目的：筛选靶向人多药耐药相关蛋白基因（mrp1）特异性小分子干扰 RNA（siRNA）的有效序列。方法：设计并体外转录合成靶向 mrp1的4条 siRNA（mrp1- si251，mrp1- si480，mrp1- si795，mrp1- si1016和空白对照 si -阴性），转染转基因单因素肝癌多药耐药细胞 HepG2/ mrp1。用 RT - PCR 检测 mrp1 mRNA 表达，流式细胞仪检测多药耐药相关蛋白表达、细胞内柔红霉素（DNR）蓄积，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞对阿霉素（ADM）的敏感性。结果：4条 siRNA 均能不同程度逆转 HepG2/ mrp1细胞由 mrp1介导的多药耐药。转染72h 后，mrp1- si795组和 mrp1- si1016组的 mrp1 mRNA 表达水平分别分别下调了（86.36±2.26）％和（85.54±1.04）％，较 mrp1- si251组和 mrp1-si480组明显下降（P ﹤0.05）；细胞内柔红霉素蓄积由多到少依次为 mrp1- si795组多，mrp1- si1016组次之，mrp1- si480组较少，mrp1- si251组少（P ﹤0.05）；mrp1-si795组对 ADR 耐药的相对逆转率（86.36％）高，mrp1- si1016组（85.54％）次之，较 mrp1- si251组（60.93％）和 mrp1- si480组（70.29％）有明显差异（P ﹤0.05）；mrp1- si1016组和 mrp1- si795组多药耐药相关蛋白表达明显下调。结论：实验设计的靶向 mrp1 mRNA 的 siRNA 序列能够不同程度逆转多药耐药相关蛋白介导的人肝癌耐药细胞 HepG2/ mrp1的多药耐药性，mrp1- si1016和 mrp1- si795效果好，mrp1- si480较差，mrp1- si251差。mrp1- si1016和 mrp1- si795可以作为进一步实验的靶序列。
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缺氧对人肝癌 HepG2细胞凋亡及 p38MAPK 通路的影响
目的：探讨缺氧对人肝癌 HepG2细胞凋亡及 p38MAPK 通路的影响。方法：用三气培养箱培养肝癌细胞 HepG2，建立缺氧细胞模型，CCK －8法检测 HepG2细胞的增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Real －time PCR 分析 p38MAPK mRNA 的表达，Western blot 法检测 p38MAPK 及 p －p38MAPK 蛋白的表达变化。结果：缺氧可抑制人肝癌 HepG2细胞的增殖，抑制细胞凋亡（P ＜0．05）；缺氧处理人肝癌 HepG2细胞后， p38MAPK mRNA 的表达量下调（P ＜0．05）；Western blot 结果显示缺氧可下调 p38MAPK、p －p38MAPK 蛋白的表达（P ＜0．05）。结论：缺氧通过抑制 p38MAPK 通路抑制人肝癌 HepG2细胞凋亡。
关键词： 缺氧 HepG2 细胞 凋亡 p38MAPK 通路 -
sh-Set7/9表达载体的构建及其在 HepG2细胞中的功能
目的：构建 sh-Set7/9表达载体并筛选稳定转染 HepG2细胞株,考察其干扰效果,为后续研究 Set7/9基因的功能及其在肝癌细胞系中的作用提供实验基础。方法寻找靶向序列,设计 siRNA 片段,构建针对人 Set7/9基因的shRNA 和对照载体,将干扰载体和载体稳定转染肝癌细胞 HepG2,Real-time PCR 检测细胞中 Set7/9基因的表达水平；同时利用 Western blot 方法在蛋白质水平进行检测,确定该基因的干扰效果。结果成功构建载体 Set7/9-shR-NA；Real-time PCR 结果显示该基因表达水平明显被抑制(P <0.05),同样 Western blot 检测表明其蛋白表达也显著下调。此外,与其相关的 Sirt1蛋白表达水平提高8.4倍,Suv39h1蛋白表达水平升高1.1倍。结论构建稳定转染株后,可以显著下调 Set7/9基因的表达,同时影响与其相关的 Sirt1和 Suv39h1蛋白表达水平,提示对肝癌 HepG2细胞活性产生影响。
