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6′-羟基爵床素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其机制
目的：探讨6′-羟基爵床素 A(JR6)对人肝癌 HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法体外培养人肝癌 HepG2细胞,采用 MTT 法观察不同浓度的 JR6和5-氟尿嘧啶(5-FU)对 HepG2细胞存活的作用,荧光显微镜观察 Hoechst33258染色后细胞核形态改变,用流式细胞仪检测 AnnexinⅤ-FlTC/ Pl 双染后 HepG2细胞的凋亡率,JC-1荧光染色观察药物对细胞线粒体膜电位的影响,Western 蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白细胞色素 c、Bax 和 Bcl-2蛋白的表达。结果 JR66.1～196μmol??L-1和5-FU 3.4～192μmol??L-1分别作用 HepG2细胞48 h,对 HepG2细胞 存 活 具 有 抑 制 作 用, lC50分别为74.90和49.75μmol??L-1。 JR612.3,49和196μmol??L-1作用 HepG2细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,由正常对照组的(6.9±2.0)%增加至(13.8±2.0)%,(18.6±4.3)%和(32.4±3.2)%( P <0.05, P <0.01)。Hoechst33258染色结果显示,JR649和196μmol??L-1作用 HepG2细胞48 h,部分细胞出现细胞核固缩和染色质凝集等凋亡变化。线粒体膜电位检测结果发现,JR649和196μmol??L-1作用48 h 能使 HepG2细胞线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05, P<0.01)。线粒体凋亡相关蛋白的检测结果表明,JR612.3,49和196μmol??L-1作用 HepG2细胞48 h,胞浆细胞色素 c 表达增加,促凋亡蛋白 Bax 表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,且 Bax / Bcl-2比值增加(P<0.05, P<0.01)。 JR649μmol??L-1和5-FU 组上述蛋白表达无明显差异。结论 JR6可能通过促进细胞色素 c 释放、打破 Bcl-2/ Bax 平衡诱导 HepG2细胞凋亡。
关键词： 6′-羟基爵床素 A HepG2 细胞 细胞凋亡 线粒体
