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补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠神经—内分泌功能的影响
目的 探讨补肾生髓方治疗缺血性中风的可能机制.方法 雄性SD大鼠采用惊恐加房劳的复合伤肾法制造肾精亏虚模型,联合大脑中动脉线栓法改良制作左侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型.将造模成功的24只大鼠随机分为模型组、脑络欣通组和补肾生髓方组,每组8只.另随机取正常大鼠8只为正常组.脑络欣通组和补肾生髓方组分别按每天8.54 g/kg、10.25 g/kg灌胃相应药物,造模后每天灌胃2次;模型组予以等量的生理盐水灌胃,各组均持续2周.正常组不做处理.检测各组大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺素(TSH)、红细胞生成素(EPO)、血钙及血磷值.结果 与正常组比较,模型组大鼠血浆ACTH和血清TSH、EPO、血钙值显著降低,而血磷值升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,脑络欣通组血磷值降低,补肾生髓方组血清TSH值升高、血磷值降低(P＜0.05). 结论 补肾生髓方药能升高肾精不足型脑缺血再灌注大鼠血清TSH值、降低血磷,具有调节神经—内分泌的作用.
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益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3表达的影响
目的 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、卷曲蛋白9(Frizzled9)和T细胞因子3(TCF3)蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组,脑缺血2h后持续灌注7d.采用Western-Blot法检测缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,用免疫组化Envision两步法检测缺血侧海马CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达.结果 在缺血侧海马区,与假.手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01),补肾生髓方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05).在缺血侧海马CA1区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组与补肾生髓方组能显著降低CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达(P＜0.01).结论 2种中药复方能通过抑制缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,调节Wnt/β-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复.
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两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠Nestin、NSE和GFAP表达的影响
目的 比较益气活血方(脑络欣通)和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧侧脑室下区神经上皮干细胞蛋白(Nestin)、缺血半暗带神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注动物模型,动物随机分为假手术组、模型组、益气活血方组及补肾生髓方组.脑缺血2h,分别再灌注1周、2周、3周,采用免疫荧光法检测Nestin、NSE和GFAP表达的阳性细胞数或平均吸收光密度值(A值).结果 缺血侧侧脑室下区,再灌注1周、2周益气活血方组,再灌注2周、3周补肾生髓方组,Nestin表达的阳性细胞数较模型组显著增多(P＜0.05或P＜0.01);再灌注1周益气活血方组较补肾生髓方组显著增多(P＜0.01),再灌注2周、3周补肾生髓方组较益气活血方组显著增多(P＜0.05).缺血半暗带区,再灌注1周、2周益气活血方组,再灌注2周补肾生髓方组,NSE表达的阳性细胞数较模型组显著增多(P＜0.01);再灌注1周时益气活血方组较补肾生髓方组显著增多(P＜0.01),再灌注2周时补肾生髓方组较益气活血方组显著增加(P＜0.01).缺血半暗带区,再灌注1周、2周益气活血方组与补肾生髓方组GFAP表达平均吸光度较模型组明显增加(P＜0.05或P＜0.01);再灌注各时间段两复方组比较无显著差异(P＞0.05).结论 益气活血方与补肾生髓方能通过增加缺血侧侧脑室下区Nestin、缺血半暗带区NSE数量、增强GFAP的表达,促进局灶性脑缺血后神经干细胞的增殖分化,两种复方在增加Nestin、NSE数量方面存在一定差异.
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两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响
目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响.方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组.线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2h再灌注2周.治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值.结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P＜0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P＜0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P＜0.05),补肾组与益气组之间无明显差异.皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P＜0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P＜0.05),补肾组与益气组之间无明显差异.结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化.
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补肾生髓方和益气活血方对脑缺血损伤大鼠Nogo-A、OMgp、MAG蛋白表达的影响
目的:观察补肾生髓方和益气活血方对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带Nogo-A、OMgp、MAG表达的影响.方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组及益气活血方组.脑缺血2h,分别再灌注3d、7d、14d,采用免疫组化检测Nogo-A、OMgp和MAC-的表达水平.结果:再灌注3d、7d、14d补肾生髓方组,再灌注14d益气活血方组,Nogo-A阳性表达较模型组显著减弱(P＜0.05或P＜0.01)；再灌注7d、14d时补肾生髓方组Nogo-A表达较益气活血方组减弱(P＜0.05或P＜0.01).再灌注14d补肾生髓方组,再灌注3d、7d、14d益气活血方组,OMgp阳性表达较模型组显著减弱(P＜0.05或P＜0.01)；再灌注各时间点两复方组间OMgp阳性表达无显著差异(P＞0.05).再灌注3d、7d、14d补肾生髓方组,再灌注3d、7d益气活血方组,MAC,阳性表达较模型组显著减弱(P＜0.05或P＜0.01)；再灌注3d时益气活血方组MAG表达较补肾生髓方组显著减弱(P＜0.05).结论:益气活血方与补肾生髓方可促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能回复,其作用机制可能与下调Nogo-A、OMgp、MAG的表达有关,提示在脑缺血再灌注早期,益气活血方优于补肾生髓方,后期补肾生髓方优于益气活血方.
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补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号通路Nurrl、SMO mRNA及其蛋白表达的影响
目的 探讨补肾生髓方和益气活血方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号转导通路Nurrl、SMO mRNA及其蛋白表达的影响.方法 采用线栓法复制右侧大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组和益气活血方组.脑缺血2h后,持续灌注7d.采用PCR检测额顶叶皮质Nurrl、SMO mRNA表达水平,采用Western blot检测其蛋白表达水平.结果 与假手术组比较,模型组Nurrl、SMO mRNA及其蛋白表达水平均明显上调(P＜0.05);益气活血方组和补肾生髓方组Nurrl mRNA及其蛋白、SMO蛋白相对表达水平均较模型组明显下调(P＜0.05);模型组、益气活血方组和补肾生髓方组SMO mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);益气活血方组与补肾生髓方组Nurrl、SMO蛋白表达水平有显著差异(P＜0.05).结论 补肾生髓方和益气活血方促进脑组织修复的作用与其下调Notch信号转导通路中Nurrl、SMO mRNA及其蛋白表达有关.
关键词： 脑缺血再灌注 益气活血方 补肾生髓方 Notch信号转导通路 -
益气活血方与补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带形态学影响
目的 观察益气活血方(脑络欣通)和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带形态学的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血方组及补肾生髓方组.采用线栓法复制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2 h,分别再灌注1,2,3周,采用苏木精-伊红、Spoerrl染色法观察缺血半暗带形态学变化.结果 苏木精-伊红染色示再灌注3周时模型大鼠缺血半暗带神经细胞变性坏死严重,可见核浓缩现象与胶质细胞增生及少量淋巴细胞浸润.两种中药复方在再灌注3周时,缺血半暗带神经细胞变性坏死减轻,胶质细胞增生不明显,可见少量核浓缩现象.Spoerrl染色示神经细胞突触呈蓝红色,模型组神经突触阳性总面积单位显著减小(P<0.01);再灌注各时间点,两种中药复方组神经细胞突触阳性总面积单位较模型组显著增多(P<0.01);再灌注2周补肾生髓方组比益气活血方阳性染色面积显著减少(P<0.01).结论 益气活血方与补肾生髓方通过减轻缺血半暗带区神经细胞突触损伤或促进神经细胞突触再生,提高中枢神经系统可塑性,抗脑缺血损伤.
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两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织Hes-1、Hes-5表达的动态影响
目的:探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧额顶叶皮质Hes-1、Hes-5蛋白表达的动态影响.方法: 采用线栓法复制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型.随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组.脑缺血2 h,分别再灌注1,2,3周,采用免疫组织化学SABC法检测Hes-1、Hes-5蛋白表达的阳性面积和平均吸收光密度值.结果:在缺血区额顶叶皮质,再灌注1,2周时,模型组Hes-1、Hes-5表达阳性面积单位、平均吸收光密度值较假手术组明显增加(P<0.05,或P<0.01).再灌注1周时,益气活血方和补肾生髓方组Hes-1、Hes-5蛋白表达阳性面积及平均光密度值显著高于模型组(P<0.05,或P<0.01),益气活血方组Hes-1和Hes-5蛋白表达平均光密度值显著高于补肾生髓方组(P<0.01).再灌注2周时,除补肾生髓方组Hes-5外,益气活血方组和补肾生髓方组Hes-1和Hes-5蛋白表达阳性面积及平均光密度值显著高于模型组(P<0.05,或P<0.01),益气活血方组Hes-5表达阳性面积显著高于补肾生髓方组(P<0.01).再灌注3周时,补肾生髓方组Hes-1表达阳性面积,补肾生髓方组和益气活血方组Hes-5表达阳性面积及益气活血方组Hes-5表达平均光密度值显著高于模型组(P<0.05).结论:两种中药复方均能通过增强缺血侧脑组织额顶叶皮质Hes-1和Hes-5的表达,促进局灶性脑缺血后内源性神经干细胞的增殖分化.
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益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达的影响
目的 观察两种中药复方对脑缺血再灌注大鼠海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达的影响,探讨其作用机制.方法 0.26mm尼龙线,造成大鼠右侧大脑中动脉阻塞,采用随机分组法,分入假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组.脑缺血2h后,分别于再灌注7d和14d取缺血侧海马和皮质.采用Westem Blot检测海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组Jagged1、Notch4和Hes1蛋白7d和14d表达均显著上调(P＜0.05);与模型组比较,益气活血方组和补肾生髓方组Jagged1、Notch4和Hes1蛋白7d和14d表达表达均显著下调(P＜0.05);与补肾生髓方组比较,益气活血方组Jagged1、Notch4蛋白7d和14d表达表达均显著下调(P＜0.05).结论 益气活血方和补肾生髓方能通过下调Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达,调节Notch信号通路,影响脑缺血后内源性神经干细胞增殖分化,促进其向神经元分化.
