首页 > 文献资料
-
长链非编码RNA-TP53TG1在神经胶质瘤细胞中对糖剥夺应激反应的影响
目的 构建长链非编码RNA-TP53TG1的真核表达克隆,并探索其在神经胶质瘤中对糖剥夺应激反应的影响.方法 用RT-PCR方法从人胶质瘤细胞中扩增出TP53TG1;构建了TP53TG1的全长真核表达克隆；实时定量PCR检测其在U87MG细胞内的表达；同时用低糖(0.3 g/L葡萄糖、8h)处理；real-time PCR检测GRP78、IDH1和PKM2的表达水平.结果 成功构建了真核重组表达质粒pCIG-TP53TG1；在转染U87MG细胞36 h后,可见绿色荧光的表达,U87MG细胞中TP53TG1 mRNA升高了2.9×106倍(P＜0.05)；过表达TP53TG1的同时低糖处理,GRP78和IDH1 mRNA的表达水平显著升高(P＜0.05),而PKM2 mRNA的表达水平显著降低(P＜0.05).结论 在U87MG细胞中,TP53TG1可能通过影响GRP78、IDH1和PKM2 mRNA的表达,而参与到对糖剥夺的应激反应过程.
-
人脑胶质瘤中miR-21调控FASLG基因表达的作用及机制
目的 研究miR-21在人脑胶质瘤细胞中调控FASLG基因表达的作用效果及分子机制.方法 应用实时定量PCR方法检测人脑胶质瘤及其癌旁组织中miR-21及FASLG基因的表达.转染miR-21的前体(miR-21precursor)至人脑胶质瘤U87MG细胞,然后应用Western blot法检测FASLG蛋白的表达.应用荧光素酶报告基因表达分析实验分析miR-21能否与FASLG基因的3’非翻译区(3'UTR)特异性结合.结果 人脑胶质瘤组织中的miR-21mRNA的表达水平明显比癌旁组织少,而FASLG mRNA则增加显著,二者的表达水平呈明显的负性相关.转染miR-21 precursor能够显著上调胶质瘤U87MG细胞中miR-21的表达,而在miR-21高表达的胶质瘤U87MG细胞中,FASLG的蛋白表达下调显著.miR-21能够特异性地与FASLG基因的3'UTR中的种子区结合,负性调节荧光素酶报告基因的表达.结论 miR-21与FASLG基因与人脑胶质瘤的发生相关,miR-21在胶质瘤细胞中能够靶向沉默FASLG基因.
-
UMSCs对U87MG细胞增殖的影响
目的:通过对研究脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stell cells,UCMSCs)与人恶性胶质母细胞瘤细胞U87MG细胞(U87 Malignant glioma cells)体外共培养,模拟肿瘤生长的内环境,以及其对U87MG细胞增值作用的影响及肿瘤细胞与间充质干细胞的共培养方法.方法:提取人脐带间充质干细胞进行体外培养、扩增,用MTT法测定UMSCS上清液对U87MG的影响,用瑞士染色法检测U87MG形态学变化.结果:MTT比色法结果显示UMSCS对U87MG有抑制作用.96小时培养后1∶8、1∶4、1∶2及未稀释的UMSCs上清液对U87MG的抑制率分别为17％,24％,37.2％及46.4％,U87MG细胞形态亦随着培养时间的延长由多角形变为梭形,突起消失,细胞间骨架结构断裂.结论:通过对共培养前后U87MG与UMSCs共培养后形态学变化、生长曲线变化及对生长周期的影响作用的观察分析,得出UMSCs及其上清液对U87MG有抑制作用,而且呈时间及浓度依赖性.
-
Leptin促进人脑胶质瘤U87MG细胞的迁移和侵袭
目的:探讨瘦素(leptin)对人脑胶质瘤U87MG细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法:Leptin处理U87 MG细胞,采用细胞划痕实验检测U87MG细胞的迁移能力,Transwell实验检测U87 MG细胞的侵袭能力,RT-PCR及Western blotting法检测U87MG细胞中MMP-2及MMP-9 mRNA和蛋白的表达.结果:Leptin明显促进U87MG细胞迁移能力[(152.42±3.29)vs(83.24 ±2.61) μm,P＜0.05]和侵袭能力[(31.78±5.04)vs(17.03±2.41)个细胞,P＜0.05],leptin能显著上调U87MG细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA[(0.76±0.04 )vs(0.35±0.02),(0.84±0.02)vs(0.41 ±0.06);均P＜0.05]及蛋白[(0.79±0.03)vs(0.23±0.01),(0.81±0.05)vs(0.39±0,03)；均P＜0.05]的表达.MMP抑制剂GM6001(10 μmol/ml)可以逆转leptin对U87 MG细胞迁移[(82.05±2.98)vs(81.76±3.25)μm,P＞0.05]和侵袭能力[(19.23±2.46)vs( 18.02±1.98)个细胞,P＞0.05]的影响.结论:Leptin可以促进人脑胶质瘤U87MG细胞的侵袭及迁移,其机制可能与上调MMP-2、MMP-9的表达有关.
-
异硫氰酸苄酯抑制人胶质瘤U87MG细胞体外侵袭和诱导凋亡的作用和机制
目的 研究异硫氰酸苄酯对人胶质瘤U87MG细胞体外侵袭和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 采用MTS实验考察异硫氰酸苄酯对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;2,5 μmol·L-1异硫氰酸苄酯作用24 h后,采用Transwell实验、黏附实验和划痕实验观察异硫氰酸苄酯对人胶质瘤细胞侵袭、黏附和迁移能力的影响;应用Real-time-PCR和Western blot法检测相应浓度异硫氰酸酯处理后人胶质瘤U87MG细胞中MMP-2、MMP-9、CD44、Survivin、Bcl-2、Netl、RohA、caspase-3、caspase-8和p-AKT的表达变化;应用报告基因技术检测NF-κB转录活性的变化;采用ELISA法测定胞内8-OH-dG含量;10,20 μmol·L-1异硫氰酸酯作用24 h后,采用流式细胞术观察其对细胞凋亡的作用.结果 异硫氰酸苄酯可显著抑制人胶质瘤U87MG细胞体外增殖;与0μmol·L-1组相比,2,5μmol·L-1异硫氰酸苄酯对人胶质瘤细胞U87MG侵袭、黏附和迁移能力有明显的抑制作用;不同浓度异硫氰酸苄酯处理后,肿瘤细胞MMP-2、MMP-9、CD44、Survivin、Bcl-2、NET1和RhoA的mRNA和蛋白表达、AKT磷酸化水平和NF-κB转录活性明显下调,caspase-3和caspase-8表达以及8-OH-dG含量显著上调;10,20 μ mol·L-1异硫氰酸苄酯可显著诱导细胞凋亡.结论 异硫氰酸苄酯抑制人胶质瘤细胞U87MG的侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT/NF-κB信号转导途径,进而调节侵袭和凋亡相关基因表达有关.
-
人脑胶质瘤中DNA拓扑异构酶-Ⅱα的表达及其对胶质瘤U87MG细胞凋亡的影响
目的 研究DNA拓扑异构酶-Ⅱα(Topoisomerase-Ⅱα,Topo-Ⅱα)基因在人脑胶质瘤中的表达改变及其对胶质瘤U87MG细胞凋亡的影响.方法 Real-time PCR检测25例脑胶质瘤及相应癌旁组织中Topo-ⅡαmRNA的表达.将Topo-Ⅱα基因特异性的siRNA转染U87MG细胞.转染后,Western Blot检测转染后Topo-Ⅱα蛋白的表达,双标流式细胞法检测细胞凋亡率.结果 与癌旁纽织相比,Topo-ⅡαmRNA在脑胶质瘤组织中表达明显上调.转染后,U87MG细胞中的Topo-Ⅱα蛋白表达明显降低,同时,凋亡率明显增加.结论 Topo-Ⅱα基因在脑胶质瘤中存在表达异常,其表达降低能够促进细胞凋亡.
-
PEDF对脑胶质瘤U87MG细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对脑胶质瘤U87MG细胞增殖与凋亡的影响.方法 分组培养U87MG细胞,对照组不添加PEDF蛋白,干预组分别添加80nmol/L、160nmol/L、320nmol/L的PEDF蛋白,采用MMT法检测不同时间点各组细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率并进行比较.结果 同一时间点,各浓度PEDF干预组的细胞增殖抑制率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);各浓度PEDF干预组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);相同浓度PEDF环境下,各时间点间细胞增殖抑制率差异亦有统计学意义(P＜0.05).随着PEDF浓度增高,U87MG细胞凋亡率呈增高趋势.结论 PEDF能够抑制脑胶质瘤U87MG细胞增殖并能促其凋亡,其抑制增殖水平与浓度、作用时间相关,促进凋亡水平与浓度相关.
-
熊果酸通过抑制Akt通路诱导胶质瘤细胞凋亡
目的 探讨熊果酸对胶质瘤细胞系U87MG细胞增殖和凋亡的影响,并分析可能的作用机制.方法 体外培养的U87MG细胞,用不同浓度熊果酸(浓度0、10、20、40、80、100μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对U87MG细胞增殖的影响;熊果酸(浓度分别为0、20、40、80μmol/L)处理U87MG细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测细胞Caspase-3活性;Western blot法检测Akt、p-Akt,p-GSK-3β、Bax及Bcl-2的表达.结果 熊果酸对U87MG细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;U87MG细胞经熊果酸作用48 h后,细胞凋亡率从14.8％上升至37.7％;Bax表达上调,而Bcl-2表达下调;细胞Caspase-3活性显著升高;且熊果酸可抑制p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达.结论 熊果酸对U87MG细胞增殖具有抑制作用,并可促进细胞凋亡,其抗肿瘤作用机制可能与抑制Akt信号通路激活,继而上调Bax并下调Bcl-2,并增加Caspase-3活性有关.
