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Toll样受体-2在早产大鼠坏死性小肠结肠炎中的表达及谷氨酰胺对其的影响
目的 探讨坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)早产大鼠肠道组织中Toll样受体-2(Toll-like receptor-2,TLR-2)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达及谷氨酰胺(glutamine,Gln)对其表达的影响及对NEC肠道损伤的保护作用.方法 60只早产新生大鼠按随机数字表法分为模型组、Gln干预组和对照组,每组20只.模型组和Gln干预组早产新生大鼠采用代乳品人工喂养+缺氧冷刺激建立NEC模型,Gln干预组同时在配方乳中加入Gln 0.3 g/kg;对照组未进行任何干预.所有早产大鼠生后第3天处死后取肠道组织,HE染色观察病理改变,对回肠进行病理评分,并采用免疫组织化学方法检测空肠、回肠和结肠caspase-3、TLR-2蛋白的表达,采用荧光定量聚合酶链反应技术检测空肠、回肠及结肠TLR-2 mRNA的表达.结果 模型组、Gln干预组和对照组回肠损伤病理评分分别为(3.10±0.99)分、(2.40±0.69)分及(O.30±0.48)分;回肠组织TLR-2蛋白的表达分别为2.53±0.94、2.15±0.82及1.57±0.62;caspase-3蛋白的表达分别为2.83±0.45、2.70±0.04及0.91±0.29;模型组TLR-2 tuRNA的含量为Gln干预组的1.46倍,为对照组的2.10倍.与对照组相比,模型组的肠道损伤病理评分、caspase-3蛋白、TLR-2蛋白和TLR-2mRNA的表达均增加(P均＜0.01);与模型组相比,Gln干预组的肠道损伤病理评分、caspase-3蛋白、TLR-2蛋白和TLR-2 mRNA的表达均有下降(P＜0.05).TLR-2 mRNA和caspase-3蛋白的表达呈正相关(r=0.71,P＜0.01),与肠组织损伤病理评分也呈正相关(r=0.69,P＜0.01);caspase-3与肠组织损伤病理评分呈正相关(r=0.81,P＜0.01).结论 TLR-2可能参与了NEC的发病.降低TLR-2的表达,抑制肠黏膜细胞的凋亡,可能是Gln保护NEC早产大鼠肠道的机制之一.
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丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞株-6细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞株-6(intestinal epithelium cell line No.6,IEC-6)细胞增殖和凋亡的作用. 方法 不同浓度丁酸钠(低浓度2 mmol/L,中浓度8 mmol/L,高浓度14、20 mmol/L)处理IEC-6细胞,细胞计数试剂盒CCK-8法检测细胞增殖情况,分光光度法检测细胞内Caspase-3活性程度,流式细胞术检测细胞凋亡率. 结果 (1)加入丁酸钠(2、8、14、20mmol/L)共培养24 h后,2、8 mmol/L丁酸钠组细胞增殖速度比对照组快,差异有统计学意义(P<0.01);48 h后,14、20 mmol/L丁酸钠组细胞增殖较对照组明显受抑制,差异有统计学意义(P<0.01);72 h后,8、14、20 mmol/L丁酸钠组增殖亦明显受抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)加入丁酸钠(2、8、14 mmol/L)共培养12 h后,8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);24 h后,2、8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性均升高,差异有统计学意义(P<0.05);48 h后,8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较Caspase-3活性亦升高,差异有统计学意义(P<0.05).(3)加入丁酸钠(2、8、14 mmol/L)共培养12、24、48 h后,8、14 mmol/L丁酸钠组与对照组比较IEC-6细胞凋亡率均有升高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 中、高浓度丁酸钠有诱导IEC-6细胞凋亡,抑制IEC-6细胞增殖作用,而低浓度丁酸钠没有这种作用.
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缺血再灌注对于胎鼠小肠组织神经降压素的影响
目的 研究缺血再灌注对于胎鼠小肠组织神经降压素(NT)的影响,旨在探讨小肠组织NT含量的降低是否在坏死性小肠炎的发病机理中起着一定的作用.方法 57只胎鼠随机分为两组;假手术组13只;缺血再灌注组44只.缺血再灌注组再分为Ⅰ组34只,缺血时间分别为5 min、10 min和20 min,再灌注组时间均为5 min.再灌注Ⅱ组21只,缺血时间均为10 min,再灌注时间分别为5 min、20 min.采用放射免疫的方法,检测57只胎鼠小肠组织NT的含量.结果 缺血再灌注Ⅰ组与假手术组相比,5 min时小肠组织NT含量均有降低,分别为(96±7)ng/mg与(140±12)ng/mg,且随着缺血时间的延长,NT含量进一步下降,以缺血10 min、20 min降低为明显[20 min时NTⅠ组为(56±6)ng/mg](P＜0.01).缺血时间相同,随着再灌注时间的延长,小肠组织的NT降低,再灌注20 min与再灌注5 min比较差异有显著性(P＜0.05).结论 宫内缺血再灌注能造成胎鼠小肠组织NT的降低.
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预防性应用天然蒙脱石对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤的保护作用
目的 探讨预防性应用天然蒙脱石对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing entero-colitis,NEC)模型肠损伤的保护作用及可能机制. 方法 按析因设计,32只新生SD大鼠随机分成4组,每组8只.A组为NEC模型,出生48 h起给予天然蒙脱石0.6 gl(kg·d)灌胃;B组为NEC模型,未添加天然蒙脱石;C组为对照,未添加天然蒙脱石;D组为对照,出生48 h起给予天然蒙脱石0.6 g/(kg·d)灌胃.SD新生大鼠出生后48 h开始采用鼠配方奶喂养,100%氮气90 s,4℃10 min,每天2次,连续3 d,建立新生大鼠NEC模型.A、B组在造模结束后24 h和C、D组新生大鼠空腹断头处死,留取十二指肠下端至直肠上端肠管进行肠细胞凋亡率检测(流式细胞仪)、电镜观察和血小板活化因子(platelet-actvating factor,PAF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量(ELISA 法)检测.所有新生大鼠均留取回盲部近端肠管进行肠组织损伤评分. 结果造模后,A、B组新生鼠相继出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少,生长减慢;透射电镜显示肠黏膜出现大量凋亡细胞,形成凋亡小体,A组程度较轻.A、B、C和D组肠组织损伤评分分别为1.42±0.36、3.54±0.50、0.13±0.17和0.17±0.18,肠细胞凋亡率为(11.6±4.6)%、(27.6±9.9)%、(4.8±2.9)%和(3.6±3.8)%,与B组相比,A组肠组织损伤评分和肠细胞凋亡率明显降低,但仍高于C、D两组(P均<0.01).A、B、C和D组肠组织PAF含量(单位为pg/mg prot)分别为385.0 4-308.0.1663.24-576.1、40.8±40.4和37.1±33.1,TNF-α含量(单位为pg/mg prot)为46.4±15.1、258.1±281.7、13.2±12.2和12.44-8.8.B组肠组织PAF、TNF-α含量明显高于C、D组;与B组相比,A组肠组织PAF、TNF-α含量明显降低(P均<0.01).肠组织损伤评分、肠细胞凋亡率及肠组织PAF、TNF-α含量均受造模和预防性应用天然蒙脱石两因素影响,造模与预防性应用天然蒙脱石之间存在交互作用. 结论 预防性应用天然蒙脱石可能通过减少肠细胞凋亡率,降低肠组织PAF、TNF-α含量,从而减轻肠损伤程度.
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表皮生长因子及其受体在新生鼠肠损伤中的动态变化
目的 检测新生鼠肠损伤时回肠组织表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、转化生长因子α(transforming growth factor-α,TGF-α)及表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)的动态变化,探讨其在新生儿坏死性小肠结肠炎中的作用. 方法 1日龄新生Wistar大鼠随机分为实验组40只和对照组8只.实验组腹腔注射5 mg/kg内毒素(lipopolysaccharide,LPS),对照组注射同等剂量无菌生理盐水.实验组大鼠于注射LPS后1、3、6、12和24 h处死后分离胃肠道,观察回肠组织形态学改变,测定肠组织EGF、EGFR蛋白表达及EGFR mRNA和TGF-αmRNA的动态变化,并与对照组进行比较. 结果 实验组于注射LPS后1、3、6、12和24 h回肠组织损伤评分分别为(1.28±0.62)分,(1.75±0.74)分,(1.98±0.75)分,(2.85±0.41)分和(2.35±0.63)分,均明显高于对照组(0.12±0.17)分(P<0.01);EGF蛋白水平分别为(235.9±44.3)pg/mgprot,(231.8±30.0)pg/mg prot,(223.3±48.1)pg/mg prot,(211.7±47.0)pg/mg prot和(221.4±39.0)pg/mg prot,显著低于对照组[(287.7±42.6)pg/mg prot](P<0.05),EGF浓度与肠损伤程度呈负相关(r=-1.000,P<0.01);注射LPS后EGFR蛋白和mRNA表达增加,但与肠损伤程度无相关性(r=0.800,P>0.05);TGF-α mRNA在注射LPS后1 h和3 h明显上调. 结论 EGF水平降低可能在新生儿坏死性小肠结肠炎发生发展中起关键作用.
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丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞株-6基质金属蛋白酶-3表达的影响
目的 探讨丁酸钠对大鼠小肠上皮细胞株-6(intestinal epithelial cell line No.6,IEC-6)细胞基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和组织金属蛋白酶抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响,为预防新生儿NEC提供理论依据.方法将对数生长期IEC-6细胞分3组进行实验,低浓度丁酸钠组:培养液中加入终浓度为2 mmol/L的丁酸钠;高浓度丁酸钠组:丁酸钠终浓度为14 mmol/L;另设不含丁酸钠的对照组.共培养24 h后获取细胞,采用逆转录聚合酶链反应技术检测MMP-3和TIMP-1 mRNA的水平.培养48 h后,采用Western印迹法检测MMP-3和TIMP-1蛋白的表达水平.组间差异比较采用单因素方差分析及Dunnett-t和Dunnett's T3进行两两检验.结果 高浓度丁酸钠组MMP-3 mRNA水平为0.566±0.140,MMP-3酶原水平为0.756±0.128,MMP-3活性形式蛋白水平为0.255±0.057,均较对照组(分别为0.166±0.041、0.312±0.057和0.042±0.038)明显升高,差异均有统计学意义(P均＜0.01).低浓度丁酸钠组MMP-3 mRNA水平(0.213±0.039)、酶原水平(0.407±0.088)和活性形式蛋白水平(0.103±0.050)与对照组差异均无统计学意义(P＞0.05).高、低浓度丁酸钠组和对照组TIMP-1 mRNA为0.427±0.042,0.383±0.043和0.355±0.048;蛋白水平分别为0.576±0.140,0.524±0.123和0.355±0.062,组间差异均无统计学意义(F=1.97和3.10,P均＞0.05).结论高浓度丁酸钠能选择性诱导IEC-6细胞MMP-3的表达,而低浓度丁酸钠对其没有明显影响.
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降钙素基因相关肽在新生儿坏死性小肠结肠炎发病机理中作用的实验研究
目的探讨新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)发病机理,为寻找其内源性保护物质提供实验室依据. 方法以健康7日龄Wistar新生鼠分组并制备缺血再灌注(I/R)及缺血预处理(IPC)实验模型,分别测定血浆降钙素基因相关肽(CGRP)浓度、乳酸脱氢酸(LDH)活性、小肠组织丙二醛(MDA)含量及湿重/干重(WW/DW)比值,并制备病理切片光镜下观察形态学变化. 结果实验各组血浆CGRP浓度除IPC组与IPC+I/R组差异无显著性外[(292±17 与282±19)pg/L(q=1.82,P>0.05)],其余各组间差异均有显著性[(124±10与162±24)pg/L(q=7.16);(124±10与292±17)pg/L(q=42.01);(162±24与292±17)pg/L(q=21.73,P值均<0.01)],IPC组CGRP较对照组及I/R组均明显升高.血浆LDH在I/R时较对照组明显升高[(190±24与46±9)U/L(q=26.70,P<0.01)],而在IPC组及IPC+I/R组较I/R组又有明显下降[(122±15与190±24)U/L(q=11.77);(138±15与190±24)U/L(q=6.39;P值均<0.01)].I/R时小肠MDA含量较对照组明显增加[(1.51±0.10与0.61±0.07)nmol/mg(q=36.12,P<0.01)],而在IPC及IPC+I/R时较I/R组则又明显下降[(0.68±0.08与1.51±0.10)nmol/mg(q=31.75);0.88±0.11与1.51±0.10)nmol/mg(q=20.76,P值均<0.01)].I/R时小肠组织水肿明显,WW/DW比值较对照组明显增大[(4.86±0.37与3.96±0.28)pro wt(q=9.50,P<0.01)],IPC则可明显减轻I/R所致的组织水肿[(4.31±0.33与4.86±0.37)pro wt(q=5.44,P<0.01)].组织形态学改变在IPC组无明显小肠粘膜损伤;而I/R组而表现小肠绒毛大量脱落、上皮细胞肿胀、正常细胞结构消失或溶解,绒毛间可见大量炎性及血性渗出. 结论本研究证实新生大鼠小肠存在IPC现象,且IPC对新生大鼠小肠I/R损伤具有显著保护作用;而CGRP可能是介导新生大鼠小肠IPC保护作用的重要内源性活性物质.
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肝素结合性表皮生长因子样生长因子在坏死性小肠结肠炎新生大鼠线粒体途径细胞凋亡中的作用
目的 探讨肝素结合性表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)在新生儿坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型线粒体途径细胞凋亡中的作用. 方法 新生无特定病原体Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组10只.NEC模型组:采用代乳品人工喂养,并给予100％氮气缺氧90 s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续3 d；HB-EGF干预组:在NEC模型组基础上予HB-EGF灌胃,每次800 μg/kg,每天4次,连续3d.正常对照组:鼠乳喂养3d,不予任何干预.大鼠生后72h禁食12h后处死.取回肠末端组织,HE染色观察病理改变并评分；电镜下观察线粒体超微结构变化；免疫组织化学方法检测细胞色素C含量；Western印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)及凋亡肽酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)的表达.组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 (1)HB-EGF干预组NEC发生率为2/10,低于模型组(9/10),差异有统计学意义(x2=7.27,P＜0.01)；对照组未发生NEC.(2)NEC模型组线粒体在肠上皮细胞及肌层细胞中存在明显肿胀,基质内有多数电子透亮区,线粒体超微结构严重损伤.HB-EGF干预组有少量线粒体肿胀,损伤较NEC模型组减轻.(3)NEC模型组回肠组织细胞色素C表达较对照组增强,差异有统计学意义(0.030±0.018与0.002±0.001,q=6.15,P＜0.01),HB-EGF干预组回肠组织细胞色素C表达(0.014±0.018)较NEC模型组减弱,差异有统计学意义(q=3.53,P＜0.05).NEC模型组的APAF-1表达较对照组增强(1.364±0.299与0.215±0.033,q=15.31,P＜0.05),AIF表达也增强(0.181±0.050与0.127±0.045,q=3.71,P＜0.05)；与NEC模型组比较,HB-EGF干预组APAF-1的表达(0.455±0.123)减低(q=4.04,P＜0.05),AIF的表达(0.289±0.045)则明显增强(q=7.32,P＜0.05). 结论 HB-EGF能降低新生大鼠NEC发生率,其机制之一可能是通过下调APAF-1表达而减少新生大鼠线粒体途径细胞凋亡.
关键词： 小肠结肠炎 坏死性 胞间信号肽类和蛋白质类 凋亡蛋白酶活化因子1 细胞凋亡 线粒体 大鼠 -
双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠道保护作用的机制
目的：探讨双歧杆菌防治新生大鼠坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis， NEC）的可能分子机制。方法出生2 h内的新生Sprague-Dawley大鼠75只，随机分为5组，每组15只：（1）NEC模型组：人工喂养+脂多糖；（2）双歧杆菌干预组：人工喂养+脂多糖+双歧杆菌；（3）人工喂养对照组：仅人工喂养；（4）双歧杆菌对照组：人工喂养+双歧杆菌；（5）母乳喂养对照组：与母鼠同笼鼠乳喂养。脂多糖按30 mg/kg每天灌胃1次，共3 d。双歧杆菌微囊按1×1010菌落形成单位/ml加入到代乳品中灌胃，每天1次。喂养72 h，末次喂养后空腹12 h，断头法处死大鼠。取末段回肠组织光镜下观察形态学改变并对肠道损伤评分，免疫组织化学法检测回肠组织 Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）2、TLR4、核转录因子（nuclear transcription factor，NF）-κB p65蛋白表达。采用Kruskal-Wallis检验、方差分析、校正χ2检验或Fisher精确概率法进行统计学分析。结果 NEC模型组、双歧杆菌干预组、人工喂养对照组、双歧杆菌对照组及母乳喂养对照组的NEC发生比例分别为11/15、4/15、3/15、2/15与0/15；肠道损伤评分分别为（3.37±0.27）、（1.53±0.44）、（1.75±0.37）、（0.92±0.39）与（0.30±0.18）分；TLR2蛋白表达分别为0.35±0.05、0.30±0.03、0.32±0.04、0.30±0.02与0.29±0.03；TLR4蛋白表达分别为0.48±0.05、0.34±0.03、0.36±0.03、0.37±0.04与0.35±0.02；NF-κB p65蛋白表达分别为0.43±0.03、0.29±0.03、0.35±0.02、0.32±0.02与0.30±0.02。5组的NEC发生比例、肠道损伤评分、TLR2、TLR4及NF-κB p65蛋白表达量比较，差异均有统计学意义（χ2、H或F值分别为23.836、70.290、8.803、38.599和75.076，P值均＜0.05），NEC模型组均高于其他4组（P值均＜0.05）。双歧杆菌干预组的NEC发生比例与3个对照组比较，差异均无统计学意义（P值均＞0.05）；肠道损伤评分高于双歧杆菌对照组及母乳喂养对照组（P值均＜0.01），但与人工喂养对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；TLR4和NF-κB p65蛋白表达量均低于人工喂养对照组和双歧杆菌对照组（P值均＜0.05），但与母乳喂养对照组比较，差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。双歧杆菌干预组TLR2蛋白表达量与3个对照组比较，差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。结论双歧杆菌可能通过抑制致病菌或通过TLR2负反馈调节等方式，减少肠黏膜细胞TLR2及TLR4的蛋白表达，并进一步抑制NF-κB通路，使炎症反应得以缓解，发挥对NEC的防治作用。
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新生儿坏死性小肠结肠炎80例临床分析
目的 总结分析新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)的临床表现和辅助检查特征. 方法 回顾性分析深圳市儿童医院2009年5月10日至2012年5月10日收治的80例NEC患儿的临床资料.记录患儿的胎龄、出生体重、喂养方式等一般情况,观察发病日龄、临床表现、实验室检查结果、腹部X线表现.采用方差分析和LSD法进行统计学分析.结果 (1)80例NEC患儿中,早产儿占57.5％(46例),低出生体重儿占55.0％(44例),人工喂养占75.0％(60例);临床表现以腹胀和呕吐多见,分别占75.0％(60例)和45.0％(36例);实验室检查大便潜血阳性者占60.0％(48例),C-反应蛋白＞ 10 mg/L者占32.5％(26例);腹部X线可见肠管充气扩张者占60.0％(48例),肠壁积气者占32.5％(26例).(2)胎龄≤30+6周、31～周、34～周及≥37周组NEC患儿的平均发病日龄分别为(18.0±3.1)d、(10.1±2.8)d、(6.5±2.3)d和(4.7±1.7)d,差异有统计学意义(F=16.6,P＜0.01).胎龄≤30+6周组患儿发病日龄晚于胎龄31～周、34～周及≥37周组(P均＜0.05).胎龄31～周组患儿发病日龄晚于胎龄≥37周组(P＜0.05).(3)治疗措施及预后:保守治疗55例,其中9例保守治疗1～4 d家属放弃治疗,25例因保守治疗24～48 h无效行手术治疗;直接手术治疗25例,其中消化道穿孔16例;除外放弃治疗的患儿,共有6例死亡病例,其中3例手术中发现全肠坏死,患儿死亡,2例因手术后腹膜炎病情严重,出现休克及DIC导致死亡,1例为保守治疗42 h需行手术但家属拒绝,患儿出现腹膜炎、休克及多脏器功能衰竭死亡. 结论 新生儿NEC进展快,预后差,且临床表现多不典型.监测白细胞计数、血小板计数、C-反应蛋白及腹部X线对于NEC的早期诊断及预后判断有重要意义.
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高通量测序技术检测新生儿坏死性小肠结肠炎患儿微小RNA的差异表达
目的：探讨新生儿坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis，NEC）患儿微小RNA（microRNA，miRNA）的差异表达情况及其意义。方法收集2014年10月至2015年11月在广州市妇女儿童医疗中心确诊为Bell分期Ⅱ期及Ⅱ期以上的NEC患儿25例，同期非NEC新生儿25例作为对照组。取外周血提取白细胞。随机选取对照组与NEC组各5例的标本，用Illumina二代高通量测序技术进行测序，筛选出有差异的miRNA，并进行靶基因预测及生物学功能分析。其余标本采用实时荧光定量-聚合酶链反应技术检测差异表达的miRNA的相对表达量，验证上述高通量测序的结果。应用DEGseq软件对2组数据的miRNA进行差异表达分析统计。P＜0.05为差异有统计学意义。以P＜0.01，q＜0.001，丨Log2 Ratio丨≥1作为差异表达的筛选标准。采用MeV4.6软件对NEC组与对照组差异表达的miRNA进行聚类分析。结果 NEC组与对照组有482个miRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05），其中126个为已知显著差异表达的miRNA，其中上调58个，下调68个。表达上调的 hsa-miR-223-5p、hsa-miR-183-3p 和 hsa-miR-222-5p，以及下调的 hsa-miR-23b-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-146a-3p 和 hsa-miR-1298-5p的验证结果与测序结果相符。生物信息学分析发现，在NEC患儿中有显著差异的miRNA的靶基因参与Toll样受体信号转导通路、丝裂原活化蛋白激酶通路、JAK-STAT等信号转导通路的调节。结论 NEC患儿外周血白细胞miRNA表达存在显著差异，这些miRNA可能通过调节不同靶基因来调控相关信号通路参与NEC的发生和发展。
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抗中性粒细胞胞浆抗体相关原发性小血管炎二例
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关原发性小血管炎主要指显微镜下型多血管炎(MPA)、韦格纳氏肉芽肿(WG)、过敏性肉芽肿性血管炎(churg-strauss syndrome,CSS),ANCA相关坏死性新月体性肾炎(NCGN)则被认为是原发性小血管炎的肾脏局限型.以往儿科报道较少,今年我院收治2例报告如下.
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暴发性紫癜的治疗进展
暴发性紫癜(purpura fulminans,PF)征候群又名坏疽性紫癜、坏死性紫癜、出血性紫癜,系儿科危重症,主要为广泛血管内血栓形成,临床表现酷似弥漫性血管内凝血(DIC).其临床特征为:突然迅速进展的对称性皮肤紫癜,累及全身皮肤,以下肢密集,与其他暴发性皮肤损伤不同的是皮疹可在几小时内由瘀点迅速增大融合为直径为数厘米的瘀斑,基底肿胀坚硬与周围组织分界清楚,颜色由鲜红渐变为暗紫色,坏死后成为黑色焦痂,浆液坏死区发生水泡或血泡,可融合成大泡,发疹的肢体可出现明显肿胀疼痛[1].本病病因不明,可发生于以下3种情况:急性感染引起的急性感染性暴发性紫癜,遗传性或获得性蛋白C缺陷或其他凝血障碍所致的凝血障碍性暴发性紫癜,以及原因不明的特发性暴发性紫癜[1].主要死亡原因为器官功能衰竭、DIC、肾出血[2].
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血清β-葡萄糖苷酶在诊断新生儿坏死性小肠结肠炎中的应用价值
目的 通过病例对照研究方法分析β-葡萄糖苷酶(Cytosolic β-Glucosidase,CBG)在新生儿坏死性小肠结肠炎患者血清中的浓度的变化,并进一步探讨血清β-葡萄糖苷酶与NEC的关系.方法 将我院NICU病房2009年8月至2010年8月住院期间的96例早产儿分为3组,早期NEC组(25例)、确诊NEC组(23例)、对照组(48例),用酶联免疫吸附法分别检测三组患儿血清β-葡萄糖苷酶浓度并同时监测CRP浓度及WBC计数,比较各炎症指标对诊断NEC的灵敏度、特异度、约登指数,评价它们对诊断该病的价值.结果 (1)三组患儿在出生性别差异无统计学意义(P＞0.05);出生体重分别为:(1761.3±319.4)g,(1951.9±428.6)g,(1893.7±315.7)g,校正胎龄分别为:(33.6±2.3)w,(35±2.1)w,(34.5±1.9)w,采样日龄分别为:(15.3±2.8)d,(14.7±2.3)d,(15.1±2.6)d,相比较无明显差异性(P＞0.05).3组患儿血清β-葡萄糖苷酶浓度分别为:(112.369±108.539)nmol/L,(693.013±211.614)nmol/L,(36.478±28.31)nmol/L,与对照组对比,早期NEC组、确诊NEC组血清β-葡萄糖苷酶浓度明显升高,且有统计学意义(P＜0.05);与早期NEC组比较,确诊NEC组血清β-葡萄糖苷酶浓度明显升高(P＜0.05).(2)以CBG≥65 ng/ml,CRP≥2 mg/L,WBC计数为＜5×109/L,或出生后3 d＞加×109/L为阳性标准,三指标对诊断NEC的灵敏度分别为93.8%、85.4%、43.8%,其中CBG与CRP比较差异无显著意义(P＞0.05),但均高于WBC计数(P＜0.05),其中CBG的特异度87.4%、约登指数81.3%.(3)CBG与CRP之间存在正相关,相关系数为0.379,P＜0.01.结论 血清β-葡萄糖苷酶在NEC早期即出现增高,且与NEC程度有较好的相关性;血清CBG可能成为NEC早期诊断的一个敏感指标.
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糖巨肽对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠组织损伤及肠上皮细胞凋亡的影响
目的 建立新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型,探讨糖巨肽对NEC新生大鼠肠道的保护作用.方法 36只SD新生大鼠采用抽签法随机分为NEC模型组、糖巨肰干预组和正常对照组,每组12只.大鼠出生后第1～3天均为母乳喂养；在第4～6天,正常对照组继续母乳喂养,而NEC模型组和糖巨肽干预组则通过人工喂养+缺氧复氧冷刺激的方法进行造模.第6天喂养结束后三组大鼠均置于保育箱中空腹24h,然后用颈椎脱臼法处死大鼠,取回盲部近段回肠组织进行固定、切片,行病理检查、TUNEL凋亡检测和电镜检查；同时取回盲部附近肠段制备组织匀浆,检测肠组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的含量,并采用荧光定量PCR的方法检测PAF mRNA的表达.结果 (1)病理评分:NEC模型组为(2.17±0.83)分,糖巨肽干预组(0.92±0.79)分,正常对照组(0.17±0.39)分,糖巨肽干预组与NEC模型组比较,差异有统计学意义(H=8.819,P=0.003)；(2)肠组织TNF-α水平:模型组(41.94±13.51)pg/ml,干预组(31.69±11.68) pg/ml,正常组(17.42±7.18)pg/ml,干预组与模型组相比,差异有统计学意义(F=3.959,P=0.030)；(3)肠组织IL-1β水平:模型组(150.33±36.41) pg/ml,干预组(118.36±33.00)pg/ml,正常组(28.44±15.04) pg/ml,干预组与模型组相比,差异有统计学意义(F =5.080,P=0.013)；(4)肠组织PAF mRNA表达水平(2- △△C1值):模型组为(3.01±0.96),干预组为(1.56±0.29),正常组为(1.01±0.13),干预组与模型组比较,差异有统计学意义(F=25.251,P=0.000)；(5)电镜观察:正常对照组可见其细胞核占细胞体积的大部分,结构清晰,有核膜包被,提示正常细胞相；NEC模型组可见凋亡小体,提示凋亡晚期相；糖巨肽干预组可见染色质靠核膜边集,核孔扩大,提示凋亡早期相；(6)TUNEL检测肠上皮细胞凋亡率:NEC模型组为(38.79±9.79),糖巨肽干预组为( 29.54±7.30),正常对照组相为(6.37±1.96),糖巨肽干预组肠上皮细胞凋亡率低于NEC模型组,两组比较,差异具有统计学意义(F =6.888,P=0.003).结论 在人工喂养条件下,缺氧、复氧和冷刺激方法的NEC造模成功率为75％ (9/12).糖巨肽对NEC新生大鼠肠道具有保护作用.
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中药山豆根中毒致亚急性基底节坏死性脑病一例
患儿男,7岁,因姿势异常6个月于2005年入院.6个月前患儿因自幼易患"扁桃体炎",就诊于当地中医所,给予中药"山豆根"煎煮口服,每天15 g.服用至第23天时,患儿出现频繁呕吐,为非喷射性.
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红细胞输注对早产儿肠道组织氧合的影响
目的 探讨红细胞输注对早产儿肠道组织氧合的影响.方法 前瞻性队列研究,选取2017年6月至2018年3月复旦大学附属儿科医院新生儿科收治的出生胎龄＜37周并输注红细胞治疗的早产儿,按照喂养不耐受标准分为喂养不耐受组和喂养耐受组.利用近红外光谱监测仪持续监测患儿红细胞输注前2h、输注过程中至输注后48 h肠道组织氧饱和度(rSO2)变化.两组患儿基本情况的比较采用t检验、Mann-Whitney U检验和X2检验,采用混合线性模型比较两组患儿肠道rSO2随时间变化的组内和组间差异.结果 共纳入符合条件的患儿73例,其中男41例、女32例,平均出生胎龄(30±4)周,平均出生体重(1 543±688)g;喂养不耐受组33例,喂养耐受组40例.喂养不耐受组输血前2h,输血过程中,输血后2、6、12、24、48 h肠道rSO2平均值分别是0.50±0.07、0.52±0.07、0.52±0.08、0.51±0.08、0.51±0.07、0.51±0.08、0.51±0.07;喂养耐受组分别为0.51±0.04、0.55±0.04、0.57±0.05、0.57±0.04、0.56±0.04、0.56±0.04、0.56±0.05;与红细胞输注前2h比较,喂养不耐受组患儿红细胞输注过程中肠道rSO2升高(t=4.992,P=0.000),而喂养耐受组患儿红细胞输注过程中肠道rSO2升高(t=9.615,P=0.000),且此作用一直持续至红细胞输注后48 h(t=5.519、12.409、10.033、9.133、7.983,P均=0.000);喂养不耐受组患儿肠道rSO2随时间增加幅度较喂养耐受组患儿小(F=8.876,P=0.000);矫正胎龄越小的患儿,肠道rSO2越低(F=4.863,P=0.031),尤其是喂养不耐受组矫正胎龄＜30周的患儿红细胞输注后2h肠道rSO2较红细胞输注前2h明显降低(t=23.063,P=0.002).结论 喂养情况和矫正胎龄可能在早产儿输血相关性坏死性小肠结肠炎的发生发展中起着一定作用,尤其是喂养不耐受矫正胎龄＜30周的早产儿红细胞输注可能会增加肠道缺血的风险,更易引起早产儿坏死性小肠结肠炎.临床试验注册 复旦大学附属儿科医院,NCT02544100.
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新生儿坏死性小肠结肠炎影像学与临床相关性的回顾分析
目的 回顾性分析新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)影像学表现与临床的关系,提高对其影像学的认识及诊断水平.方法 选取2006年1月1日至2011年12月31日,重庆医科大学附属儿童医院新生儿内、外科收治NEC患儿211例,对其影像学进行总结,分析患儿影像学指标与临床表现及手术的关系.结果 211例中,腹部X线平片无明显变化的40例(19.0％),腹部X线平片动态好转的47例(22.3％),腹部X线平片动态进展恶化的23例(10.9％).腹部X线平片无变化组,预后好与预后差阳性率分别为97.5％、2.5％,腹部X线平片好转组,预后好与预后差阳性率分别为97.9％、2.1％,腹部X线平片恶化组,预后好与预后差阳性率分别是56.5％、43.5％,3组差异有统计学意义(X2 =31.742,P ＜0.01).腹部X线平片和腹部B超诊断气腹的阳性率分别为16.0％(12/75)和1.3％(1/75),(x2=10.191,P＜0.05),对门脉积气的阳性率分别为1.3％ (1/75)、12.0％(9/75),(x2=6.857,P＜0.05).手术时机选择与腹部X线平片显示为气腹(OR=19.543)及肠梗阻(OR=19.527)关系密切(P＜0.01).结论 腹部X线平片是检查NEC的主要方法,腹部X线平片对气腹检测阳性率高,腹部B超对检出门脉积气更敏感,两者互相补充.手术时机选择与腹部X线平片查出气腹或肠梗阻关系为密切.
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输血与新生儿坏死性小肠结肠炎相关性的Meta分析
目的 定量评价输血与新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)发病之间的联系.方法 通过电子资源数据库搜索1985年1月1日至2011年11月1日期间发表的以输血和坏死性小肠结肠炎为研究内容的中英文病例对照研究,对研究结果进行综合总结及Meta分析,以RevMan 5.0软件计算输血后发生NEC的比值比(OR)及95％可信区间(CI),并进行敏感性分析和发表偏倚分析.结果 共纳入7篇病例对照研究文献,累计病例480例,对照2845例.用Meta分析的随机效应模型得出输血后发生NEC的比值比OR =3.35,95％ CI=(1.54,7.27).敏感性分析表明输血48 h内发生NEC的OR=4.21,95％CI=2.17 ～8.16,而控制胎龄和出生体重等混杂因素后OR=4.29,95％ CI=1.39～ 13.24.失安全系数=263.结论 输血能增加NEC患病的危险性.
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危重评分预测新生儿坏死性小肠结肠炎预后62例回顾分析
目的 探索新生儿急性生理学评分Ⅱ(SNAP-Ⅱ)和新生儿紧急生理学评分围产期补充-Ⅱ(SNAPPE-Ⅱ)预测新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)手术风险及预后的价值.方法 2001年10月至2011年10月对浙江大学医学院附属儿童医院新生儿重症监护室,收治的62例NEC患儿进行回顾性分析,按照是否接受手术分为手术组和非手术组,按预后分为存活组和死亡组.统计患儿的一般资料、早期症状、实验室检查、治疗方法、预后,并根据每例患儿诊断NEC当日的指标进行SNAP-Ⅱ和SNAPPE-Ⅱ评分.结果 腹胀是NEC早期常见症状,占91.9％ (57/62),其次常见症状包括胃潴留、血便等.手术组的SNAP-Ⅱ和SNAPPE-Ⅱ评分(26.5、26.5)高于非手术组(13.0、13.0)(P=0.002、0.006),死亡组的SNAP-Ⅱ和SNAPPE-Ⅱ评分(29、32)高于存活组(8、8)(P=0.000、0.000).SNAP-Ⅱ和SNAPPE-Ⅱ评分预测手术的工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分别为0.745和0.714,SNAP-Ⅱ和SNAPPE-Ⅱ评分预测死亡的ROC曲线AUC分别为0.916和0.929.SNAP-Ⅱ和SNAPPE-Ⅱ评分预测手术的佳值分别为22和28,预测死亡风险的佳值分别为19和22.结论 SNAP-Ⅱ及SNAPPE-Ⅱ评分作为疾病严重度的指标,能预测NEC的预后及手术风险,对NEC诊断早期预测其死亡危险性有重要意义.
