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人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究
为了解人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的结构,本研究构建了EV-D68 3A蛋白可溶区的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化并对其结构进行了初步研究.首先,采用PCR的方法扩增EV-D68 3A(1～61)基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a-His-SUMO中,转化进入BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达出His-SUMO-3A(1～61)融合蛋白.经Ni NTA树脂亲和层析初步纯化后得到大量融合蛋白,利用ULP酶酶切去除His-SUMO标签,通过Ni-NTA树脂亲和层析、阴离子交换层析柱、分子筛层析等方法分离标签并进一步纯化目的蛋白.后通过化学交联反应检测目的蛋白的多聚化状态.结果显示,利用pET28a-His-SUMO-3A(1～61)原核表达载体能够在大肠杆菌中成功表达出大量可溶性的融合蛋白;经过多步纯化方法得到了大量高纯度的目的蛋白,平均每升大肠杆菌可得到约5mg目的蛋白,纯度达95％以上;通过化学交联反应证明了该蛋白的多聚化存在形式.本研究成功建立了EV-D68 3A蛋白可溶区的表达和纯化系统,为进一步获得3A蛋白晶体、研究3A蛋白功能以及设计以3A为靶点的抗病毒药物奠定了基础.
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激素性骨质疏松症发病机制的研究进展
激素性骨质疏松症是临床使用糖皮质激素后常见的副作用,对于激素性骨质疏松的发病机制,从信号通路的层面研究来看,糖皮质激素可以通过抑制骨形成的Wnt/β-catenin、BMPs等信号通路和促进骨吸收的OPG/RANKL/RANK等信号通路引起骨质疏松.近年来对自噬通路和非编码RNA等通路调节因子的研究发现其对激素性骨质疏松的形成有着重要的作用,而且部分通路间的交联反应也被证实是激素性骨质疏松发生的介导因素,这为激素性骨质疏松发病机制的研究提供了新的方向.但是,我们目前的研究层面很可能只是这个复杂的调控网络中的冰山一角,许多通路和调节因子的研究仍处于起步阶段,具体机制很多未完全阐明,仍需要更多的基础和临床实验去完善这个调控网络.本文拟对激素性骨质疏松的发病信号通路及相关通路调节因子研究现状进行综述,为该疾病的靶向治疗提供新的研究方向.
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评价软胶囊中明胶交联反应的相关指标间的相关性及影响因素
目的评价明胶交联反应指标间的相关性,考察影响软胶囊中明胶交联反应的因素,探讨软胶囊溶出迟缓机理.方法采用甲醛处理软胶囊囊壳模拟交联反应,进行明胶溶胀动力学和溶出度实验,采用TNBS法测定ε-氨基酸含量.应用差示热扫描分析明胶结构的变化.结果明胶交联后,平衡膨胀量(Seq)、百分溶出量和氨基酸含量之间呈良好线性关系;平衡膨胀量、氨基酸含量与软胶囊崩解时间呈良好线性关系;在40℃或光照[(4 500±500)lx]条件下放置的软胶囊囊壳的Seq显著低于室温避光下放置的软胶囊(P＜0.01);甘氨酸和焦亚硫酸钠能有效阻止Seq的降低;明胶发生交联后,分子中螺旋-卷曲转变消失.结论明胶平衡膨胀量(Seq)、百分溶出量和氨基酸含量从不同角度反映交联反应程度,有良好相关关系(r=0.995 3-0.998 5);高温、光线会促发明胶交联反应;抗氧剂能延缓交联反应的发生;明胶分子中螺旋-卷曲转变消失,水化作用减弱,是软胶囊溶出迟缓的主要原因.
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晚期糖化终产物的临床检测与应用进展
还原糖如葡萄糖的羰基与蛋白质、核酸或含胺的脂质等生物大分子通过非酶糖基化作用形成可逆产物Schiff碱和Amadori产物,后者再经过一系列分子重排形成不可逆的聚合物,该反应过程称为Mailland反应,所产生的系列聚合物被称为晚期糖化终产物(advanced glycation end products,AGEs).该类聚合物呈棕黄色,具有难降解、易发生交联反应等特征,部分还具有荧光特性.已有研究发现AGEs在糖尿病及其并发症、肾脏疾病、心血管疾病等慢性疾病的病理机制中有重要的作用[1].因此,检测体内AGEs含量对多种疾病的预测、诊断及治疗均具有重要的意义.然而,由于AGEs的结构复杂多样,目前仍缺乏标准的检测方法.近年来检测AGEs的各种新手段被不断应用于临床多种疾病的研究之中,现就AGEs的临床检测与应用进展综述如下.
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氧化壳寡糖交联脱细胞猪真皮基质的研究
目的：对氧化壳寡糖（OCOS）交联脱细胞真皮基质（pADM）后的性能进行评价。方法将一定质量OCOS溶于缓冲溶液中，将pADM浸没在该体系中，在特定温度下交联改性一段时间。考察反应温度、pH值、用量和反应时间对基质材料收缩温度的影响，通过红外光谱、原子力显微镜、孔隙率、热稳定性、耐酶降解性、细胞毒性等对交联前后基质材料的结构、性能进行表征。结果优交联改性条件为反应温度37℃，反应时间16 h，OCOS用量8%，pH 8.4。优条件下交联改性，得到的材料（OCOS-pADM）收缩温度可以达到78.4℃，红外光谱中胶原的3个特征吸收峰仍然存在，原子力显微镜下可明显观察到纵向上的D周期明暗条纹，改性后材料孔隙率变大，差示扫描量热法表征改性后材料热变性温度达80.44℃，7 d后降解率仅为7.5%±1.7%，细胞毒性评级为1级。结论改性后基质各方面性能均有所提高，胶原天然结构没有遭到破坏，细胞毒性测试中细胞形态良好，初步具备作为生物材料所需的条件。
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高压锅水浴法修复组织抗原和微波染色并用的体会
目前,免疫组织化学染色技术的出现,是病理学发展史上的一次革命.免疫组织化学特异性高、简便易行,无论在临床病理诊断,还是病理研究领域,都起着十分重要的、不可缺少的作用.但日常工作中所使用的10%甲醛固定的石蜡包埋组织常产生蛋白交联反应,遮蔽了组织内某些蛋白抗原,使抗体不能与抗原结合,导致免疫组织化学染色呈假阴性结果,影响了病理诊断的结果及科研的结论.用于免疫组织化学的抗体近千种,不同抗体对病理切片的抗原修复要求也不尽相同.
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牙周细胞在离子化胶原表面的黏附与生长
目的:评价离子化胶原对不同交联剂的作用及交联后对牙周细胞的黏附与生长的影响.方法:实验于2006-10/2007-01在四川大学生物材料工程研究中心实验室完成.①通过胶原蛋白与甲醇在低温反应得到化学修饰离子化胶原,将胶原海绵和离子化胶原海绵分别与戊二醛、碳化二亚胺,京尼平在室温条件下发生交联反应,控制交联剂的终质量分数为0.006,交联时间均为24 h.②通过测溶液中羟脯氨酸含量测交联产物的交联度;用胶原酶测交联产物体外降解时间:通过牙周细胞在交联产物上的生长情况(A70nm)确定交联产物对细胞的作用.结果:①吸液率和交联度:离子化胶原与各交联剂交联后吸液率都低于胶原交联后,交联度相应提高,胶原和离子化胶原与戊二醛交联其交联度高,分别为81%,85%.②降解率:离子化胶原的降解率总的趋势低于胶原样品,离子化胶原、胶原被炭化二亚胺交联后,其降解率分别为0.5%,45.0%.③牙周细胞生长情况:离子化胶原交联产物上牙周细胞A570nm值高于胶原交联产物.结论:离子化胶原在交联过程中显示了较好的抗生物降解性能,离子化胶原交联产物在牙周细胞培养过程中显示出了低的细胞毒性,提示其对牙周细胞黏附与生长具有促进作用,可以代替胶原应用于牙周组织治疗.
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改良环氧树脂的几点改进
作者曾撰文介绍采用改良环氧树脂制作人体管道铸型标本的技术方法[1～3],制作出的铸型既具有很强的支撑力,又有较好的柔韧性,铸型效果都较理想.但是,在配制过程中,常用胺类(乙二胺)作为环氧树脂的固化剂,由于两者在搅拌时交联反应过快,使局部热量聚集不易及时散开而导致剧烈的化学反应造成填充剂硬化,从而影响铸型标本的质量.鉴于此,我们改用EP型固化剂替换胺类,简化了操作步骤,并提高铸型标本的质量,现报道如下:
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明胶冻力对尼莫地平软胶囊溶出稳定性的影响
将不同来源和冻力差异的明胶制成软胶囊和胶皮后,通过测定软胶囊的溶出度、胶皮的平衡膨胀量和氨基酸残基含量,考察软胶囊的稳定性,对明胶的组分进行分离和测定,考察其交联反应活性.结果显示,加速条件下放置90 d后,软胶囊的溶出度显著降低(P<0.05),且明胶冻力越高,溶出度越低,胶皮的平衡膨胀量和ω-氨基酸残基含量亦有相同变化.DSC图谱显示,考察后样品囊壳吸热峰向温度较高的区域偏移,且明胶冻力越高,偏移幅度越大.明胶分子主要含有α、β和γ等组分,其中α组分与明胶的冻力有良好的相关性,各组分的交联反应活性依次为α>β>γ.
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海藻多糖植物空心胶囊的体内生物利用度与生物等效性
药用空心胶囊是一种药用辅料,主要应用于药物固体制剂,一般由动物明胶作为主要的成膜材料,并已有百年历史.近年来,明胶空心胶囊的弊端逐渐显现,特别是明胶空心胶囊的含水量高,对药物稳定性要求较高,易与含醛基的化合物发生交联反应等,另外,由于穆斯林宗教的禁食和潜在的动物源传染病等原因,人们开始寻找植物性成膜材料来替代动物明胶制备药用空心胶囊.
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抑制乙酰螺旋霉素胶囊产生交联反应的工艺探讨
目的 乙酰螺旋霉素胶囊在贮藏1年以后,因明胶胶囊渐渐地发生交联反应,在有效期内,出现溶出度不合格现象.通过本次工艺探讨,找出解决溶出度不合格的方法 .方法 通过在乙酰螺旋霉素胶囊处方加入、未加入交联抑制剂,在加速试验条件下,对明胶交联反应的发生的情况进行对比.结果 通过6个月的加速试验考查加入交联抑制剂的产品溶出度符合规定;而未加入交联抑制剂的产品,在加速试验考查2个月时就出现不合格.结论 加入交联抑制剂,可抑制明胶反应的发生,明显改善该产品的溶出度,达到试验的目的 .
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明胶硬胶囊的交联反应和溶出
目的考察明胶硬胶囊的交联及对体内、外性能的影响.方法比较胶囊所包裹的药物的生物药效率.结果与结论明胶的交联反应不影响药物的溶出.
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脱镁叶绿酸分离及与萘普生交联物的制备
目的 分离纯化脱镁叶绿酸,将脱镁叶绿酸与萘普生交联,合成一种易于在体内释放的新化合物.方法以丙酮提取,乙醚萃取,盐酸脱镁,从中药蚕砂中分离出脱镁叶绿酸.用二氯亚砜将萘普生酰氯化,在氮气保护下与脱镁叶绿酸交联,以硅胶柱层析分离产物.以高效液相色谱(HPLC)测定其纯度,以红外光谱判断其交联成功性.结果 HPLC测定其纯度为98%,红外光谱显示脱镁叶绿酸和萘普生形成了酸酐交联.结论脱镁叶绿酸与萘普生的交联反应是可行的.
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纤维蛋白形成与降解
血栓形成的终时相是纤维蛋白原在凝血酶的作用下转变成纤维蛋白凝块.初,纤维蛋白原在凝血酶的水解作用下生成纤维蛋白单体.随之,纤维蛋白单体开始集中,形成纤维蛋白二聚体及多聚体.纤维蛋白多聚体在因子的作用下发生交联反应,形成稳定的纤维蛋白凝块.从此,血栓形成告终.由凝血系统构筑的止血防线是用于防止血液从损伤的血管流失.而纤维蛋白溶解系统则是以降解血栓的方式限制血栓范围的扩大和延伸,防止血管阻塞和保持血流通畅.
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非酶糖基化与血管老化的关系
以非酶糖基化衰老学说为依据,系统回顾了生理及病理状态下,非酶糖基化反应作用于血管,造成血管损伤的相关文献,证实了随着增龄,机体的非酶糖基化程度逐渐加深,并可通过多种途径作用于血管,引起血管与老化相关的一系列形态与功能的改变.文章试通过对非酶糖基化与血管衰老二者关系的初步探讨,为今后延缓血管老化的研究提供相应的理论依据.
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Gremlin和BMP7在纤维化疾病中的作用
Gremlin是进化上高度保守的分泌型糖蛋白,属于骨形态蛋白拮抗剂家族成员,在个体胚胎发育过程中肺、肾等器官的形态形成过程中起重要作用,并参与成熟组织器官功能的维持.Gremlin通过与BMP直接结合,阻断BMP与受体结合,而拮抗BMP的生物学活性.TGF-β是目前已知的重要的促纤维形成因子,参与肾、肺、肝、眼、心等组织器官的纤维性病变.BMP7和TGF-β同属于TGF-β超家族成员,两者所介导的信号途径存在交联反应,共同参与调节正常生理活动及某些疾病的发生发展.迄今的研究证明Gremlin和BMP7均与纤维化病变的发生发展有关,且相互间可能存在调控与被调控的机制.
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羧甲基淀粉钠溶胀度影响因素
羧甲基淀粉钠(C8H11O7Na),简称CMS,是一种与羧甲基纤维素(CMC)结构和性质十分相近的新一代淀粉衍生物,有“工业味精”之称.本文主要考察了氯乙酸用量,氢氧化钠用量,酒精用量,反应温度和氯乙酸与氢氧化钠配比对溶胀度的影响,通过实验得出了氯乙酸与氢氧化钠佳配比为1∶2,佳反应温度为55℃,很大程度的提高了羧甲基淀粉钠的溶胀度.
