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多囊卵巢综合征患者BMP-7异常表达对颗粒细胞增殖的影响
目的 探讨PCOS患者颗粒细胞内BMP-7的异常表达对颗粒细胞增殖的影响.方法 将44例行体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)或卵胞质内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的患者分为PCOS组(33例)与正常排卵对照组(11例),检测并比较两组颗粒细胞的BMP7、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,采用流式细胞仪对患者颗粒细胞的凋亡率进行检测分析.结果 与两组腰臀比(WHR)及超排天数比较,差异无统计学意义;PCOS组年龄、FSH及Gn用量均低于对照组,而BMI、LH、E2、T值高于对照组,差异均有统计学意义.PCOS组颗粒细胞凋亡细胞的DNA含量高于对照组,卵丘颗粒细胞内Bcl-2低于对照组,Caspase-3转录水平PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义,而两组BMP7转录水平差异无统计学意义.结论 PCOS患者颗粒细胞内BMP7的异常表达可能是影响颗粒细胞增殖能力的原因之一.
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加味桔梗汤治疗实验性肺纤维化的初步观察
肺纤维化是临床常见的疑难病,其发病的机制还不十分清楚,治疗方法仍很有限,尚未找到有效的治疗方案[1].近年来,许多学者尝试用中医药治疗本病,虽然目前仍处于探索阶段,却已显示出了良好的前景[2],但其作用机理尚不十分清楚.本课题组追踪该领域国际新研究动态,与耶鲁大学医学院合作,初步观察加味桔梗汤对实验性肺纤维化的治疗效果并探讨其可能的治疗机理,为指导今后临床应用提供实验依据.
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大鼠及人先天性肛门直肠畸形中Wnt5a及BMP7基因的表达研究
目的 探讨Wnt5a及骨形成蛋白7(BMP7)基因在先天性肛门直肠畸形中的表达.方法 将已受孕的大鼠(35只)根据是否胃管注入乙烯硫脲(ETU)以及是否存在肛门直肠畸形分为对照组(12只)、ETU无畸形组(8只)和ETU畸形组(15只).RT-PCR检测妊娠第13、14、15、16天大鼠直肠及泄殖腔Wnt5a和BMP7的mRNA表达;Western blot检测妊娠第16天大鼠直肠Wnt5a和BMP7的蛋白表达;高位畸形、低位畸性患者及非胃肠道疾病死亡,分为高位畸形组、低位畸形组和对照组,RT-PCR和Western blot分别检测直肠末端Wnt5a和BMP7的mRNA和蛋白表达.结果 ETU组大鼠的Wnt5a及BMP7基因的mRNA表达在4个时间点均显著低于对照组,差异均有显著统计学意义(P＜0.01);ETU畸形组大鼠的Wnt5a和BMP7的蛋白表达显著低于对照组,差异均有显著统计学意义(P＜0.01),而大鼠ETU无畸形组Wnt5a和BMP7的蛋白表达与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);人高位畸形组大鼠的Wnt5a和BMP7的mRNA和蛋白表达均显著低于对照组,差异均有显著统计学意义(P＜0.01),而人低位畸形组Wnt5a和BMP7的mRNA和蛋白表达与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Wnt5a和BMP7基因的表达下降可能与先天性肛门直肠畸形有关.
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人骨形成因子7基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达
BMP7是骨形成因子家族的一个成员,它不仅是一个重要的成骨生长因子,而且在糖尿病肾脏损伤保护和逆转中扮演重要的角色.干细胞治疗已经逐渐发展为糖尿病肾病治疗的一种有效手段,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是BMP7的体内天然分泌细胞.本研究旨在通过构建BMP7重组慢病毒表达载体,感染MSCs,并进行鉴定,从而建立BMP7高表达的MSCs细胞系.首先通过PCR法扩增BMP7基因的蛋白编码序列,并克隆入pCDH-BMP7慢病毒载体,其后与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,将慢病毒感染小鼠MSCs,荧光显微镜下鉴定感染率.后,采用定量PCR和Western blot检测BMP7的表达.测序结果表明pCDH-BMP7慢病毒载体构建成功,包装病毒产生的病毒液滴度为5×108 TU/ml,慢病毒感染小鼠MSCs的转染率高于75％,定量PCR和Western blot结果均显示BMP7表达比对照组显著升高.结果表明BMP7重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度滴度病毒液,感染小鼠MSCs能稳定过表达BMP7蛋白,为进一步探索高表达BMP7的MSCs治疗糖尿病肾脏损伤的研究提供实验基础.
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骨形成因子7的分子功能研究进展及在老年医学中的应用
骨形成因子属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族中的一个亚群,BMP7是骨形成因子家族的一个成员,天然hBMP-7存在同源和异源二聚体形式,二聚体形式的hBMP-7是其生物学活性主要形式.糖尿病肾病和前列腺癌是两种常见的老年疾病,近年来发现BMP7是一个重要的功能性生物活性分子和疾病标志物,在糖尿病肾病、前列腺和乳腺肿瘤等领域均扮演重要的角色并发生表达变化.本文结合国内外新研究进展,综述了BMP7的功能、信号调控和体外表达及其在糖尿病肾病等老年疾病中的应用.
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BMP7基因真核表达载体的构建及荷瘤小鼠制备
目的 克隆BMP7基因及构建BMP7基因真核表达载体,稳定转染于H22细胞系,制备荷瘤小鼠.方法 应用RT-PCR技术从人胚肾细胞系293T细胞总RNA中成功扩增出1 293 bp包含BMP7基冈编码区的cDNA序列,在上下游加上BamHI及HindⅢ双酶切位点后形成带酶切位点的BMP7基因,然后连入含BaraH Ⅰ及HindⅢ双酶切位点的pEGFP-C1表达质粒上,构建BMP7基因的重组真核表达质粒pEGFP-C1- BMP7.脂质体介导方法转染细胞,RT-PCR、western-blot方法检测其mRNA及蛋白表达,皮下注射制备荷瘤小鼠.结果 扩增的cDNA经测序比较与基因文库完全一致；BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,质粒形成约4.7 kb和约1.3 kb两条带,与理论计算值完全一致.注射转染BMP7基因后H22细胞小鼠瘤体明显增大.结论 成功克隆BMP7基因及构建BMP7基因的真核表达载体.BMP7基因高表达可能是细胞癌变的原因之一.
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三七皂苷对糖尿病大鼠肾脏骨形成蛋白7表达的影响
目的:观察三七皂苷(PNS)对糖尿病(DM)大鼠肾脏骨形成蛋白7(BMP7)表达的影响,探讨PNS对DM大鼠肾脏的保护作用及其机制.方法:以四氧嘧啶复制DM大鼠模型,动物分为正常组、模型组、PNS高、低剂量[生药含量分别为PNS200mg/(kg·d),100mg/(kg·d)]治疗组.生化检测空腹血糖(FBG)、尿素氮(UN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及尿蛋白(Upro);HE染色光镜观察肾组织形态学改变;免疫组化检测BMP7蛋白表达.RT-PCR检测mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,Cr、Upro、TC、TG(P<0.01)水平升高,肾小球基底膜增厚,TGFβ1 mRNA表达增加,BMP7表达减少.PNS治疗组大鼠,以上生化指标都降低,肾小球纤维化程度减轻,TGFβ1 mRNA表达减少,BMP7表达增加,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01).结论:三七皂苷可能通过增加BMP7表达,进而对DM大鼠肾脏具有保护作用.
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肾衰泄浊汤对BMP7、TGFβ1调节作用的探讨
目的:观察肾衰泄浊汤对肾间质纤维化大鼠肾组织骨形态蛋白-7(BMP7)、转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白的调节作用.方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,将72只大鼠分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组及苯那普利组,观察术后第7d、第14d梗阻侧大鼠肾组织病理改变及BMP7、TGFβ1蛋白表达.结果:第7d、第14d中药各组和苯那普利组大鼠BMP7较假手术组减弱,但较模型组增强;而TGFβ1则相反,且BMP7与TGFβ1呈明显负相关.结论:该方可能是通过诱导BMP7表达,抑制TGFβ1表达,减轻肾间质纤维化.
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BMP7对小鼠诱导多能干细胞骨向分化作用的研究
目的:探讨骨形态蛋白(bone morphogenetic protein,aMP)超家族成员之一BMP7在小鼠诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS)骨向分化过程中的作用.方法:本试验分成三组,分别是自发分化组,骨诱导组和添加BMP7的骨诱导组.每天观察各组细胞形态学特征及生长状况的差异,在诱导第14天通过茜素红染色检测基质矿化情况,判断BMP7在体外骨诱导条件下对小鼠iPS细胞骨向分化过程所发挥的作用.结果:完成了小鼠iPS细胞的培养鉴定,并诱导形成理想状态的拟胚体(Embryoid body,EB)用于分化接种.结果发现,添加BMP7的骨诱导组细胞的矿化结节阳性率明显增加.结论:BMP7在诱导小鼠iPS细胞骨向分化过程中起促进作用,而对非骨向分化的细胞无成骨促进作用.
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Shh、Bmp4及Bmp7与前列腺增生的分子生物学研究
良性前列腺增生症(benign prostate hyperplasia,BPH)是老年人常见的疾病之一.顾方六等在1995年调查了北京40岁以上城乡居民419人前列腺增生的发病率,40岁～为10.2%、50岁～为17.8%、70岁以上达50.0%[1].上海仁济医院在90年代中期对上海市1582例40岁以上男性前列腺增生的调查发现,40岁～的发病率为15.3%,而50岁～则升高到34.8%,70岁以上将近50%[2].前列腺增生导致的尿频、尿急,夜尿增多等临床症状严重影响了老年人的生活质量.目前,BPH的发病机制尚未完全阐明,其中激素内分泌学说、上皮-间质细胞相互作用学说等曾被研究.现今主要的研究热点集中在分子生物学基因调控方面,以下就目前良性前列腺增生与一些生长因子的研究作一综述.
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骨形成蛋白7在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义
[目的]观察骨形成蛋白7(BMP7)、转化生长因子β1(TGFβ1)在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及其与病程的关系，以探讨BMP7在糖尿病肾病发病中的作用。[方法]64只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组各32只。以四氧嘧啶复制糖尿病模型。动态观察空腹血糖(FBG)、24h尿微量蛋白，光镜(PAS染色)观察肾脏病理，RT-PCR技术检测肾脏组织中BMP7、TG-Fβ1mRNA表达。[结果]与正常组比较，糖尿病模型大鼠BMP7mRNA表达降低，而TGFβ1mRNA表达升高(P＜0.01)；并且随着病变的加重，BMP7mRNA表达水平呈下降趋势，而TGFβ1mRNA表达逐渐升高。相关性分析显示，与肾功能分别呈负相关和正相关。[结论]在糖尿病大鼠肾脏组织中BMP7表达减少，而TGFβl表达增加，表明在DN发生和发展过程中其重要作用。
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和厚朴酚抑制结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白7关系的研究
目的 研究和厚朴酚(honokial,HNK)对人源结肠癌细胞HCT116增殖的影响及其可能分子机制.方法 采用结晶紫染色、流式细胞术检测和厚朴酚对HCT116细胞增殖和细胞周期的影响;Western blot分析和厚朴酚对增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指标Bcl-2 的影响;Western blot及半定量PCR分析和厚朴酚对HCT116细胞中内源性骨形态蛋白7(BMP7)表达的影响;利用BMP7 过表达腺病毒及抗体,通过结晶紫定量和Western blot,分析和厚朴酚联合应用BMP7腺病毒与抗体对HCT116细胞增殖的影响.结果 和厚朴酚呈浓度和时间依赖性地抑制HCT116细胞增殖、诱导细胞凋亡、使细胞阻滞于G2期,并上调PCNA的蛋白表达水 平,下调Bcl-2的蛋白表达水平;和厚朴酚可上调HCT116细胞中BMP7的mRNA及蛋白表达水平;外源性BMP7过表达腺病毒可促进和厚朴酚的增殖抑制和促凋亡作用,而BMP7抗体可抑制此作用.结论 和厚朴酚能够抑制HCT116 的增殖并促进凋亡,其机制可能与上调BMP7的表达有关.
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白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白7的关系研究
目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞生长的抑制作用与骨形态发生蛋白7(BMP7)的关系,及其可能的分子机制.方法 利用CCK-8、流式细胞术、West-ern blot和Annexin V-EGFP染色等方法,分析Res对HCT116细胞增殖和凋亡的影响.利用细胞增殖抑制实验、PCR和Western blot等实验,分析Res对HCT116细胞中BMP7表达的影响,以及BMP7对Res抑制结肠癌细胞增殖的影响及可能分子机制.结果 Res能抑制HCT116细胞增殖,诱导S期阻滞并促进其凋亡;Res增加BMP7在HCT116细胞中的mRNA和蛋白表达.过表达BMP7增强Res对HCT116细胞的增殖抑制作用,并促进凋亡,而BMP7特异性抗体则明显减弱此作用;在HCT116细胞中,Res对BMPs/Smads信号无明显影响,但能降低Akt1/2/3的磷酸化水平;过表达BMP7增强Res抑制Akt1/2/3磷酸化的作用,而BMP7特异性抗体明显减弱Res的这种作用;同时,过表达 BMP7能增强 Res抑制PTEN磷酸化的作用,而 BMP7特异性抗体明显减弱Res对PTEN磷酸化的抑制.结论 Res对结肠癌HCT116细胞有增殖抑制作用,机制可能与Res通过上调BMP7表达而抑制PTEN磷酸化,终使PI3K/Akt信号转导下降有关.
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BMP7对三维条件下小鼠iPS细胞成骨能力的影响
目的:探讨明胶海绵作为体外成骨支架材料的可行性及BMP7对小鼠诱导型多能干细胞(miPSCs)在三维培养条件下骨向分化能力的影响.方法:miPSCs经体外培养形成拟胚体(EBs),将消化所得的单细胞于明胶海绵上成骨诱导,7d后检测其成骨能力及贴附情况.结果:miPSCs可以贴附并沿着明胶纤维伸展;BMP7添加组的钙结节含量及成骨基因表达水平高于未添加组.结论:明胶海绵可以作为miPSCs体外成骨的培养支架;BMP7对三维培养条件下miPSCs的成骨能力有促进作用.
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Wnt3a 联合 BM P7对 BM SC 成骨分化的初步研究
目的：探讨Wnt蛋白（Wnt3a）联合骨形态发生蛋白（BMP7）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的作用。方法：选择SD大鼠12只，进行骨髓间充质干细胞的分离、纯化、培养，并采用不同的方法进行骨髓间充质干细胞的体外诱导分化，按干预的不同分为4组：Wnt3a组、BM P‐7组、联合诱导组以及对照组，对比不同方法对成骨分化的诱导作用差异。结果：联合诱导组的 IA 值为（121627±261），显著低于Wnt3a组、BMP‐7组、对照组的（147173±348）、（146557±361）、（182659±409），并且其有大量橘红色矿化结节形成，较其他三组更多，组间差异比较均具有统计学意义（P＜0．05）。结论：Wnt3a联合BMP7诱导BMSC成骨分化的效果显著优于单独采用Wnt3a或BM P7进行诱导，值得在临床上推广使用。
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NFATc1-ERK5通路介导流体剪切力促进成骨细胞BMP7表达
目的:探讨成骨细胞中NFATc1与ERK5调控关系,并研究流体剪切力(FSS)调节BMP7表达的信号通路.方法:实验分为6组,即空白组、FSS组、CsA(Cyclosporin,NFATc1抑制剂)组、XMD8-92(ERK5抑制剂)组、FSS+CsA组、FSS+XMD8-92组.用Western Blot方法检测不同干预条件下NFATc1、ERK5、p-ERK5以及BMP7蛋白表达水平并进行比较.结果:12 dyn/cm2FSS作用45 min能够显著提高NFATc1、p-ERK5在成骨细胞内水平,400 nmol/L CsA干预30 min能够有效抑制NFATc1表达量升高以及ERK5磷酸化,但5 μmol/L XMD8-92作用1 h仅能够抑制ERK5磷酸化,而对NFATc1没有作用.此外,FSS促进MC3T3-E1细胞中BMP7表达量升高,CsA和XMD8-92任何一种抑制剂均能显著阻止BMP7表达.结论:FSS在成骨细胞中通过NFATc1来调控ERK5磷酸化,BMP7为ERK5下游靶点受NFATc1-ERK5通路调控.
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过表达BMP7对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞功能的影响
目的 通过对大鼠肾小管上皮细胞( RTEC)转染外源性骨形态发生蛋白7( BMP7)基因,探讨BMP7对RTEC增殖活性和迁移能力的影响.方法 分别在体外用腺病毒介导载体HBAD-GFP和HBAD-BMP7转染入大鼠RTEC,转化生长因子-β1( TGF-β1)刺激RTEC,反转录PCR( RT-PCR)及Western blot方法检测其mRNA及蛋白表达,MTS和迁移实验检测RTEC增殖及迁移能力的变化.结果 (1)成功建立转染细胞系,TGF-β1在10 ng/mL作用12 h时促RTEC增殖、抑制BMP7的表达效果佳;(2) HBAD-BMP7转染RTEC后,BMP7的mRNA和蛋白水平均明显增高(P＜0.01),p38 的mRNA和蛋白水平明显下降(P＜0.01). (3)RTEC过表达BMP7后明显缓解TGF-β1的促增殖和迁移能力,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 过表达BMP7可降低p38表达,改善TGF-β1诱导RTEC的功能.
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Gremlin和BMP7在纤维化疾病中的作用
Gremlin是进化上高度保守的分泌型糖蛋白,属于骨形态蛋白拮抗剂家族成员,在个体胚胎发育过程中肺、肾等器官的形态形成过程中起重要作用,并参与成熟组织器官功能的维持.Gremlin通过与BMP直接结合,阻断BMP与受体结合,而拮抗BMP的生物学活性.TGF-β是目前已知的重要的促纤维形成因子,参与肾、肺、肝、眼、心等组织器官的纤维性病变.BMP7和TGF-β同属于TGF-β超家族成员,两者所介导的信号途径存在交联反应,共同参与调节正常生理活动及某些疾病的发生发展.迄今的研究证明Gremlin和BMP7均与纤维化病变的发生发展有关,且相互间可能存在调控与被调控的机制.
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bmp3、bmp4、bmp7在犬牙根发育过程中的表达研究
目的:探讨bmp3、bmp4、bmp7在牙根发育过程中的生理作用.方法: 采用原位杂交染色技术,观测犬恒牙牙根发育各阶段标本中bmp3、bmp4、bmp 7mRNA的定位表达.结果:bmp3的表达始于牙根发育早期的牙囊组织,之后转移到成牙骨质细胞和牙周膜细胞中;bmp4阳性信号在发育过程中主要位于成牙本质细胞层中;bmp7在牙根发育早期的颈环处上皮根鞘细胞有表达,而后还在分泌期的成牙骨质细胞和成牙本质细胞中表达.结论:bmp3、bmp4、bmp7在牙根发育过程中的表达具有时空特异性,提示它们参与调控牙根的发育.
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冬凌草甲素抑制HCT116细胞增殖与p38MAPK信号通路相关性研究
目的 研究冬凌草甲素(ORI)对人源结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,并探讨其可能的分子机制.方法 采用结晶紫染色研究ORI(5、10、15、20、25 μmol/L)对HCT116细胞的增殖抑制作用;采用Western blotting技术研究ORI(10、15、20μrnol/L)对HCT116细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关指标(Caspase-3和Cleaved-caspase-3)、p38 MAPK信号通路相关指标(Smad 1/5/8、p-Smad 1/5/8、p38、p-p38)蛋白表达的影响;采用Western blotting、凝胶电泳技术分析ORI对BMP7蛋白、mRNA表达的影响;转染重组BMP7腺病毒(AdBMP7)实现BMP7的外源性过表达,应用BMP7抗体(anti-BMP7)降低BMP7水平,检测ORI是否通过调节BMP7表达影响HCT116细胞增殖凋亡、p38 MAPK信号通路.结果 与对照组比较,ORI明显抑制HCT116细胞增殖,下调PCNA蛋白水平;明显上调Caspase-3、Cleaved caspase-3、p-p38蛋白表达,且呈浓度与时间相关性,对Smad1/5/8、P-Smad1/5/8蛋白表达无明显影响;明显上调BMP7蛋白及RNA表达;外源性过表达BMP7加强了ORI对上述蛋白表达的调控,anti-BMP7则部分抑制了ORI的作用.结论 ORI抑制HCT116细胞的增殖,其机制可能与上调BMP7蛋白表达进而激活p38MAPK信号通路相关.
