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TNF-α刺激的人脐静脉内皮细胞组织因子表达及其分子机制
为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激下组织因子(TF)的表达及其分子机制,用流式细胞术检测HUVEC膜表面TF蛋白的表达,用RT-PCR方法检测TF mRNA的表达和用Western印迹方法检测HUVEC核蛋白中核因子κB(NF-κB).结果发现,TNF-α能刺激HUVEC细胞膜表面TF表达增加,其增加与TF mRNA合成增加具有高度一致性,且TF表达的增高滞后于mRNA升高数小时之后;TF表达增加的同时伴有核蛋白(κB)显著的活化.结论:TNF-α刺激HUVEC后,迅速活化NF-κB,启动TF的转录,TF mRNA表达增加,TF蛋白合成增加,导致TF在HUVEC膜表面表达增加,激活凝血途径.
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PDTC对PV-杀白细胞素(PVL)诱导THP-1巨噬细胞NF-κB活化及炎性因子表达的影响
目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对PV-杀白细胞素(panton-valentine Ieucocidin,PVL)诱导THP-1巨噬细胞NF-κB及炎性因子表达的影响.方法 实验分3组,PBS对照组、rPVL刺激组和PDTC处理组,在加入rPVL刺激前60 min,给予100 μmol/L PDTC预处理THP-1巨噬细胞.采用免疫组化检测NF-κB的移位,Western blot检测细胞胞质IκB蛋白和胞核NF-κB蛋白表达,ELISA法检测细胞上清IL-8和IL-6蛋白的表达,RT-PCR法检测IL-8和IL-6 mRNA水平表达.结果 PDTC处理组NF-κB阳性细胞明显减少,核蛋白表达降低,胞质IκB蛋白降解减少；IL-8和IL-6mRNA表达明显下调,蛋白分泌量分别由12.96 ng/ml和6.55 ng/ml降低到6.78 ng/ml和3.88ng/ml,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PDTC可能通过抑制NF-κB的活性,从而降低II-8和IL-6的表达,对PVL引起的炎性损伤具有一定的保护作用.
关键词： 杀白细胞素 二硫代氨基甲酸吡咯烷 核因子κB IL-8 IL-6 -
穿透支原体脂质相关膜蛋白激活核因子κB诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶
目的了解穿透支原体潜在的致病性和穿透支原体脂质相关膜蛋白诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的分子机制. 方法用从穿透支原体提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞,以RT-PCR和Western blot等方法分析诱导性一氧化氮合酶的表达和NO的产生.用间接免疫荧光和Western blot检测经穿透支原体脂质相关膜蛋白处理的小鼠巨噬细胞中NF-κB的激活和NF-κB抑制剂PDTC(吡咯啉烷二甲基硫脲)对iNOS的表达和NO产生的影响. 结果穿透支原体脂质相关膜蛋白以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,且能激活NF-κB诱导巨噬细胞表达iNOS的mRNA和蛋白,其mRNA和蛋白的表达水平能被PDTC所抑制. 结论由于穿透支原体脂质相关膜蛋白能通过激活NF-κB诱导巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶,因而可能是一个重要的致病因素.
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心肺复苏患者血浆核因子κB的变化及乌司他丁的保护作用
目的观察心肺复苏后(CPR)全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的发生,探讨乌司他丁对炎症介质的干预作用.方法将CPR后存活＞48 h的40名患者随机分为乌司他丁治疗组和对照组.于48h抽取外周血测定核因子κB(NF-κB)的活性,白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;并进行罹患SIRS的评估,检测患者重要脏器的功能,将两组结果进行比较.结果CPR后两组患者外周血NF-κB的活性,IL-6、TNF-α的水平均高于正常人(P＜0.05).治疗组患者NF-κB的活性,IL-6、TNF-α的水平明显低于对照组(P＜0.05).治疗组患者SIRS的发生率仅20%,对照组SIRS的发生率为65%.治疗组患者肌酸激酶(CK),谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT)和肌肝(Cr)值明显低于对照组(P＜0.05).结论乌司他丁能够有效地抑制CPR后机体炎症反应并保护患者重要脏器功能.
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核因子κB途径介导C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的促炎作用
目的 观察了C反应蛋白(CRP)对培养的肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)炎性因子白介素-6(IL-6)的影响,探讨CRP对肺血管疾病的可能作用.方法 体外培养hPASMCs,以不同质量浓度的CRP(5～200μg/mL)刺激不同时间(0,3,6,9,12,18,24 h).核因子κB(NF-κB)的活性以非变性凝胶电泳迁移率(EMSA)方法进行分析.IL-6 mRNA和蛋白水平以Real-time PCR和ELISA方法进行检测.结果 CRP以浓度依赖的方式促进hPASMCs IL-6的合成.与对照组相比,CRP 200 μg/mL使IL-6的合成增加2.8倍.CRP显著诱导NF-κB在bPASMCs的激活.CRP对hPASMCs的促炎作用受到细胞表面FCγⅡa受体特异性抗体的抑制.结论 CRP促进体外培养的hPASMCs对IL-6的表达,这一作用是通过细胞表而FcγⅡa受体亚型和NF-κB的核内转位激活而介导的.提示CRP在肺动脉高压的发病中有重要作用.
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孟鲁司特对百草枯所致大鼠肺损伤的治疗作用
目的 探讨孟鲁司特对百草枯(PQ)中毒所致大鼠肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肺湿/干质量比(W/D)和血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、肺组织中核因子κB (NF-κBp65)及肺组织病理变化的影响.方法 取SD大鼠104只,随机(随机数字法)分为3组,PQ组40只、孟鲁司特组40只、对照组24只.PQ组和孟鲁司特组用百草枯一次性染毒,分别在不同处理后第1、3、5、7天时处死大鼠.观察肺组织中MDA和SOD含量、肺湿/干质量比(W/D)、血清TNF-α、IL-10含量及肺组织中NF-κBp65含量,并取肺组织制备标本分别在光镜和电镜下观察肺组织的病理改变.结果 PQ组第7天时肺组织中MDA含量、肺组织湿/干质量比、血清TNF-α和IL-10含量、肺组织中NF-κBp65含量明显高于对照组,SOD含量明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.01).孟鲁司特组第7天时肺组织中MDA含量、肺组织湿/干质量比、血清TNF-α和IL-10含量、肺组织中NF-κBp65含量明显低于PQ组,SOD含量明显高于PQ组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).光镜及电镜观察PQ组病理学改变为急性弥漫性肺损伤,表现为肺泡腔内出血、渗出、炎性细胞浸润,Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞坏死脱落；孟鲁司特组大鼠肺组织病理改变为局灶性肺泡少量炎性细胞浸润,Ⅰ型上皮细胞完整,Ⅱ型上皮细胞未见明显坏死.结论 孟鲁司特对百草枯中毒所致大鼠急性肺损伤具有一定的保护作用.
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甘草酸二铵对百草枯中毒大鼠肾组织TOLL样受体4表达的影响
目的 了解甘草酸二铵(DG)对百草枯(PQ)中毒大鼠肾组织TOLL样受体4(TLR4)及NF-κB等表达影响.方法 根据随机数字表法将大鼠分为PQ染毒组(PQ组,n=20)、DG干预组(DG组,n=20)和空白对照组(NS组,n=10).PQ组及DG组100 mg/kg一次性灌胃方式建立急性肾损伤大鼠动物模型,NS组予以等量生理盐水灌胃,DG组灌胃后立即给予甘草酸二铵50 mg/kg腹腔注射,每24 h重复给药一次.ELISA检测血清和肾组织IL-6、IL-10的含量,免疫组化分析各组TLR4、Myd88及NF-κB P65蛋白表达变化,荧光定量PCR方法检测肾组织TLR4、Myd88及NF-κB的的基因表达.结果 与NS组比较,PQ组的血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血清及肾组织中IL-6水平均明显升高(F=266.014,168.160,63.279, 192.997,均P＜0.01).与PQ组比较,DG组Cr、BUN、血清及肾组织中IL-6水平均明显降低(F=266.014,168.160,63.279, 192.997,均P＜0.01).与NS组比较,PQ组的肾组织和血清中IL-10水平均明显升高(F=87.511,79.473,均P＜0.01),与PQ组比较,DG组的肾组织和血清中IL-10水平均有一定升高(F=87.511,79.473,均P＜0.01).与NS组比较,PQ组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κBmRNA表达明显升高(F=84.408,60.683,86.272,均P＜0.01);与PQ组比较,DG组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κB mRNA表达明显降低(F=84.408,60.683,86.272,均P＜0.01).免疫组化结果显示,PQ组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κB的蛋白表达量明显升高(F=79.139,61.799, 112.740,均P＜0.01).与PQ组比较,DG组肾组织TLR-4、Myd88和NF-κB的蛋白表达量明显降低(F=79.139,61.799,112.740,均P＜0.01).结论 甘草酸二铵可减轻百草枯中毒大鼠的急性肾损伤,并能降低肾组织TLR-4、myd88及NF-κB的表达水平.
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miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响
目的 观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子 κB(NF-κB)信号转导通路的影响.方法 体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(con-trol组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 nM浓度NC至癫痫大鼠海马神经元;miR-146a-5p组:转染80 nM浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元.转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子 κB抑制蛋白 α(IκBα)、磷酸化IκBα(pIκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ)mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、pIκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平.结果 体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P<0.05);miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P<0.05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元pIκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P<0.05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P<0.05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P<0.05).结论 miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中pIκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放.
关键词： 大鼠 癫痫 miRNA-146a-5p 海马神经元 核因子κB -
妊娠期高血压患者外周单个核细胞 NF -κB 活性及血浆五聚素3的表达的相关性
目的：探讨妊娠期高血压患者外周单个核细胞核因子κB（NF -κB）活性及血浆五聚素3（PTX3）的表达的相关性。方法选取2012年3月至2014年12月收治的妊娠期高血压疾病患者60例作为观察组，选取同期入院正常晚期妊娠妇女20例作为对照组，分别检测其外周单个核细胞 NF -κB 和血浆 PTX3水平，并进行统计学分析。结果重度子痫前期、轻度子痫前期和妊娠期高血压三组之间 NF -κB 水平逐渐降低，而 PTX3水平逐渐升高，差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。经 Pearson 相关分析显示，NF -κB 与子痫严重程度呈正相关（ r =0.521），而 PTX3呈负相关（ r =-0.397），差异有统计学意义（ P 均 ﹤0.05）；ROC 曲线显示，两种指标联合诊断阳性面积0.808，具有诊断意义（ P ﹤0.05）。结论妊娠期高血压患者外周单个核细胞 NF -κB 活性及血浆 PTX3的表达呈负相关关系，两者联合检测具有较高的诊断价值。
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核因子κB在运动防治慢性阻塞性肺疾病患者骨骼肌萎缩中的作用机制
慢阻塞性肺疾病(COPD)具有明显的肺外损伤效应，可引起呼吸肌和外周骨骼肌的萎缩，严重影响患者呼吸功能和生活质量，其中核因子κB(NF-κB)过度激活被认为是COPD患者骨骼肌萎缩的一种重要因素。本文从NF-κB激活与COPD患者骨骼肌蛋白降解和骨骼肌细胞再生之间关系，分析NF-κB在COPD患者骨骼肌萎缩中的作用及运动对COPD骨骼肌NF-κB通路的影响。
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miR-9的靶蛋白在多囊卵巢综合征患者卵巢组织中的研究进展
多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄女性常见的一种生殖内分泌疾病,目前全世界育龄期女性的发病率占到4%~10%.PCOS具有异质性,其病理改变十分复杂,包括窦状卵泡发育异常、颗粒细胞增生凋亡、卵泡膜细胞过度增生、高雄激素血症及慢性排卵障碍等.至今具体发病机制尚未阐明,多基因异常和环境改变被认为是PCOS发病机制的两个重要因素.近年研究发现,微小核糖核酸(miRNA)异常表达与氧化应激、胰岛素抵抗、高雄激素血症、炎症以及各种癌症形成有关.研究显示,微小核糖核酸-9(miR-9)在PCOS患者卵泡液及卵巢颗粒细胞中的表达水平较健康妇女明显升高,考虑可能与PCOS的发病机制有关.通过KEGG database pathway及Target Scan等软件进行生物信息学分析结果提示miR-9主要的靶蛋白有核因子κB亚基1(NF-κB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、胰岛素受体底物2(IRS2)等.文本将对miR-9的靶蛋白在PCOS患者卵巢组织中的表达研究进展进行综述.
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放射性心脏损伤初期核因子κB的变化及氨溴索的影响
目的 探讨放射性心脏损伤初期核因子κB(NF-κB)的变化及氨溴索对放射性心脏损伤的治疗作用.方法 雌性SD大鼠60只随机分为正常对照组,照射组和治疗组.照射组和治疗组腹腔内注射戊巴比妥钠40 mg/kg给予直线加速器照射,照射剂量单次20 Gy/min,照射前7 d,照射组给予等量生理盐水腹腔内注射,治疗组给予氨溴索35 mg/kg.于照射后1、2、3、4 d取心脏组织作病理HE染色,免疫组化法测定NF-κB的表达,免疫组化染色以计算机图像分析系统测定,数据用组间t检验.结果 治疗组与对照组大鼠心肌组织无明显变化.照射组NF-κB的表达在1、4 d较正常组增高(P<0.05),治疗组较照射组4 d NF-κB的表达减弱(P<0.05).结论 放射性心脏损伤初期NF-κB表达增高,氨溴索可抑制NF-κB在放射性心脏损伤中的表达.
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核因子κB在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制
目的 探讨核因子κB(NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制.方法 24只Wastar大鼠按随机数字表法分为对照组、SAP组和NF-κB抑制剂组即二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组,每组各8只.制作SAP大鼠模型,对照组仅翻动胰腺,PDTC组于建模后2h经尾静脉注射PDTC溶液40mL/kg.各组大鼠于建模后24h处死,观察各组大鼠腹腔内大体改变,比较各组肠黏膜的病理改变、通透性的变化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)的表达水平,应用免疫组织化学法检测大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin的表达.结果 对照组大鼠腹腔内无明显炎症征象,肠管无水肿充血;SAP组和PDTC组大鼠均有不同程度的腹水、肠管水肿、充血,且SAP组更为严重.光学显微镜下对照组肠黏膜未见明显损伤,SAP组和PDTC组大鼠回肠可见不同程度的肠黏膜破坏,且PDTC组较轻.三组大鼠的病理评分[(3.6±1.4)、(21.3±3.7)、(33.8±4.2)分]和肠黏膜通透性[(22±6)、(188±26)、(328±35)nL·min-1cm-1]比较,差异均有统计学意义(F=7.259、6.402,P均<0.05),且SAP组肠黏膜通透性较PDTC组增加更为显著(P<0.05).三组大鼠TNF-α[(146±37)、(1684±80)、(2896±99)ng/L],IL-1[(53±10)、(1756±60)、(2893±88)ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义(F=5.751、7.247,P均<0.05),其中SAP组和PDTC组肠道TNF-α、IL-1表达水平均较对照组显著增加(P均<0.05),且SAP组大鼠TNF-α和IL-1表达水平均较PDTC组更高(P均<0.05).免疫组织化学结果显示,对照组Occludin蛋白沿肠黏膜上皮细胞分布,呈很强的棕褐色线状信号;PDTC组Occludin的定位与对照组没有明显区别,但棕褐色阳性信号有所减弱;SAP组阳性细胞明显减少.三组大鼠Occludin[(15.6±3.0)、(6.4±1.4)、(3.1±1.2)]表达水平比较,差异有统计学意义(F=5.427,P<0.05).结论 SAP大鼠肠黏膜屏障损伤可能与肠组织中NF-κB表达升高有关,从而下调肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin的表达,抑制NF-κB表达对SAP肠黏膜屏障损伤具有保护作用.
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萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响
目的 评价萝卜硫素对于脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织炎症反应以及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 将30只雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分成假手术组、模型组和治疗组,每组各10只.模型组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备大鼠脓毒症模型,治疗组大鼠在术后立即腹腔注射50 mg/kg的萝卜硫素注射液,其余两组注入等量等渗NaCl溶液;于术后24 h大鼠右侧颈总动脉采集动脉血标本,然后处死大鼠取肺组织测定肺组织湿/干比.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测三组大鼠肺组织匀浆标本肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、NF-κB p65表达水平;荧光实时定量PCR检测三组大鼠肺组织TLR4 mRNA的表达.结果 假手术组、模型组及治疗组大鼠肺组织湿/干比[(4.00±0.13)、(6.10±0.05)、(5.80±0.08)]、氧合指数[(315±11)、(177±7)、(200±12)mmHg]、TNF-α[(6.05±0.29)、(45.06±0.52)、(27.09±0.85)ng/L]、IL-1β[(8.02±0.21)、(38.23±0.81)、(32.73±1.12)ng/L]及NF-κB p65[(0.375±0.013)、(1.230±0.045)、(0.988±0.043)ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义(F=480.891、255.309、4245.262、1918.168、564.842,P均<0.001).进一步两两比较发现,模型组和治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较假手术组大鼠显著升高(P均<0.05),治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较模型组大鼠显著降低(P均<0.05);而模型组和治疗组大鼠氧合指数均较假手术组大鼠显著降低(P均<0.05),治疗组大鼠氧合指数较模型组大鼠显著升高(P<0.05).荧光实时定量PCR结果显示,三组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义(F=224.538,P<0.001).进一步两两比较发现,与假手术组比较,模型组及治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达均显著升高(P均<0.05);而治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达较模型组显著降低(P<0.05).结论 萝卜硫素可减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应、肺水肿程度,改善缺氧状态,对于肺组织具有一定保护作用,且其作用机制可能与干预TLR4/NF-κB信号途径相关.
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重症溃疡性结肠炎患者血清NOD样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1和核因子κB mRNA表达水平及临床意义
目的 探讨重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(CASP1)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平及临床意义.方法选取温州市中西医结合医院消化内科收治的重症UC患者116例作为重症UC组,同期健康体检者50例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测受试者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测所有受试者血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18表达水平,采用Pearson相关分析重症UC组患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β、IL-18表达的相关性.结果重症UC组患者血清NLRP3[(6.3±1.1)vs.(1.2±0.3)]、CASP1[(5.4±1.1)vs.(1.1±0.3)]和NF-κB[(6.73±1.13)vs.(0.51±0.15)mRNA表达水平均显著高于对照组(t=32.016、27.873、38.710,P均<0.001).重症UC组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级患者NLRP3[(2.4±0.6)、(4.5±1.1)、(6.8±1.2)]、CASP1[(2.2±0.4)、(3.9±1.0)、(5.9±1.1)]及NF-κB[(2.5±0.6)、(5.4±1.2)、(7.2±1.4)]mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(F=49.852、43.224、33.293,P均<0.001).进一步两两比较发现,Ⅱ级、Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅰ级患者(P均<0.05),Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅱ级患者(P均<0.05).重症UC组患者血清IL-1β[(90±7)ng/L vs.(69±7)ng/L]、IL-18[(121±4)ng/L vs.(102±6)ng/L]表达水平较对照组均显著升高(t=16.555、24.249,P均<0.001).重症UC患者血清NLRP3 mRNA与CASP1、及NF-κB mRNA表达均呈正相关(r=0.767、0.676,P均<0.001),而CASP1 mRNA与NF-κB mRNA表达无相关性(r=0.263,P=0.175).重症UC患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β表达均呈正相关(r=3.372、3.724、3.424,P=0.035、0.011、0.026),与IL-18表达亦均呈正相关(r=2.963、3.513、3.312,P=0.043、0.018、0.023).结论重症UC患者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平均显著升高,且NLRP3 mRNA与CASP1、NF-κB mRNA表达呈正相关.NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA参与重症UC病理过程,临床上可通过检测NLRP3、CASP1和NF-κB表达水平判断UC病程进展.
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结核分枝杆菌抗原激活核因子κB延迟中性粒细胞自发凋亡的作用
目的 探讨结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发凋亡的影响.方法 取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用核因子κB(NF-κB)抑制剂N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理30 min后,膜联蛋白V(AnnexinV/PI)染色,流式细胞术观察细胞凋亡情况;并用凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)化学发光法检测Mtb-Ag刺激0、1、2、4、6、24h后,中性粒细胞NF-κB的DNA结合活性.结果 加Mtb-Ag(1.125 mg/ml)培养的中性粒细胞凋亡率(32%±3%)与中性粒细胞体外培养24 h后自发凋亡率(55%±6%)相比,明显降低(P＜0.05).Mtb-Ag(1.125 mg/ml)作用中性粒细胞1 h后明显可见NF-κB活化,2 h NF-κB的DNA结合活性达高峰,24h回到静息水平;经TPCK(30 μmol/L)预处理后可阻断Mtb-Ag的抑制凋亡作用.结论 经激活NF-κB介导后,Mtb-Ag对中性粒细胞自发凋亡有抑制作用.
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阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达
背景 分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道.目的 探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制.方法 将HUVEC随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α+PDTC干预组(PDTC系核因子κB的特异性活性抑制剂),TNF-α+NS398干预组(NS398是COX-2的特异性活性抑制剂).TNF-α+阿司匹林0 02 mol/L干预组,TNF-α+阿司匹林0 2 mol/L干预组,TNF-α+阿司匹林1 mol/L干预组,TNF-α+阿司匹林5 mol/L干预组,共8组,每组3例.分别用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平和蛋白表达.结果 1)4 μg/L TNF-α使HUVEC的分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达明显增加(P<0 01).2)阿司匹林浓度依赖性抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(P<0 01);阿司匹林浓度依赖性地抑制HUVEC的NF-κB p65 mRNA水平和蛋白表达(P<0 01).3)PDTC抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(均P<0 01).结论 阿司匹林通过NF-κB p65途径抑制TNF-α诱导的HUVEC 分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达,并可能借此发挥抗动脉粥样硬化作用.
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蛋白质氧连糖基化修饰对肿瘤坏死因子α诱导的小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响
目的 采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导心肌成纤维细胞(CF)增殖,探讨快速提高细胞内氧连糖基化(O-GlcNAc)水平对CF功能及P65、核因子κB信号通路负向调控因子TNFAIP3蛋白表达的影响.方法 胰酶联合Ⅳ型胶原酶消化成年小鼠心脏组织培养CF,差速贴壁法分离纯化原代CF,波形蛋白免疫荧光染色鉴定细胞类型.将CF分为空白对照组;TNF-α(10 μg/L)组;Thiamet-G(150 μmol/L)预处理+空白对照组;Thiamet-G(150 μmol/L)预处理+TNF-α(10 μg/L)组.活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测CF增殖,细胞划痕实验评价迁移能力,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TNF-α靶基因血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达,Western blot检测磷酸化P65(p-P65)、总P65 (t-P65)、TNFAIP3蛋白水平.结果 原代培养的心脏细胞经波形蛋白免疫荧光染色鉴定为CF,纯度＞95％.Thiamet-G预处理CF2h即可观察到全细胞蛋白O-GlcNAc水平显著升高(3.22±0.32比1.00±0.22,P＜0.05);与空白对照组相比,TNF-α处理组可激活核因子κB通路(p-P65增高:3.13±0.27比1.00±0.13,P＜0.05),诱导靶基因VCAM-1、MCP-1 mRNA表达(4.21±0.37比1.00±0.21,11.26±0.98比1.00±0.32,均P＜0.05),明显提高CF增殖及迁移能力(1.74±0.21比0.48±0.11,P＜0.05);与TNF-α处理组相比,Thiamet-G预处理后TNF-α诱导的CF增殖及迁移被抑制(1.04±0.07比1.74±0.21,P＜0.05),靶基因VCAM-1、MCP-1 mRNA表达减少(2.09±0.13比4.21±0.37,3.13±0.85比11.26±0.98,均P＜0.05),P65蛋白总水平在12 h无明显变化(1.08±0.13比1.00±0.24,P＞0.05),但p-P65水平下降(1.82±0.08比3.13±0.21,P＜0.05),TNFAIP3蛋白表达显著上调(5.86±0.61比2.95±0.33,P＜0.05).结论 快速提高细胞内O-GlcNAc水平对TNF-α诱导的成年小鼠CF增殖和迁移具有抑制作用,其作用机制可能与上调TNFAIP3的表达有关.
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精氨酸升压素对心肌成纤维细胞核转录因子κB活性的影响
目的探讨精氨酸升压素(AVP)对心肌成纤维细胞(CFs)核转录因子(NF-κB)活性的影响.方法胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs,分别采用免疫荧光-共聚焦显微镜法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和AVP干预下CFs中NF-κB的细胞内定位和CFs核中NF-κB的蛋白含量.结果基础状态下CFs的NF-κB主要分布于细胞浆,细胞核中无NF-κB蛋白表达,AVP干预后CFs的NF-κB主要分布于细胞核,细胞浆中NF-κB显著减少.结论 AVP能够激活CFs的NF-κB,使其从细胞浆转位至细胞核,提示AVP对CFs的调节作用可能是通过NF-κB激活通路发挥的.
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梗阻性黄疸大鼠NF-κB的变化及其对免疫应答的影响
目的:探讨梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)时NF-KB的变化及其对免疫应答的影响.方法:60只Wistar♂大鼠随机分成3组:假手术组(SHAM组)、梗阻性黄疸组(CBDL组)和梗阻性黄疸+NF-kB抑制剂脯氨酸二硫化氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC组).每组术后7、14 d分批(n=10)检测光镜下肝脏病理组织学,血清总胆红素(TB),谷丙转氨酶(ALT),内毒素(LPS)水平,肝组织促炎因子IL-1β、IL-6,抑炎因子IL-10以及NF-kB蛋白表达.结果:CBDL组7、14 d大鼠均出现肝组织病理损伤,CBDL组较SHAM组血清TB、ALT、LPS增高(7 d:140.14±10.17 vs 7.309±1.04,134.479±10.20 vs 35.79±3.76.189.33±11.05 vs 2.816±0.58;14 d:194.608±12.73 vs 36.142±3.51.217.797±12.37 vs 7.321±1.03.292.816±14.53vs 2.664±0.53,均P＜0.01),肝组织IL-1β,IL-6,IL-10和NF-kB表达增强(均P＜0.01),且14 d较7 d变化更为显著.PDTC组大鼠血清TB、ALT和肝组织IL-1β、IL-6、NF-kB表达在7 d时相点时比CBDL组显著下降(P＜0.01),而到14 d时相点时比较CBDL组无明显变化;LPS和IL-10表达与CBDL组各时相点相比无明显差异.结论:梗阻性黄疸大鼠早期(7 d)通过PDTC抑制NF-kB活化表达,可下调促炎因子的表达,减轻肝损.后期(14 d)作用不明显,其机制可能是通过LPS、IL-10等其他途径所致.
