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吃西兰花或可治疗糖尿病
近日,一项刊登在国际杂志Science Translational Medicine上的研究报告中,来自瑞典、美国和瑞士的科学家通过研究发现,利用十字花科蔬菜中发现的萝卜硫素来处理大鼠的肝脏细胞或能帮助降低其机体中葡萄糖的水平;文章中研究人员描述了分离萝卜硫素的方法,以及如何利用萝卜硫素来检测其对大鼠肝脏细胞和人类机体的影响.
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萝卜硫素抑制脂多糖诱导心肌细胞肥大的机制研究
目的 探讨萝卜硫素对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导心肌细胞肥大的影响及其作用机制.方法 体外原代培养新生大鼠心肌细胞,将心肌细胞按随机数字表法分为对照组,LPS诱导组,JAK2抑制剂组,萝卜硫素低、中、高剂量组.除对照组外,其余各组细胞加入1 mg/L的LPS进行干预,低、中、高剂量组加入10、20、40 μg/ml萝卜硫素进行干预,JAK2抑制剂组加入JAK2抑制剂10 nmol/L干预24 h.采用计算机图像分析系统测定心肌细胞体积,BCA法测定心肌细胞中总蛋白含量,ELISA法检测细胞培养基上清液中 IL-6、TNF-α水平,WB 法检测酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子(janus kinase/signal transducer and activator of transcription, JAK/STAT)信号通路相关蛋白表达水平.结果 与LPS诱导组比较,低、中、高剂量组细胞体积[(1 635.71±154.84)μm3、(1 450.06±140.13)μm3、(1 194.51± 134.76)μm3比(1 854.28±181.37)μm3]和蛋白[(20.14±2.11)μg、(17.59±1.64)μg、(14.27±1.47)μg 比(23.17±2.56)μg]含量降低(P＜0.05);细胞培养基上清中 IL-6[(1 410.08±255.17)pg/ml、(1 065.61± 210.37)pg/ml、(790.09±140.28)pg/ml 比(1 804.07±275.34)pg/ml]、TNF-α[(164.16±27.51)pg/ml、(130.13± 22.08)pg/ml、(92.27±12.16)pg/ml比(182.42±30.37) pg/ml]水平降低(P＜0.05);细胞p-JAK2/JAK2[(0.39± 0.05)、(0.27±0.04)、(0.21±0.03)比(0.54±0.07)]、p-STAT3[(0.47±0.05)、(0.25±0.03)、(0.18±0.03)比(0.53±0.06)]表达降低(P＜0.05).结论 萝卜硫素对LPS诱导的心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关.
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萝卜硫素对视网膜母细胞瘤细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 研究萝卜硫素对视网膜母细胞瘤细胞(Y79)增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 Y79细胞经10、20、40 mg/L萝卜硫素干预24、48 h后,采用CCK8试剂盒检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测萝卜硫素对Y79细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平.结果 不同浓度萝卜硫素作用Y79细胞24、48 h后,可呈浓度、时间依赖性的抑制细胞增殖.与对照组比较,10、20、40 mg/L萝卜硫素组细胞凋亡率[(12.47±2.24)％、(24.63±3.44)％、(57.49±5.41)％比(3.47±0.74)％]增高(P<0.05);40 mg/L萝卜硫素组细胞Bax[(0.57±0.03)比(0.12±0.01)]表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2[(0.16±0.01)比(0.81±0.03)]、Wnt[(0.19±0.01)比(0.74±0.02)]、β-catenin[(0.22±0.02)比(0.82±0.03)]蛋白表达降低(P<0.05).结论 萝卜硫素可抑制Y79细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关.
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萝卜硫素调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导胃癌HGC27细胞凋亡
目的 研究萝卜硫素对胃癌HGC27细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 培养HGC27细胞,分别以不同浓度的萝卜硫素干预,检测萝卜硫素对HGC27细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测萝卜硫素对 HGC27 细胞凋亡的影响;采用 WB 法检测萝卜硫素诱导胃癌 HGC27 细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3的表达及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)信号通路中PI3K、Akt及p-Akt蛋白的表达;WB检测抑制剂LY294002、萝卜硫素单独及联合诱导 HGC27 细胞后,PI3K、Akt 及 p-Akt 蛋白表达变化.结果 萝卜硫素呈时间浓度依赖性抑制HGC27细胞的增殖.与对照组比较,10、20、40 μg/ml萝卜硫素组细胞凋亡率[(10.29±1.57)%、(23.68±1.69)%、(35.29±2.38)%比(2.52±0.74)%]增加(P＜0.05),Bax[(18.92±2.18)、(34.06±5.06)、(44.08±5.69)比(12.51±2.15)]、caspase-3[(29.37±3.06)、(49.24±6.08)、(81.55±7.95)比(18.16±2.35)]表达升高(P＜0.05) , Bcl-2[(56.39±5.27) 、(33.06±4.26)、 (25.61±4.01)比(78.25±7.26)] 、 PI3K[(51.06±5.27) 、(42.06±5.21)、(23.08±4.51)比(79.07±8.12)]、p-Akt/Akt[(58.62±5.34)、(35.24±4.06)、(14.52±2.56)比(82.64±8.25)]蛋白表达降低(P＜0.05);与对照组比较,40 μg/ml萝卜硫素组、LY294002组、LY294002+萝卜硫素组细胞中 PI3K[(56.41±5.36)、(34.37±4.52)、(23.11±3.05)比(81.24±7.16)]、p-Akt/Akt [(49.52±5.84)、(31.06±4.09)、(21.05±2.28)比(77.52±7.06)]蛋白表达降低(P＜0.05).结论 萝卜硫素可抑制胃癌HGC27细胞增殖、促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关.
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萝卜硫素对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的神经元保护机制
目的 研究萝卜硫素(SFN)对大鼠局部脑缺血-再灌注损伤的神经保护机制.方法 24只雄性SD大鼠,随机(随机数字法)分为3组,A组:假手术组(n=8),B组:缺血-再灌注模型组(n=8),C组:萝卜硫素干预组(n=8);A组:假手术后腹腔注射等量磷酸盐缓冲液(PBS),B组:缺血-再灌注术后腹腔注射等量PBS,C组:缺血-再灌注术后腹腔注射萝卜硫5 mg/kg.通过四氮唑红(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定脑梗死体积,苏木精伊红染色法(HE)观察组织学形态改变,TUNEL法检测脑神经元凋亡变化,RT-PCR测定缺血脑组织核转录因子kappa B亚单位p65(NF-κBp65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达,免疫蛋白印记法(Western-bloting)检测脑组织iNOS、NF-κBp蛋白表达水平.结果 与B组比,C组脑梗死体积降低[(96.34±3.72) vs.(124.65 ±3.85),P＜0.01],且脑神经元凋亡减少,RT-PCR法显示C组脑组织NF-κBpmRNA和iNOS mRNA含量降低[(0.26 ±0.018)vs.(0.43±0.031),P＜0.01].Western-bloting结果显示,C组NF-κB和iNOS含量降低[(0.67 ±0.042) vs.(0.56 ±0.032),P＜0.01].结论 SFN可通过减少脑局灶性缺血-再灌注损伤后缺血脑组织NF-κB和iNOS表达,减少脑梗死体积,抑制神经元细胞凋亡,具有脑神经保护作用.
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萝卜硫素对肺气肿大鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响
目的 探讨萝卜硫素(SFN)对肺气肿大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 SPF级雄性Wistar大鼠18只,随机分为对照组(6只)和模型组(12只):模型组采用气管内滴注脂多糖(d1、d14)联合熏烟法构建肺气肿大鼠模型,持续60 d;对照组以生理盐水替代脂多糖,正常空气吸入.造模成功后,两组大鼠均行支气管肺泡灌洗,支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞计数,提取、纯化AM,用不同浓度SFN(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)干预模型组大鼠AM 16 h.依处理方法不同,将AM分为五组:对照组、SFN0组、SFN5组、SFN10组和SFN20组.采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中TNF-α含量;蛋白印迹法(Western blot)检测各组AM中核转录因子Nrf2及下游靶基因醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素氧合酶-1(HO1)蛋白相对表达量.结果 (1)模型组大鼠BALF中细胞总数及AM百分比均较对照组显著增加,分别为(2.79±0.42)×106/ml,(98.7±1.0)%和(0.77±0.16)×106/ml,(90.0±2.5)%(均P<0.001);(2)TNF-α在SFN各浓度组中含量均高于对照组[对照组:(12.2±2.7)pg/ml;SFN0组:(150.7±11.0) pg/ml;SFN5组:(133.1±13.7)pg/ml;SFN10组:(65.3±14.8)pg/ml;SFN20组:(48.2±11.1)pg/ml],随SFN干预浓度增加,TNF-α含量呈下降趋势(均P<0.05);(3)与对照组相比,SFN0组Nrf2蛋白胞核表达减少,胞质表达增加(均P<0.05),随SFN干预浓度增加,Nrf2胞核表达量相应增加,胞质相应减少(均P<0.05),即核内移增加;(4)与对照组相比,SFN0组NQO1、HO1蛋白表达减少,随SFN干预浓度增加,NQO1、HO1蛋白表达相应增加(均P<0.05).且NQO1、HO1表达量与TNF-α含量呈负相关(r=-0.918,P<0.01;r=-0.939,P<0.01).结论 SFN可通过增加Nrf2核内移,促进下游靶基因NQO1、HO1等转录表达,进而抑制肺气肿大鼠AM释放TNF-α.
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萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响
目的 评价萝卜硫素对于脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织炎症反应以及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 将30只雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分成假手术组、模型组和治疗组,每组各10只.模型组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备大鼠脓毒症模型,治疗组大鼠在术后立即腹腔注射50 mg/kg的萝卜硫素注射液,其余两组注入等量等渗NaCl溶液;于术后24 h大鼠右侧颈总动脉采集动脉血标本,然后处死大鼠取肺组织测定肺组织湿/干比.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测三组大鼠肺组织匀浆标本肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、NF-κB p65表达水平;荧光实时定量PCR检测三组大鼠肺组织TLR4 mRNA的表达.结果 假手术组、模型组及治疗组大鼠肺组织湿/干比[(4.00±0.13)、(6.10±0.05)、(5.80±0.08)]、氧合指数[(315±11)、(177±7)、(200±12)mmHg]、TNF-α[(6.05±0.29)、(45.06±0.52)、(27.09±0.85)ng/L]、IL-1β[(8.02±0.21)、(38.23±0.81)、(32.73±1.12)ng/L]及NF-κB p65[(0.375±0.013)、(1.230±0.045)、(0.988±0.043)ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义(F=480.891、255.309、4245.262、1918.168、564.842,P均<0.001).进一步两两比较发现,模型组和治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较假手术组大鼠显著升高(P均<0.05),治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较模型组大鼠显著降低(P均<0.05);而模型组和治疗组大鼠氧合指数均较假手术组大鼠显著降低(P均<0.05),治疗组大鼠氧合指数较模型组大鼠显著升高(P<0.05).荧光实时定量PCR结果显示,三组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义(F=224.538,P<0.001).进一步两两比较发现,与假手术组比较,模型组及治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达均显著升高(P均<0.05);而治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达较模型组显著降低(P<0.05).结论 萝卜硫素可减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应、肺水肿程度,改善缺氧状态,对于肺组织具有一定保护作用,且其作用机制可能与干预TLR4/NF-κB信号途径相关.
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萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠氧化损伤及脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1表达的影响
目的 评价萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠氧化应激损伤及脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 (APE1)表达的影响.方法 按随机数字表法将60只Sprague-Dawley大鼠分成三组:假手术组、模型组和治疗组,每组各20只.假手术组仅进行剖腹和关腹操作,模型组和治疗组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型,治疗组大鼠在术后立即通过腹腔内注射给予50 mg/kg的萝卜硫素注射液,其余两组注入等量等渗NaCl溶液.于术后24 h右侧颈总动脉采集动脉血标本,然后处死大鼠取肺组织.光镜下观察病理学结果,测定肺组织湿/干比.同时,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织匀浆标本谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)表达情况,采用蛋白质印迹法检测肺组织APE1的表达.结果 苏木素-伊红(HE)染色结果显示,假手术组肺组织结构清晰,未见明显水肿以及炎症细胞浸润;与假手术组相比,模型组大鼠肺组织病理形态学损伤严重,而治疗组肺组织损伤较模型组有所减轻.三组大鼠肺组织湿/干比(3.49±0.26、5.56±0.20、4.96±0.15)、动脉氧合指数(453±23、232±22、332±11)、GSH[(8.57±0.26)、(4.36±0.08)、(6.23±0.20)mg/g]及SOD表达水平[(91.0±3.0)、(55.5±2.5)、(72.1±2.4) NU/mg]比较差异均有统计学意义(F=107.897、128.676、275.863、183.797,P均＜0.001).进一步两两比较发现,模型组、治疗组大鼠肺组织湿/干比较假手术组均显著上升(P均＜0.05),治疗组肺组织湿/干比较模型组下降(P＜0.05);而模型组、治疗组动脉氧合指数及氧化损伤指标GSH和SOD水平较假手术组均显著下降(P均＜0.05),且治疗组较模型组均上升(P均＜0.05).蛋白质印迹法结果显示三组大鼠肺组织APE1表达水平比较差异有统计学意义(F=453.991,P＜0.001),进一步两两比较发现模型组、治疗组大鼠肺组织APE1表达较假手术组均显著下降(P均＜0.05),但治疗组较模型组明显上升(P＜0.05).结论 萝卜硫素可减轻脓毒症大鼠急性肺损伤,其机制可能与改善肺组织氧化应激反应及上调APE1表达有关.
关键词： 萝卜硫素 急性肺损伤 脓毒症 氧化应激 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 -
萝卜硫素对中波紫外线损伤HaCaT细胞的保护作用的研究
目的 观察萝卜硫素对中波紫外线(UVB)损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制.方法 用不同浓度的萝卜硫素对HaCaT细胞进行预处理4h,采用90mJ/cm2的剂量照射细胞,以MTT法检测细胞生存率,以酶联免疫吸附实验(ELTSA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α的分泌量,以流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 UVB的照射对HaCaT细胞造成明显的损伤,萝卜硫素可提高UVB照射后HaCaT细胞的生存率,抑制HaCaT细胞TNF-α的分泌水平,同时萝卜硫素能够降低UVB所引起的细胞凋亡率升高(P<0.05).结论 UVB对HaCaT细胞有损伤作用,而萝卜硫素具有光保护作用,萝卜硫素可能是通过降低UVB引起的炎症因子TNF-α的分泌从而减轻紫外线辐射引起的损伤,同时也降低了细胞的凋亡率,改善细胞受UVB照射后增殖活性下降的状况.
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萝卜硫素对小鼠放射性肺损伤的防护作用机制
目的 探讨萝卜硫素(sulforaphane,SF)对小鼠急性放射性肺损伤的防护作用及其机制.方法 40只雌性C57BL/6J小鼠,按随机数字表法分为健康对照组、单纯照射组、照射+SF3 mg/kg组、照射+SF 5 mg/kg组、照射+SF 10 mg/kg组,每组8只.以6MVX射线全肺单次12 Gy照射,各给药组自照射前7d开始至照射后7d,隔天腹腔注射不同浓度的SF,健康对照组和单纯照射组注射同等剂量的二甲基亚砜溶剂(DMSO+生理盐水).照后14 d,留取小鼠肺组织标本,HE染色观察病理改变,免疫组织化学法观察NLRP3的定位与表达,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、TGF-β1表达水平,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺组织中NLRP3、IL-1β mRNA的表达,Western blot检测NF-κB p65、NLRP3、IL-1β蛋白表达,凝胶迁移实验(EMSA)检测NF-κB活性.结果 HE染色结果显示,各照射+SF组与单纯照射组比较,肺组织急性炎性反应减轻.肺组织中NLRP3表达下降,照射+SF 10 mg/kg组NLRP3降低显著(F=42.750,P ＜0.05).支气管肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、TGF-β1水平下降(tIL-6=-62.65 ～-21.00,tTNF-α=-32.18～-16.57,tTGF-β1=-58.22～-46.11,P＜0.05).肺组织NLRP3和IL-1β mRNA表达显著下降(tNLRP3=-6.56 ～-5.68,tIL-1β=-29.75 ～-21.20,P＜0.05).NF-κB p65、NLRP3、IL-1β蛋白表达下降(tNF-κB p65=-34.00 ～-1.71,tNLRP3=-25.01～-16.91,tIL-1β=-73.70 ～-55.14,P＜0.05),其中NF-κB p65、NLRP3相对表达量和SF呈剂量依赖性降低(r=0.945、0.926).EMSA结果显示,NF-κB活性下降,且和SF呈剂量依赖性降低(tNF-κB=-38.68、-614.82、-2 831.40,P＜0.05).结论 萝卜硫素可通过降低小鼠肺组织NLRP3表达,有效地降低炎性因子的表达,减轻辐射诱导的炎症反应,对放射性肺损伤具有防护作用.
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萝卜硫素及其衍生物BSFN通过激活PI3K/Akt途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡
目的 研究萝卜硫素(SFN)及其衍生物(BSFN)对SH-SY5Y细胞的增殖抑制活性及通过PI3K/Akt途径探讨其抗肿瘤作用机制.方法 四甲基偶氮唑蓝比色法测定其对SH-SY5Y细胞增殖抑制率;通过免疫荧光法、流式细胞术、蛋白质印迹法对其进行抗癌机制研究.结果 四甲基偶氮唑蓝结果显示,萝卜硫素和萝卜硫素衍生物处理细胞72 h的IC50值分别为13.27和5.21μmol·L-1,且呈现时间剂量依赖性;Hoechst33258染色荧光显微镜观察发现,萝卜硫素、萝卜硫素衍生物能诱导SH-SY5Y细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin V-FITC/PI荧光双染结果亦证实萝卜硫素、萝卜硫素衍生物可以诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡;DAPI和DCFH-DA染色流式细胞术分析显示,萝卜硫素衍生物诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞、细胞活性氧产生增加,且较萝卜硫素作用明显;蛋白质印迹分析发现萝卜硫素和萝卜硫素衍生物能调节PI3 K/Akt途径中凋亡相关蛋白的表达,同时检测细胞内Nrf2与Keap-1蛋白表达,发现Nrf2蛋白表达增加,Keap-1蛋白表达减少.结论 萝卜硫素衍生物通过PI3 K/Akt信号途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡和S期阻滞,且作用优于萝卜硫素,可能成为一种新型的抗癌药物.
关键词： 萝卜硫素 萝卜硫素衍生物 SH-SY5Y细胞 细胞凋亡 PI3K/Akt信号途径 -
萝卜硫素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用
目的 研究萝卜硫素(sulforaphen,SFN)对大鼠局部脑缺血再灌注的抗氧化作用.方法 雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注模型组(I/R组)、萝卜硫素干预组(SFN组)(5mg/kg)；Sham组:假手术后腹腔注射等量PBS,I/R组:缺血再灌注术后腹腔注射等量PBS;SFN组:缺血再灌注术后腹腔注射萝卜硫素5mg/kg.通过测定脑梗死体积,HE染色观察组织学形态改变,酶联免疫吸附法检测缺血脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测HO-1蛋白水平的变化.结果 与I/R组比,SFN干预后可降低脑缺血再灌注后脑梗死体积(P＜0.05),ELISA法显示,SFN能降低脑缺血再灌注后大鼠的MDA含量(P＜0.05).Western blot结果显示,SFN能够明显诱导HO-1蛋白的表达(P＜0.05).结论 SFN可通过诱导HO-1的表达,减少脑局灶性缺血再灌注损伤后脑MDA含量,减少脑梗死体积,具有神经保护作用.
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萝卜硫素对人结肠癌HT-9细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响
[目的]研究萝卜硫素对人结肠癌HT-9细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.[方法]采用CCK8试剂检测萝卜硫素对HT-9细胞增殖的影响;碘化丙啶(PI)染色检测萝卜硫素对HT-9细胞凋亡的影响;免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达.[结果]萝卜硫素可以明显抑制HT-9细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性;PI染色结果提示萝卜硫素可明显诱导HT-9细胞的凋亡,10、20、40 μg/mL萝卜硫素作用24 h后,HT-9细胞的凋亡率分别为(14.67±1.95)%、(27.95±2.53)%及(35.6±3.75)%,并且让细胞停留在G0/G1期;Western Blot结果提示萝卜硫素呈剂量依赖性的抑制PI3K、p-Akt及Bcl-2蛋白的表达,并诱导Bax蛋白的表达.[结论]萝卜硫素可明显抑制HT-9细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活化有关.
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萝卜硫素通过Traf6/TAK1信号通路介导人胃癌细胞凋亡的机制研究
[目的]探讨萝卜硫素对人胃癌(HGC27)细胞增殖、凋亡的影响,并观察其可能作用的机制.[方法]将对数生长期的HGC27细胞分为空白对照组、15μg/mL萝卜硫素、30μg/mL萝卜硫素及60μg/mL萝卜硫素,用不同浓度药物处理细胞后,采用CCK8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,免疫印迹技术检测细胞中凋亡蛋白及肿瘤坏死因子受体相关分子6(Traf6)/转化生长因子-β活化激酶1(TAK1)信号通路蛋白表达量.[结果]与空白对照组相比,不同浓度萝卜硫素组细胞增殖抑制率及凋亡率明显升高(P<0.05);促凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平显著升高,而抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)水平则显著降低(P<0.05);Traf6、p-TAK1蛋白表达量相对于空白对照组显著升高(P<0.05).[结论]萝卜硫素可以抑制人胃癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡,Traf6/TAK1信号通路可能参与了萝卜硫素对肿瘤细胞的抑制作用.
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Nrf2-ARE通路的激活改善香烟提取物作用下肺泡巨噬细胞的吞噬功能
目的 探讨Nrf2-ARE通路的激活是否能修复香烟烟雾刺激后肺泡巨噬细胞的吞噬功能及抗氧化应激作用.方法 实验分为空白对照组、香烟烟雾提取物(CSE)组、萝卜硫素组和特丁基对苯二酚(T-BHQ)组.运用共聚焦显微镜观察吞噬情况,流式细胞仪分析吞噬功能和活性氧(ROS)的表达.运用Western印迹技术分析经药物干预16 h后Nrf2核蛋白在肺泡巨噬细胞中的表达.结果 与对照组相比,CSE刺激的肺泡巨噬细胞其吞噬功能明显下降(P <0.05);运用Nrf2-ARE通路的激活剂:萝卜硫素2.5 μmol/L和T-BHQ 20 μmol/L干预后可明显减缓香烟刺激引起的肺泡巨噬细胞吞噬功能的降低(P <0.05)并降低细胞内的ROS(P <0.05).Western印迹技术证实干预16 h后,T-BHQ及萝卜硫素可促进肺泡巨噬细胞Nrf2的核蛋白表达(P <0.05).在CSE作用下,肺泡巨噬细胞的吞噬功能与Nrf2核蛋白的表达量呈正相关(r =0.93,P <0.05);肺泡巨噬细胞ROS含量与Nrf2核蛋白的表达量呈负相关(r = -0.942,P <0.05),肺泡巨噬细胞的吞噬功能与细胞内ROS含量呈负相关(r = -0.883,P <0.05).结论 Nrf2-ARE通路的激活可减缓CSE激引起的肺泡巨噬细胞的吞噬功能下降并具有抗氧化应激的保护作用.
关键词： 萝卜硫素 特丁基对苯二酚 肺泡巨噬细胞 Nrf2-ARE通路 氧化应激 -
萝卜硫素可通过拮抗PXR受体抑制钠磷转运蛋白NaPi-Ⅱb表达
目的:SLC34a2基因编码的钠依赖性磷转运蛋白NaPi-Ⅱb在磷的吸收中起重要作用,减少CKD患者磷的肠道吸收可能是治疗其高磷血症的潜在方案.本研究旨在探索萝卜硫素(sulforaphane,SFN)能否通过拮抗孕烷X受体(preg-nane X receptor,PXR)抑制人源性结肠癌细胞中NaPi-Ⅱb表达,为高磷血症寻找新治疗靶点.方法:RT-qPCR检测3种结肠癌细胞系HT29、LOVO及SW480中PXR及SLC34a2 mRNA表达量;MTT法确定SFN及利福平(Rifampicin,RFP)的适宜作用浓度和时间;RT-qPCR和Westemblot分别检测药物处理后细胞系SLC34a2 mRNA和NaPi-Ⅱb的表达情况;观察探讨SFN、PXR及NaPi-Ⅱb三者之间的关系.结果:(1)10 μmol/L和20 μmol/L SFN均可抑制LOVO细胞中SLC34a2 mRNA及NaPi-Ⅱb表达,且后者的抑制效果更强.(2) 10 μmol/L SFN可降低由10 μmol/L RFP诱导的SLC34a2 mRNA和NaPi-Ⅱb高表达.结论:SFN对SLC34a2 mRNA及NaPi-Ⅱb表达存在确切抑制作用;SFN可竞争性抑制RFP激活PXR引起的NaPi-Ⅱb升高,表明SFN对NaPi-Ⅱb的抑制作用可通过SFN-/-PXR-NaPi-Ⅱb通路实现.
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萝卜硫素诱导白血病细胞K562凋亡及其与化疗药协同作用的实验研究
目的:探讨萝卜硫素诱导K562白血病细胞作用及其与化疗药的协同作用.方法:琼脂半固体集落培养法和MTT法检测不同浓度的萝卜硫素对K562细胞增殖的影响;倒置显微镜观察萝卜硫素对细胞形态的影响,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡调控蛋白PARP的活性;观察萝卜硫素分别和高三尖杉酯碱、阿糖胞苷联合的抑瘤作用,用药物相互作用指数评价药物协同作用.结果:萝卜硫素能够抑制白血病K562的增殖,呈剂量依赖性;萝卜硫素引起了K562细胞形态的明显改变,显著提高了细胞的早期凋亡率,增加了促凋亡蛋白PARP的表达水平;萝卜硫素与化疗药物高三尖杉酯碱和阿糖胞苷存在明显的协同作用,其协同系数分别为0.64和0.66.结论:萝卜硫素可以诱导K562细胞发生凋亡,增加化疗药物的敏感性,具有良好的临床应用前景.
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萝卜硫素对A375黑色素瘤增殖、生长、凋亡和血管生成的影响及其机制
目的 研究萝卜硫素(sulforaphane,sFN)对A375黑色素瘤增殖、生长、凋亡和血管生成的影响及其作用机制.方法 细胞增殖实验研究SFN对A375细胞增殖的影响;裸小鼠皮下移植瘤模型研究SFN对黑色素瘤体内生长的影响;流式细胞仪检测萝卜硫素对A375黑色素瘤细胞凋亡的影响;小管形成实验检测SFN对A375人黑色素瘤血管生成的影响;蛋白质印迹法检测SFN对A375细胞中调控增殖、凋亡及血管生成相关蛋白表达的影响,如Bax、Bcl-2、VEGF、bFGF、cleavedPARP、p-P38、t-P38、p-Erk、t-Erk.结果 SFN对A375细胞的增殖具有明显的抑制作用;SFN能够明显抑制A375裸鼠皮下移植瘤的体内生长;SFN能显著抑制肿瘤细胞诱导的血管生成;SFN对A375黑色素瘤细胞的凋亡无明显影响.机制研究发现,SFN对VEGF、bFGF、p-P38及p-Erk的表达具有抑制作用,但对Bcl-2、Bax及cleaved PARP蛋白的表达没有明显影响.结论 萝卜硫素具有抗黑色素瘤体内生长的能力,其作用机制与调控黑色素瘤细胞的凋亡无关,而可能是通过抑制黑色素瘤的血管生成.
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这些营养可别丢了
萝卜皮萝卜皮富含萝卜硫素,是十字花科蔬菜里有益健康的物质之一,可诱发肝脏解毒酵素的活性,并可保护皮肤免受紫外线伤害.苹果皮、西红柿皮苹果皮、西红柿皮富含抗氧化成分与膳食纤维,利于降血脂.苹果皮还曾被美国《预防》杂志列为天然护肤食物之一,主要因为苹果皮里的懈皮素可保护皮肤不受紫外线伤害.西红柿皮中的番茄红素也能抵抗紫外线,并抑制皮肤细胞产生黑色素.葡萄皮葡萄皮中含有的花青素比果肉还多,具有保护微细血管、抗炎的作用.建议洗净后连皮带肉与籽一起打成汁,完整摄取营养.
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萝卜硫素的体外抗氧化和抑菌活性
目的 观察萝卜硫素(SFN)体外抗氧化和抑菌活性.方法 试剂盒检测SFN总抗氧化能力(TAC)、抑制超氧阴离子(O2-)活力；水杨酸比色法和邻苯三酚自氧化法检测羟自由基(OH-)与超氧阴离子(O2-)清除能力；滤纸片法检测SFN的抑菌作用,连续二倍稀释法测定其低抑菌浓度( MIC)、低杀菌浓度(MBC)和对大肠杆菌和金色葡球菌生长的抑制.结果 SFN在体外模拟系统中总抗氧化活性和抑制抑制O2-生成活力较高,但对OH-和O2-的直接清除率较低,低于30％.抑菌结果表明SFN对大肠杆菌、金色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草杆菌、表皮葡萄球菌5种受试菌均有较强的抑制作用,MIC为0.78～6.25 μg/ml之间.结论 SFN具有较好的抗氧化活性和较强的抑菌效果.
