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雷帕霉素减少GK糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其机制
目的 观察糖尿病肾组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、核因子(NF-κB)的表达及其与肾组织细胞凋亡关系以及雷帕霉素对其的影响.方法 将20只GK大鼠随机分为DM组(n＝10)、DMR组(n＝10),10只Wistar大鼠作为NC组.DMR组予以6mg/kg雷帕霉素灌胃,DM与NC组仅给予等量生理盐水灌胃.TUNEL法检测肾组织细胞凋亡.免疫组织化学法(IHC)检测肾组织TNF-α和NF-κB的表达.结果 TUNEL法显示,NC组肾组织未见明显的凋亡细胞;4周及8周DM组凋亡数呈进行性增多(P＜0.01).IHC显示,NC组肾组织TNF-a、NP-k Bp65有轻微阳性表达;4周、8周DM组NF-k Bp65、TNF-α表达有逐渐上升的趋势,均显著高于正常对照组(P＜0.01).NF-κBp65、TNF-α阳性表达呈正相关(P＜0.01);肾组织NF-α和NF-κBp65表达与肾组织细胞凋亡之间均呈正相关(P＜0.01);与DM组比较,DMR组4周、8周组肾组织TNF-α和NF-κBp65的过度表达均被显著抑制(P＜0.01),肾组织细胞凋亡数显著减少(P＜0.01).结论 NP-κB及其诱导的TNF-α在糖尿病肾病损伤中发挥重要作用,雷帕霉素可能通过抑制NP-kB和TNF-α的表达减少减轻肾组织细胞凋亡.
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阿司匹林对胰岛瘤细胞株NIT-1细胞增殖及NF-κB表达的影响
目的 探讨阿司匹林对胰岛瘤细胞株NI-1细胞增殖、胰岛素分泌及NF-κB p65的影响.方法培养胰岛细胞株NIT-1细胞,经不同浓度阿司匹林处理后,采用MTT法检测细胞增殖,Hoechest 33342荧光染色法观察细胞核形态和细胞凋亡变化,用放射免疫法测定胰岛素分泌和通过NF-κBp65激活-核转运试剂盒在荧光显微镜下检测NF-κBp65的表达. 结果 随药物浓度增加和作用时间的延长,阿司匹林对NIT-1细胞增殖的抑制作用逐渐增强,细胞培养24 h时,5 mmol/L阿司匹林组与对照(NC)组比较(P=0.011374),10 mmol/L阿司匹林组与NC组比较(P=0.000079),差异均有统计学意义.随阿司匹林剂量的不断增加,细胞培养各时间段均出现不同的剂量-效应关系.当药物浓度在1 mmol/L 时,细胞培养48 h后,细胞增殖明显变缓慢,胰岛素分泌水平降低,且表现出明显的时间-效应关系.随阿司匹林浓度的增加,凋亡细胞数明显增多,细胞内NF-κB p65表达显著下降. 结论 阿司匹林对胰岛瘤细胞株NIT-1的增殖具有抑制作用,其抑制作用随阿司匹林浓度增加,呈时间-效应和剂量-效应关系.
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高糖通过激活人脐静脉内皮细胞IκB-α/NF-κB途径诱导MCP-1的表达
目的 观察高糖诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB的活性和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达,探讨糖尿病并发动脉粥样硬化的发病机制. 方法 在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度葡萄糖,检测内皮细胞中MCP-1 mRNA、MCP-1蛋白的表达,NF-κB的活性及IκB-α的磷酸化水平. 结果 高糖明显地诱导了血管内皮细胞NF-κB的活性、MCP-1的表达及IκB-α的磷酸化;NF-κB活性抑制剂明显地降低了高糖所诱导的MCP-1的表达. 结论 高糖通过诱导血管内皮细胞IκB-α的磷酸化激活NF-κB,从而诱导了MCP-1的表达.提示在糖尿病并发动脉粥样硬化的发病过程中,高血糖通过激活血管内皮细胞IκB-α/NF-κB途径诱导MCP-1的表达,进而发挥了重要的作用.
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糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-κB和COX-2表达
目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对大鼠心脏微血管内皮细胞因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系. 方法 体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-κB及COX-2蛋白的表达. 结果 25、50、100、200mg/L BSA-AGEs作用后,NF-κB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg/L AGEs作用6、12、24、48h,NF-κB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多. 结论 BSA- AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-κB和COX-2的表达,其作用可能与NF-κB的活化有关.
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核转录因子κB在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达及其与传导速度的关系
目的 研究核转录因子κB(NF-κB)在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达动态变化及其意义.方法 建立糖尿病大鼠模型后,分别在实验1个月、3个月、6个月时测定坐骨神经的传导速度和NF-κB的表达量.结果 (1)坐骨神经传导速度:与正常对照(NC)组相比,糖尿病模型1个月组大鼠坐骨神经传导速度未见明显下降,3个月、6个月组则明显下降(P＜0.05);(2)EMSA电泳条带灰度分析:与NC相比,NF-κB表达在糖尿病各组均明显增强(P＜0.05).结论 NF-κB在糖尿病大鼠坐骨神经中持续活化,推断NF-κB在糖尿病周围神经病变的发病机制中起重要作用.
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中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响
目的 观察中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响. 方法 阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为对照组(10只)、模型组(9只)、心康方组(9只)和卡托普利组(9只).Masson染色观察心肌胶原变化,Western blot检测心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子κB的抑制蛋白(IκB)和p56的表达,Western blot和RT-qPCR分别检测心肌基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平. 结果 与对照组比较,模型组大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著增加,胶原容积分数显著升高(均为P＜0.01);TGF-β1和p56表达显著增加,IκB显著降低(均为P＜0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P＜0.01或P＜0.05).与模型组比较,心康方组和卡托普利组大鼠的心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著减少,胶原容积分数显著降低(均为P＜0.01);TGF-β1和p56显著降低,IκB显著升高(均为P＜0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著降低(P＜0.叭或P＜0.05). 结论 中药心康方可减轻心力衰竭大鼠的心肌胶原沉积,其机制可能与抑制核因子κB介导的TGF-β1上调有关.
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姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少类风湿关节炎破骨细胞生成
目的 研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者破骨细胞生成的影响及可能机制.方法 分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导培养为破骨细胞,不同浓度Cur(0、2.5、5和10 μmol/L)进行干预.培养14 d后行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色标记成熟破骨细胞并计数;Western blot法检测各组细胞中核因子-κB抑制蛋白α(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκBαⅡ)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达;Western blot法检测细胞质和细胞核中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的表达.结果 Cur 2.5、5和Cur 10 μmol/L组TRAP阳性细胞数(个/10个视野)分别为103.00±4.36、89.33±4.93和67.33±4.16,与Control组146.67±6.11相比均明显减少(P＜0.05);IκBα蛋白表达水平明显升高,p-IκBα的表达水平明显下降(P＜0.05);细胞质中NF-κB p65表达水平明显升高,细胞核中NF-κB p65表达水平明显下降(P＜0.05).结论 姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少RA破骨细胞生成.
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核因子κB、细胞间粘附分子1在吸烟大鼠气道上皮细胞中的表达
目的探讨核因子κB (NF-κB)和细胞间粘附分子1(ICAM-1)在吸烟大鼠气道上皮细胞中表达的变化及其在气道炎症形成过程中的作用.方法 Wistar大鼠39只,随机分为不吸烟组、吸烟1个月组、3个月组,每组13只.采用免疫组织化学染色和原位杂交技术半定量检测各组NF-κB亚单位p65和ICAM-1的表达.结果 (1) 吸烟1个月组、3个月组细支气管上皮细胞NF-κB核染色阳性细胞百分比为 (63±4)%、(51±5)%,与不吸烟组[(27±5)%]比较,差异有显著性(P分别＜0.01);(2)吸烟1个月组、3个月组主、细支气管气道上皮细胞ICAM-1 mRNA的表达为0.645±0.038、0.747±0.041、0.688±0.062、0.809±0.023,与不吸烟组(0.526±0.023、0.635±0.044)比较差异有显著性(P分别＜0.01);而且3个月组与1个月组比较差异也有显著性(P分别＜0.05、0.01);(3)吸烟1个月组、3个月组主、细支气管气道上皮细胞ICAM-1蛋白表达为0.73±0.04、0.94±0.05、0.77±0.04、0.99±0.03,与不吸烟组(0.57±0.04、0.83±0.04)比较,差异也有显著性(P分别＜0.01);而且3个月组与1个月组比较差异也有显著性(P分别＜0.05);(4)各组细支气管上皮细胞ICAM-1 mRNA及其蛋白表达与主支气管比较(P分别＜0.01);(5)吸烟1个月组大鼠细支气管上皮细胞NF-κB 核染色阳性细胞百分比与ICAM-1蛋白表达呈正相关(r=0.462,P＜0.05).结论 NF-κB及ICAM-1在吸烟所致气道炎症形成过程中可能发挥重要的作用.
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蛋白激酶C-核因子κB信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响
目的探讨蛋白激酶C(PKC)-核因子κB(NF-κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法体外培养HPASMCs,用工具药PKC激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA+PDTC组在常氧和缺氧条件下培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA表达,Western blot法检测VEGF和NF-κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达,免疫细胞化学法检测NF-κB p65的表达和定位,流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果(1)NF-κB p65胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2/M%:常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA+PDTC组比较差异均有显著性(P均<0.05);缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性(P<0.05).(2)VEGF mRNA和蛋白表达:常氧对照组、PMA组、PMA+PDTC组组间差异均无显著性(P均>0.05);缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA+PDTC组、常氧PMA组,差异均有显著性(P均<0.05).(3)缺氧PMA组NF-κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2/M%之间均呈正相关(r=0.587～0.710,P均<0.05).结论常氧培养HPASMCs存在PKC-NF-κB信号转导通道;缺氧培养HPASMCs 增殖与PKC激活、NF-κB活化和VEGF高表达有关.提示NF-κB活化是HPASMCs PKC信号转导通道的下游事件,缺氧时HPASMCs PKC-NF-κB信号转导通道激活和VEGF高表达可能参与缺氧性肺动脉高压的形成.
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内皮细胞在不同间歇缺氧方式时核因子κB和细胞间黏附分子1的变化
目的 测定人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304在不同间歇缺氧(IH)程度、频率、时段和恢复时段下核因子κB(NF-κB)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的变化.方法 在自制细胞培养舱中程控产生预置的IH/ROX(再氧合)暴露环境,将ECV304细胞暴露于该环境共60次循环.暴露时按IH/ROX时段将细胞分为11组,每组样本数为12.A组:采用21%O2 15 s/21%O2 3分钟45秒(即间歇正常氧)方案;B组:置于标准孵箱中不加暴露(标准孵育);C组:采用1.5%O215 s/21%O2 3分钟45秒方案;D组:采用10%O2 15 s/21%O2 3分钟45秒方案;以下固定IH方案为1.5%O2 15 s和ROX程度21%O2不变,IH/ROX循环频率分别为12次/h(C组)、9 次/h(E组)、6次/h(F组)、20次/h(G组)和40次/h(H组);I组:采用1.5%O230 s/21%O23分钟45秒方案;C组完成暴露后放回标准孵箱中60 min为J组,120 min为K组.分别采用酶联免疫吸附(ELISA)法和细胞表面ELISA法测定细胞裂解液中总NF-κB水平和细胞表面ICAM-1浓度,并测定总蛋白含量.结果 C组NF-κB和ICAM-1水平分别为(0.82±0.28)、(1562±56) pg/ml,A组分别为(0.37±0.07)、(768±80) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(D值分别为225.00、176.04,P分别＜0.01、＜0.05);D组分别为(0.66±0.22)、(1113±76) pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为25.00、0.00,P均＜0.01);I组分别为(0.45±0.16)、(1155±19) pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为27.00、0.00,P均＜0.01);同时C组的NF-κB和ICAM-1水平在C、E、F、G和H这5个不同IH频率组的比较亦是相对高的(χ2分别为35.63、56.89,P均＜0.01);J组NF-κB水平[(0.6233±0.0534)]与C组比较差异无统计学意义(D=36.00,P＞0.05),而K组NF-κB水平[(0.3050±0.0013)]与C组比较差异有统计学意义(D=234.00,P＜0.01).结论 IH/ROX可对内皮细胞造成程度依赖的炎性损伤且不易恢复,中度频率的IH/ROX将选择性激活细胞炎性通道,而过高频率和过长时段的IH反而激活细胞适应性通道.
关键词： 细胞低氧 核因子κB 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 细胞间黏附分子1 -
核因子κB和蛋白激酶C对哮喘Th2类细胞因子表达的调控
目的探讨核因子κB(NF-κB)和蛋白激酶C(PKC)中对支气管哮喘T淋巴细胞表达Th2类细胞因子白细胞介素4(IL-4)和IL-5的调控信号传导中的作用.方法将16只豚鼠随机分为哮喘组和正常对照组,每组8只;人体材料取自16例急性发作期哮喘患者及16名正常对照者.分别从每只豚鼠及每位受试者的外周血中分离出T淋巴细胞并分成3组培养.第1组作为空白对照,第2组加入PKC激动剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA),第3组同时加入PMA和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC).将培养的T淋巴细胞涂片,用免疫组织化学染色方法检测NF-κB的表达,用原位分子杂交方法检测IL-4和IL-5的mRNA,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中的IL-4和IL-5.结果加入PMA培养的哮喘T淋巴细胞NF-κB活化细胞百分比、IL-4和IL-5的mRNA表达阳性细胞百分比、培养液上清中的IL-4和IL-5与空白对照组比较差异均有显著性(q=8.44～38.66,P<0.01),且与加入PMA培养的正常T淋巴细胞组比较差异也均有显著性(q=8.11～40.12,P<0.01);而同时加入PMA和PDTC培养的哮喘T淋巴细胞的以上指标与加入PMA培养的哮喘T淋巴细胞比较差异也均有显著性(q=6.50～35.63,P<0.01).T淋巴细胞NF-κB活化细胞的百分比与IL-4和IL-5的mRNA表达阳性细胞的百分比均呈显著正相关(r=0.60～0.82,P均<0.001),与培养液上清中的IL-4和IL-5也均呈显著正相关(r=0.42～0.70,P均<0.005或0.001).结论 T淋巴细胞PKC活化后使IL-4和IL-5的表达增加的生物信号可能是通过激活NF-κB来传导的.T淋巴细胞PKC-NF-κB信号传导途径的激活可能是哮喘的发病机制之一.
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核因子κB顺式"诱骗"元件对支气管哮喘患者T淋巴细胞功能的干预作用
目的探讨核因子κB(NF-κB)顺式诱骗寡脱氧核苷酸(ODN)对体外支气管哮喘(简称哮喘)患者T淋巴细胞增殖/凋亡功能和细胞因子合成功能的干预作用. 方法将T淋巴细胞分为四组:正常对照组(A组)、哮喘空白组(B组)、哮喘NF-κB顺式诱骗ODN组(B1组)和无序哮喘ODN组(B2组).两种ODN分别经脂质体转染至后两组细胞.通过流式细胞术、四甲基偶氮唑盐微量比色法检测T淋巴细胞的凋亡和增殖;通过原位细胞杂交和酶联免疫吸附试验检测T淋巴细胞白细胞介素5(IL-5)mRNA和蛋白质的表达;通过逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)和Western blot检测T淋巴细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白质的表达. 结果 B1组T淋巴细胞增殖率为0.220±0.020, 与B组(0.340±0.030)比较差异有显著性(P＜0.05);凋亡率为(10.8±1.3)%, 与B组[(8.1±1.2)%]比较差异也有显著性(P＜0.05); 同时B1组IL-5 mRNA和蛋白质的表达分别为21±4、24±4,与B组(33±4、54±10)比较,差异有显著性(P＜0.05);B1组iNOS mRNA和蛋白质的表达分别为0.33±0.05、782±117,与B组(0.75±0.13、1 185±230)比较,差异有显著性(P＜0.05).而B2组与B组比较,上述指标的差异无显著性(P均>0.05). 结论 NF-κB顺式诱骗元件能使哮喘患者异常增殖的T淋巴细胞增殖减少、凋亡增多,使其过度分泌的炎性因子合成减少.有进一步探讨其作为新的哮喘基因治疗手段的价值.
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Toll样受体3介导的信号通路在原发性胆汁性肝硬化模型中的作用
目的 初步探索Toll样受体3(TLR3)介导的信号通路在原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病中的作用以及趋化因子受体3(CXCR3)对其影响.方法 6～8周雌性C57BL/6野生鼠和CXCR3基因敲除(CXCR3-/-)鼠,腹腔注射5 mg/kg的聚肌胞(poly I:C),每周2次,第8、16、24周收集小鼠肝脏标本,免疫印迹法比较正常对照组和PBC模型组之间小鼠肝脏中TLR3、TIR区域的调节分子1(TRIF)和转录因子核因子κB(p-NFκB p65)的含量差异.结果 与对照组相比,PBC模型组的线粒体抗体滴度和碱性磷酸酶水平明显增高,P<0.05;poly I:C腹腔注射后,第8周可见小胆管周围炎性细胞浸润,胆管上皮细胞变性坏死;第16周可见小叶间胆管增生,炎性细胞浸润;第24周可见小胆管损伤、闭塞,胆管内胆栓形成.免疫印迹结果显示,PBC模型组小鼠肝脏中TLR3的相对含量均较正常对照组升高,不同时期野生鼠PBC模型组之间TLR3的相对含量无明显差异,与第8周相比,第16和24周CXCR3-/-小鼠TLR3的相对含量有下降趋势:各个时期PBC模型组肝脏中的TRIF的相对含量较正常小鼠无明显变化,野生鼠和CXCR3-/-小鼠PBC模型组之间TRIF的相对含量无明显差异;各个时期野生鼠PBC模型组肝脏中的p-NFκB p65的相对含量与正常小鼠无明显差异,CXCR3-/-小鼠PBC模型组肝脏中的p-NFκB p65的相对含量较正常小鼠升高.结论 TLR3介导的信号通路在PBC模型发病中可能发生一定的作用;TLR3介导的信号通路可能主要通过IRF-3产生1型干扰素诱导疾病的发生;CXCR3对PBC模型发病中TLR3介导信号通路的作用无显著影响.
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阿司匹林对Aβ25-35诱导神经元炎性损伤的保护作用研究
目的 观察阿司匹林对Aβ25-35诱导神经炎性反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-13)、核因子κB(NF-κB)/p65核蛋白和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIκB-α)总蛋白表达的影响,探讨NF-κB通路在此过程中的作用.方法取孕龄17 ～18 d SD大鼠的海马神经元,将培养至第7天的神经元随机分为4组:(1)Aβ组:加入终浓度为20 μmol/L的Aβ25-35;(2)低剂量阿司匹林组:加入终浓度为50μmol/L的阿司匹林和20 μmol/L的Aβ25-35;(3)高剂量阿司匹林组:加入终浓度为100μmol/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ25-35;(4)空白对照组:加入等量维持培养基.继续培养48 h后,采用双抗体夹心ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Western-Blot法检测NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平.结果 (1)与对照组比较,Aβ组TNF-α和IL-1β的含量明显升高(P＜0.01),NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白的表达水平也明显升高(P＜0.01);(2)与Aβ组比较,低剂量和高剂量阿司匹林均可降低TNF-α和IL-1β的含量(P＜0.05),并减少NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平(P＜0.05);(3)低剂量和高剂量阿司匹林组两组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿司匹林可能通过抑制NF-κB的激活来减轻Aβ25-35诱导神经元的炎性损伤.
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肿瘤坏死因子-α对泡沫细胞胆固醇流出及ATP结合盒转运子A1表达的影响
目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对泡沫细胞胆固醇流出途径的影响及可能作用机制.方法采用人组织瘤细胞-1(THP-1)细胞诱导分化形成的泡沫细胞,测定TNF-α与细胞胆固醇流出的时间、浓度关系.然后给予饱和浓度的TNF-α刺激,随机将泡沫细胞分成对照组、TNF-α组、对甲苯磺酰L-苯丙氨酸甲基甲酮(N-α-tosyl-L-phenylalanine chloromethy ketone,TPCK)组及TPCK+TNF-α组,以RT-PCR法、Western blot法测定细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)的表达.结果TNF-α抑制细胞胆固醇流出呈时间、浓度效应,在10.0 ng/ml时,TNF-α抑制胆固醇流出达到饱和效应.10.0 ng/ml TNF-α刺激后以时间依赖方式下调ABCA1表达.TPCK预孵育后可部分逆转TNF-α对ABCA1表达的下调.结论炎症因子TNF-α可通过抑制ABCA1的表达而减少细胞胆固醇的流出,核因子κB(NF-κB)激活抑制剂TPCK可逆转TNF-α的上述影响,提示TNF-α抑制ABCA1表达与NF-κB激活有关.TNF α/NF-κB信号途径可抑制泡沫细胞的胆固醇流出,从而加重细胞内胆固醇的蓄积.
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DAPK1在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达及其作用
目的 探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达及在炎症失控中的作用.方法 将30只雄性C57小鼠按随机数字表法分为5组:正常对照组、LPS诱导急性肺损伤3、6、12、24h组.应用2 mg/kg DAPK1抑制剂TC-DAPK 6预处理小鼠后,再用10 mg/kg LPS诱导小鼠肺损伤.HE染色光镜观察小鼠肺组织病理改变;免疫组化检测肺组织中DAPK1的表达和分布;应用RT-PCR和Western blot检测肺组织DAPK1和NF-κB p65的表达;ELISA检测血清炎症因子TNF-α、IL-6水平变化;Kaplan-Meier生存分析对各组小鼠存活时间进行分析.结果 LPS致伤组肺组织可见明显病理损伤改变且随时间进展加重,而DAPK1蛋白在正常对照组小鼠肺组织仅少量表达,在急性肺损伤小鼠肺组织中表达随时间进展明显增加;与正常对照组相比,LPS组肺组织DAPK1 mRNA蛋白表达水平均明显增高(P＜0.05),血浆炎症因子TNF-α、IL-6均明显升高(P＜0.05).抑制小鼠肺DAPK1表达可明显降低LPS诱导的肺组织中DAPK1和NF-κB p65蛋白水平、血清炎症因子TNF-α、IL-6的水平(P＜0.05).此外,抑制DAPK1可延长LPS致急性肺损伤小鼠的生存期(P＜0.01).结论 DAPK1通过调控NF-κB炎症通路参与了LPS诱导的小鼠急性肺损伤,其可作为潜在的治疗靶点.
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NF-κB表达与糖尿病大鼠肺损伤的关系
目的 探讨糖尿病大鼠肺脏的NF-κB表达情况及NF-κB的表达增强对肺脏损伤的程度.方法 30只10周龄SD大鼠随机分为正常对照组(A组,雌雄各5只)、糖尿病模型组(B组,雌雄各10只),采用链脲菌素诱导建立12周糖尿病大鼠模型.模型建立12周后,全部大鼠采用20％的乌拉坦1.35 g/kg腹腔内注射麻醉处死,并取左肺下叶固定切片.光学显微镜下观察肺组织炎症程度,免疫组织化学方法检测肺组织NF-κB表达的阳性面积百分比.结果 ①肺部炎症观察:大多数正常对照组大鼠肺组织内未见炎症细胞.糖尿病模型组可见片状炎症细胞聚集,局部肺泡结构消失;②NF-κB的表达:NF-κB主要表达于气管、肺泡的上皮细胞内.正常对照组肺组织阳性表达明显弱于糖尿病模型组.分别对正常对照组和糖尿病模型组大鼠肺脏支气管上皮细胞和肺泡壁上皮细胞的NF-κB的表达做秩和检验(P＜0.05)具有明显统计学差异.结论 2型糖尿病大鼠模型肺组织内时炎症的改变程度较正常对照组相比明显加重,NF-κB的表达增加可能是糖尿病时肺脏病变的一个重要的危险因素.
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利拉鲁肽通过抑制核因子κB p65磷酸化调控人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的表达
目的 探讨利拉鲁肽在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能的影响及其可能机制.方法 高糖环境下(25 mmol/L葡萄糖)培养人脐静脉内皮细胞,分别给予10、100、1 000 μg/L利拉鲁肽进行干预,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法分别检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及核因子κB p65 (NF-κB p65)的mRNA、蛋白表达水平;应用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)干预利拉鲁肽处理后的HUVECs,观察eNOS、iNOS、NF-κB p65的mRNA、蛋白表达水平的变化.研究结果多组间采用单因素方差分析,两组间比较采用SLD分析.结果 与普通培养基(7 mmol/L葡萄糖)组相比,高糖环境下HUVECs的eNOS mRNA和蛋白表达均降低,iNOS mRNA和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65蛋白表达均增高(t=2.79、5.75、4.32、4.85、7.12,均P＜0.05).与0μg/L组相比,1 000μg/L利拉鲁肽干预组HUVECs的eNOS mRNA、eNOS蛋白表达均上调,iNOS mRNA、iNOS蛋白表达及NF-κB p65磷酸化蛋白表达均下调(t=5.12、9.34、6.70、5.50、8.94,均P＜0.05).与单独使用利拉鲁肽组相比,TNF-α联合利拉鲁肽组HUVECs的eNOSmRNA和蛋白表达均下调,iNOS mRNA和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65蛋白表达均上调(t=3.33～7.87,均P＜0.05).结论 利拉鲁肽可通过抑制NF-κB p65磷酸化在转录和翻译水平上增加eNOS表达、降低iNOS的表达,从而改善内皮细胞功能,预防糖尿病动脉粥样硬化.
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卡介苗多糖核酸通过抑制支气管哮喘小鼠核因子κB影响支气管肺泡灌洗液中细胞因子水平的研究
目的 观察卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠Th1/Th2型免疫反应的调节作用,探讨核因子κB(NF-κB)与细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白介素4(IL-4)、IL-5的关系及BCG-PSN的调节作用.方法 35只小鼠随机分为对照组、卵白蛋白(OVA)组、BCG-PSN 6周龄组、BCG-PSN 6周龄+OVA组、BCG-PSN 1周龄+OVA组.所有动物于第40天和第41天雾化吸入OVA进行气道激发,第42天行支气管肺泡灌洗;取支气管、肺组织标本.用ELISA方法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中INF-γ、IL-4、IL-5的水平,用免疫组织化学染色方法检测支气管、肺组织NF-κB的表达.结果 OVA致敏后BALF中IL-4、IL-5的水平及支气管、肺组织中NF-κB的表达明显增加,且NF-κB的表达与IL-4、IL-5的水平呈正相关;BCG-PSN免疫后IL-4、IL-5的水平及NF-κB的表达下降,BCG-PSN 1周龄+OVA组IFN-γ的水平有显著升高.结论 NF-κB对IL-4、IL-5具有上调作用,BCG-PSN免疫可提高BCG-PSN 1周龄鼠IFN-γ水平.
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Toll样受体4介导的Th2免疫在支气管哮喘中的作用
支气管哮喘(简称哮喘)是一种以Th2优势免疫为特征的慢性气道炎症性疾病.Toll样受体4(TLR4)是表达在固有免疫细胞表面的模式识别受体,与病原体相关分子模式结合并启动细胞内信号转导.脂多糖介导的TLR4信号转导激活核转录因子NF-κB,引起固有免疫细胞活化.一方面,分泌多种促炎症细胞因子、参与炎症形成,并促进抗原递呈,引起初始型T细胞向Th1或Th2分化.另一方面,诱导协同刺激分子表达,启动特异性免疫应答.这两种效应在哮喘气道炎症、气道高反应性和气道重塑的发生与发展过程中起着重要作用.以TLR4信号通路作为靶点,有望为哮喘免疫治疗开辟新的途径.
