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人膜转运蛋白ABCA1及清道夫受体CLA-1表达上调剂的筛选和活性研究
目的 筛选上调人ATP结合盒转运体A1 (ABCA1)和人清道夫受体(CLA-1)表达的新型活性化合物,为抗动脉粥样硬化药物提供先导化合物.方法 应用本实验室已经建立的ABCA1和CLA-1表达上调剂的高通量筛选模型对20 000个化合物进行筛选,从中获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物,对其及结构类似物进行活性测定,并进行初步的构效关系研究.结果 化合物5033171和5242411具有较好的上调ABCA1和CLA-1表达的活性,在ABCA1上调剂模型上的EC50分别为2.10和3.87 μmol/L,在CLA-1上调剂模型上的EC50分别为1.37和1.57 μmol/L.构效关系研究结果提示苯并噻唑的6位有长链烷基取代对增加活性有利.结论 化合物5033171和5242411是活性很好的ABCA1和CLA-1上调剂.
关键词： ATP结合匣式转运子 动脉粥样硬化 高通量筛选 -
药物外排泵基因表达与结核分枝杆菌耐药关系的探讨
目的 探讨MTB药物外排泵基因的表达与耐药表型、耐药相关基因突变型的关系.方法 从2007年天津市结核病控制中心参比室库存菌株中选择对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇联合或单一耐药的全部耐药MTB菌株45株及对以上4种药物全敏感的MTB菌株26株(全敏组).采用直接测序法检测异烟肼耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC、ndh,利福平耐药相关基因rpoB,链霉素耐药相关基因rpsL、rrs和乙胺丁醇耐药相关基因embB、embC、embA的突变情况.提取菌株RNA后逆转录并采用real-time PCR方法检测药物外排泵基因Rv1410c、Rv2136c、Rv0783c和Rv1819c的表达量,并用方差分析和t检验的方法分析药物外排泵基因表达量在不同菌株耐药表型、耐药相关基因突变型菌株中的差异.结果 Rv1410c表达量在耐链霉素组[(8.48±6.33)×10-5],耐异烟肼组[(8.43±6.38)×10-5],耐利福平组[(9.59±7.27)×10-5],耐多药组[(10.37±7.86)×10-5],耐异烟肼+链霉素组[(9.39±6.81)×10-5],均高于全敏组表达量[(5.67±3.29)×10-5],差异有统计学意义(t′值分别为2.18、2.20、2.29、2.34、2.43,P均<0.05).Rv2136c表达量在耐异烟肼组[(3.51±2.43)×10-5],耐多药组[(4.21±2.94)×10-5],耐异烟肼+链霉素组[(3.81±2.46)×10-5]均高于全敏组表达量[(2.50±1.44)×10-5],差异有统计学意义(t′值分别为2.03、2.22、2.28,P均<0.05).rpoB 531突变型菌株Rv0783c的表达量[(5.41±3.03)×10-6]高于野生型耐利福平菌株[(2.29±1.62)×10-6],差异有统计学意义(t′=2.81,P<0.05).结论 Rv1410c和Rv2136c表达量高低与MTB对多种药物耐药有关,Rv0783c的高表达与利福平耐药株rpoB 531位密码子突变可能相关.
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三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因R219K多态性与冠心病相关性的荟萃分析
目的 研究中国人群ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因R219K多态性与冠心病的相关性.方法 计算机检索CBM、CNKI、万方数据库、VIP及Medline、PubMed等数据库,收集中国人群ABCA1基因R219K多态性与冠心病相关性的病例对照研究,检索时间从建库(CBM:1978;CNKI 1994;万方数据库:1989年;VIP:1989年;Medline:1966年;PubMed:2000年)至2012年2月.在评价纳入研究质量并提取有效数据后,用RevMan 5.0软件进行Meta分析.结果 纳入13个文献,冠心病2363例,对照人群2328例.K等位基因较R等位基因(OR=0.66,95％CI:0.60～0.71,P＜0.01)、携带RK+KK较RR基因型(OR=0.60,95％CI:0.53～0.68,P＜0.01)、RK较RR基因型(OR=0.67,95％CI:0.59～0.76,P＜0.01)、KK较RR基因型(OR=0.45,95％CI:0.38～0.53,P＜0.01)人群发生冠心病的风险更低.结论 中国人群ABCA1基因R219K多态性与冠心病的发生、发展有一定关联,而ABCA1的K等位基因是冠心病的保护因素.
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宁夏回族脑梗死患者三磷酸腺苷结合盒转运子基因R219K多态性与血脂的关系
目的 探讨宁夏回族脑梗死患者ATP结合盒转运子(ABCA1)基因R219K多态性与血脂的关系.方法 连续入选住院的回族脑梗死患者105例为脑梗死组,同期入选我院门诊回族健康体验者257例为对照组.检测血脂等生化指标,用PCR-RFLP方法测基因R219K多态性,分析其与血脂的关系.结果 脑梗死组和对照组RR、RK基因型及R和K等位基因频率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).脑梗死组KK基因型较对照组明显降低,差异有统计学意义(11.4％ vs 26.8％,P＜0.01).各基因型血脂水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 KK基因型可能是回族脑梗死患者的保护因素,其保护因素可能与血脂水平无关.
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烟酸对高脂血症兔动脉粥样硬化斑块与胆固醇逆转运相关基因表达的影响
目的 探讨烟酸对高脂血症兔动脉粥样硬化斑块和TC逆转运相关基因表达的影响.方法 24只兔分为对照组、高脂组和烟酸组,每组8只.实验前后检测血脂水平；14周末行主动脉病理学检测；采用实时荧光定量PCR检测ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)和小凹蛋白1(Cav-1)mRNA表达.体外观察不同浓度烟酸(0～5.0 mmol/L)对Filipin阻断后ABCA1、SR-BⅠ和Cav-1表达的影响.结果 与对照组比较,高脂组8周时TC、TG和LDL-C、主动脉内膜厚度和斑块面积明显增加,ABCA1、SR-BⅠ和Cav-1 mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).与高脂组比较,烟酸组14周时TC、TG和LDL-C明显降低,HDL-C、ABCA1和Cav-1mRNA表达明显升高,主动脉内膜厚度和斑块面积明显缩小(P＜0.01).1.0 mmol/L烟酸可明显改善Cav-1与ABCA1 mRNA表达(P＜0.05).结论 烟酸可明显改善血脂谱及稳定动脉粥样硬化斑块,上调ABCA1与Cav-1mRNA表达水平,但对SR-BⅠ表达无明显影响.
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依折麦布和瑞舒伐他汀通过肝X受体α-三磷酸腺苷结合盒转运体A1对胆固醇的影响
目的 研究瑞舒伐他汀、依折麦布及两者联合是否通过肝X受体α (LXRα)-三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)信号通路影响血管平滑肌细胞(VSMC)来源的泡沫细胞胆固醇水平.方法 取大鼠胸主动脉3～5代VSMC进行实验,分为9组:对照组,不干预,仅单独培养VSMC 48 h;模型组,用氧化型LDL(ox-LDL 50 μg/ml)诱导VSMC,单独培养48 h;依折麦布A组(3.0 μmol/L)、依折麦布B组(10.0μmol/L)、依折麦布C组(30.0 μmol/L)、瑞舒伐他汀A组(0.1 μmol/L)、瑞舒伐他汀B组(1.0 μmol/L)及瑞舒伐他汀C组(5.0 μmol/L)在用ox-LDL 50μg/ml诱导VSMC基础上,分别加入不同剂量的依折麦布或瑞舒伐他汀培养24 h;联合组,在用ox-LDL 50 μg/ml诱导VSMC基础上,加入依折麦布30.0μmol/L和瑞舒伐他汀5.0 μmol/L,培养24 h.检测各组TC、游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)水平及各组细胞LXRα、ABCA1 mRNA及蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组TC、FC、CE水平显著升高,LXRα、ABCA1 mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,瑞舒伐他汀C组、依折麦布C组及联合组TC、FC、CE水平显著减少,LXRα、ABCA1 mRNA及蛋白表达显著增加(P＜0.05);且联合组LXRα、ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显高于依折麦布各组及瑞舒伐他汀各组(P＜0.05).结论 瑞舒伐他汀、依折麦布及2个适浓度的联合均可以通过上调LXRα、ABCA1表达,促进泡沫细胞中ABCA1介导的胆固醇的逆转运,减少胆固醇在细胞中蓄积,且联合组较单药组效果更显著.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对泡沫细胞中胆固醇流出的影响及机制
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对泡沫细胞中胆固醇流出的影响及其机制.方法 人单核细胞白血病细胞诱导分化为巨噬细胞再转化为泡沫细胞,将细胞分为对照组,低、中和高剂量组,每组1.5×106个细胞,分别用0,10,30,100 μmol/L EGCG干预后,胆固醇检测试剂盒检测细胞中胆固醇含量,液体闪烁计数仪检测载脂蛋白A-I介导的泡沫细胞胆固醇流出,蛋白质印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)蛋白质表达,实时荧光定量PCR检测ABCA1 mRNA的表达.结果 与对照组比较,低、中和高剂量组泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.01),胆固醇流出率升高[(7.04±0.21)％、(7.75±0.17)％、(8.53±0.18)％ vs (3.37±0.16)％,P＜0.01],胆固醇含量降低[(419.33±19.75) mg/g、(352.58±14.23)mg/g、(312.62±17.45)mg/g vs (520.51±20.62) mg/g,P＜0.01],且中剂量组和高剂量组胆固醇流出率、胆固醇含量和ABCA1蛋白表达均较低剂量组变化明显(P＜0.05).结论 EGCG通过上调ABCA1的转录与表达,促进胆固醇流出,减轻细胞中胆固醇负荷.
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血管内皮细胞中三磷酸腺苷-结合盒转运子A1对炎性细胞因子表达的影响
目的 研究在公认的ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)诱导因素8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)刺激下,人血管内皮细胞ECV304中ABCA1基因对炎性细胞因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞化学趋向蛋白-1(MCP-1)及白介素-1β(IL-1β)的调节作用.以阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)发生中的作用机制.方法 培养人血管内皮细胞株ECV304,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12及24h,以荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA表达量,Western blot蛋白印迹法和酶联免疫吸附测定法检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质表达量;ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染人血管内皮细胞,给予上述的8-Br-cAMP,同样的方法测定上述指标的改变.结果 人血管内皮细胞ECV304在给予8-Br-cAMP刺激6、12 h后,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mR-NA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后3、6 h ABCA1、ICAM-1、MCP-1mRNA的表达降低,12、24h ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低.结论 在8-Br-cAMP作用下,血管内皮细胞中ABCA1可增加炎性因子的表达,从而在AS早期的发生中发挥作用.
关键词： 冠状动脉疾病 内皮 血管 ATP结合匣式转运子 基因表达 -
睾酮抑制大鼠血管平滑肌细胞泡沫化及机制研究
目的 研究睾酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)转化为泡沫细胞的抑制作用,并探讨其可能机制.方法 培养大鼠VSMC,分为对照组、ox-LDL组、低(1 nmol/L)、中(10 nmol/L)、高(100 nmol/L)浓度睾酮组.另外,设置睾酮组(100 nmol/L)、氟他胺组(1μmol/L)、睾酮与氟他胺合用组,并与ox-LDL共培养建立泡沫细胞模型.利用油红O染色及酶荧光法检测不同浓度睾酮及氟他胺预处理对VSMC内脂质含量的影响,免疫印迹法检测各组细胞内线粒体融合素2(Mfn2)、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)的表达变化.结果 与ox-LDL组比较,不同浓度睾酮组VSMC脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P＜0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P＜0.05),CD36表达降低(P＜0.05).与睾酮组比较,睾酮与氟他胺合用组VSMC脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P＜0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P＜0.05),CD36表达增加(P＜0.05).结论 睾酮以雄激素受体依赖的方式,抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化过程,其作用与睾酮上调Mfn2表达进而调节CD36和ABCA1表达有关.
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三磷酸腺苷结合盒转运子1和动脉粥样硬化
三磷酸腺苷结合盒转运子1(ABCA1)的一个重要生物功能是介导细胞内脂质外流.早期研究发现的相关证据支持这个结论.在巨噬细胞中,胆固醇外流是主动转运过程,ABCA1高度表达.在血清减少、增加细胞胆固醇含量和环腺苷酸处理的孵育条件下,载脂蛋白介导的细胞脂质外流升高,也诱导ABCA1的表达和细胞表面的出现,说明ABCA1与细胞脂质相关.相关的药物能抑制ABCA1阴离子和蛋白转运活性,也抑制脂质外流.应用反义寡核苷酸降低ABCA1表达或通过互补DNA转染提高ABCA1表达,能分别抑制或提高载脂蛋白A1(ApoA1)介导的细胞胆固醇外流.ABCA1参与此通路的有力证据是识别引起丹吉尔病(TD)和家族性高密度脂蛋白(HDL)缺乏的人类基因突变所致的遗传缺陷,ABCA1存在不同程度的异常和功能障碍.研究也证实,ABCA1介导胆固醇和磷脂协同转运.
关键词： ATP结合匣式转运子 动脉粥样硬化 -
三磷酸腺苷结合盒转运子A1基因多态性与冠心病及缺血性脑卒中的关系研究
目的 探讨三磷酸腺苷结合盒转运子A1 (ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)基因多态性与广西汉族人群冠心病(CHD)及缺血性脑卒中(IS)易感的相关性.方法 选择住院患者1134例,根据诊断分为CHD组565例、IS组569例,同时选择年龄、性别匹配的健康人群541例作为对照组,进行临床资料分析,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测ABCA1基因的单核苷酸多态性(SNP)位点rs2066715和rs2740483的基因分型,探讨其与CHD及IS易感的相关性.结果 3组rs2066715基因型及等位基因频率差异无统计学意义(P＞0.05),该SNP与CHD及IS的易感无相关性(P＞0.05);与对照组比较,CHD组和IS组rs2740483等位基因和基因型频率分布差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);该SNP与CHD及IS的易感有相关性(P＜0.05).结论 ABCA1 rs2740483与广西汉族CHD和IS易感相关,携带野生型等位基因的个体有更高的罹患风险.
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罗格列酮联合依折麦布对脂化后血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的影响及可能机制的研究
目的 探究罗格列酮联合依折麦布对脂化血管平滑肌细胞(SMC)胆固醇含量的影响及可能机制.方法 将原代大鼠胸主动脉SMC分空白对照组、泡沫细胞组、依折麦布3.0、10.0、30.0μmol/L组、罗格列酮组(25.0tμmol/L)、联合组(罗格列酮25.0 μmol/L+依折麦布30.0 μmol/L).采用酶荧光法检测各组细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)的含量,并计算胆固醇酯(CE)值.RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达,Western blot检测LXRα和ABCA1蛋白表达量.结果 泡沫细胞组较空白对照组LXRα和ABCA1 mRNA(0.2980±0.0247 vs1.0010±0.0554,0.3022±0.0266 vs1.0009±0.0526)以及蛋白表达均减少(P＜0.05),TC、FC和CE含量显著增加(P＜0.05);与泡沫细胞组比较,依折麦布组3.0、10.0、30.0tμmol/L、罗格列酮组和联合组LXRα和ABCA1 mRNA及蛋白表达均增加,依折麦布组则呈现浓度依赖性;依折麦布组30.0 μmol/L、罗格列酮组和联合组TC、FC和CE含量减少(P＜0.05);且联合组LXRα和ABCA1 mRNA及蛋白增加更为明显(P＜0.05).结论 罗格列酮与依折麦布联合,显著减少细胞内胆固醇含量,增加SMC内的胆固醇逆转运效率,其机制可能与LXRα-ABCA1通路有关.
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肿瘤坏死因子-α对泡沫细胞胆固醇流出及ATP结合盒转运子A1表达的影响
目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对泡沫细胞胆固醇流出途径的影响及可能作用机制.方法采用人组织瘤细胞-1(THP-1)细胞诱导分化形成的泡沫细胞,测定TNF-α与细胞胆固醇流出的时间、浓度关系.然后给予饱和浓度的TNF-α刺激,随机将泡沫细胞分成对照组、TNF-α组、对甲苯磺酰L-苯丙氨酸甲基甲酮(N-α-tosyl-L-phenylalanine chloromethy ketone,TPCK)组及TPCK+TNF-α组,以RT-PCR法、Western blot法测定细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)的表达.结果TNF-α抑制细胞胆固醇流出呈时间、浓度效应,在10.0 ng/ml时,TNF-α抑制胆固醇流出达到饱和效应.10.0 ng/ml TNF-α刺激后以时间依赖方式下调ABCA1表达.TPCK预孵育后可部分逆转TNF-α对ABCA1表达的下调.结论炎症因子TNF-α可通过抑制ABCA1的表达而减少细胞胆固醇的流出,核因子κB(NF-κB)激活抑制剂TPCK可逆转TNF-α的上述影响,提示TNF-α抑制ABCA1表达与NF-κB激活有关.TNF α/NF-κB信号途径可抑制泡沫细胞的胆固醇流出,从而加重细胞内胆固醇的蓄积.
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中国汉族人群冠心病候选基因变异及其临床关联的地域特征
目的 探讨冠心病候选基因单核苷酸多态性在中国汉族人群中的地域分布特征.方法 选择西安、十堰及宁波地区汉族人群中经冠状动脉造影证实的冠心病及正常对照为研究对象.采用苯酚-氯仿-异丙醇抽提外周血白细胞全基因组DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)及限制性片段长度多态性(RFLP)结合测序方法确定候选基因单核苷酸多态性(SNP).SNP位点选择ATP结合盒转运子(ABCAl-G596A),胆固醇酯转运蛋白(CETP-Taq1B),脂蛋白脂酶(LPL-Hind Ⅲ及LPL-Pvu Ⅱ).结果 入选西安、十堰及宁波三个地区中国汉族人群615例(西安、十堰及宁波地区分别220、209及186例),平均年龄(60±10)岁,男性占75.9%.西安地区人群糖尿病罹患率以及血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及甘油三酯(TG)水平显著高于十堰及宁波地区人群(均P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著低于后者[分别为(1.17±0.48)mmol/L,(1.25±0.33)mmol/L,(1.29±0.44) mmol/L,P=0.03];三个地区人群之间ABCA1-G596A及CETP-Taq1B基因型频率分布差异具有统计学意义(均P＜0.01),而LPL基因型频率基本一致(P＞0.05);4个SNP对三个地区人群TC及LDL-C影响差异无统计学意义.ABCA1-G596A基因变异均显著升高三个地区人群血浆HDL-C水平(P＜0.01),同时降低TG水平[西安:GG(2.4±1.3)mmol/L、GA(1.9±0.9)mmol/L、AA(1.6±0.8)mmoL/L,P＜0.01;十堰:GG(2.1±1.0)mmol/L、GA(1.9±0.8)mmol/L、AA(1.8±0.7)mmoL/L,P=0.03;宁波:GG(1.9±1.1)mmol/L、GA(1.8±0.9)mmol/L、AA(1.6±0.7)mmol/L,P=0.05];三个地区人群LPL-Hind Ⅲ(+/+)基因型携带者血浆TG均水平显著高于(-/-)携带者[西安:+/+(2.2±1.0)mmol/L、-/-(1.6±0.7)mmol/L,P=0.01;十堰:+/+(2.1±0.7)mmol/L、-/-(1.7±0.6)mmol/L,P=0.01;宁波:+/+(1.8±1.0)mmol/L、-/-(1.4±0.5)mmol/L,P=0.001],而对HDL-C的影响无统计学意义;CETP-Taq1B、LPL-Hind Ⅲ及LPL-Pvu Ⅱ基因变异对不同地区人群HDL-C及(或)TG的影响不尽一致.4个SNP对三个地区汉族人群冠心病发病的影响均无统计学意义.结论 不同地域中国汉族人群冠心病危险因素(环境因素和遗传因素)存在一定异质性;候选基因SNP可预测冠心病中间表型,但对临床表型缺乏显著影响,此联系独立于地域因素.
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新发现的中国人ATP结合盒转运子A1基因M233V 单核苷酸多态性及其家系调查
目的 对112例中国冠心病患者行ATP结合盒转运子A1(ABCA1)基因筛选以发现新的单核苷酸多态性(SNP),并对先证者家系进行调查确定其意义.方法 用聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性分析(SSCP)-DNA测序及限制性酶切发现ABCA1基因新的SNP,进一步对先证者家系的16位成员进行血脂检查、基因组DNA提取及限制性酶切分析.结果 M233V是一个新发现的ABCA1基因SNP,此位点在外显子7,cDNA位置为A1092G,并导致233位氨基酸由甲硫氨酸转变为缬氨酸(M233V).16位家族成员中发现5例存在M233V SNP位点改变,且均为AG型改变.结论 中国人中存在新发现的ABCA1基因M233V SNP,家系调查显示M233V SNP中AA型分布频率高,AG型次之,AG型SNP的发生具有家族倾向性.
关键词： 冠状动脉疾病 ATP结合匣式转运子 多态性 单核苷酸 -
ABCA1基因多态性与冠心病易感性的关联研究
目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter 1,ABCA1)基因R219K及M883I单核苷酸多态性(SNP)位点与脂代谢和冠心病(coronary heart disease, CHD)易感性的关系.方法以医院为基础的病例-对照研究.经冠状动脉造影确诊的冠心病病例224例,同一地区正常对照248例.分别以PCR-RFLP和PIRA-PCR对ABCA1第219密码子G→A(Arg219Lys)和第883 G→A(Met883Ile)密码子多态进行检测,比较不同基因型与个体血脂水平和冠心病患病风险的关系.结果吸烟、高血压和高血糖是冠心病的独立危险因素.与携带219RR基因型者比较,携带至少1个219K等位基因者(即RK和KK基因型)冠心病患病风险显著降低59%(OR=0.41, 95% CI=0.27～0.61).而在883位点,II基因型携带者患冠心病率较低(OR=0.54,95% CI=0.26～1.11).而两位点联合作用分析发现与携带219RR,883MM或883MI基因型者相比较,携带其他组合基因型的个体冠心病患病风险降低61%(OR=0.39,95% CI=0.26～0.60).另外,对照组中携带219K等位基因者血清HDL-C水平显著高于219K非携带者 (P=0.037),提示Arg219Lys位点的多态改变主要通过改变HDL-C水平影响个体冠心病的患病风险.结论 ABCA1 R219K可能与中国汉族人群冠心病遗传易感性有关,血清高密度脂蛋白可能是其作用靶点.
关键词： 冠状动脉疾病 ATP结合匣式转运子 基因表达 脂蛋白类 -
冠心病患者ATP结合盒转运子1基因R219K变异的研究
目的探讨ATP结合盒转运子1基因(ATP-binding cassette transporter 1,ABCA1)R219K变异与我国冠心病发病风险的关系.方法采用病例-对照研究,对236例冠心病患者和251例正常对照组进行研究.采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定ABCA1基因多态性.结果在中国湖南汉族人群ABCA1R219K变异的三种基因型中,RK型发生频率高,RR型次之,KK型发生频率低.冠心病组中KK基因型频率(12.3%)明显低于对照组(19.1%)(P＜0.05).KK基因型的HDL-C水平明显高于RR型(P＜0.05),KK型甘油三酯水平虽然低于RR型,但差异无显著性(P＞0.05).多因素logistic回归分析冠心病患者中KK基因型的OR值为0.559(95%CI0.322～0.972,P=0.039).结论ATP结合盒转运子1基因R219K变异KK型产生有益的临床血脂谱,可能是冠心病患者的低危遗传标记.
关键词： 冠状动脉疾病 ATP结合匣式转运子 多态性 限制性片段长度 -
X-连锁肾上腺脑白质营养不良高风险胎儿的产前分子诊断
目的 探讨X-连锁肾上腺脑白质营养不良高风险胎儿的产前分子诊断方法 .方法 提取4个高风险家系胎儿羊水细胞基因组DNA,采用亲子鉴定试验评估母体基因组DNA污染情况,用PCR扩增先证者突变的DNA片段,然后进行PCR-限制性片段长度多态性、DNA序列测定和变性高效液相色谱对胎儿羊水基因组DNA的ABCD1基因进行分析.结果 (1)家系1:用BcnI切割799 bp的PCR产物,胎儿1与其父(正常对照)酶切模式一样,PCR产物测序未发现胎儿1的ABCD1基因有与先证者相同的突变(P560L突变);(2)家系2:用MaeI切割232 bp的PCR产物,胎儿2与其父酶切模式一样,PCR产物测序未发现胎儿2的ABCD1基因有与先证者相同的突变(Q177X突变);(3)家系3:用AciI切割271 bp的PCR产物,胎儿3与先证者酶切模式一样,PCR产物测序发现胎儿3的ABCD1基因有与先证者相同的突变(R617C突变);(4)家系4:变性高效液相色谱(DHPLC)分析269 bp的PCR产物,胎儿4与其父洗脱峰的峰型相似,而与先证者的峰型不同,PCR产物测序未发现胎儿4的ABCD1基因有与先证者相同的突变(K276E突变).结合胎儿性别判断,胎儿1、2为正常纯合子,胎儿3为肾上腺脑白质营养不良半合子,胎儿4为正常半合子.结论 应用产前分子诊断的方法 诊断X-连锁肾上腺脑白质营养不良高风险胎儿准确且有效.
关键词： 肾上腺脑白质营养不良 产前诊断 ATP结合匣式转运子 突变 -
子宫内膜癌顺铂耐药细胞株的建立和鉴定及耐药机制研究
目的 建立子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP,鉴定其生物学特性,并探讨其顺铂耐药的机制.方法 采用顺铂浓度逐步递增联合大剂量顺铂冲击方法,在体外连续诱导、培养子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞,建立子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP.非放射性细胞增殖法(MTS法)测定ISH/DDP细胞对顺铂的耐药指数;绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间;流式细胞术检测ISH/DDP细胞的细胞周期比例;免疫细胞化学法检测ISH/DDP细胞中耐药蛋白--乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P糖蛋白(P-gp)以及谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)蛋白的表达水平,以综合积分表示.结果 Ishikawa细胞在体外采用顺铂浓度逐步递增联合大剂量顺铂冲击方法 连续诱导、培养,历时10个月,成功建立了子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP,其耐药指数为3.77.Ishikawa细胞和ISH/DDP细胞的群体倍增时间分别为34.1 h和40.4 b,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).与Ishikawa细胞相比,ISH/DDP细胞的S期细胞比例[分别为(44.2±6.1)%和(55.3±8.4)%]增加,G2/M期细胞比例[分别为(11.9±0.7)%和(5.7±2.4)%]减少,差异均有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞比例[分别为(44.3±5.7)%和(39.0±10.7)%]减少,但差异无统计学意义(P>0.05).ISH/DDP细胞中BCRP蛋白的表达水平为(16.3±2.0)分,高于Ishikawa细胞的(13.4±1.5)分,差异有统计学意义(P<0.05);而Ishikawa和ISH/DDP细胞中P-gp蛋白的表达水平分别为(16.1±1.0)和(15.5±1.2)分,GST-π蛋白的表达水平分别为(14.9±1.1)和(15.2±1.9)分,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 ISH/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制可能与细胞中BCRP蛋白的过度表达相关.
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腹水来源卵巢上皮性癌细胞系中侧群细胞的分离、鉴定及耐药性分析
目的：由已建立的腹水来源卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系中分离侧群（SP）细胞，鉴定SP细胞作为肿瘤干细胞样细胞的生物学特征，并对其进行耐药性分析。方法采用流式细胞仪分选该卵巢癌细胞系中的SP细胞；分别在体外分化条件下培养SP及非侧群（NSP）细胞，并分别测定其SP细胞比例用于比较其体外分化及自我更新能力；将SP及NSP细胞接种于非肥胖性糖尿病-严重免疫缺陷（NOD-SCID）小鼠的皮下及腹腔，比较SP及NSP细胞的成瘤率；采用活细胞计数法（CCK-8法）检测SP、NSP及未分选卵巢癌细胞（未分选细胞）对顺铂的耐药性，以50%抑制浓度（IC50）表示。结果分选前的腹水来源卵巢癌细胞中，SP细胞比例为（4.81±0.43）%，从该卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞。SP细胞经体外分化培养，3周后其中SP细胞比例为（4.89±0.33）%，与分选前SP细胞比例相近，两者比较，差异无统计学意义（P>0.05）；而NSP细胞经体外分化培养，3周后其中SP细胞比例仅为（0.10±0.03）%，明显低于分选前SP细胞比例（P<0.01）。皮下接种1.0×103个SP细胞6周后3只小鼠全部成瘤，皮下成瘤率为3/3，而接种1.0×104个NSP细胞12周后3只小鼠均未成瘤，皮下成瘤率为0，两者皮下成瘤率比较，差异有统计学意义（P<0.01）；同时，腹腔接种相同数量的SP、NSP细胞后其成瘤能力与皮下接种后相似；原发肿瘤与移植瘤经HE染色和免疫组化染色显示，原发肿瘤与移植瘤均为卵巢低分化浆液性乳头状囊腺癌，均表达卵巢浆液性乳头状囊腺癌标志物CA125。SP、NSP、未分选细胞的顺铂IC50值分别为（2.33±0.14）、（1.60±0.04）、（1.81±0.03）μg/ml，SP细胞的顺铂IC50值明显高于NSP及未分选细胞（P<0.05）；以上述未分选细胞的顺铂IC50进一步处理后，未分选细胞中SP细胞比例为（40.10±4.22）%，明显高于顺铂处理前的SP细胞比例[为（4.81±0.43）%；P<0.01]；以上述SP细胞的顺铂IC50进一步处理后，SP细胞的存活率为（58.7±3.3）%，再予维拉帕米拮抗后其存活率下降为（7.2±1.3）%，两者比较，差异有统计学意义（P<0.01）。结论腹水来源卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞，分离出的SP细胞占整个肿瘤细胞群体中的极少数，具有自我更新和分化能力，可再现原发肿瘤的表型，具有干细胞样细胞的生物学特征，并且对卵巢癌一线化疗药物顺铂耐药。
