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蒲灵化瘀止痛方治疗子宫腺肌病小鼠的多靶点作用研究
目的:以雌激素效应相关因子、血管生成相关因子及其相互作用为靶点,探讨在子宫腺肌病(AM)小鼠疾病发生发展的不同时间段及子宫在位及异位内膜不同空间部位,蒲灵化瘀止痛方治疗AM的作用机制.方法:对8周龄ICR雌鼠施行雄鼠垂体宫腔内移植手术,术后分别饲养3个月及6个月,形成M1组及M2组(AM小鼠模型3月组及6月组).选择蒲灵化瘀止痛方为实验药物,同时将未造模同期小鼠设为正常组.各组分别给药3个月(Z1组及Z2组).运用免疫组化技术观察雌激素效应相关因子(P450、COX-2、ERa)及血管生成相关因子(VEGF、ENS、CD31、MMP-2)在模型组、用药组随疾病发生发展的不同时间段及子宫在位及异位内膜不同空间部位的变化.结果:在位内膜方面,①与正常组比较:M1及M2组CD31显著下降(P＜0.01,P＜0.05)、VEGF显著增高(P＜0.001)、MMP-2显著增高(P＜0.01);P450、COX-2、ERa表达在M1组无显著差异,P450、COX-2在M2组显著增高(P＜0.001).②M1与M2组比较:P450、COX-2、ERa表达M2组显著高于M1组(P＜0.01,P＜0.001,P＜0.05).③治疗前后比较:Z1与M1比较,VEGF、MMP-2表达显著下降(P＜0.01,P＜0.05),CD31显著升高(P＜0.001);Z2与M2比较,P450、COX-2、ERa表达下降显著(P＜0.01,P＜0.001,P＜0.05).在异位内膜方面,①与正常组比较:M1及M2组P450、COX-2表达及M2组ERa值表达均显著增高(P＜0.001,P＜0.01);②M1与M2组比较:M2组COX-2、ERa、P450表达与M1组比较有增高趋势(P=0.001,P=0.051,P=0.122);③治疗前后比较:Z1与M1比较,P450显著下调(P＜0.05)、COX-2及ERa无显著变化;Z2与M2比较,P450、COX-2、ERa下降显著(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.05).结论:蒲灵化瘀止痛方可多靶点治疗AM.病程早期的中药治疗主要以血管生成相关因子为靶点,改善早期在位内膜的缺血缺氧状况,直接截断由此触发的雌激素生成的正反馈链.疾病的后阶段,中药治疗靶点主要是在位及异位内膜雌激素效应相关因子,通过雌激素效应的变化影响血管生成因子的变化.
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血管生成相关因子治疗肝细胞肝癌研究进展
肝细胞肝癌(HCC)是一种富血管性肿瘤,其生长很大程度上依赖于血供的程度.现已证实许多血管生成相关因子与HCC的形成、生长、侵袭、转移、复发及预后关系密切.这些因子包括血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Tie-血管生成素、生长抑素、血管他丁、内皮他丁、基质金属蛋白酶、血管生成因子、巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、Ephrin等,甚至还包括一些神经生长因子.血管生成相关因子又可以分为血管生成促进因子和血管生成抑制因子两大类.针对上述因子在血管生成中的作用而采用的抑制血管生成疗法,已被证实能够有效地抑制HCC生长、侵袭、转移和复发.抑制肿瘤血管生成有望成为治疗HCC的重要方法之一.
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血管生成相关因子在早产儿视网膜病外周循环中的表达
随着近20年围产医学的发展，早产儿存活率呈上升趋势[1]，但存活者早产儿视网膜病（retinopathy of prematurity，ROP）的发生率也在增高。ROP是一种发生在早产儿和低出生体重儿中的视网膜血管增生性疾病，在世界上许多国家是儿童失明的主要原因。2012年我国16家三级医院的随机抽查统计显示，ROP发生率为11.27%[2]。ROP是一个多因素综合作用的疾病，确切病因尚不清楚，早产、低出生体重及不合理氧疗是目前公认的高危因素。尽管临床一直致力于控制早产儿吸氧浓度及吸氧时间等导致ROP发生的危险因素，但在全球范围内重度ROP总数量及发生率仍在不断增加[3-5]。因此，对于ROP，早期诊断和治疗至关重要。ROP的早期诊断目前主要靠眼底筛查，各国都建立了ROP眼底筛查的制度和标准，均是根据出生体重和胎龄制定ROP筛查对象及筛查时间。眼底筛查是有创操作，容易引起感染，而且由于反复筛查，使得ROP筛查成本增加，造成不必要的浪费。另外，眼底筛查有时相对于ROP发生的时间偏晚，容易导致ROP发现及治疗的不及时。因此，寻找更为简便的ROP诊断方法是众多学者的研究目标。由于ROP为血管增生性疾病，在ROP发生过程中有很多血管生成相关因子参与，所以是否能根据外周血中血管生成相关因子的变化情况警示ROP的发生成为近年来的热点问题。
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不同治疗方法对子宫腺肌病模型小鼠血管生成相关因子的影响
目的:探讨在子宫腺疾病(AM)在位及异位子宫内膜不同空间部位,中西医治疗方法对模型小鼠血管生成相关因子的不同影响.方法:对8周龄ICR雌鼠施行雄鼠垂体宫腔内移植手术,术后分别饲养3个月,形成模型组.选择导师行气化瘀法临床验方(蒲灵化瘀止痛方)为实验药物(A组),同时将丹莪妇康煎膏作为中药对照组(B组)、孕三烯酮组为西药对照组(C组)、未造模同期小鼠为空白组,各组分别给药3个月.运用免疫组化技术观察血管生成相关因子(VEGF、CD31、MMP-2)在模型组、用药组的变化.结果:与正常组比较,模型组在位内膜CD31表达显著下降(P＜0.05),A、B、C组治疗后上调,且A组显著优于B、C组(P＜0.05).与模型组比较,A、B、C组异位内膜CD31表达显著下降(P＜0.05),A、B、C组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,模型组在位内膜MMP-2、VEGF显著升高(P＜0.05).治疗后A、B、C组在位内膜MMP-2、VEGF表达与模型组比较均显著下调(P＜0.05),A、B、C组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,治疗后A、B、C组异位内膜MMP-2均显著下降(P＜0.05),C组显著低于A组及B组(P＜0.05).结论:蒲灵化瘀止痛方可以有效改善在位内膜的缺血缺氧状态,通过终止疾病的始动环节而达到治疗该病的目的.在改善局部血供方面,行气活血中药与西药比较有明显优势.
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survivin mRNA表达与乳腺癌血管生成
目的探讨survivin mRNA表达与乳腺癌血管生成的关系.方法应用原位杂交检测survivin mRNA在97例乳腺癌组织、56例癌旁乳腺组织中的表达;通过免疫组化Elivision法检测endoglin标记的MVD记数的表达情况.结果survivin mRNA在癌旁乳腺组织、乳腺癌组织中的阳性率分别为1.79%(1/56)、72.16%(70/97),后者的阳性率明显高于前者(P＜0.005);survivin mRNA表达阳性组中endoglin-MVD显著高于survivinmRNA表达阴性组(P＜0.05).结论survivin mRNA参与了乳腺癌的血管生成.
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血管内皮生长因子和垂体瘤
原癌基因活化导致基因突变而引发肿瘤细胞的发生,各类原癌基因通过各种途径诱导血管生成相关因子诸如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子(TGF)等的高度表达,而进一步促进肿瘤的生长.
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血管内皮生长因子和垂体瘤
原癌基因的活化导致基因突变而出现肿瘤细胞的发生,同时各类原癌基因通过各种途径来诱导血管生成相关因子如血管内皮生长因子( VEGF)、碱性纤维母细胞生长因子( bFGF)、转化生长因子( TGF)等的高量表达,而进一步促进肿瘤的生长, VEGF是肿瘤组织中促血管生成主要的血管生长因子,目前发现 20余种以上生长因子作用于血管内皮.
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溃疡性结肠炎及溃疡性结肠炎相关性结直肠癌小鼠模型中血管生成因子的表达及其与血管新生的关系
目的 观察葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)及溃疡性结肠炎相关性结直肠癌(UCACRC)组织中血管生成相关因子的表达及其与血管生成的关系.方法 应用DSS与水循环交替口服诱导反复发作的UC小鼠模型(n=23),1,2-二甲肼(DMH)/DSS联合法建立UCACRC小鼠模型(n=23),同时设立对照组(n=20).分时段处死小鼠,观察其结肠组织的改变,用S-P免疫组化法检测3组小鼠的UC组织、UCACRC组织及正常结肠组织中血管生成素(An分2)、缺氧诱导因子(HIF)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1的表达水平.结果 单纯使用DSS可建立UC小鼠模型.第9个周期末处死的小鼠中,UC组仅有15.38％(2/13)发生低度不典型增生,而加用DMH的UCACRC组不典型增生和癌变率可达92.31％(12/13).Ang-2、HIF、VEGF、Flk-1在UC组织、UCACRC组织中呈高水平表达,其阳性率明显高于正常结肠组织(P均＜0.05),且循环周期越多,表达水平越高；但UC组织和UCACRC组织比较,4种血管生成相关因子表达的差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 Ang-2、HIF、VEGF、Hk-1在UC及UCACRC的血管生成过程中起着重要的作用,与炎症及肿瘤的发生、发展密切相关.
关键词： 血管生成相关因子 溃疡性结肠炎 溃疡性结肠炎相关性结直肠癌 -
茶多酚联合吉非替尼抗肺腺癌血管生成的初步研究
目的:通过观察茶多酚联合吉非替尼对人肺腺癌生长的抑制作用.验证茶多酚抗肿瘤血管生成效应.方法:建立人肺腺癌A549移植瘤模型.设立对照组、茶多酚组、吉非替尼组及两者联合组.观察对肺腺癌A549移植瘤的抑制率,检测移植瘤体的微血管密度;并观察EGFR-VEGF这一肿瘤血管生成重要通路的相关因子VEGF、AKT-2、HIF-1a和STAT-3表达水平.结果:茶多酚组、吉非替尼组对移植性人肺腺癌A549瘤体、肿瘤组织微血管密度及VEGF的表达都有明显的抑制效果;两者联合使用效果明显增强;茶多酚组、吉非替尼组能明显抑制AKT-2、HIF-1a和STAT-3表达水平,但两者联合组对AKT-2、HIF-1a作用并不明显,而能明显抑制STAT3表达.结论:茶多酚、吉非替尼对移植性人肺腺癌A549具有明显的抑制效果,两者联合使用有一定增效作用,并能够影响肿瘤血管生成通路的相关因子表达.
关键词： 茶多酚 吉非替尼 联合用药 人肺腺癌(A549) 血管生成相关因子 -
环氧合酶-2抑制剂对人胃癌细胞株的作用及机制探讨
研究表明,非甾体类抗炎药(NSAID)可降低结直肠癌、肝癌、卵巢癌的发病率和死亡率[1],很可能和该类药物抑制环氧合酶-2(COX-2)有关,而COX-2具有促肿瘤血管形成作用[2].本研究拟考察选择性COX-2抑制剂NS398对体外培养的胃癌细胞株SGC7901及裸鼠移植瘤中血管生成相关因子的作用,初步探讨NS398对胃癌血管形成的影响.
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子宫内膜异位症血管生成相关因子及抗血管生成治疗进展
新血管形成是异位子宫内膜种植、生长的关键步骤。子宫内膜异位症血管形成相关因子包括促血管生成因子和抑制血管生成因子，二者均参与了子宫内膜异位症的病理过程。子宫内膜异位症的发病机制非常复杂，寻找有效的治疗方法是当前亟待解决的临床问题。本文综合目前对子宫内膜异位症抗血管生成治疗进展的研究，以期抗血管生成治疗成为中西医治疗子宫内膜异位症的新目标。
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KIF4A对巨噬细胞血管生成相关因子表达的调节作用
目的 探讨驱动蛋白KIF4A对巨噬细胞不同亚群中血管生成相关因子表达的影响.方法 THP-1细胞在PMA及不同人重组细胞因子的外界刺激下分别分化为M0、M1、M2细胞,采用ELISA技术检测此3种巨噬细胞亚群中血管生成相关因子的表达水平.利用siRNA转染敲除M0、M1、M2细胞中KIF4A的表达,采用实时定量PCR检测敲除后血管生成相关因子的表达水平.结果 巨噬细胞M0上清中可检测到LIF、VEGF、sVEGFR1及TIMP1,而sVEGFR2、Fit-3、Leptin、LeptinR、CD40L均不表达.其中LIF、VEGF、TIMP1在M0向M1、M2分化过程中,表达差异均无统计学意义(P ＞0.05);sVEGFR1在M0向M1分化过程中表达差异无统计学意义(P＞0.05),向M2分化过程中表达显著上调(P＜0.01).转染KIF4A siRNA后,M0与M1细胞中LIF、sVEGFR1、VEGF、TIMP1的表达差异均无统计学意义(P ＞0.05);M2细胞中LIF、VEGF、TIMP1表达差异均无统计学意义(P＞0.05),但sVEGFR1表达水平明显降低(P＜0.05).结论 M2细胞sVEGFR1表达水平显著上调;KIF4A参与M2细胞中sVEGFR1的表达.
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survivin蛋白在乳腺癌组织中的表达及与微血管生成的相关性
survivin是目前发现的相对分子质量小的凋亡抑制蛋白,其参与肿瘤新生血管的形成,同时又抑制细胞凋亡间接促进肿瘤生长.endoglin是极为重要的一种血管生成相关因子,可能与肿瘤的进展有关,可作为肿瘤新生血管的标志物.目前大量研究表明,乳腺癌的生长和转移依赖于新生血管生成.近期,我们对97例乳腺癌患者的sunrivin蛋白及endoglin(CD105)标记的微血管密度(MVD)进行了检测,旨在探讨sunrivin与乳腺癌血管生成的关系.
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骨髓间充质干细胞移植对角膜化学伤后炎症和血管生成相关因子表达的影响
背景 已有研究证明骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植可重建损伤的角膜上皮并促进角膜上皮的修复,但BMSCs的作用机制尚不明确. 目的 探讨BMSCs移植在大鼠角膜化学伤后抗炎和抗新生血管形成的作用.方法 从2只成年清洁级SD大鼠双侧股骨及胫骨提取骨髓并进行BMSCs培养和传代,第3代细胞种植于羊膜.18只成年清洁级SD大鼠用NaOH滤纸片贴附于角膜中央的方法制作角膜碱烧伤模型,然后按随机数字表法随机分为3组,每组6只眼,均取右眼为模型眼.造模1周后,BMSCs移植组行带有BMSCs的羊膜移植；羊膜移植组行无BMSCs的羊膜移植；模型对照组不进行移植.术后2周裂隙灯显微镜下进行角膜透明度评分并计算角膜新生血管(CNV)面积,ELISA法检测各组大鼠角膜中白细胞介素2(IL-2)、IL-10、干扰素γ(IFN-γ)和转化生长因子B(TGF-β)的含量,荧光实时定量PCR法检测各组角膜中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) mRNA的表达.结果 传代细胞CD90及CD29表达阳性率分别为99.78％及99.79％,CD34、CD45及CD11b的表达率分别为7.90％、1.16％和1.28％,符合间充质干细胞的特征,种植于羊膜后生长状态良好.角膜碱烧伤后1周,各组大鼠角膜水肿混浊评分和CNV面积的差异均无统计学意义(F=0.021,P=0.979；F=0.076,P=0.927).移植术后2周,羊膜移植组和BMSCs移植组大鼠角膜混浊水肿评分均明显低于模型对照组(P=0.011、0.001),CNV面积均小于模型对照组(P=0.005、0.000).与羊膜移植组比较,BMSCs移植组CNV面积较小(P=0.001).角膜中Thl细胞分泌的IL-2和IFN-γ在BMSCs移植组明显下降,与模型对照组及羊膜移植组比较差异均有统计学意义(P=0.000、0.002、0.003、0.045),而Th2细胞分泌的IL-10和TGF-β明显高于模型对照组和羊膜移植组(P=0.000、0.000、0.000、0.021).3个组间VEGF在角膜中的表达差异无统计学意义( F=4.880,P=0.056).BMSCs移植组大鼠角膜中MMP-2及bFGF的表达均明显低于模型对照组及羊膜移植组(P＜0.01).结论 BMSCs移植可调节大鼠角膜碱烧伤后炎性相关因子和新生血管相关因子的分泌,从而减轻角膜炎症反应,抑制CNV的形成.
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中西医治疗方法对AM小鼠不同作用靶点的比较研究
目的 以雌激素效应相关因子、血管生成相关因子及其相互作用为靶点,探讨比较中西医治疗方法对子宫腺肌病(adenomysis,AM)小鼠子宫在位及异位内膜的不同作用机制.方法 对8周龄ICR雌鼠施行雄鼠垂体宫腔内移植手术,术后分别饲养3月,形成模型组.选择导师行气化瘀法临床验方(蒲灵化瘀止痛方)为实验药物(A组),孕三烯酮组为西药对照组(B组),未造模同期小鼠为空白对照组.各组分别给药3月.运用免疫组化技术观察雌激素效应相关因子(p450、COX-2、ERa)及血管生成相关因子(VEGF、CD31、MMP-2)在模型组、用药组的变化.结果 在位内膜:与空白组比较,模型组CD31表达显著下降,MMP-2、VEGF显著升高;治疗后,A、B组CD31上调,A组显著优于B组,MMP-2、VEGF表达与模型组比较均显著下调,各组之间无统计学差异.异位内膜:与模型组比较,A、B组CD31表达显著下降,组间比较无统计学差异.治疗后A、B组MMP-2均显著下降,B组显著低于A组.在位及异位内膜p450、COX-2模型组显著高于空白组,治疗后p450、COX-2表达与模型组比较A、B组显著下降,组间比较无统计学差异.与模型组比较,A、B组治疗后ERa在位内膜及异位内膜显著下调,各组间比较无统计学差异.结论 蒲灵化瘀止痛方可以有效改善在位内膜的缺血缺氧状态,与西药比较有明显优势,通过终止疾病的始动环节而达到治疗该病的目的.中药治疗可以有效减少异位内膜雌激素水平,疗效与西药孕三烯酮比较无明显差异.
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抗肿瘤血管生成药物及血管生成相关因子的研究进展
0 引言肿瘤血管生成这一概念是20世纪70年代由Folkmant提出,称为"血管生成开关";当肿瘤体积达到2 mm3时,肿瘤需要独立的血供,血管生成在维持肿瘤快速生长中起关键性作用[1].肿瘤血管生成方式包括出芽式、套入式、血管生成拟态、马赛克血管等,其中出芽方式早报道且适用于大多数肿瘤.该过程包括毛细血管基底膜降解,血管内皮细胞迁移、增殖、形成管状结构,基底膜形成以及血流贯通等诸多环节.该过程主要由血管调节因子(包括肿瘤血管生成因子和肿瘤血管生成抑制因子)起中心调控作用,肿瘤细胞、炎症细胞可分泌多种细胞因子和炎性因子,这些因子作用于肿瘤微环境中的基质细胞、纤维原细胞等,从而促进肿瘤血管或抑制肿瘤血管生成,当两者的平衡被打破,肿瘤血管生成因子占优势时,即发生肿瘤血管生成.
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子宫腺肌病小鼠血管生成及雌激素效应因子的相互作用机制
目的:以雌激素效应相关因子、血管生成相关因子及其相互作用为靶点,探讨在子宫腺肌病(AM)小鼠疾病发生发展的不同时间段及子宫在位及异位内膜不同空间部位、疾病的主导机制.方法:以健康雌性未孕8周龄ICR小鼠为研究对象,行子宫内移植脑垂体手术,以建立AM的小鼠模型.随机设正常组、A组(3月模型组)、B组(6月模型组),采用免疫组化染色方法,检测各组AM小鼠异位和在位内膜雌激素效应相关因子、血管生成相关因子的表达变化.结果:与正常组相比,A组、B组在位内膜CD31均显著下调,VEGF、MMP-2显著上调,A组P450、ERα、COX-2无显著变化,B组P450、COX-2显著上调;异位内膜A组P450、ERα值显著增高.A组与B组比较,在位内膜CD31、VEGF、MMP-2值无显著差异,B组P450、ERα、COX-2均显著高于A组;异位内膜CD31、VEGF的表达A组与B组间比较无显著差异,MMP-2、COX-2值B组显著高于A组.无论是A组或B组,VEGF、MMP-2在位内膜增高幅度均显著高于同期异位内膜,P450表达A、B组异位内膜显著高于同期模型组在位内膜.结论:雌激素效应因子异常、血管生成相关因子异常及其相互作用,促成了AM的发生和发展,但在疾病的不同阶段,其主导机制有所不同.在位内膜的缺血缺氧可能为疾病的始动机制,导致异位内膜雌激素效应相关因子显著上调.
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干扰Krüppel样因子8表达对肝癌SMMC7721细胞中血管生成相关因子的调控作用
目的:构建Krüppel样因子8(Krüppel-like factor 8,KLF8)的真核表达质粒及干扰质粒,考查KLF8对人肝癌SMMC7721细胞中血管生成相关因子的调控作用.方法:构建KLF8的真核表达质粒pcDNA3.1-KLF8,测序确认.构建靶向不同KLF8干扰位点的干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-KLF8,筛选出于扰效率高的pGPU6/GFP/Neo-KLF8.将pcDNA3.1-KLF8、相应的对照质粒pcDNA3.1,pGPU6/GFP/Neo-KLF8、相应的对照质粒pGPU6/GFP/Neo-ShNC分别转染人肝癌SMMC7721细胞,共4组.实时荧光定量PCR及Westernblot检测KLF8的表达,qPCR检测各组细胞中低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF) 1-α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素(angiopoietin,Ang)1、Ang2、血管生成素受体Tie2及基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinase,MMP)2的mRNA表达.结果:pcDNA3.1-KLF8显著上调KLF8表达(相对表达量为68.8±6.5),pGPU6/GFP/Neo-KLF8下调KLF8的表达(相对表达量0.31±0.01).转染pcDNA3.1-KLF8组与其对照组相比,VEGF、Ang2、HIF1-α及MMP2 mRNA表达增加(P＜0.05),血管生成素受体Tie2、Ang1的mRNA表达无差异(P＞0.05)；转染pGPU6/GFP/Neo-KLF8组与其对照组相比,Ang2和HIF1-α表达降低(P＜0.05),VEGF、血管生成素受体Tie2、Ang1及MMP2的表达无差异(P＞0.05).结论:在肝癌中,KLF8可能通过调控VEGF、Ang2、HIF1-α及MMP2来调控血管生成.
关键词： 肝细胞癌 Kruppel样因子8 血管生成相关因子 -
缺氧诱导因子-1α在乳腺癌中的研究进展
缺氧是实体肿瘤微环境的基本特征之一,同时肿瘤细胞的缺氧也是肿瘤发生恶性转化甚至转移的始动因子.目前认为缺氧诱导因子( hypoxia-inducible factor,HIF)在肿瘤缺氧环境下起了重要作用,有代表性的为HIF-1,它的α功能亚基(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-lα)被激活后可以调节多种下游基因,如与肿瘤相关的基因主要有血管生成相关因子、葡萄糖转运和糖酵解酶、肿瘤侵袭和转移相关因子、肿瘤增殖和凋亡相关蛋白等,使细胞对缺氧环境产生应激反应,从而更好地适应缺氧环境.
