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乳腺癌中KIF4A基因表达的临床意义及基因富集分析
目的 探讨驱动蛋白超家族4A(kinesin family member 4A,KIF4A)在乳腺癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系.方法 利用GEO数据库的GSE3494公共数据集和TCGA数据库的乳腺癌样本及其临床资料,采用χ2检验进行KIF4A与临床病理特征的相关性分析,Kaplan-Meier法进行生存分析.通过基因富集分析预测乳腺癌中高表达KIF4A所富集的基因集.结果 KIF4A在不同Elston组织学分级和TNM分期的乳腺癌肿瘤样本中表达差异有统计学意义(P=0.000).GSE3494和TC-GA数据库中KIF4A与ER水平、PR水平均显著相关(P=0.000);与年龄仅TCGA数据库分析结果差异有统计学意义(P=0.000).此外,GSE3494数据集中,KIF4A与肿瘤大小、淋巴结浸润均显著相关(P=0.000);TCGA数据库中,KIF4A仅与T分期显著相关(P=0.000),与N分期(P=0.081)、M分期(P=0.372)均不相关.KIF4A高表达的乳腺癌患者预后较差,其疾病特异生存期(P=0.001)和总体生存率(P=0.005)均远低于KIF4A低表达患者,且富集了与细胞分裂、细胞周期调控、DNA复制及DNA损伤修复有关的基因集.结论 KIF4 A与乳腺癌多个临床病理指标相关,可作为潜在的乳腺癌预后标志物和治疗靶标进一步研究.
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驱动蛋白KIF4A抑制胃癌细胞的侵袭作用
目的 应用胃癌细胞SGC-7901以及稳定低表达驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞SGC-shKIF4A,研究KIF4A对胃癌细胞侵袭能力的作用.方法 使用蛋白免疫印迹法鉴定对照胃癌细胞SGC-shNC以及SGC-shKIF4A细胞内KIF4A蛋白的表达水平,并通过细胞侵袭实验计数这两种细胞的侵袭能力.通过细胞免疫荧光染色法观察在SGC-7901、SGC-shNC、SGC-shKIF4A细胞中皮层肌动蛋白(cortactin)的数量变化情况.结果 与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞侵袭能力明显增强;与其他细胞相比,SGC-shKIF4A细胞的cortactin数量明显增多(P＜0.01),表明该细胞内侵袭性伪足增多.结论 驱动蛋白KIF4A具有抑制胃癌细胞的侵袭作用,这为KIF4A作为靶点应用于胃癌的预后预测以及有效治疗奠定理论基础.
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染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定
目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA(shRNA)表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株(SGC-shKIF4A)和稳定表达无意义shRNA的对照细胞(SGC-shNC);同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
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染色体驱动蛋白KIF4A参与调控肺癌细胞顺铂耐药
目的 研究染色体驱动蛋白KIF4A参与肺癌细胞顺铂耐药过程.方法 采用逆转录PCR(RT-PCR)及Western Blot实验检测并比较肺癌细胞株A549及其顺铂耐药衍生细胞株A549/DDP中染色体驱动蛋白KIF4A的表达.先用细胞转染技术在A549细胞中过表达外源性KIF4A,或用RNA干扰(RNAi)技术敲降A549/DDP细胞中内源性KIF4A的表达,再用顺铂处理上述细胞,后通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖能力.结果 染色体驱动蛋白KIF4A在A549/DDP细胞中mRNA和蛋白质的表达均高于A549细胞.在A549细胞中过表达外源性KIF4A,导致细胞耐受顺铂药物,且细胞增殖能力不受顺铂药物处理的影响.相反,在A549/DDP细胞中敲降KIF4A的表达,导致A549/DDP细胞对顺铂药物敏感,细胞增殖能力下降.结论 驱动蛋白分子KIF4A参与调控肺癌细胞A549的顺铂耐药过程,故KIF4A可作为潜在的有效治疗肺癌顺铂耐药的新型生物靶标.
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KIF4A在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的:探讨人结直肠癌组织中染色体驱动蛋白KIF4A的表达及其临床意义.方法:收集110例手术切除的结直肠癌及相应癌旁5 cm以上结直肠黏膜组织标本,采用免疫组织化学方法检测其中KIF4A的表达情况,并分析KIF4A的表达水平与结直肠癌患者临床病理特征及其预后之间的关系.结果:结直肠癌组织中KIF4A的表达显著高于癌旁5 cm以上结直肠黏膜组织(P＜0.001);KIF4A的表达水平与结直肠癌患者的分化程度(P=0.023)、淋巴结转移(P=0.020)、远处转移(P=0.032)、TNM分期(P＜0.001)和血清癌胚抗原(CEA)水平(P=0.014)有关,而与患者性别、年龄、肿瘤大小等无关(P＞0.05).在随访的110例结直肠癌患者中,Kaplan-Meier生存曲线显示,KIF4A高表达组的5年生存率明显低于KIF4A低表达组(P＜0.05).单因素生存分析显示,KIF4A表达程度、肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及血清CEA水平与结直肠癌患者术后生存时间相关.多因素COX比例风险回归模型进一步分析显示,KIF4A表达水平、TNM分期、淋巴结转移和远处转移为结直肠癌患者预后的独立危险因素.结论:KIF4A在结直肠癌组织中高表达,并且其高表达与结直肠的侵袭转移密切相关,KIF4A对于术后结直肠癌患者的预后评估具有参考价值.
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KIF4A对巨噬细胞血管生成相关因子表达的调节作用
目的 探讨驱动蛋白KIF4A对巨噬细胞不同亚群中血管生成相关因子表达的影响.方法 THP-1细胞在PMA及不同人重组细胞因子的外界刺激下分别分化为M0、M1、M2细胞,采用ELISA技术检测此3种巨噬细胞亚群中血管生成相关因子的表达水平.利用siRNA转染敲除M0、M1、M2细胞中KIF4A的表达,采用实时定量PCR检测敲除后血管生成相关因子的表达水平.结果 巨噬细胞M0上清中可检测到LIF、VEGF、sVEGFR1及TIMP1,而sVEGFR2、Fit-3、Leptin、LeptinR、CD40L均不表达.其中LIF、VEGF、TIMP1在M0向M1、M2分化过程中,表达差异均无统计学意义(P ＞0.05);sVEGFR1在M0向M1分化过程中表达差异无统计学意义(P＞0.05),向M2分化过程中表达显著上调(P＜0.01).转染KIF4A siRNA后,M0与M1细胞中LIF、sVEGFR1、VEGF、TIMP1的表达差异均无统计学意义(P ＞0.05);M2细胞中LIF、VEGF、TIMP1表达差异均无统计学意义(P＞0.05),但sVEGFR1表达水平明显降低(P＜0.05).结论 M2细胞sVEGFR1表达水平显著上调;KIF4A参与M2细胞中sVEGFR1的表达.
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KIF4A在乳腺癌中的功能分析及临床意义
目的 研究KIF4A基因在乳腺癌中的表达情况,并探讨其可能的作用机制及表达差异与预后的关系.方法 从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库收集乳腺癌数据集,下载KIF4A基因表达谱资料,相对表达量的中位数为5.77,以5.77为节点将乳腺癌患者分为KIF4A高表达组与KIF4A低表达组,分析其与病例特征的关系;利用Kaplan-Meier Plotter分析KIF4A与乳腺癌患者预后的相关性.结果KIF4A在乳腺癌组织中的表达明显高于正常乳腺组织及乳腺细胞(P<0.01),KIF4A主要分布于细胞核和细胞骨架中,KEGG通路分析和GO功能分析显示KIF4A与细胞周期、RNA转运、P53信号通路、细胞分裂、端粒维持重组等功能有关.KIF4A与Ki67的表达高度正相关(P<0.001),预后分析表明KIF4A表达越高,乳腺癌患者总生存时间和无复发生存时间更短(P<0.001).KIF4A的表达与淋巴结阴性乳腺癌的总生存率具有负相关性(P<0.001),而与淋巴结阳性乳腺癌的总生存率则不相关.结论 在乳腺癌中,KIF4A高表达并且和患者的预后相关,KIF4A在乳腺癌的发生中可能起着重要作用.
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KIF4A与肿瘤关系的研究进展
有丝分裂是细胞增殖的主要方式,并由多个基因共同调控完成.而这些调控基因的失衡可导致染色体非整倍性及肿瘤的形成.KIF4A是新近发现的驱动蛋白家族成员之一,其在染色体的浓缩与分离、纺锤体的形成及细胞质的分裂中发挥着重要作用.其作用的增强可引起有丝分裂活跃而导致细胞过度增殖,而其作用减低又可引起染色体不分离、染色体非整倍性和多倍体的形成,进一步导致肿瘤的形成.KIF4A在不同肿瘤中的表达及其与临床病理参数之间的关系具有差异性.通过探讨KIF4A与肿瘤之间的关系可为肿瘤早期诊断、治疗和预后评估提供帮助.
