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艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的表达及抗原性分析
目的：构建艰难梭菌（CD）谷氨酸脱氢酶（GDH）的原核表达载体，表达重组蛋白并鉴定其抗原活性。方法以 CD 的 ATCC43255菌株基因组 DNA 为模板，通过 PCR 法扩增 GDH 全长基因片段，构建原核表达载体并转化到大肠杆菌中，IPTG 诱导表达 GDH 蛋白，并用 Ni 柱进行纯化。利用 CD 抗原检测试剂盒对 GDH 抗原区段的抗原性进行鉴定。结果构建的原核表达载体 pET-28a／GDH 可在大肠杆菌中成功表达，获得的 GDH 抗原能与相应抗体产生特异性反应。结论原核表达的 CD 的 GDH 抗原具有很好的抗原活性，为进一步制备相应抗体并建立CD 的 GDH 抗原的免疫检测方法奠定了基础。
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抗生素相关性腹泻病
抗生素相关性腹泻病(AAD)是指应用抗生素后发生的、与抗生素有关的腹泻.Bartlett将其定义为伴随着抗生紊的使用而发生的无法用其他原因解释的腹泻.有700多种药物可引起腹泻,其中25%为抗生素.AAD的发病率因人群及抗生素种类的差异而不同,一般为5%～25%.现将其发病机制及诊治原则作一介绍.
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老年住院患者与抗生素相关性的腹泻病原菌分析
目的 分析引起老年住院患者抗生素相关性腹泻(AAD)的可疑病原菌种类及发生率.方法 对186例发生AAD老年住院患者,用血培养基、中国蓝培养基、SS培养基、真菌显色培养基及艰难梭菌培养基等,对粪便进行细菌培养；用革兰染色、自动细菌鉴定仪、EIAs、PCR等进行鉴定.结果 艰难梭菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌阳性率分别为19.36％( 36/186),8.60％ (16/186),2.15％(4/186);真菌阳性率为27.42％(51/186),菌群失调率为36.02％ (67/186).未发现其他致病菌.结论 AAD的主要致病菌为艰难梭菌,菌群失调及真菌数量增多可能在AAD发生中起着重要作用.
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艰难梭菌毒素C蛋白的克隆表达和抗体制备
目的 克隆艰难梭菌毒素C(tcdC)基因并构建TcdC蛋白的原核表达载体,制备多克隆抗体.方法从艰难梭菌标准株(ATCC43255)基因组DNA中扩增获得tcdC基因的部分片段,连接到原核表达载体并转化到大肠杆菌中,诱导表达GST-TcdC/L和IL1-TcdC/L融合蛋白,前者用作免疫抗原,后者用作检测抗原.采用SDS-PAGE法鉴定融合蛋白的表达,并通过Ni柱纯化IL1-TcdC/L融合蛋白,Q柱纯化GST-TcdC/L融合蛋白.将纯化的GST-TcdC/L融合蛋白于兔背部皮内多点注射,每只1 mg,4周1次,共3次.后1次免疫后2周,采血分离血清.用IL1-TcdC/L蛋白包被酶联板,采用ELISA法检测多抗血清效价;Western蛋白印迹法检测多抗特异性.结果SDS-PAGE结果表明,所表达的2个融合蛋白与预期分子质量一致.ELISA结果显示,制备的TcdC多克隆抗体效价>1:6.4×104.Western蛋白印迹实验显示,制备的TcdC/L多克隆抗体能特异性识别艰难梭菌中的TcdC蛋白.结论成功克隆了艰难梭菌tcdC/L基因并进行了原核表达,成功制备了其多克隆抗体,为后续研究tcdC基因在艰难梭菌致病过程中的作用及机制奠定了基础.
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临床药师参与抗生素相关性腹泻患者治疗的药学实践
目的:探讨抗生素相关性腹泻(antibiotic-associated diarrhea,AAD)发生的原因和处理方法 .方法:回顾性分析临床药师参与1例疑似AAD患者治疗的药学实践.结果:临床药师对该病例进行了分析和讨论,包括患者病情和腹泻原因,如抗菌药物的使用、联合应用的药物及患者自身疾病等.该患者的腹泻高度疑似AAD,但也不排除联合用药导致的腹泻.临床药师参与了腹泻的处理,根据患者病情建议适当停用可疑药物及针对性抗菌治疗,并加用微生态制剂治疗.临床医师采纳了上述建议,后患者腹泻症状好转.结论:患者使用抗菌药物后,出现了腹泻,要考虑AAD的可能.临床药师应注意药品不良反应,结合患者病情和用药情况,分析腹泻原因,协助医师及时调整用药方案,为患者的用药安全保驾护航.
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伪膜性肠炎的药物治疗方案与评价
目的:了解伪膜性肠炎的机制和治疗方案,以期为临床合理用药提供参考.方法:查阅国内外近期相关文献对伪膜性肠炎的病原学、发病机制及防治进行分析评价.结果及结论:抗生素的大量应用导致伪膜性肠炎发病率逐渐攀升,艰难梭菌为其主要致病菌.为有效控制伪膜性肠炎的发病应合理使用抗生素,严格控制用药指征.
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卡达唑胺--一种治疗艰难梭菌相关性腹泻的新药
艰难梭菌（难辨梭状芽孢杆菌）是一种产芽孢的厌氧性革兰阳性细菌，是引起医院抗生素相关腹泻的常见细菌，大多寄生在人体肠道内，主要通过产生两种致毒因子（毒素A和毒素B）而发挥毒性。艰难梭菌相关性腹泻（CDAD）是由肠道内的艰难梭菌引起的，通常是过度使用广谱抗生素造成肠道菌群失调的结果，是导致老年住院患者发病和死亡的主要原因［1-2］。CDAD可表现为腹泻、腹痛、发热和白细胞增多，从而诱导肠黏膜炎症（结肠炎）。后者可恶化，终导致伪膜性结肠炎、巨结肠症、肠穿孔、败血症和中毒性休克［2］。目前，CDAD的抗菌药物治疗包括万古霉素和甲硝唑，但这两种药物对严重病例的治疗效果均有限，且近年来复发率已上升至30％［3］，甲硝唑的耐药情况也不容乐观［4-5］。近30年来，只有一种新型抗生素--非达霉素被批准用于该适应证，对急性CDAD感染的治疗效果与万古霉素相当，复发率也较低。然而，对于流行性传染病，包括艰难梭菌剧毒菌株NAP1/BI/027，非达霉素的复发率仍然偏高（24％）［6］，对于CDAD再发病例的治疗复发率为20％［7］。另一方面，在CDAD的治疗中，由于万古霉素等广谱抗菌药物的广泛使用导致肠道菌群失调，已出现耐万古霉素肠球菌［8-10］。上述这些不断增加的感染威胁和持续的复发风险，促使一些公司寻求替代性的治疗方法。由瑞士Actelion公司开发的治疗CDAD的新药--卡达唑胺（Cadazolid），目前已进入Ⅲ期临床研究阶段，该公司于2014年2月底宣布，美国FDA已授予新型抗菌药物卡达唑胺合格传染病产品（QIDP）认定和快速通道地位，将该药开发应用于CDAD的治疗。本文就此新药的相关情况作一综述。
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核糖体型别027型高产毒艰难梭菌致感染性休克1例
1例社区获得性肺炎患者入院后给予抗感染治疗,经头孢西丁、左氧氟沙星、头孢哌酮-舒巴坦、莫西沙星治疗24天后出现艰难梭菌感染,继而血压下降,出现感染性休克,转入ICU治疗.后经万古霉素口服治疗14天后腹泻症状逐渐缓解.本病例中分离到的艰难梭菌经核糖体分型鉴定为027型高产毒艰难梭菌,其引发的艰难梭菌感染为重症感染.
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腹泻新病原艰难梭菌DNA提取方法的比较研究
目的:比较提取高质量艰难梭菌基因组总DNA的方法.方法:采用4种不同方法提取艰难梭菌基因组DNA,比较作为模板用于扩增艰难梭菌看家基因磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的优缺点.结果:除沸水浴法,其他3种方法制备的艰难梭菌DNA均能成功用作PCR扩增的模板.CTAB/NaCl法进行提取可有效去除多糖成分,但操作要求较高.碱裂解法操作简便、省时、成本低经济可靠,提取的DNA量及纯度较合适;试剂盒抽提出的产物纯度和产量明显高于CTAB/NACL、碱裂解法(P<0.05),但成本高.结论:四种方法各具优缺点,应根据实验室条件和实验要求进行选择.
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住院腹泻患者艰难梭菌检测分析
目的 分析住院腹泻患者艰难梭菌的检测结果.方法 为82例住院腹泻患者采集粪便标本,展开厌氧培养与API鉴定,以酶联荧光免疫法对毒素A/B进行检测.结果 82例患者中14例粪便标本检查显示艰难梭菌为阳性,艰难梭菌阳性率为17.07％,其中13例患者年龄高于44岁,毒素A/B检出率14.63％.艰难棱菌阳性患者抗菌药物应用时间为(13.47±2.63)d明显长于阴性患者的(8.15±1.68)d(P＜0.05).结论 住院腹泻患者艰难梭菌检出率和抗菌药物应用时间的长短有一定联系.
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谈谈肉毒梭茵与艰难梭菌的检验措施
目的：探讨肉毒梭茵与艰难梭菌的基本常识和检验措施，为治细菌所致疾病提供可靠依据。方法通过实验室的化学检验，进行仔细观察和记录，做出系统性规律性的检验总结。结论通过科学系统的全面检验，能准确掌肉毒梭茵与艰难梭菌的基本特性和致病原因，为针对性的治疗提供了可靠的保障。
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恶性肿瘤患者艰难梭菌感染相关性腹泻的临床特征分析
目的 恶性肿瘤患者腹泻发生率较高,艰难梭菌感染为其中一个重要的原因,但临床辨别相对困难.本研究拟探讨恶性肿瘤患者艰难梭菌感染相关性腹泻的临床特征.方法 回顾性分析472例恶性肿瘤合并腹泻患者,根据患者是否感染艰难梭菌分为艰难梭菌感染阳性组(A组,95例)和艰难梭菌感染阴性组(B组,377例).采用进行聚合酶链式反应(PCR)检测艰难梭菌毒素A(tcdA)和艰难梭菌毒素B(tcdB);采用倾向值匹配法对研究中非研究混杂因素进行类似随机化的均衡处理.卡钳值设定为0.1,2组按照1∶1的比例进行匹配.记录2组患者一般情况和恶性肿瘤治疗情况等.结果 2组患者倾向值匹配完成后,每组共有91例患者纳入研究.A组患者与B组患者一般资料差异均无统计学意义(均P ＞0.05);A组患者血浆白蛋白水平明显低于B组(P＜0.01),抗生素应用比例、质子泵抑制剂应用比例化疗、便潜血阳性比例和化疗后体能状态(ECOG)评分明显高于B组(均P＜0.05);2组患者不良反应发生情况差异无统计学意义(P＞0.05).结论 恶性肿瘤艰难梭菌感染相关性腹泻患者血浆白蛋白水平下降、便潜血阳性增加.抗生素、化疗和质子泵抑制剂的使用可能会增加恶性肿瘤患者艰难梭菌感染几率.
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中国成人艰难梭菌感染诊断和治疗专家共识
艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)作为医院和社区感染性腹泻,尤其是伪膜性肠炎等相关疾病的重要病原体,近年来在欧美等发达国家及地区日益受到关注.但在中国,医学领域对艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)的认识尚且不足.迄今为止,我国尚未有针对CDI诊断和治疗的指南、行业标准或专家共识出台.因此,中国医师协会检验医师分会感染性疾病检验医学专家委员会联合我国行业内各领域知名专家,共同撰写了本共识,旨在加强临床医务工作者对CDI的认识,提高对该种疾病的精准诊断、治疗与防控能力.
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临床腹泻患者艰难梭菌的感染情况和分子流行特征
目的 了解临床腹泻患者艰难梭菌的感染情况和分子流行特征,为控制医院感染和临床诊疗提供依据.方法 收集2016年1～12月浙江省嘉兴市第二医院临床腹泻患者粪便标本852份作为实验组,同期健康体检成人粪便标本310份作为对照组,厌氧培养获得艰难梭菌的阳性率,并结合毒素基因型和多位点序列分型进行综合分析.结果 实验组852份粪便标本中共分离到108株艰难梭菌,阳性率为12.68％,而对照组310份粪便标本分离到8株,阳性率为2.58％,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组以tcdA+tcdB+菌株为主,占86.11％(93/108),tcdA-tcdB+菌株占5.56％(6/108),tcdA-tcdB-菌株占8.33％(9/108),产毒率为91.67％,而对照组对应毒素基因型别占比为62.50％(5/8),12.50％(1/8),25.00％(2/8),产毒率为75.00％,但两组产毒率比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组多位点序列分型发现32种ST型,其中ST54是相对流行的型别,另外CC48是相对流行的克隆群.结论 临床腹泻患者艰难梭菌的感染率较高,亟需引起临床重视并加强院感防控,预防暴发流行.
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艰难梭菌病原学检测与临床
艰难梭菌是唯一能引起院内感染的厌氧菌，也是引起院内感染病原体中唯一能形成芽孢的细菌。艰难梭菌是一种苛养厌氧菌，其繁殖体在离开肠腔通常24小时内死亡，其芽孢体对一般清洁和消毒措施有很强的抵抗力，可存在于环境中达数月之久[1]。芽孢体通过胃时不被胃酸杀死并进而在肠道产生毒素并引起疾病。艰难梭菌可栖生于人或动物肠道，可通过粪-口途径引起外源性感染，也可以在大量抗菌药物使用后由肠道栖生的艰难梭菌引起内源性感染。艰难梭菌感染引起大肠内膜炎的主要症状有不同程度的腹泻、发热、腹痛、便血。也可引起败血症、肠穿孔及腹腔感染，在老人及有严重基础疾病患者中甚至导致死亡。艰难梭菌感染人潜伏期不甚明确，其发病可短致一周也可长达抗菌药物使用结束后三个月。随着艰难梭菌感染发病率的不断上升，有关艰难梭菌感染的防治、检测越来越受到临床工作的重视。
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艰难梭菌感染治疗的新方法
艰难梭菌感染（ Clostridium difficile infection，CDI）是由肠道致病性艰难梭菌过度增殖并释放毒素引起的以肠道为主要表现的感染性疾病，临床表现可从轻度自愈性腹泻到严重的伪膜性肠炎、脓毒综合征、中毒性巨结肠甚至肠穿孔［1］。21世纪以来，CDI的发病率和疾病严重程度在全球范围内呈上升趋势，尤其是艰难梭菌高产毒株（ BI／NAP1／027毒素Ⅲ型）的出现和暴发流行，使得艰难梭菌成为医疗卫生相关的重要病原菌之一［2］。应用抗生素治疗CDI已逾30年，主要是甲硝唑和万古霉素，但近年来，上述药物的敏感性降低，且治愈后复发率高达25％～60％［3］，使得重症CDI患者在抗生素治疗失败后只能行结肠次全切手术。因此，正确的治疗CDI并预防其复发尤为重要，而新方法的研发迫在眉睫。
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重症加强治疗病房腹泻患者艰难梭菌检测的敏感方法
目的：对重症加强治疗病房（ICU）腹泻患者的粪便标本进行艰难梭菌检测，了解本院ICU腹泻患者艰难梭菌的感染情况。方法采用前瞻性观察性研究方法，选择2013年6月至2014年7月入住浙江省嘉兴学院附属第二医院ICU的腹泻患者25例，每例患者收集2份粪便标本，一份行厌氧培养，另一份采用定量聚合酶链反应（PCR）及凝胶电泳进行毒素基因检测。结果25份粪便标本经厌氧培养，其中6份粪便标本培养出艰难梭菌（24%），药敏结果提示对甲硝唑及万古霉素均敏感。艰难梭菌毒素检测显示，25份粪便标本直接提取DNA后进行PCR扩增，5份标本粪便艰难梭菌毒素A/B检测为阳性，且均为毒素B阳性（20%）。两种方法检测艰难梭菌阳性率差异无统计学意义（χ2＝0.13，P＞0.05）。5例毒素检测阳性患者均治愈。结论本院ICU艰难梭菌相关性腹泻比较严重，对于临床疑诊患者应及时进行艰难梭菌检测以指导治疗。
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粪菌灌肠治疗重症监护病房艰难梭菌感染腹泻1例报告并文献复习
艰难梭菌被认为是大量应用强效广谱抗菌药物引起的抗菌药物相关性腹泻（AAD）的致病菌。重症监护病房（ICU）患者多为重度感染，应用广谱抗菌药物十分普遍，因此导致的AAD发病率呈持续上升状态，位居ICU发生腹泻病因的第3位［1］，且治疗更加困难［2］。发生AAD会引起水和电解质紊乱、肠内营养开通延迟、肠道屏障破坏，终致使患者住ICU时间延长，费用增加，影响患者预后［3］。肠道菌群失调为AAD的病理基础，粪菌移植（FMT）治疗作为一项既古老又现代的方法可以有效改善肠道菌群失衡状态。现报告1例应用粪菌灌肠成功治疗艰难梭菌感染腹泻的病例资料，并复习相关文献，期望可以提高对FMT这一疗法的认识。
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第46届抗微生物制剂和化疗跨学科会议(ICAAC)——抗生素耐药和新治疗策略专题
第46届抗微生物制剂和化疗跨学科会议(ICAAC)于2006年9月27～30日在美国旧金山隆重召开.该大会一直以涵盖感染病领域的重要议题为特点,本专题介绍了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、艰难梭菌、肺炎链球菌和革兰阴性杆菌的新资料.
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艰难梭菌耐药性及耐药机制研究进展
艰难梭菌是导致抗生素相关性腹泻和医院感染性腹泻的主要病原菌.在欧美等发达国家及地区,艰难梭菌感染都有较高的发病率和死亡率,因此受到高度关注.相比,国内艰难梭菌的研究数据还相对匮乏,尤其临床对其对常用抗生素的耐药性还认识不足.因此,本文就艰难梭菌的耐药性和耐药机制的新研究进展进行综述.
