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艰难梭菌感染诊疗进展
抗生素相关性腹泻（antibiotic-associated diarrhea，AAD）是指伴随抗菌药物的使用而出现的腹泻，发生率为5％～25％，与使用的抗菌药物种类和时间有关［1］。艰难梭菌（Ckostridium difficike ）是一种普遍存在的革兰阳性厌氧菌，可在健康人胃肠道定植，经粪-口传播，它是导致抗生素相关性结肠炎的主要病原菌。艰难梭菌感染（Ckostridium difficike infection，CDI）在医院内 AAD 病因中占15％～25％［2］，患者临床表现轻重不一，轻者为自限性腹泻，重者可以发展至中毒性结肠炎，甚至死亡。近年来，CDI 的发生率和病情严重程度不断增高，识别由艰难梭菌引起的 AAD 仍是临床上的一个难点，粪移植为复发型 CDI 的治疗带来突破性进展。美国医疗保健流行病学学会／美国感染病学会（SHEA／IDSA）2010年［3］、欧洲临床微生物与感染性疾病学会（ESCMID）2009年［4］和2013年［5］、美国胃肠病学会（ACG）2013年［6］均发表了 CDI 的诊疗指南。现结合 CDI 研究的新进展与国际指南意见，就诊断和治疗方面做一综述。
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双歧杆菌纯化粘附素对艰难梭菌粘附肠上皮细胞的竞争抑制作用
艰难梭菌对肠上皮细胞的粘附是其定植和感染的前提.以往的研究多集中于肠道正常菌群如双歧杆菌拮抗肠道致病菌粘附肠上皮细胞的研究[1,2],但由于活菌的制造和保存难度较大而使其应用受到一定程度的限制.
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儿童艰难梭菌感染
随着广谱抗生素的大量使用,艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)的发生率明显上升,特别是高毒力株(027/NAP1/BI)在欧美的出现及流行,已经引起全世界的关注.CDAD的临床症状轻重不一,可从轻度腹泻到致死性假膜性肠炎和中毒性巨结肠.CDAD的确诊依赖于实验室检查,包括厌氧菌培养及细胞毒性试验、细菌毒素抗原检测、毒素基因扩增检测.处理包括停用相关抗生素,尽早应用甲硝唑或万古霉素,以及益生菌药物.
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儿童抗生素相关性艰难梭菌腹泻的病例对照研究
目的 探讨儿童抗生素相关性腹泻(AAD)中艰难梭菌感染(CDI)的发生情况及临床特点,为抗生素相关CDI的诊治提供依据.方法 纳入2016年6月1日至2017年10月1日在复旦大学附属儿科医院行CD毒素A/B检测和CD厌氧培养且符合AAD诊断标准的住院患儿,排除<1月龄、粪便常规细菌培养和病毒检测等临床信息不完整的病例,重复病例仅纳入首次诊断AAD时的临床信息.毒素A/B检测阳性或结肠镜检查提示假膜性肠炎者CDI组;余为非CDI组.单人从病志中采集一般资料,基础疾病,出现AAD相关腹泻症状前2个月内的抗生素使用情况,1个月内的治疗和药物使用情况,实验室指标等.结果 符合本文纳入标准的AAD患儿150例,年龄40 d至15岁2月,中位年龄1.4岁,男103例(68.7％).CDI组24例(16.0％),非CDI组126例.①CDI组急性腹泻22例(中位腹泻天数8 d),因克罗恩病导致的慢性腹泻急性加重1例;因结肠息肉导致的迁延性腹泻急性加重1例,发热11例(45.8％),呕吐8例(33.3％),腹痛2例(8.3％),腹胀1例(4.2％);1例(1/5,20％)结肠镜显示为伪膜性肠炎.②CDI组和非CDI组发病年龄,性别,基础疾病,腹泻前2个月内抗生素应用情况,腹泻前1个月内手术或糖皮质激素、免疫抑制剂和抑酸药应用情况,实验室指标差异无统计学意义(P>0.05).多因素logistic分析显示CDI和非CDI临床表现和常规实验室检测指标差异无统计学意义(P>0.05).③AAD的主要治疗措施为停用广谱抗生素,益生菌辅助治疗,CDI患儿症状无好转时加用甲硝唑(应用5～7 d后未见明显好转改口服万古霉素).CDI组腹泻均好转或痊愈,非CDI组117例(94.4％)腹泻症状好转,9例死于腹泻外的其他原因.结论 儿童AAD中CDI发生率为16.0％,发热、呕吐为常见的临床表现,经治疗后预后良好,仅凭临床表现和实验室检测指标不能区分儿童ADD中CDI和非CDI.
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降低艰难梭菌感染复发新药——人源化单克隆抗体bezlotoxumab
bezlotoxumab为一人源化单克隆抗体,能够中和艰难梭菌B型毒素.bezlotoxumab由美国默克制药公司开发,于2016年10月在美国获批用于艰难梭菌感染复发的治疗.本文从药物的作用机制、药动学、临床疗效及不良反应等方面对bezlotoxumab进行了介绍.
关键词： bezlotoxumab 抗体 单克隆 艰难梭菌 -
住院腹泻患者艰难梭菌感染的临床特点分析
目的 分析上海交通大学医学院附属瑞金医院住院腹泻患者艰难梭菌感染情况及临床特点.方法 收集上海交通大学医学院附属瑞金医院2013年11月-2014年2月住院腹泻患者的不成形粪便标本706份,通过厌氧培养、乳胶凝集试验和谷氨酸脱氢酶基因(gluD)扩增,分离鉴定艰难梭菌.应用聚合酶链反应(PCR)对菌株的DNA进行毒素A基因(tcdA)和毒素B基因(tcdB)检测,分析菌株的毒素类型.根据患者病史信息,分析其临床表现和用药情况.结果 706份标本中分离得到艰难梭菌菌株34株(4.82％),来自30例住院患者;其中院内感染艰难梭菌的住院患者为23例(76.67％),均使用过头孢类、碳青霉烯类、喹诺酮类等抗生素中的1种或多种.经PCR检测菌株毒素,发现34株艰难梭菌中毒素类型为A+B+型共21株(61.76％),A-B+型12株(35.30％),A-B-型仅1株(2.94％).结论 上海交通大学医学院附属瑞金医院住院腹泻患者中艰难梭菌感染以院内感染为主,感染菌株的毒素类型以A+B+型为主,抗生素的使用是导致艰难梭菌感染的重要因素.
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艰难梭菌感染的流行状况及耐药机制研究进展
近年来艰难梭菌感染(CDI)的流行状况发生了巨大变化,随着其感染率的增加及病情的加剧,CDI已成为一个全球性的健康问题.CDI曾在北美和欧洲数次暴发流行,同样艰难梭菌也已成为亚洲地区重要的院内感染病原体,但目前国内对CDI的认识和临床感染监控还不够.了解CDI的流行状况和艰难梭菌耐药情况,可以为临床预防及治疗CDI提供依据.本文将就CDI的流行状况及耐药机制的研究进展进行综述.
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院内感染艰难梭菌的毒素检测及核糖体分型研究
目的 了解艰难梭菌临床分离株的毒力情况,并运用核糖体分型技术进行流行病学研究.方法 采集住院腹泻患者的未成形粪便标本,无水乙醇处理后接种CDMN选择培养基行艰难梭菌分离培养,并通过革兰染色、耐氧试验和凝集试验行菌落鉴定；提取菌株DNA,选择特异性引物用PCR法扩增毒素基因tcdA和tcdB；核糖体分型针对细菌基因组16S～23S rDNA间区序列进行扩增,并根据电泳带型的多态性实现分型.结果 共计分离得44株艰难梭菌,3种毒素型分别为A+B+型、A-B+型和A-B-型,分别占 57％ 、34％和9％；18种核糖体型中以R8 型和R4 型为主,分别占 20％和18％.结论 本研究临床分离的艰难梭菌菌株中,毒素型以A+B+型为主,核糖体分型存在相对优势的型别；无证据提示存在院内艰难梭菌感染的暴发流行.
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炎症性肠病患者艰难梭菌感染率及相关分析
炎症性肠病(IBD)是一种非特异性肠道炎症疾病,该类疾病在临床中多见于结肠炎(UC)及克罗恩病(CD),对患者肠胃及身体功能的远期影响较大[1].艰难梭菌(C-diff)菌种形状为梭状的革兰阳性细菌,C-diff繁殖速度远超于其他厌氧细菌,其大量集结能快速引发一系列典型临床症状,从初的轻度腹泻到后期的顽固性结肠炎.本文分析IBD患者艰难梭菌感染率及其影响因素,现报告如下.
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2种艰难梭菌感染检测方法的比较与分析
目的 比较酶联免疫荧光分析(ELFA)与实时荧光定量PCR(PCR)2种艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)检测方法的检验性能,从中选择灵敏度高、特异性好且操作简便的CDI检验方法开展临床检验.方法 对来自重症监护病房(ICU)、消化内科及感染科等临床科室的126份粪便标本进行艰难梭菌毒素或基因检测.以产毒培养试验(toxigenic culture,TGC)结果作为参考标准,评价ELFA与PCR方法的性能,同时分析我院及各科室的CDI流行情况.结果 TGC检测126份腹泻患者的粪便标本,阳性率为19.0％ (24/126),其中ICU、消化内科感染率较高.ELFA和PCR方法的检测敏感性分别为66.7％和91.7％,差异有统计学意义(x2=4.55,P＜0.05);特异性、阳性预测值、阴性预测值与准确度差异无统计学意义.结论 我院CDI形势较为严峻,以ICU和消化内科为突出.PCR与ELFA均能够提供更为准确、可靠的检测结果,但前者敏感性较好.
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实时荧光定量PCR对艰难梭菌感染诊断价值的meta分析
目的 系统评价实时荧光定量PCR(real-time PCR)对艰难梭菌感染的诊断价值.方法 制定原始文献的纳入、排除标准及检索策略,检索有关real-time PCR诊断粪便中艰难梭菌感染且同时采用细胞培养毒素中和试验(CCCNA)或厌氧产毒培养(TC)作为诊断金标准的文献,采用诊断准确性研究的质量评价工具QUADAS进行质量评价,并用Meta DiSc1.4软件进行meta分析.结果 纳入研究文献共42篇,异质性检验提示无阈值效应,但存在其他原因导致的非阈值性异质性.real-timePCR诊断粪便艰难梭菌感染的合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比及诊断优势比(95％ CI)分别为0.925 (0.913,0.936)、0.965 (0.962,0.969)、28.385 (23.394,34.441)、0.093 (0.076,0.115)和378.15(282.17,506.77).ROC曲线下面积(AUCSR0C)和Q *指数分别为0.987 8和0.953 2,漏斗图显示无发表偏倚,meta回归结果显示各个影响因素中以发表年份和样本含量为主要异质性来源,对发表年份和样本含量进行亚组分析,发现2010年之后的诊断效能大于2010年之前,样本量大于200的诊断效能大于样本量小于200者.结论 通过对real-time PCR对艰难梭菌感染的诊断价值进行meta分析,发现real-time PCR具有较高的敏感性、特异性、阳性似然比及阴性似然比.因其快速准确,可广泛应用于临床.
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实时荧光定量PCR直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因
目的 建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因,并探讨其应用价值.方法 根据艰难梭菌基因组设计tcdB基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证其特异性;收集2015年10-12月临床腹泻患者稀便标本115份,提取基因组总DNA后进行tcdB基因检测,并以产毒培养法为参考方法,探讨该方法的临床诊断价值.结果 荧光定量PCR法低检测限为1×10-3 ng,并且仅特异性地扩增产毒艰难梭菌;临床样本评价荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0％、99.1％、85.7％和98.1％.结论 实时荧光定量PCR直接检测稀便标本中的艰难梭菌tcdB基因可用于艰难梭菌相关腹泻的快速诊断.
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艰难梭菌婴幼儿分离株毒力及基因型分布研究
目的 明确深圳地区婴幼儿粪便中分离出的艰难梭菌的毒力及其基因型.方法 收集深圳市宝安区妇幼保健院2014-2015年分离出的49株艰难梭菌菌株,PCR检测其毒素A、B的编码基因tcdA、tcdB的携带状况,数字化PCR-核糖体分型方法进行基因分型.结果 49株艰难梭菌tcdA、tcdB携带率分别为44.9％ (22/49)和59.2％ (29/49),其中22株tcdA、tcdB均为阳性,7株为tcdA阴性、tcdB阳性;49株菌可分为22种核糖体型,常见的核糖体型为RT017(7/49,14.3％),BA03(5/49,10.2％),BA16(5/49,10.2％)和BA13(4/49,8.2％).7株RT017菌株均为tcdA-tcdB+,而常见的tcdA+ tcdB+菌株(44.9％,22/49)则来自RT017以外的15种核糖体型.结论 深圳地区婴幼儿中分离出的艰难梭菌半数以上为产毒株,且产毒株多同时携带tcdA、tcdB基因;基因型则以RT017为主,且均为产毒素B而不产毒素A菌株.
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Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用评价
目的 评估Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用价值.方法 选取43份腹泻粪便标本,采用厌氧培养法、VIDAS检测A/B毒素法和Xpert艰难梭菌检测系统检测艰难梭菌,以产毒培养法作为金标准对检测方法进行评价,并比较不同检测方法对临床标本检测结果的一致性.通过自配027型标准菌株模拟粪便标本,验证Xpert艰难梭菌检测系统筛选027型流行株的能力.结果 以产毒培养法为金标准,Xpert艰难梭菌检测系统的敏感性和特异性分别为90.9％和93.8％,阳性和阴性预测值分别为83.3％和96.8％.与产毒培养法结果一致性检验Kappa值为0.822(P ＜0.05),与VIDAS检测A/B毒素法结果一致性检验Kappa值为0.419(P＜ 0.05);027型标准菌株模拟粪便标本检测结果阳性并报告为027型.结论 Xpert艰难梭菌检测系统能够快速准确地检测粪便标本中的艰难梭菌相关基因,且能准确报告027型高产毒力菌株.
关键词： 艰难梭菌 Xpert艰难梭菌检测系统 产毒培养 -
艰难梭菌感染流行病学特征、实验室诊断与治疗的研究进展
艰难梭菌(Clostridium difficile)是一种专性厌氧革兰阳性芽孢杆菌,一般认为是环境和人类肠道中的正常菌群.近年来该菌引起的医院内感染日益增多,是医院内获得性腹泻的主要病原菌.抗菌药物的过度应用被认为是引起艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)发病率增加的主要因素.CDI的发病率在全球范围内不断增加,尤其是新型高产毒株在北美地区造成了医院内感染的暴发流行,引起了世界范围的关注.本文对CDI的流行病学特征、致病机制、实验室诊断、治疗以及感染控制等方面的新研究进展进行阐述,旨在为CDI的早期预防提供新思路.
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艰难梭菌A毒素的纯化
目的建立一种纯化艰难梭菌A毒素的方法.方法将艰难梭菌VPI 10463菌株经透析培养,50%饱和硫酸胺盐析,酸沉淀,再经DEAE-Toyopearl 650M离子交换色谱.结果精制的艰难梭菌A毒素Native-PAGE及对流免疫电泳均为单一带,相对分子质量为550 000,小鼠毒力为1×106MLD/ml,Vero细胞毒性为1×107CU/ml.凝血活性为1:512,肠袢试验为阳性.结论该法简便、实用、可行.
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艰难梭菌毒素A对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究艰难梭菌毒素A对人肝癌细胞株(SMMC-7721)增殖和凋亡的影响.方法:克隆分析及四甲基偶氮唑盐(MTT)法用于细胞增殖的分析;透射电镜及单细胞凝胶电泳用于凋亡细胞形态学变化及DNA片段的观察;流式细胞术检测凋亡细胞数及Bcl-2和P53蛋白的表达.结果:0.018～4.690 mg/L的毒素A明显抑制SMMC-7721细胞的克隆形成,并以时间和浓度依赖方式抑制SMMC-7721细胞的增殖;SMMC-7721细胞与4.690 mg/L毒素A共同培养48 h,透射电镜观察到典型的凋亡形态学变化,单细胞凝胶电泳显示细胞DNA的损伤;流式细胞仪分析结果显示:0.073～4.690 mg/L毒素A诱导6.8%～41.8%细胞凋亡;0.293～4.690 mg/L毒素A降低Bcl-2、增高p53蛋白的表达.结论:艰难梭菌毒素A对SMMC-7721细胞有明显的增殖抑制活性,此作用通过诱导细胞凋亡产生.
关键词： 艰难梭菌 毒素A SMMC-7721细胞 细胞毒性 凋亡 -
艰难梭菌分离培养与病原学分子特征研究
目的：建立艰难梭菌分离培养与鉴定的表型诊断技术，并对分离获得的艰难梭菌进行分子学特征研究。方法采集杭州某医院ICU住院患者肛拭标本，接种厌氧血琼脂平皿，置厌氧培养箱，可疑菌株采用厌氧菌鉴定试剂条鉴定；用VIDAS荧光酶联免疫技术检测A/B毒素；用PCR技术检测艰难梭菌毒素基因和核糖体分型。结果28例 ICU 患者检出艰难梭菌9株，检出率为32.14%。9株艰难梭菌中， A/B 毒素表型阳性7株（77.78%），毒素基因检测均阳性。9株艰难梭菌可分为3种核糖型，其中R3型为优势株，占77.78%。结论杭州市ICU患者检出艰难梭菌的比例较高，均携带A/B毒素基因，且存在优势型别。
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荧光PCR快速检测艰难梭菌
艰难梭菌(clostridium difficile,CD)又称难辨梭状芽孢杆菌,是一种厌氧革兰染色阳性芽孢杆菌,广泛分布于自然环境及动物和人的粪便中,主要通过粪-口途径传播[1-2].
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伪膜性肠道炎病原菌检查的临床意义
由于抗生素的应用,大量肠道正常细菌受到抑制,使肠道菌丛的平衡紊乱[1].属于肠道常居菌的艰难梭菌(clostridumdifficile)可因对抗生素耐药的产毒菌株的大量繁殖,引起假膜性肠炎,这种严重的消化道感染性疾病的诊断有赖于病原菌的检出.
