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艰难梭菌毒素的研究进展
艰难梭菌是引起抗菌药物相关性腹泻和伪膜性结肠炎的主要致病菌,致病性主要是由毒素介导,所产生的毒素因导致肠道正常菌群失调,肠道黏膜的损伤而引起一系列与感染相关的临床症状.且近年来,艰难梭菌感染率逐年上升,尤其是高毒力菌株的出现,病死率也不断上升,已引起全世界的关注.因此,对艰难梭菌毒素相关研究进行综述,将为防治艰难梭菌感染提供依据.
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四川大学华西医院2015～2017年艰难梭菌腹泻致病株的药物敏感性及其变迁
目的 总结华西医院艰难梭菌腹泻致病株的药物敏感性,比较其变迁,为艰难梭菌感染的治疗和防控提供基础参考数据.方法 分离四川大学华西医院2015年8～12月(44株)和强化感染控制措施后2016年7月至2017年7月(29株)两个时间段中腹泻患者粪便样本艰难梭菌致病产毒株共73株,PCR扩增毒素基因后进行测序鉴定.琼脂对倍稀释法测定甲硝唑、万古霉素、克林霉素、莫西沙星、四环素、利福昔明、非达霉素和硝唑尼特9种药物的低抑菌浓度(MIC).分析艰难梭菌耐药性,并对比强化感染控制措施前后的耐药性变化.结果 所有菌株对甲硝唑和万古霉素高度敏感,对克林霉素、莫西沙星、四环素、利福昔明的耐药率分别为79.5％、26.0％、27.4％、9.5％;对非达霉素和硝唑尼特高度敏感,两药的MIC范围均为＜0.008～0.5 mg/L.与2015年相比,强化感染控制措施后艰难梭菌对克林霉素耐药率(99.5％vs.44.8％)、莫西沙星耐药率(36.4％ vs.10.3％)下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).此外,发现一株罕见的利奈唑胺药物敏感性下降的菌株,其MIC达16 mg/L.结论 华西医院艰难梭菌对克林霉素和莫西沙星的耐药率较高,需限制使用;对甲硝唑和万古霉紊高度敏感,可以经验性使用.
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ST37型艰难梭菌的生长适应性研究
目的 通过对临床分离的8株ST37型艰难梭菌的生存特性研究,为临床感染治疗提供初步实验依据及新的研究思路.方法 将产毒型ST37艰难梭菌与不产毒ST39艰难梭菌1∶1等量混合后培养,应用实时荧光定量PCR方法检测毒素基因tcdB随培养时间延长相对表达量的变化,从而了解ST37型艰难梭菌与不产毒菌株共存时的生长适应性.同理将ST37型艰难梭菌与tcdA+ tcdB+的ST54菌株等量混合后测定毒素基因tcdA相对表达量的变化,了解ST37型艰难梭菌与产双毒菌株共存时的特性.结果 将ST37型艰难梭菌菌株与不产毒的艰难梭菌1∶1混合后培养,毒素基因tcdB在混合培养液中所占的比例随时间延长逐渐下降(P＜0.05),至第4天混合液中几乎检测不到tcdB.将ST37型艰难梭菌菌株与tcdA+ tcdB+的ST54菌株混合培养后,毒素基因tcdA并未随时间延长而规律减少(P＞0.05).结论 不产毒艰难梭菌菌株能抑制产毒的ST37型艰难梭菌的生长,然而只产tcdA毒素的ST37型艰难梭菌并不能抑制产双毒菌株艰难梭菌的生长.
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复发的炎症性肠病患者中艰难梭菌的临床实验室检测
目的 探索2种用于临床实验室快速检测的方法——核酸粪便直接检测和酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)粪便直接检测,在复发的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者中识别艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)的临床应用,为艰难梭菌的医院感染防控提供支持.方法 收集2014年11月—2015年4月入院复发的48例IBD患者入院48 h内自然解出的粪便,使用粪便厌氧培养和鉴定、核酸粪便直接检测和EIA粪便直接检测3种方法分别检测同一样本.采用Kappa一致性检验方法对检测结果进行统计学分析.结果 48份样本中,共有37份不含有艰难梭菌的样本和11份含艰难梭菌的样本,其中含有产毒艰难梭菌的样本2份,占4.2％.2株产毒艰难梭菌的毒素类型均为A+B+.一致性检验表明与厌氧培养和鉴定法相比,核酸粪便直接检测法与其一致性好(Kappa=1.00,P＜0.05);EIA粪便直接检测法在识别是否有艰难梭菌的样本方面与其一致性也很高(Kappa=0.89,P＜0.05).但EIA粪便直接检测法对含产毒的艰难梭菌样本进行毒素检测时会漏检.结论 除了厌氧培养和鉴定以外,核酸粪便直接检测和EIA粪便直接检测都可以用于IBD患者合并CDI的筛查,前者较后者略好.临床上高度怀疑IBD合并CDI的患者,若粪便的EIA毒素检测阴性,建议加用核酸检测等其他方法进行确认.
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抗艰难梭菌A毒素单克隆抗体的制备及特性分析
目的: 制备抗艰难梭菌A毒素的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法: 用纯化的艰难梭菌A毒素免疫BALB/c小鼠, 将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合, 采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞.用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析; 用Western blot检测mAb的特异性.结果: 得到6株杂交瘤细胞株, 5C10株细胞分泌的mAb为IgG2a, 4B5和8A1株细胞分泌的mAb为IgG1, 其他3株细胞mAb (2H7、3E9和6G8)均分泌IgM.中和试验表明, 所有的mAb均无中和活性.腹水mAb的效价均在10-4以上, 其中mAb 2H7、6G8、5C10、4B5和8A1具有共同的表位, 而mAb 3E9识别的位点与其他5株不同. mAb 8A1和4B5 的相对亲和力>105, 其他4株mAb的相对亲和力>104.在非变性条件下, PAGE后Western blot的结果显示, 6株mAb均可与相对分子质量(Mr)为55×104的A毒素产生反应; 而在变性条件下, 还原与非还原SDS-PAGE后Western blot均显示, 6株mAb均可与Mr为5×104～24×104的A毒素产生反应.结论: 6株杂交瘤细胞株均能分泌抗艰难梭菌A毒素的特异性mAb, 为艰难梭菌A毒素的研究提供了有利的工具.
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艰难梭菌毒素A羧基端基因的克隆与表达
目的:克隆并表达艰难梭菌毒素A羧基末端受体结合区 (CDTAR)基因.方法:PCR扩增CDTAR基因并将其克隆到表达载体pET-22b(+),重组质粒转化到E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对表达产物进行分析.结果:构建了含CDTAR基因的重组质粒pET-CDTAR,IPTG诱导后SDS-PAGE显示表达出Mr约为35.7 ku的重组蛋白,占菌体总蛋白的36.1%,可溶性表达占上清的22.2%,包涵体中约占24.9%.结论:成功克隆了CDTAR基因,并构建表达了CDTAR重组蛋白,为进一步研究CDTAR功能及研制艰难梭菌疫苗奠定了基础.
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艰难梭菌细胞毒素B功能区的表达
1 材料和方法1.1 材料 限制性核酸内切酶,T4DNAligase购自New England Biolab公司. 厌氧发生剂、脑心浸液(干粉)购自生物梅里埃公司(bioMerieux). 其他试剂为国产分析纯. 艰难梭菌(clostridium difficile, C.d VPI10463)从兰州生物制品研究所购买. 大肠杆菌菌株BL21(DE3)及质粒PET22b(+)系南方医科大学消化研究所存.
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包含艰难梭菌毒素A和B非毒性域及鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的重组融合蛋白疫苗
艰难梭菌是一种芽胞杆菌,可产生毒素介导性疾病。艰难梭菌表达2种主要毒力因子,即毒素A (TcdA)和毒素B(TcdB)。在人类和动物研究中结果表明,人类抗这些毒素的免疫力与抗艰难梭菌感染( CDI)明确相关,已知TcdA和TcdB的受体结合域( RBDs)是具免疫原性的。在本项研究中,我们检测了鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白( FliC )亚单位D1作为先天免疫激动剂,在小鼠模型中作为重组融合疫苗表达的靶向 TcdA 和 TcdB 的 RBDs 的免疫佐剂特性。经腹腔免疫的小鼠在血清中出现了明显的抗TcdA和抗TcdB的IgG。在能够密切体现人类疾病的CD1小鼠模型中进行了重组疫苗(加或不加佐剂)的保护效力测定。用相当于2个剂量的加有铝佐剂的类毒素A和类毒素B疫苗腹腔免疫C57 BL/6小鼠,并用艰难梭菌 VP I10463株进行经口饲攻击,结果表明,与单纯用铝佐剂免疫的小鼠比较,免疫疫苗的小鼠能够防止腹泻和死亡,2组之间差异具有显著的统计学意义(P<0.001)。这些结果证实了以蛋白为基础的靶向艰难梭菌RBDs的重组疫苗在伤寒沙门菌鞭毛的辅助下,能够在CD1小鼠模型中当用同源性菌株攻击时,能够产生高度的保护作用,应该进一步进行临床前研究。
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非产毒艰难梭菌对艰难梭菌感染BALB/c小鼠的防治作用
目的 观察非产毒艰难梭菌对艰难梭菌感染的防治效果.方法 用艰难梭菌产毒株人工感染BALB/c小鼠.感染前后分别用非产毒艰难梭菌进行预防与治疗,以小鼠的死亡数、盲肠内容物上清液的细胞毒性和盲肠黏膜的病理变化为观察指标,判断非产毒艰难梭菌对艰难梭菌感染的防治效果.结果 非产毒艰难梭菌不能预防艰难梭菌的感染,但在艰难梭菌感染后能明显降低盲肠黏膜的病理损伤.结论 非产毒艰难梭菌对感染艰难梭菌的BALB/c小鼠有一定的治疗作用.
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艰难梭菌感染预防与控制进展
艰难梭菌( CD)是专性厌氧革兰阳性芽孢杆菌,广泛存在于自然界、人与动物的粪便中。肠道菌群失调可导致艰难梭菌过度生长并释放毒素,引起艰难梭菌感染( CDI)[1]。 CD致病的确切机制尚不清楚,毒素的产生是致病的关键因素(非产毒菌株不引起腹泻),主要产生A、B两种毒素( TcdA,TcdB),毒素可破坏肠道上皮的完整性,并释放 IL-8等炎症介质[2]。该菌于1935年首次报道,1978年被确定为抗生素相关腹泻的主要原因[3]。临床表现可从轻度的自限性腹泻到严重的伪膜性肠炎。作为医院感染的重要类型,艰难梭菌感染日益受到人们的重视。了解艰难梭菌感染的危险因素、传播与感染方式,尤其是做好医院感染的防控工作是有效防止艰难梭菌暴发流行的前提。
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合理使用抗菌药物防治器官移植术后感染
1 碳青霉烯耐药的肠杆菌(CRE)简述2013年美国疾病控制与预防中心(CDC)发布的《细菌耐药威胁》将碳青霉烯耐药的肠杆菌(CRE)同艰难梭菌及耐药淋球菌共同列为"紧急威胁".CRE感染导致患者治疗费用增加,CRE血流感染病死率高达90%.
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艰难梭菌感染的危险因素及临床特征的研究进展
随着医疗技术的发达,广谱抗菌药物的大量使用及艰难梭菌高毒力菌株的出现,使CD的耐药性明显增加,同时也使CDI的发病率、病死率及严重程度在全球范围内呈明显上升趋势,尽管目前有一些治疗手段,但CDI的复发率及治疗失败率仍较常见,加重了患者的痛苦与经济负担[1].本文就目前CDI的流行情况、危险因素及临床特征等方面做一简要综述,为预防提高依据.
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艰难梭菌在儿童中的定植、感染的研究进展
艰难梭菌属专性厌氧菌,是抗生素相关性腹泻的常见致病菌,可引起艰难梭菌相关性腹泻.近年来随着广谱抗生素的大量使用,菌株耐药性的增加,高毒力菌株的出现,艰难梭菌感染在全球的发生率明显上升.本文就艰难梭菌及其在儿童中的定植、感染现状等作一简要综述.
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甲硝唑维B6和甲硝唑是同样的药吗
甲硝唑片和甲硝唑维B.片的主要成分都是甲硝唑.甲硝唑维B.片为复方制剂,每片含甲硝唑200毫克、维生素B620毫克;甲硝唑片是单方制剂,每片只合甲硝唑200毫克.甲硝唑维B6片和甲硝唑片,药名虽然不同样,但适应证、疗效和用法是一样的,两药均可用于各种厌氧菌感染,如败血症、心内膜炎、脓胸、肺脓肿、腹腔感染、妇科感染、骨和关节感染、脑膜炎、脑脓肿、皮肤软组织感染、艰难梭菌引起的抗生素相关肠炎、幽门螺杆菌相关胃炎或消化性溃疡、牙周感染及细菌性阴道炎等,也可用于肠道及肠外阿米巴病、阴道滴虫病、贾第虫病等.
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革兰阳性杆菌的感染及治疗对策
随着器官移植手术的开展及免疫制剂广泛使用,加之抗生素的不合理应用,伴随社会其它因素的影响,革兰阳性杆菌感染致病的概率有所增加.而目前临床并未对革兰阳性杆菌引起足够的重视.近年来,医学科学不断进步,对革兰阳性杆菌有了更深入的研究,为此就革兰阳性杆菌中的单核细胞增生性李斯特菌、红斑丹毒丝菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌,炭疽杆菌以及诺卡氏菌的感染、检测方法 及治疗作一综述.
