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HPV树突状细胞疫苗研究进展
人乳头瘤病毒(HPV)感染在人群中非常普遍,尚无有效预防和治疗办法.本文概述了以树突状细胞(DC)为基础的HPV疫苗研究现状,包括病毒蛋白及肽段负载的DC疫苗、HPV-DNA、RNA、病毒样颗粒刺激的DC疫苗及肿瘤细胞与DC融合疫苗等,并讨论了其在尖锐湿疣防治中的可能应用.
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胃癌细胞-树突状细胞融合疫苗B7-1和B7-2 mRNA表达变化的研究
我们尝试利用细胞融合技术将树突状细胞(DC)与胃癌细胞进行融合,制备融合细胞疫苗.B7-1和B7-2作为DC表面高效提呈外源性抗原并提供T细胞第二活化信号的必要分子,在融合细胞内其基因表达的变化成为融合细胞抗肿瘤活性改变的重要分子基础.因此,我们对融合细胞B7-1和B7-2的基因表达变化进行检测,并对这一改变引起融合细胞抗原提呈及T细胞活化能力增强的可能分子机制进行初步探讨,为胃癌DC疫苗的研究提供理论基础与实验依据.
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胶质瘤树突状细胞融合疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞
在本研究中,我们检测树突状细胞(DC)与胶质瘤细胞U87融合是否会产生融合细胞,并确定此融合细胞是否会于体外诱导产生胶质瘤细胞U87特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).
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B7.1/GM-CSF修饰的PC3-DC融合疫苗在体外抗肿瘤免疫效应
目的:制作B7.1/GM-CSF修饰的DC融合疫苗,并观察其在体外的特异性抗肿瘤免疫效应.方法:制备完整表达GM-CSF的前列腺癌细胞(PC3细胞),从前列腺癌患者外周血中分离树实状细胞(DC),应用电融合法融合DC和GM-CSF-PC3,构建B7.1/GPI蛋白并锚定于融合细胞表面;应用免疫荧光观察融合细胞形态及锚定稳定性;流式细胞进行融合细胞表形测定;ELISA试剂盒检测IFN-γ分泌情况;MTr及LDH试剂盒测定融合细胞刺激同源异体T淋巴细胞增殖和细胞毒性效应.结果:成功制备GM-CSF-PC3细胞及B7.1/GPI蛋白,成功分离DC并表达DC分子标记;B7.1/GM-CSF融合疫苗高表达DC分子标记及前列腺癌标记;T细胞增殖实验证明融合疫苗具有强烈的免疫刺激活性;细胞毒性实验证明了融合细胞具有比对照组更有效的肿瘤杀伤作用.结论:电融合技术可成功诱导DC与GM-CSF-PC3融合,体外实验中特定修饰的融合疫苗可显著的提升抗肿瘤免疫效应.
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树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展
树突状细胞(DC)是目前发现功能强的专职抗原呈递细胞(APC),DC疫苗的开发研制尚处于早期阶段,但已获得的大量有价值的实验数据可以表明,DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥出强大的功能.DC体外培养的方法渐趋成熟,提高DC生物学功效的手段多彩纷呈,日益增多的临床研究工作推动着该领域的迅速发展.作者就DC肿瘤疫苗制备方法及其在临床试验中的应用作一综述,并提出该免疫治疗中尚存在的一些问题.
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肺炎链球菌蛋白质疫苗研究进展
随着肺炎链球菌(SP)耐药菌株的不断出现使得疫苗研发备受关注,但目前使用的荚膜多糖及其结合疫苗有很大局限性.因此,针对SP主要毒力因子的蛋白质疫苗迅速发展,其中SP单一蛋白质疫苗包括溶血素、表面蛋白A、表面黏附素A、三组氨酸蛋白D、黏附毒力因子A,蛋白质联合疫苗包括多价重组蛋白质联合疫苗、多价蛋白质融合疫苗,已取得一定实验和临床效果,有望替代多糖疫苗.
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抑制Tregs增强DC/HCC融合疫苗诱导抗肝癌免疫反应的研究
目的 通过抑制荷瘤小鼠体内调节性T细胞(TregFoxp3+),探讨其增强DC/HCC融合细胞疫苗诱导抗肝癌免疫作用的相关机制.方法 皮下建立小鼠肝癌模型,24只小鼠随机分为4组:(1)环磷酰胺联合疫苗组[环磷酰胺(CTX)+ VAC]；(2)疫苗组(VAC)；(3)单纯环磷酰胺组(CTX)；(4)对照组.各组治疗后,取外周血测定CD8+及CD4+淋巴细胞比例,同时取肿瘤组织及脾脏组织分别行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学观察肿瘤坏死和CD8+细胞及Treg+细胞的浸润,并用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测脾脏淋巴细胞特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性.结果 与其他各组比较,CTX+ VAC组外周血CD4+及CD8+细胞比例增高[ CTX+ VAC:17.50％、14.69％；VAC:16.17％、13.07％；CTX:12.17％、11.59％；对照组:12.24％、11.16％]；肿瘤组织可见大量肿瘤细胞坏死,脾脏组织中Foxp3+细胞浸润减少,CD8+细胞浸润增高,CTL对肿瘤细胞杀伤作用明显增强(P＜0.05).结论 通过CTX抑制荷瘤小鼠微环境及外周血中的Treg细胞,可以明显增强DC/HCC融合疫苗对肿瘤的杀伤作用.
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树突状细胞/肿瘤细胞融合疫苗抗肿瘤免疫研究进展
0引言在肿瘤的发生发展过程中,肿瘤细胞通过抑制抗原呈递细胞(Antigen presenting cells,APCs),特别是树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的抗原呈递作用来逃避宿主对其进行的免疫攻击.进行APC的研究,尤其是DCs来源的肿瘤疫苗的研究对肿瘤的免疫治疗具有重要意义.DC/肿瘤细胞融合疫苗因其独特的抗原呈递特点,已成为目前以DCS为基础的细胞免疫治疗的研究热点之一[1].本文将对近年来DC/肿瘤细胞疫苗与肿瘤的细胞免疫治疗方面的研究进展进行综述.
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树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗对食管癌移植瘤生长的抑制作用
背景与目的:我们前期的研究表明树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗能有效诱导体外抗食管癌细胞的特异性免疫应答,在此基础上,本研究进一步探讨树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)对食管癌细胞株EC-109裸鼠皮下移植瘤的体内抑瘤作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:①采用聚乙二醇法制备树突细胞/肿瘤细胞融合疫苗并诱导抗原特异性CTL8产生.②建立食管癌EC-109细胞裸鼠皮下移植瘤模型,将成功荷瘤的裸鼠随机分为3组.分别以融合细胞激活的CTLs(A组,n=11)、未激活的T淋巴细胞(B组,n=11)以及RMPI=1640培养液(C组,n=11)作为效应细胞进行瘤内注射,每周一次.③4周后处死动物剥离肿瘤组织,测量并比较各组肿瘤组织的平均体积及平均湿重,计算抑瘤率.④免疫组化SP法检测3组裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.⑤流式细胞仪检测3组肿瘤细胞周期及细胞凋亡率,比较各组肿瘤细胞的S期细胞平均百分比(S-phase fraction,SPF)以及细胞平均凋亡率.结果:①A组肿瘤组织的平均体积显著小于B组和C组,差异有统计学意义[(881.45±31.14)mm3 vs.(1493.37±51.67)mm3,(2065.77±87.55)mm3,F=950.67,P=0.00],其平均湿重亦显著小于B组和C组,差异有统计学意义[(0.88±0.04)g vs.(1.38±0.07)g,(2.04±0.11)g,F=1335.90,P=0.00];A组抑瘤率明显高于B组,差异有统计学意义(56.86% vs.32.35%,F=1218.08,P=0.001).②A组肿瘤的平均PCNA-LI明显低于B组和C组,差异有统计学意义[(26.83±0.95)% vs.(51.82±1.51)%,(68.93±2.40)%,F=1528.39,P=0.000].③A组肿瘤细胞平均SPF值明显低于B、C两组,差异有统计学意义[(12.46±0.36)% vs.(29.39±0.96)%,(42.25±1.43)%,F=2188.05,P=0.001].④A组肿瘤细胞平均凋亡率明显高于B、C两组,差异有统计学意义[(38.03±1.21)% vs.(17.75±0.56)%,(6.59±0.22)%,F=4565.51,P=0.001].结论:本研究成功建立人食管癌EC-109细胞裸鼠皮下移植瘤模型,证实DC/EC-109细胞融合疫苗体外诱导的抗原特异性CTLs瘤内直接注射具有抑制食管癌裸鼠移植瘤生长的作用,其机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用.
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树突细胞-食管癌融合细胞体外诱导特异性抗食管癌免疫反应
背景与目的:树突细胞(dendritic cells,DC)是人体专职的抗原呈递细胞,以DC为基础的DC/肿瘤细胞融合疫苗可以有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答.本研究旨在探讨成熟的DC与人食管癌细胞株ECl09细胞融合疫苗体外诱导特异性抗食管癌细胞的免疫反应.方法:从健康志愿者外周血中分离出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),在重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage-colony-stimulating factor,rhGM-CSF)和白介素(interleukin-4,IL-4)作用下体外诱导DC,采用聚乙二醇(polyethylene glyco1,PEG)融合法使DC与EC109细胞融合制备DC/EC109细胞融合疫苗,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测融合疫苗刺激T淋巴细胞增殖的活性,乳酸脱氢酶(LDH)实验检测融合疫苗活化的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)在体外特异性杀伤EC109细胞的活性,并与对人胃癌细胞株SGC7901及人乳腺癌细胞株MCF7的杀伤作用进行比较.结果:DC与EC109细胞的融合效率高达到22.25%.DC/EC109细胞融合疫苗能有效地刺激T淋巴细胞的增殖反应,其刺激T淋巴细胞增殖的能力显著高于DC或EC109细胞(P＜0.05).DC/EC109细胞融合疫苗活化的CTL对EC109细胞具有特异性的杀伤作用,对EC109细胞的杀伤作用显著强于对SGC7901细胞及MCF7细胞的杀伤作用(P＜0.05).结论:DC/EC109细胞融合疫苗能有效诱导抗EC109细胞的特异性免疫应答.
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三阴乳腺癌细胞-树突状细胞融合疫苗的抗肿瘤免疫效应
目的 利用细胞电融合技术制备外周血来源树突状细胞(DC)和三阴乳腺癌细胞(MDA-MB-231)全抗原肿瘤疫苗,观察其特异性抗肿瘤免疫效应.方法 从健康人外周血中分离培养DC,利用电融合技术,将DC和三阴乳腺癌细胞融合；荧光显微镜观察融合疫苗的形态；流式细胞仪进行融合疫苗的表型鉴定；ELlSA试剂盒检测IL-12、IFN-y的分泌情况；CCK-8试剂盒测定融合疫苗刺激同源异体T淋巴细胞增殖和细胞毒性效应.结果 成功分离培养DC,其表面高表达DC的分子标记CD83、CD11c、CD86、HLA-DR;融合疫苗形态不规则,其表面共同表达DC和三阴乳腺癌的标记分子；T淋巴细胞增殖实验证明融合疫苗有很强的免疫刺激活性；细胞毒性实验证明融合疫苗具有比对照组更强的杀伤肿瘤细胞作用.结论 电融合技术成功诱导DC和三阴乳腺癌细胞融合,全抗原融合疫苗体外实验可显著增强抗肿瘤免疫效应.
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三阴乳腺癌疫苗刺激T淋巴细胞增殖免疫效应观察
目的:利用细胞融合技术制备外周血来源树突状细胞(DC)和三阴乳腺癌细胞(MDA-MB-231)全抗原肿瘤疫苗,观察其刺激同源T淋巴细胞增殖作用.方法:从健康人的外周血中分离培养树突状细胞,利用电融合技术,将DC和三阴乳腺癌细胞融合；用荧光显微镜观察融合疫苗的形态；用流式细胞仪进行融合疫苗的表型鉴定；用CCK-8试剂盒测定融合疫苗刺激同源异体T淋巴细胞增殖效应.结果:成功分离培养DC,其表面高表达DC的分子标记CD11c、CD86、HLA-DR；融合疫苗的形态不规则,其表面共同表达DC和三阴乳腺癌的标记分子；T淋巴增殖实验证明融合疫苗具有很强的免疫刺激活性.结论:电融合技术成功诱导DC和三阴乳腺癌细胞融合,全抗原融合疫苗体外实验可显著增强同源T淋巴细胞增殖.
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胃癌细胞-树突状细胞融合疫苗肿瘤细胞杀伤活性研究
目的对胃癌细胞-树突状细胞(dendtitic cells,DCs)融合疫苗激活杀伤性T淋巴细胞体内外肿瘤细胞杀伤活性进行研究,为胃癌DC疫苗免疫治疗提供实验依据.方法胃癌患者外周血单个核细胞经GM-CSF,IL-4,TNF-α定向诱导获取DC.DC与SGC7901胃癌细胞经PEG诱导融合、HAT/HT筛选培养获得纯净融合细胞.MTT比色法检测融合疫苗体外杀伤胃癌细胞的细胞毒作用.观察融合疫苗对胃癌裸鼠种植瘤模型肿瘤生长的影响,流式细胞术AnnexinV/PI双标法检测瘤细胞凋亡,观察融合疫苗对肿瘤组织病理学改变的影响.结果①胃癌患者外周血单个核细胞体外定向诱导分化,可获得具备典型形态特征及表型的DC.②DC与SGC7901细胞经PEG诱导融合,HAT/HT筛选培养,可获得纯净融合细胞.③体外MTT比色检测,融合疫苗胃癌细胞杀伤率为(81.47±5.25)%,与混合培养DC组(70.53±2.46)%差异显著(P＜0.05),与单纯T细胞组(21.67±2.55)%差异非常显著(P＜0.01).④融合疫苗组荷瘤裸鼠终末肿瘤体积平均(1.298±0.021)cm3,与对照组差异非常显著(P＜0.01),抑瘤率为57.8%.⑤融合疫苗组肿瘤细胞凋亡率(54.9±1.38)%,坏死率为(21.04±1.47)%;与对照组瘤细胞凋亡百分率(20.02±0.39)%,坏死百分率(1.23±0.03)%比较差异非常显著(P＜0.01).⑥融合疫苗组肿瘤组织与对照组比较显著出血、坏死,瘤组织内大量淋巴细胞浸润.结论融合细胞疫苗激活T淋巴细胞体内外均可诱导显著胃癌细胞杀伤细胞毒活性;其应用于荷瘤动物体内,可以明显减慢肿瘤生长速度,诱导更多肿瘤细胞凋亡.
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SGC7901-DC融合细胞疫苗表型变化特点的研究
目的利用细胞融合技术,获取SGC7901胃癌细胞-DC融合细胞疫苗,并对融合细胞表型变化进行检测,了解其变化特点,为基于树突状细胞的融合疫苗研究及应用提供实验依据.方法利用聚乙二醇(PEG)诱导SGC7901胃癌细胞、树突状细胞融合,利用HAT、HT筛选培养系统对融合细胞进行筛选培养,获取纯净融合疫苗;应用直标荧光单克隆抗体进行染色,流式细胞仪检测细胞表型变化特点.结果SGC7901胃癌细胞-DC融合后,融合细胞具备独特的形态学特点,其细胞表面分子表达较亲代DC显著升高.结论SGC7901胃癌细胞-DC融合细胞疫苗具备独特形态学特点,其细胞表面分子表达较亲代DC显著升高,成为其具备更强生物学效应的细胞学基础.
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树突状细胞与肺癌细胞 A549融合疫苗的制备及临床研究
目的：制备树突状细胞与肺癌细胞A549融合疫苗，分析其应用效果。方法选择DC和A-549细胞，以50％聚乙二醇和10％二甲基亚砜为融合剂，构建融合细胞，观察融合效果。同时采用流式细胞仪检测相关免疫因子的变化。结果DC细胞存活率为（90．62±5．22）％，DC-A549融合细胞融合率为（25．36±3．23）％。DC-A549融合细胞与淋巴细胞共培养的 T淋巴细胞其CD8＋ T淋巴细胞含量高于单独培养淋巴细胞，CD4＋ T淋巴细胞含量低于单独培养淋巴细胞，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论树突状细胞与肺癌细胞A549融合疫苗能刺激免疫细胞活化，有可能在临床上获得抗肺癌的能力。
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包含艰难梭菌毒素A和B非毒性域及鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的重组融合蛋白疫苗
艰难梭菌是一种芽胞杆菌,可产生毒素介导性疾病。艰难梭菌表达2种主要毒力因子,即毒素A (TcdA)和毒素B(TcdB)。在人类和动物研究中结果表明,人类抗这些毒素的免疫力与抗艰难梭菌感染( CDI)明确相关,已知TcdA和TcdB的受体结合域( RBDs)是具免疫原性的。在本项研究中,我们检测了鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白( FliC )亚单位D1作为先天免疫激动剂,在小鼠模型中作为重组融合疫苗表达的靶向 TcdA 和 TcdB 的 RBDs 的免疫佐剂特性。经腹腔免疫的小鼠在血清中出现了明显的抗TcdA和抗TcdB的IgG。在能够密切体现人类疾病的CD1小鼠模型中进行了重组疫苗(加或不加佐剂)的保护效力测定。用相当于2个剂量的加有铝佐剂的类毒素A和类毒素B疫苗腹腔免疫C57 BL/6小鼠,并用艰难梭菌 VP I10463株进行经口饲攻击,结果表明,与单纯用铝佐剂免疫的小鼠比较,免疫疫苗的小鼠能够防止腹泻和死亡,2组之间差异具有显著的统计学意义(P<0.001)。这些结果证实了以蛋白为基础的靶向艰难梭菌RBDs的重组疫苗在伤寒沙门菌鞭毛的辅助下,能够在CD1小鼠模型中当用同源性菌株攻击时,能够产生高度的保护作用,应该进一步进行临床前研究。
