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恶性疟原虫FCC1/HN株谷氨酸脱氢酶基因的克隆及序列分析
目的克隆恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶(GDH)基因并测定其序列,比较FCC1/HN株与国外分离株GDH基因序列的差异.方法根据GDH基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增GDH基因,并将其克隆入pMD18-T载体.阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定.应用DNAstar软件比较不同分离株GDH基因序列的同源性.结果PCR扩增得到特异的FCC1/HN株GDH基因序列.酶切及PCR鉴定获得了正确的pT-GDH重组质粒.测序表明,恶性疟原虫FCC1/HN株GDH基因全长1 329 bp,编码442个氨基酸.序列分析表明,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的FCQ27、K1株GDH基因编码的氨基酸序列有少量的差异.结论克隆了恶性疟原虫FCC1/HN株GDH基因;序列测定及同源性分析表明,FCC1/HN株与其它分离株的GDH基因序列有较高的同源性.
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肝病患者TBA、PA、Cys C、GLDH、CHE检测分析
目的探讨血清前白蛋白(PA)、总胆汁酸(TBA)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)和胆碱酯酶(CHE)联合检测在肝病患者中的变化和临床意义,为其诊断和治疗提供依据.方法 253例肝病患者分为急性肝炎(84例)、慢性肝炎(93例)、肝硬化(46例)、肝癌(30例)4组;56例健康体检者作为对照组,分别检测血清TBA、PA、CHE、GLDH、Cys C浓度并进行对照分析.结果肝病患者各组患者PA、CHE浓度明显降低,以肝硬化和肝癌组为明显;Cys C、GLDH、TBA显著升高,依次为肝硬化组、慢性肝炎组、急性肝炎组,与对照组相比,差异均有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 PA、CHE变化反映各型肝炎早期肝细胞的损害程度.TBA、Cys C、GLDH是各种肝病的敏感指标,对肝炎的早期诊断及预后判断有重要临床意义.
关键词： 前白蛋白 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 谷氨酸脱氢酶 胆碱酯酶类 -
新生儿高胰岛素-高血氨综合征
新生儿高胰岛素-高血氨综合征是一种谷氨酸脱氢酶基因突变导致的遗传性疾病,临床表现为低血糖、高胰岛素和轻度高血氨.进食蛋白质可迅速诱发低血糖,新生儿期起病者少见,易被忽视或延误诊治,导致严重神经系统后遗症.本文就该疾病的发病机制、临床表现及诊疗现状加以概述总结.
关键词： 高胰岛素-高血氨综合征 谷氨酸脱氢酶 低血糖 新生儿 -
艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的表达及抗原性分析
目的：构建艰难梭菌（CD）谷氨酸脱氢酶（GDH）的原核表达载体，表达重组蛋白并鉴定其抗原活性。方法以 CD 的 ATCC43255菌株基因组 DNA 为模板，通过 PCR 法扩增 GDH 全长基因片段，构建原核表达载体并转化到大肠杆菌中，IPTG 诱导表达 GDH 蛋白，并用 Ni 柱进行纯化。利用 CD 抗原检测试剂盒对 GDH 抗原区段的抗原性进行鉴定。结果构建的原核表达载体 pET-28a／GDH 可在大肠杆菌中成功表达，获得的 GDH 抗原能与相应抗体产生特异性反应。结论原核表达的 CD 的 GDH 抗原具有很好的抗原活性，为进一步制备相应抗体并建立CD 的 GDH 抗原的免疫检测方法奠定了基础。
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关键词：
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海洛因对大鼠谷氨酸脱氢酶基因表达的影响
目的:研究海洛因对大鼠谷氨酸脱氢酶(GDH)基因表达的影响.方法:40只成年♂ Wistar大鼠随机分为4组:对照组腹腔注射(ip)生理盐水9 d;给药3 d组ip海洛因3 d;给药9 d组ip海洛因9 d;停药组ip海洛因9 d后停药8 d.采用生化自动分析系统检测血浆及组织中GDH活性,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测组织中GDH mRNA的含量.结果:血浆中GDH活性在海洛因给药期间逐渐增高,停药8 d后仍无明显降低;大脑组织GDH活性在海洛因给药3 d、海洛因给药9 d及停药8 d后均显著低于对照组(P＜0.01);肝脏GDH活性在海洛因给药过程中降低(P＜0.01),停药8 d后恢复到对照组水平;小肠GDH活性在海洛因给药9 d后显著高于对照组(P＜0.05),停药8 d后小肠GDH活性继续升高并明显高于对照组(P＜0.01)和海洛因给药9 d组(P＜0.05).大脑、肝脏和小肠GDH mRNA含量分别与其GDH活性变化趋势一致.结论:海洛因对大鼠不同组织GDH基因表达影响不同.
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一种诊断用谷氨酸脱氢酶酶学性质研究
目的 研究一种国产谷氨酸脱氢酶的热稳定性、酸碱耐受性、适温度、适pH和动力学参数等性质.方法 以α-酮戊二酸、铵离子及还原型辅酶Ⅰ(NADH)为底物,在谷氨酸脱氢酶催化作用下,转变为谷氨酸和氧化型辅酶Ⅰ(NAD),利用NADH在340 nm处有吸收峰,监测其反应速率(-△A/min),计算谷氨酸脱氢酶的活力单位,采用Linewaeaver-Burk作图法(双倒数作图法)对谷氨酸脱氢酶的米氏常数进行测定.结果 谷氨酸脱氢酶于50℃保温20 min保留活力约为87.5％,而在60 ℃保温20 min后残存活力为54％;适反应温度为45℃;适反应pH为7.5;在pH为5～10范围内酸碱耐受性较好,25℃放置20 h残留活力为90％以上.结论 动力学研究表明该酶与国外知名厂家产品相差不大.
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先天性高胰岛素血症家系ABCC8、KCNJ11、GLUD1基因突变分析
目的 通过对先天性高胰岛素血症患儿家系ABCC8、KCNJ11及GLUD1基因的突变分析,探讨先天性高胰岛素血症的遗传发病机制.方法 选取2008年11月至2012年2月北京儿童医院收治的11例临床诊断为先天性高胰岛素血症的患儿及其家系为研究对象,其中男7例,女4例.应用PCR DNA直接测序技术对11个患儿的家系ABCC8基因的39个外显子区、KCNJ11基因的非翻译区及外显子区以及GLUD1基因的第6、7、10、11、12外显子区进行测序分析.结果 11例患儿家系中,病例1及其父亲携带ABCC8基因P629PfsX17杂合突变；病例4及其父亲携带ABCC8基因W288X杂合突变；病例5携带ABCC8基因A640V和Q1196x杂合突变,而其父亲仅携带ABCC8基因Q1196x杂合突变；病例6及其父亲携带GLUD1基因R269H杂合突变；上述4例患儿母亲相应基因位点均正常.另7例患儿及其父母并未检测出上述3种基因突变.结论 ABCC8基因突变是导致中国儿童先天性高胰岛素血症发病的主要致病机制.在中国人中,ABCC8基因的P629PfsX17、W288X、A640V、Q1196x杂合突变,GLUD1基因的R269H杂合突变可以导致先天性高胰岛素血症的发生,其遗传方式可为父系遗传或新生突变.
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肝硬化患者血清谷氨酸脱氢酶和总胆汁酸检测的意义
血清谷氨酸脱氢酶(GLDH)主要分布在肝脏、胃、胰腺、肠等重要器官细胞的线粒体中,其活性以肝细胞线粒体内高,在肝内氨基酸的分解与合成代谢中发挥重要作用.
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腺苷脱氨酶的全自动分析方法的建立
氨酶(adenosine deaminase,ADA),广泛分布于体内组织中,它主要起催化水解腺苷生成肌苷和氨的作用,与细胞免疫功能有关.近年来,ADA在临床疾病实验诊断中的应用日益广泛,如鉴别结核性和非结核性胸、腹水以及肝病、肿瘤的诊断.目前国内多以改良Martineck法测定ADA酶促反应生成的氨量来推算ADA活性[1],百特公司产品即属此类,此方法虽对仪器设备要求低,但手工操作时间长,干扰因素多,难以获得快速准确的结果.目前国外有报道单一试剂的酶偶联法[2],但易受内源性氨的干扰,由于此方法中试剂用于测定氨,空气和样本中的氨会影响测定结果和试剂的稳定性.而我们设计的方法是将试剂中的谷氨酸脱氢酶作为第二试剂,从而使试剂的稳定性大大提高,测定中有效避免了内源性氨的影响,也可贮存空白反应曲线,所以本法的准确性和精密性明显提高.
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新生儿高胰岛素-高血氨综合征一例报告并文献复习
目的：探讨高胰岛素-高血氨综合征( hyperinsulinism/hyperammonemia syndrome, HI/HA)的临床特点,以减少误诊。方法回顾性分析1例新生儿HI/HA的临床资料。结果患儿系试管婴儿,34周分娩,因出生后持续低血糖难以纠正15 d由外院转入。入院后血糖测不出(血糖低),查胰岛素明显增高,血氨轻度增高；行头颅MRI检查示双侧脑室异常信号,额颞部蛛网膜下腔增宽。因经济困难未行基因检测。根据以上检查确诊为HI/HA。予二氮嗪口服维持血糖但产生耐药,择期行胰腺次全切除术,术后血糖维持稳定,血胰岛素及血氨正常,生长发育正常。结论临床应提高对HI/HA尤其症状不典型病例的认识,争取早发现、早治疗,以减少神经系统后遗症。
关键词： 高胰岛素-高血氨综合征 新生儿 谷氨酸脱氢酶 低血糖症 -
肝病患者血清谷氨酸脱氢酶的检测及其预后变化规律
目的:通过观察患者血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)的变化情况,以及该酶在肝细胞损害性疾病中的活性,结合谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)等指标鉴别诊断肝病的基本类型和预后的判断.方法:采用德意志临床化学协会(DGKC法)检测GLDH,同时检测AST、ALT、TB及GGT等常规生化项目,并作相关性分析,统计有关指标.结果:对于肝细胞损伤性痰病患者,血清中GLDH的活性明显高于健康者和其他疾病患者(P＜0.05).其中急性肝病患者GLDH阳性率可达76.0％,慢性乙型肝炎为57.5％,原发性肝癌为46.2％,肝硬化为25.6％,急性脂肪肝为71.4％.结论:谷氨酸脱氢酶作为肝细胞病变,特别是急性乙型肝炎和急性脂肪肝的诊断指标具有重要临床价值,并对指导临床治疗和预后判定具有重要意义.
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补肾方剂对胎鼠肝组织己糖激酶、谷氨酸脱氢酶活性的影响
目的:通过胚胎期给药,探讨补肾方对胎儿宫内发育迟缓(IUGR)模型胎鼠己糖激酶(HK)、谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的影响.方法:模型组用酒精给孕鼠灌胃导致IUGR模型,各补肾组分别在造模同时予补肾方灌胃,其他组予补气方、补血方、气血双补方灌胃,检测各组胎鼠肝组织HK、GDH活性.结果:IUGR胎鼠HK、GDH活性明显降低(P＜0.05)；补肾阴方、补血方对IUGR胎鼠HK活性降低均有明显恢复作用(P＜0.05)；补肾方、补血方、气血双补方均能不同程度恢复IUGR胎鼠GDH活性(P ＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05).结论:改善IUGR胎鼠肝组织HK、GDH活性可能是补肾方治疗IUGR机理之一,可作为中医“肾主生殖发育、肾为先天之本”和“补母益子”论的依据.
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大鼠脑电图及大脑皮质和海马中谷氨酸脱氢酶活性的变化与不同时程急性惊厥的关系
目的:探讨不同时程急性惊厥大鼠脑电图及大脑皮质及海马中谷氨酸脱氢酶活性的变化与惊厥的关系.方法:实验于2004-10/12在河北医科大学基础医学研究所生物化学研究室完成.选用成年健康雄性SD大鼠26只,随机分为急性惊厥模型组(n=20),腹腔注射60 mg/kg戊四氮致痫复制大鼠急性惊厥模型,造模后又分急性惊厥发作后0,4,24 h和7 d 4个时程阶段组,每组5只.生理盐水对照组(n=6):腹腔注射等体积生理盐水.观察大鼠行为学表现及脑电图的变化,应用DGKC速率法检测大鼠皮质和海马中谷氨酸脱氢酶的活性.结果:①急性惊厥组大鼠注射戊四氮后5～15 min均出现Ⅳ～Ⅴ级癫痫样发作,可持续达1 h,之后在行为学上的表现逐渐安静和趋于正常.②生理盐水对照组大鼠脑电图为正常α节律,急性惊厥组大鼠脑电图呈现高幅棘-慢、尖-慢波以及多棘、多尖综合波.③谷氨酸脱氢酶活性:急性惊厥模型组大鼠大脑皮质及海马0 h[(21 510.97±1 040.86),(17 542.51±1 107.39)nkat/g],24 h[(12 625.52±2 066.04),(12091.08±709.74)nkat/g];7d[(14 253.18±1 099.98),(13 826.10±797.60)nkat/g],与生理盐水对照组相比,均显著降低[(25 246.99±2 211.15)nkat/g,(21 635.72±2 154.54)nkat/g,P＜0.05].急性惊厥后7 d有所回升,但仍未回到正常水平.结论:戊四氮诱发急性惊厥发作,大鼠脑电图出现特征性波型变化.而脑中谷氨酸脱氢酶活性变化与大鼠行为(痫样发作)并非一致;由于谷氨酸脱氢酶活性降低而影响谷氨酸的代谢,导致脑组织产生兴奋性毒性,也许是惊厥发作的原因之一.
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腹泻患者艰难梭菌及其毒素A/B检出率分析
目的 了解住院腹泻患者艰难梭菌及其毒素A/B的检出情况,为临床诊断抗生素相关性腹泻提供参考依据.方法 收集2015年9月至2016年8月崇州市人民医院疑似抗生素相关性腹泻住院患者的粪便标本163份,用艰难梭菌快速检测试剂盒检测艰难梭菌特异性抗原谷氨酸脱氢酶(GDH);用酶联免疫荧光法检测GDH阳性标本中艰难梭菌毒素A/B的产生情况.结果 163份粪便标本中GDH阳性为34份,阳性率为20.86％.34份GDH阳性标本中艰难梭菌毒素A/B阳性率为41.18％ (14/34),可疑阳性率为17.65％ (6/34),阴性率为41.18％ (14/34).结论 疑似抗生素相关性腹泻住院患者艰难梭菌GDH检出率较高,毒素A/B阳性率也比较高,提示临床应重视抗生素相关性腹泻患者艰难梭菌感染的诊断.
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血清谷氨酸脱氢酶的检测及对肝病诊断的临床应用
[目的] 通过观察血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)在肝细胞损害性疾病中酶活性的变化情况,来指导临床治疗,并对预后进行判断.[方法] 采用德国临床化学学会推荐的α-酮戊二酸法检测谷氨酸脱氢酶,同时检测AST、ALT、TBA及γ-GT等常规生化项目,并作相关性分析,统计有关指标.[结果] 对于肝细胞损伤性疾病患者,血清中谷氨酸脱氢酶的活性明显高于健康者和其他疾病患者(P<0.05).其中急性坏死性肝病患者GLDH阳性率可达100%,急性病毒性肝炎为 75.2%,慢性活动性肝炎为59.4%,酒精性肝硬化为66.2%,肝硬化为66%,原发性肝癌为 42.1%. [结论] 谷氨酸脱氢酶作为肝细胞病变,特别是急性缺血性肝炎和酒精性肝炎的诊断指标具有重要临床价值,并对指导临床治疗和预后判定具有重要意义.
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不同肝病患者血清谷氨酸脱氢酶测定及临床意义
谷氨酸脱氢酶(GLDH)是含锌的金属结合酶,它催化谷氨酸脱氢、脱氨生成α-酮戊二酸之间的可逆反应.此反应是体内大多数氨基酸经合脱氨联脱去氨基的关键步骤,也是体内非必需氨基酸由联合脱氨逆向反应生成的重要反应,还是连结氨基酸代谢,三羧酸循环的中心环节,故GLDH主要分布于肝细胞的线粒体内,只有在肝细胞受损害时才明显升高,本文测定不同肝病患者血清GLDH,并分析其临床意义.
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血清谷氨酸脱氢酶对肝移植患者的预后评价
目的探讨血清谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GLD)与肝移植患者预后的关系.方法应用德国临床化学学会推荐的速率法测定30例肝移植患者血清GLD活性并动态观察其变化的规律.结果对30例肝移植术中及术后早期患者血清GLD、ALT、AST、LDH活性进行连续监测.在术中供肝血流再灌注后,患者血清中此4种肝酶的活性开始明显上升.患者的预后与GLD升高的幅度及恢复至正常的时间的长短有关.预后不良的患者术后GLD峰值(均值5898.52 U/L)明显高于预后良好的患者(均值285.08 U/L).分别以肝移植术后GLD、ALT的峰值800 U/L、1400 U/L为临界值预测肝移植术后预后.肝移植术后GLD峰、ALT峰预测准确率分别为86.7%、90%.将肝移植术后GD恢复正常值天数以14天为界预测肝移植预后.其动态变化对预后的预测准确率为100%.结论肝移植术后早期血清GLD水平与预后有密切关系,GLD是预测肝移植预后的一个有价值的酶学指标.
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血清GLDH和AST-m在诊断几种肝脏疾病中的意义
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)属细胞内功能酶,广泛分布于心脏、肝脏、骨骼肌和肾脏等全身组织中,AST有两种同工酶,即细胞质同工酶(AST-s)和线粒体同工酶(AST-m).同工酶的测定有助于肝病的诊断[1,2].谷氨酸脱氢酶(GLDH)是一种线粒体酶,主要分布于肝脏、肠、胰腺、心等器官,尤以肝脏丰富[3].本文对128例不同肝病患者血清中GLDH和AST-m进行检测,并与对照组比较,研究它们在诊断不同肝脏疾病中的意义.
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肝病患者血清谷氨酸脱氢酶检测的临床意义
为了进一步探讨谷氨酸脱氢酶(GDH)对各种肝病的诊断价值及临床意义,我们采用连续监测法对102例肝病患者及40例健康对照者血清中GDH进行了检测.
