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睫状神经营养因子对大鼠创伤性脊髓水肿的影响
目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠创伤性脊髓水肿的影响及其可能的作用机制. 方法:采用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤,分别于术前及术后3天用干湿法测定脊髓组织水含量、用原子吸收分光光度计测定脊髓组织中Ca2+的含量. 结果:脊髓损伤后局部组织含水量、Ca2+含量均显著增加(P< 0.01),用CNTF治疗后水含量、Ca2+含量有明显下降(P< 0.01),但和正常组相比仍有明显差异. 结论:CNTF可能是通过阻止Ca2+内流、稳定细胞内外Ca2+平衡而起到减轻创伤性脊髓水肿的作用.
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睫状神经营养因子对损伤脊髓神经元酶学的影响
目的：研究脊髓损伤后脊髓神经元的酶学变化，并探索睫状神经营养因子（CNTF）对脊髓神经元的保护作用。方法：用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤，分别于术前及术后第3、7、14天测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（AChE）和酸性磷酸酶（ACP）的含量。结果：AChE于术后持续下降；ACP在术后3天开始上升，第7天升至高，以后逐渐下降；经CNTF治疗后上述两种酶变化的幅度较小，且整个过程也比较平稳。结论：CNTF对脊髓损伤的神经元具有一定的保护作用。
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补肾益精方对外周血干细胞在RCS大鼠视网膜上的募集及睫状神经营养因子表达的影响
目的:观察补肾益精方对外周血骨髓间充质干细胞在视网膜变性模型(RCS)大鼠视网膜募集及睫状神经营养因子(CNTF)分泌的影响,探讨补肾益精方治疗视网膜退行性病变的作用机制.方法:实验研究.采用尾静脉注射方式将1×107个GFP标记的骨髓间充质干细胞(GFP-MSCs)注射至3周龄RCS大鼠外周血,然后按随机数字表法分为蒸馏水组及补肾益精方(BSYJ)组,每组39只.注射后第1天开始分别采用蒸馏水及补肾益精方药液灌胃,正常SD大鼠作为对照组常规饲养.给药7d、14d及28 d时分别采用视网膜铺片、免疫荧光显微镜观察GFP-MSCs在视网膜的募集情况;实时荧光定量PCR及免疫荧光双染技术检测视网膜表达CNTF的情况;TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况;采用单因素方差进行数据分析.结果:给药7d、14d和28 d时,蒸馏水组GFP-MSCs的数目少于BSYJ组,其中给药28 d时,2组差异有统计学意义(t=2.71,P=0.001).给药7d、14d和28 d时,BSYJ组CNTF表达较蒸馏水组均明显增加,3组差异有统计学意义(F=5.763,P=0.003;F=3.165,P=0.042;F=4.839,P=0.004).给药7d和28 d时,BSYJ组视网膜细胞凋亡率明显少于蒸馏水组,3组差异有统计学意义(F=0.002,P=0.001;F=0.307,P=0.004).结论:补肾益精方能够促进外周血干细胞在视网膜上的募集以及促进CNTF的表达,这可能是补肾益精方延缓RCS大鼠视网膜细胞凋亡和病变进程的作用机制之一.
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重组人睫状神经营养因子脂质体制备及性质
目的 制备重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF),脂质体,提高rhCNTF穿透血脑屏障能力.方法 采用薄膜超声法制备rhCNTF脂质体,测定包封率.分别用rhCNTF原液、rhCNTF脂质体及生理盐水尾静脉注射Balb/C小鼠,0,2,6,12,24 h后测小鼠脑组织中rhCNTF含量.结果 制得的rhCNTF脂质体形态圆整,平均直径为85.0 nm,包封率为93.14%.用ELISA法测定小鼠脑组织中rhCNTF的含量,rhCNTF原液组和rhCNTF脂质体组存在显著差异.结论 制备的rbCNTF脂质体能提高rhCNTF穿越血脑屏障的能力,为rhCNTF的进一步应用和研究提供了依据.
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CNTF对慢性高眼压大鼠RGCs的保护作用
目的 研究慢性高眼压大鼠玻璃体腔内注射睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用.方法 大鼠随机分成1、2、3、4周组,制作慢性高眼压模型,实验眼玻璃体注入CNTF 0.5 μg,对照眼注入5 μl磷酸钠溶液,各实验点光镜观察和进行免疫组化检测,采用图像分析系统分析.结果 HE染色光镜观察分析,1、2、3周实验组RGCs数明显多于对照组(P<0.05),RGCs略有肿胀,形态趋于正常,4周实验组和对照组形态差异不明显;GAP-43免疫组织化学检测,2、3、4周实验组RGCs层阳性染色与对照组相比有显著性差异(P<0.05),1周实验组RGCs阳性染色较少(P>0.05).结论 CNTF对慢性高眼压动物RGCs起到一定的保护作用并可促进RGCs再生.
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细胞因子对视网膜变性疾病防治作用的研究进展
视网膜变性疾病是严重的致盲性眼病,感光细胞的凋亡是其主要表现.细胞因子是机体组织细胞合成和分泌的小分子多肽类因子,参与多种细胞生理功能的调节,减少细胞的凋亡.随着对各种细胞因子,特别是神经营养因子作用机理的不断阐明,越来越多的研究发现外源性的给予或内源性的诱发其表达,对于变性视网膜光感受器的保护是有积极作用的.本文将近年来用于视网膜变性疾病方面研究的神经营养因子和部分非神经营养因子类细胞因子,包括神经生长因子、睫状神经营养因子、脑源性神经生长因子、碱性成纤维生长因子、神经营养因子-3、促红细胞生成素等作一综述.
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TAT-tCNTF融合蛋白对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的 确定TAT-tCNTF融合蛋白能够透过细胞膜进入细胞内,并研究其对Aβ诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法 重组PCR获得人截短型CNTF基因后,与pBV 220-TAT载体连接,在大肠杆菌中表达,细胞免疫荧光方法检测TAT蛋白运载融合蛋白穿过SH-SY5Y细胞膜的作用,Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞产生神经毒性,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测融合蛋白对细胞存活率的影响,Heochst 33342/PI荧光双染法进行细胞凋亡和坏死的形态学观察,并进行LDH释放分析进一步检测TAT-tCNTF对细胞损伤后的保护作用.结果 成功构建pBV220-TAT-tCNTF表达载体,Western blot结果表明重组融合蛋白可以与CNTF抗体特异性结合,细胞免疫荧光方法显示TAT-tCNTF能大量进入细胞,而rhCNTF只有微量进入细胞.对Aβ_(25-35)诱导损伤的SH-SY5Y细胞MTT、Heochst 33342/PI荧光双染法及LDH分析都表明TAT-tCNTF能明显提高细胞的存活率.结论 TAT-tCNTF融合蛋白可以跨越细胞膜,能够保护Aβ_(25-35)诱导损伤的SH-SY5Y细胞,具有促进细胞生存生长的活性.
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慢性应激对大鼠海马神经元睫状神经营养因子及其mRNA表达水平的影响
目的观察慢性应激对大鼠海马神经元CNTF及其mRNA表达水平的变化.方法采用慢性不可预见性中等强度应激,运用旷场实验观察大鼠行为;运用免疫组化和原位杂交的方法,观察大鼠海马神经元CNTF及其mRNA表达水平的变化.结果与对照组相比,慢性应激组大鼠海马CNTF免疫阳性颗粒数目减少,着色浅淡;CNTF mRNA杂交阳性信号减少.结论慢性应激可造成大鼠海马神经元CNTF及其mRNA表达水平降低.
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EGF与CNTF基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及机制探讨
目的 研究表皮生长因子(EGF)与睫状神经营养因子(CNTF)基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响,并探讨其机制.方法 96只SD大鼠随机均分为EGF转染组(A组)、CNTF转染组(B组)、CNTF与EGF共转染组(C组)和对照组(D组)4组.采用改良Allen′s法制备大鼠脊髓损伤模型,分别向A、B、C组和D组持续转染重组EGF与CNTF质粒和空白质粒各5 μg.术后1、2、4、6周采用BBB运动功能评分系统检测大鼠运动功能恢复情况;采用RT-PCR和Western blot法检测EGF与CNTF基因的表达;采用免疫荧光双标染色和组织学观察EGF与CNTF对反应性星形胶质细胞增殖分化的影响以及脊髓组织病理变化情况.结果 术后2、4、6周运动功能评分C组BBB评分明显高于其余3组(P<0.05).RT-PCR和Western blot法检测显示A组大鼠脊髓组织可见EGF,B组可见CNTF mRNA与蛋白的表达,C组可见共同表达,而D组则未见明显表达.组织学观察示C组脊髓结构以及神经元形态恢复较好且逐渐趋于正常,且免疫荧光双标染色示C组脊髓组织中Nestin阳性的星形胶质细胞数较D组明显增多(P<0.05).结论 EGF与CNTF基因能够促进脊髓损伤后星形胶质细胞逆分化,从而促进脊髓功能的修复.
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睫状神经营养因子在癫痫发病机制中的研究进展
癫痫是一种以大脑神经元异常和过度超同步化放电所引起的慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征。神经系统疾病中,癫痫发病率仅次于脑血管疾病,我国平均患病率为7译,且每年新发病患者达50万人左右[1],明确癫痫发病机制是目前亟待解决的问题。脑神经元的异常放电与神经递质失衡、离子通道、神经胶质细胞、遗传及免疫等多方面的异常有着密切的关系。虽然目前有关癫痫的发病机制尚未完全阐明,但也取得了一些相应的进展。睫状神经营养因子( ciliary neurotrophic factor,CNTF)在癫痫发病过程中起着十分重要的作用。 CNTF属于IL-6家族成员,是一种非靶源性神经营养因子[2]。 CNTF主要表达于周围神经系统的神经膜细胞和中枢神经系统的星形胶质细胞(astrocyte,Ast),在神经系统损伤后释放,可促进神经元存活与再生,具有神经保护作用；在生理状态下, CNTF在脑内的表达比较低,在癫痫发病状态时,其合成量迅速增加,表达显著升高[3-4]。
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急性高眼压大鼠视网膜睫状神经营养因子表达变化
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)在急性高眼压大鼠视网膜中的定位及表达变化.方法 采用前房灌注法建立大鼠急性高眼压模型,在1,3,7,14,21 d分别摘取眼球,运用RT-PCR和免疫组织化学方法 检测视网膜CNTF的定位及表达变化. 结果 对照组大鼠视网膜神经节细胞层(GCL)有少量CNTF表达,急性高眼压大鼠视网膜CNTF的表达显著增加,建立模型后第3～7 天表达量达到高峰,此时除GCL外,神经纤维层(NFL)、内核层(INL)亦发现CNTF表达,后表达减少.结论 急性高眼压大鼠视网膜CNTF表达增加,可能是大鼠高眼压损伤后的一种保护性反应,CNTF的增加对视网膜神经节细胞可能有保护作用.
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心肌营养素-1的研究进展
心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)初是Pennica等[1]于1995年从小鼠胚胎干细胞的胚状体培养液中分离获得的一种新型细胞因子,其结构与细胞因子IL-6家庭成员如白血病抑制因子(1 eukamia inhibitory factor. LIF)睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor. CNTF)抑瘤素M (oncostatin M. OSM)与白细胞介素-11(Interleukin-11.IL-11)具有高度同源性[2,3],属IL-6家庭成员.
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NGF与CNTF促周围神经再生作用的差异性及协同性研究进展
神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)和睫状神经营养因子(Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF)是两种研究为广泛和深入的神经营养因子,NGF和CNTF促进周围神经再生的作用机制和作用特点不仅具有差异性,而且存在有协同作用.本文就近年来该方面的文献报道综述如下.
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大鼠面神经压榨对面神经元CNTF表达的影响
目的 观察将大鼠面神经压榨后面部行为学变化,探索简易稳定的面神经压榨建模方法；检测压榨侧面神经运动神经元中睫状神经营养因子(CNTF)的表达变化.方法 选取健康大鼠30只,解剖右侧面神经主干,蚊式血管钳单齿钳夹,持续1 min,设左侧为对照.术后1、7、14、21、35 d,观察大鼠面部行为学改变；HE染色观察面神经运动神经元的病理形态学变化并进行细胞计数；免疫组化观察面神经元CNTF蛋白的表达并进行光密度分析.结果 面神经压榨损伤后即刻出现同侧面神经瘫痪,术后7～14d达高峰,而后逐渐恢复,35 d大鼠面部对称,面瘫完全恢复.HE染色发现术后7、14、21 d损伤侧面神经运动神经元数目较对照组减少(P＜0.01),细胞结构形态紊乱,细胞内空泡增多,核仁偏移.免疫组化发现术后7、14、21 d面神经运动神经元CNTF蛋白表达量明显增多(P＜0.01).结论 神经压榨是建立可逆性面神经麻痹动物模型简易稳定的方法.面神经压榨损伤后,面神经运动神经元内CNTF蛋白的表达增多.
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CNTF、PDGF在成年猫背根节的分布
目的 观察睫状神经营养因子(CNTF)、血小板源性生长因子(PDGF)在成年猫背根节(dorsal root ganglion,DRG)的表达情况.方法 成年健康雄猫5只,心内灌注固定后,随机取一侧L6背根节制作厚20μm冰冻切片,采用免疫组织化学ABC法染色,观察CNTF、PDGF在正常背根节的分布.结果 CNTF、PDGF在成年猫背根节的大、中小神经元均有表达,但以中小神经元的表达为主;阳性反应物主要定位在胞浆;部分纤维也呈阳性反应,未见明显的卫星细胞着色.结论 CNTF、PDGF在成年猫的背根节有表达,可能与背根节神经元的生理功能有关.
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间充质干细胞移植肺气肿大鼠肺组织病理改变及炎性因子表达变化
目的：观察间充质干细胞（ MSCs）移植后肺气肿大鼠肺组织病理改变及血清、肺组织中炎性因子水平的变化。方法雌性SD大鼠24只，随机分为对照组、模型组及移植组，各8只。模型组及移植组采用烟熏法制作肺气肿大鼠模型，对照组常规饲养。移植组予MSCs移植。 MSCs移植8周后同期处死各组大鼠，取肺组织行病理检查，计算平均内衬间隔（ MLI）及平均肺泡数（ MAN）；采用蛋白芯片技术检测大鼠血清及肺组织中的炎性因子，筛选差异性表达的炎性因子。结果移植组移植8周后于大鼠肺组织内观察到MSCs。模型组及移植组大鼠肺组织呈肺气肿样改变，且移植组较模型组轻。移植组大鼠肺组织MLI、MAN与模型组、对照组相比，P均＜0．05。模型组与对照组肺组织中差异性表达的炎性因子为睫状神经营养因子（CNTF）、神经生长因子（NGF）、IL-10、激活素A、趋化因子CX3及瘦素；移植组与模型组肺组织中差异性表达的炎性因子为CNTF、IL-10及TNF-α；三组肺组织中CNTF水平相比，P均＜0．05。模型组与对照组血清中差异性表达的炎性因子为CNTF、IL-1β、IL-2、IL-4及IL-6；移植组与模型组血清中差异性表达的炎性因子为IL-1β、IFN-γ及IL-10；三组血清IL-1β水平相比，P均＜0．05。结论 MSCs 移植可减轻肺气肿大鼠肺组织病理改变，其机制可能为下调炎性因子表达。
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雏菊叶龙胆促进大鼠坐骨神经功能恢复及机制研究
目的 观察中药雏菊叶龙胆(Bellidifolin)对坐骨神经损伤后的大鼠是否有促进神经功能恢复的作用,并探讨其机制中是否有睫状神经生长因子的参与.方法 雄性Wistar大鼠225只,制备坐骨神经损伤模型,大鼠右侧坐骨神经离断,手术显微镜下缝合,取左侧为空白对照.造模成功后,大鼠随机分为对照组、雏菊叶龙胆25 mg组、50 mg组、75 mg组和甲钴胺组共5组,每组45只.对照组给予生理盐水腹腔注射,其余各组于手术后每天给予相应剂量的雏菊叶龙胆及甲钴胺腹腔注射,1,3及5周后进行足踪分析,计算坐骨神经功能指数(Sciatic Functional Index,SFl)、小腿三头肌湿重,免疫组化检测坐骨神经中组织睫状神经营养因子的变化(Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF).结果 3周时SFI检测结果显示,对照组、甲钴胺组及雏菊叶龙胆25 mg、50 mg、75 mg组分别为:-84.35±4.87,-45.20±2.3,-70.42±4.2,-57.73±3.46和-64.38±4.38,其中对照组与各组相比差异有统计学意义(P＜0.05),甲钴胺组与雏菊叶龙胆各组相比结果差异有统计学意义(P＜0.05),雏菊叶龙胆组各组间相比,25 mg、75 mg与50 mg组相比差异有统计学意义(P＜0.05).小腿三头肌湿重恢复率比较,雏菊叶龙胆各组与对照组、甲钴胺组相比差异有统计学意义(P＜0.05),其中雏菊叶龙胆组中25 mg.75 mg组与50 mg组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).3周时各组进行CNTF免疫组化比较,可见雏菊叶龙胆组25 mg、70 mg组与50 mg组相比差异有统计学意义(Jp＜0.05).结论 雏菊叶龙胆可以促进损伤坐骨神经的功能恢复,50 mg作用明显,神经组织内CNTF因子发挥重要作用.
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2000年度(第四届)中国行为医学十佳论著评选结果
为鼓励行为医学研究工作的发展，我刊开展了“2000年度（第4届）中国行为医学十佳论著”和“2000年度（第4届）中国行为医学优秀论著”评选。评选由中国行为医学科学编辑委员会组织评审，包括专家评议和读者评议。共评出十佳论著10篇，优秀论著30篇。获奖作者均赠送本刊2001年度杂志。 附：“十佳论著”名录（文题、资助项目、作者、作者单位）睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用（国家自然科学基金和军队医药卫生科研基金项目） 严进 路长林 何成等 上海市第二军医大学基础部神经生物学教研室慢性疲劳综合征病人的疲劳、抑郁、焦虑与生活事件的特点及其相关性分析（国家中医药管理局及国家自然科学基金项目） 王天芳 张翠珍 刘雁峰等 北京中医药大学中医诊断教研室自测健康评价的权重研究（国家自然科学基金项目） 许军 陈和年 王斌会等 广州第一军医大学南方医院临床药理基地电针百会、印堂穴对大鼠行为及脑内单胺类神经递质的影响（国家自然科学基金项目） 金光亮 苏晶 丁世芹等 北京中医药大学 WHOQOL-100量表用于药物成瘾者生命质量测定的对比研究（云南省自然科学基金项目） 万崇华 方积乾 陈丽影等 昆明医学院卫生统计教研室急性心肌梗死猝死的高危因素（山东省科委资助项目） 杨志寅 魏广和 张作记等 山东省济宁医学院心血管病研究室集体心理治疗对癌症患者生活质量和情绪影响的研究（卫生部科研基金项目） 唐丽丽 张艳龄 陈钒等 北京医科大学临床肿瘤学院生活事件与人群综合健康效应关系的通径分析（卫生部科学研究基金项目） 刘东磊 栾荣生 罗晓辉等 北京市卫生防疫站维生素B6缺乏对大鼠学习记忆的影响及有关机制的探讨（军队九五规划课题资助项目） 洪燕 王冬兰 李树田等 天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所毒性弥漫性甲状腺肿心理干预的临床疗效观察（浙江省卫生厅课题） 施剑飞 张楚 颜哲仁等 浙江省杭州市第七人民医院
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神经营养因子研究进展(3)
1.2睫状神经营养因子(CNTF) 1984年从鸡眼球组织中提纯,因具有支持鸡胚睫状体神经节内付交感神经元的存活而得名.其在成熟的周围神经中表达水平较高,在脑、骨骼肌和胚胎中表达较低.以后,又从牛心及大鼠、兔、鸡的坐骨神经中获得.CNTF由星形胶质细胞和雪旺细胞产生,为酸性蛋白,200个氨基酸残基组成,分子量22.8KD,人、大鼠、兔的CNTF同源性达85%,人CNTF基因为单拷贝基因,长约2kb,定位于11g12,对生后1d,1月、2月大鼠坐骨神经中CNTF免疫组化研究显示:随年龄增长CNTF阳性反应渐减弱,示生长的不同时期对CNTF的需求也不一样,同时也证明不同年龄组鼠坐骨神经中CNTF相对含量存在差异[1].
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睫状神经营养因子和碱性成纤维细胞生长因子对视网膜神经细胞Bcl-2蛋白动态表达的影响
目的 探讨睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对新生期小牛视网膜神经细胞中Bcl-2蛋白表达的影响.方法 以新生小牛视网膜为研究对象,传代培养视网膜神经细胞.培养细胞传至第2代,以加入CNTF和bFGF为加药组,正常对照组不加任何药物.在接种后第3天加药组分别加入终浓度为50 μg·L-1的CNTF和bFGF,检测给药后第2天、第4天、第6天,给药组内和正常对照组内不同时间点以及两组间对应时间点Bcl-2蛋白表达变化情况.结果 CNTF组Bcl-2蛋白的表达在给药后第2天、第4天、第6天相对灰度值分别为0.502±0.029、0.389±0.022、0.320±0.031,不同时间点组内比较差异均具有统计学意义(P值分别为0.006、0.002、0.035).bFGF组Bcl-2蛋白的表达在给药后第2天、第4天、第6天相对灰度值分别为0.481±0.034、0.568±0.068、0.615±0.083,不同时间点组内比较差异均无统计学意义(P值分别为0.171、0.143、0.521).正常对照组相应时间点相应灰度值分别为0.314±0.033、0.300±0.004、0.299±0.060,不同时间点组内比较差异均无统计学意义(P值分别为0.688、0.667、0.976).在给药后第2天、第4天,CNTF组Bcl-2蛋白的表达强度与正常对照组相比差异均具有统计学意义(P=0.002、P=0.002),第6天与相应对照组间差异无统计学意义(P =0.626).在给药后第2天、第4天、第6天,bFGF组Bcl-2蛋白的表达强度与正常对照组相比差异均具有统计学意义(P=0.004、P=0.011、P=0.029).结论 CNTF和bFGF能够促进体外培养的新生小牛视网膜神经细胞Bcl-2蛋白表达,提高细胞抗凋亡的能力.
