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NGF与CNTF促进周围神经电生理功能恢复的协同作用研究
目的利用新型神经再生小室模型探讨联合应用神经生长因子(NGF)和睫状神经营养因子(CNTF)促进周围神经电生理功能恢复的效果.方法用自行研制的梭形双通道桥接管桥接36只大鼠坐骨神经10 mm缺损,根据梭形管的两支管内注入的药物不同将动物随机分为A组(两支管内均注入几丁糖凝胶)、B组(一侧支管内注入几丁糖+NGF,另一侧支管内注入几丁糖+NGF+CNTF)和C组(一侧支管内注入几丁糖+CNTF,另一侧支管内注入几丁糖+NGF+CNTF).于术后8,12周对再生神经的大体形态、组织病理学进行观察,并对术后12周的再生神经行皮质感觉诱发电位(CSEP)、复合肌肉动作电位(CMAP)及神经传导速度(CV)测定.结果A组两支管内再生神经纤维组织形态学及电生理功能差异无统计学意义.B组和C组注入NGF+CNTF侧再生纤维粗细均匀,排列整齐,明显优于对照侧,CSEP、CMAP的潜伏期短、振幅高、传导速度快,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论NGF与CNTF对周围神经电生理功能的恢复具有协同作用.
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睫状神经营养因子对不全视神经损伤的保护效应
目的 观察睫状神经营养因子(CNTF)对猫视神经不全损伤后的神经保护效应.方法 制作猫视神经不全损伤模型;CNTF组分别给予CNTF 8μl(1g/L)玻璃体内注射,对照组给予生理盐水8μl;术后15d双侧上丘、外侧膝状体显微注射DiI 5μl逆行神经示踪;术前、术后3、15、30d行视觉诱发电位(P-VEP)检测;术后30 d原位心脏灌注;视网膜铺片,视网膜神经节细胞计数;取术侧视神经组织,光镜和电镜观察视神经形态变化.结果 对照组术侧眼PVEP P-100较CNTF组振幅明显减低,潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P<0.01);与手术组相较.CNTF组视网膜神经节细胞存活数[(1256±124)个/mm2]明显高于对照组[(632±61)个/mm2](P<0.01),神经结构更加完整.结论 视神经不全损伤后CNTF玻璃体注射具有视神经保护效应.
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骨髓间充质干细胞靶向移植和促红细胞生成素联合治疗脊髓损伤.
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)靶向移植和促红细胞生成素(EPO)联合对脊髓损伤的修复作用.方法 采用纽约大学(NYU)脊髓损伤模型打击器建立建立大鼠脊髓损伤模型,60只大鼠随机分为5组,每组12只,分别为对照组、模型组、BMSCs组、EPO组、BMSCs+ EPO组.BMSCs组在在模型组基础上向脊髓损伤处注射10μl(5×106个)BMSCs;EPO组连续5d腹腔注射5 IU/kg EPO;BMSCs+ EPO组在BMSCs组的基础上连续5d腹腔注射5 IU/kg EPO.采用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分标准评价大鼠后肢运动功能恢复;术后第0、8周后采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织形态变化;采用Western blot检测脊髓损伤组织中神经生长因子(NGF)、神经营养素-3(NT-3)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)的表达水平.结果 与对照组BBB评分[(20.8±0.4)分]比较,模型组[(6.9±1.3)分]、BMSCs组[(12.9±2.1)分]、EPO组[(14.2±1.9)分]和BMSCs+EPO组[(17.9±2.8)分]均减少,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,BMSCs组、EPO组和BMSCs+ EPO组BBB评分增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与BMSCs组、EPO组比较,BMSCs+ EPO组BBB评分增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,模型组、BMSCs组、EPO组和BMSCs+ EPO组NGF、NT-3、BDNF、GDNF、CNTF表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,BMSCs组、EPO组和BMSCs+ EPO组NGF、NT-3、BDNF、GDNF、CNTF表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与BMSCs组和EPO组比较,BMSCs+ EPO组NGF、NT-3、BDNF、GDNF、CNTF表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色结果显示,BMSCs组、EPO组和BMSCs+ EPO组脊髓组织都得到较好修复,BMSCs+ EPO组效果好.结论 采用BMSCs靶向移植和EPO联合治疗脊髓损伤可以有效地促进脊髓损伤大鼠脊髓损伤再生和修复.
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睫状神经营养因子在缺血性脑卒中后抑郁患者中的临床意义
目的:研究睫状神经营养因子(CNTF)在缺血性脑卒中后抑郁患者中的临床意义.方法:选择缺血性脑卒中后抑郁患者(观察组)和正常健康人(对照组)各30例,检测2组血清CNTF并比较其差异,比较不同临床特征中CNTF差异.结果:观察组的CNTF低于对照组(P＜0.05).观察组的CNTF在不同病灶体积、抑郁评分和NIHSS评分中差异有统计学意义(均P＜0.05).CNTF与病灶体积、抑郁评分和NIHSS评分均呈负相关(均rs＜0,P＜0.05).有严重并发症及死亡患者的CNTF显著低于无严重并发症及存活患者(均P＜0.05).CNTF＜16.5 ng/mL为有严重并发症及死亡的独立危险因素(均OR＞1).结论:缺血性脑卒中后CNTF可能在缺血性脑卒中后抑郁病情及预后评估中具有价值.
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玻璃体内单剂量注射睫状神经营养因子对金黄地鼠视神经再生的影响
目的：观察单次玻璃体内注射重组人睫状神经营养因子（CNTF）对金黄地鼠视网膜节细胞轴突（视神经）在坐骨神经移植物中再生的影响。方法：20只金黄地鼠，除设立正常对照组2只外，随机分为对照组（A组）、CNTF 2μg组（B组）和CNTF 1μg组（C组）各6只，自体坐骨神经移植到切断的视神经眼球端，使视神经在移植物中再生，手术后分别立即将2μL生理盐水，含CNTF 2μg的CNTF溶液2μL，含CNTF 1μg的CNTF溶液2μL注射到手术侧的玻璃体内。利用荧光金标记轴突再生的视网膜节细胞，通过计数节细胞的数量来观察CNTF对视神经再生的影响。结果：A、B、C组再生的视网膜节细胞数量平均分别为4932、8596、7338个，B、C组的阳性标记节细胞数量明显多于A组，差异有统计学意义（<0.05），B、C组之间比较无统计学差异。结论：单次玻璃体内注射CNTF能促进视神经在自体坐骨神经移植物中的再生。
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不同年龄大鼠外周神经损伤后CNTF、CNTFRα的蛋白表达及MBP含量变化
目的探讨髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)和睫状神经营养因子(ciliary neuotrophic factor,CNTF)在周围神经损伤及再生修复过程中的影响.方法将不同年龄组大鼠采用损伤后外周神经小室再生模型,用酶联免疫法测定坐骨神经中MBP含量,用免疫组化和Western blotting检测CNTF及CNTFRα在坐骨神经和脊髓中的表达.结果各年龄组伤前脊髓中有CNTFRα表达,CNTF较少表达;周围神经中CNTF主要分布在雪旺氏细胞(SCs)中,CNTFRα极少表达.各年龄组伤后损伤侧脊髓CNTF、CNTFRα,伤侧神经CNTFRα表达较伤前显著升高(P＜0.05～0.01),4周达高峰;伤侧近、远端神经中CNTF伤后1d～1周表达较伤前减低(P＜0.05),2周后开始升高,4周达高峰.其中幼年变化大,成年次之,老年弱.MBP的变化与神经CNTF的变化具有一致性,且远端高于近端.结论坐骨神经再生过程中大鼠神经、脊髓CNTF及CNTFRα表达的变化与神经再生髓鞘化的进程密切相关,不同年龄大鼠对CNTF的依赖性不同,MBP的变化与CNTF具有相关性.
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睫状神经营养因子对面神经损伤的修复作用
目的:探讨局部应用睫状神经营养因子(CNTF)对成年大鼠面神经损伤的修复作用.方法:将雄性SD大鼠颞骨内面神经垂直段横断后端端吻合,CNTF组以CNTF明胶海绵覆盖损伤处;对照组以生理盐水(SAL)的明胶海绵覆盖损伤处.术后CNTF组每周2次耳后皮下注射CNTF 5 μg,对照组同法注射等量SAL.术后2,4和12周各组进行电生理学、组织病理学观察及形态学定量分析.结果:术后2周,两组电刺激面神经均未能引发面肌兴奋,有髓纤维计数t检验,两组差异有显著性意义(P＜0.05).术后4周面神经复合肌动作电位(CMAP)CNTF组潜伏期明显短于对照组,有髓轴突计数CNTF组多于对照组(P＜0.05).术后12周,CMAP潜伏期、有髓纤维计数,两组差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:局部应用CNTF可促进成年大鼠面神经损伤的修复.
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睫状神经营养因子在喉返神经损伤及修复中疑核神经元内的表达
目的揭示喉返神经损伤及修复后疑核运动神经元睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor,CNTF)的表达及分布.方法实验犬分为喉返神经损伤组和损伤修复组,采用原位杂交及免疫组织化学技术,结合图像分析技术测定疑核CNTF mRNA及其蛋白表达呈阳性反应的神经元胞体灰度、体积及数量.结果疑核运动神经元自分泌CNTF,神经损伤后早期胞体内CNTF基因表达下降而CNTF蛋白表达增强.4周后基因表达迅速增强,而CNTF蛋白表达减弱,但6周后基因及其蛋白表达和神经元胞体数及体积均始终低于健侧.12周后CNTF表达、神经元形态、胞体数及体积趋向稳定.神经修复早期,CNTF 表达与神经损伤相似,但基因表达恢复较神经损伤组快,CNTF蛋白高表达维持时间较神经损伤组长,尽管12周后表达的神经元较正常减少,但表达强度及体积与正常无明显差异.结论运动神经元表达CNTF;表达程度与神经损伤及再生有关,提示CNTF在神经损伤再生中起重要作用.
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睫状神经营养因子对星形胶质细胞细胞周期的影响
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)在有血清培养和无血清培养的情况下,对星形胶质细胞分化和增殖的影响.方法 将纯化的星形胶质细胞分为有血清培养和无血清培养组,根据CNTF剂量不同,每组再分别分为0、2、20、200 ng/ml 4个亚组(共8个亚组).每个亚组分别在6、12和24 h取材,应用流式细胞术检测星形胶质细胞在各细胞周期时相中的百分比.结果 CNTF使无血清培养组的星形胶质细胞处于G0/G1期的细胞百分比上升,而使有血清培养组的星形胶质细胞处于G0/G1期的细胞百分比下降.结论 无血清培养时CNTF可以刺激星形胶质细胞分化进入活化状态,但不刺激其增殖;有血清培养时CNTF可以协助血清中的丝裂原引起星形胶质细胞增殖.
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腺病毒介导CNTF基因转染嗅鞘细胞移植对视神经损伤大鼠GAP-43表达影响
目的:通过检测大鼠视神经损伤后生长相关蛋白(GAP-43)的表达变化观察腺病毒介导睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)基因转染的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植对颅内段视神经损伤后神经纤维长距离再生的促进作用.方法:建立额下显微外科入路大鼠颅内段视神经损伤动物模型并分组,构建腺病毒介导CNTF基因转染的嗅鞘细胞并移植入动物眼玻璃体内,检测GAP-43表达的积分光密度值.结果:成功培养分离出稳定分泌腺病毒介导CNTF基因的嗅鞘细胞,CNTF治疗组和OECs-CNTF治疗组GAP-43表达较损伤对照组显著增加(P<0.01), OECs(嗅鞘细胞)-CNTF组较单纯CNTF治疗组GAP-43表达明显增加,两组间差异明显(P<0.05).结论:腺病毒介导CNTF转染嗅鞘细胞移植对大鼠颅内段视神经损伤后神经纤维长距离再生具有明显的促进作用.
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骨髓间充质干细胞移植对视网膜病变新生大鼠视网膜细胞凋亡的影响
目的 探讨早产儿视网膜病变(ROP)大鼠玻璃体内注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)对视网膜细胞凋亡及视网膜中神经营养素-3 (NT-3)、睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响.方法 40只7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为正常对照组、ROP模型组、骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植组与磷酸缓冲液组(PBS组),每组10只.采用高氧法制成ROP模型,持续高氧5d后分别给予BMSCs移植组与PBS组玻璃体内注射BMSCs和PBS.移植7d后,采用TUNEL/DAPI、NT-3/DAPI、CNTF/DAPI免疫荧光双标法观察BMSCs移植对视网膜细胞凋亡及NT-3、CNTF表达的影响.结果 移植7d后,正常对照组视网膜几乎未见TUNEL+ DAN+细胞,BMSCs移植组视网膜可见少量TUNEL+ DAPI+细胞,显著低于ROP模型组与PBS组(P＜0.01),而ROP模型组与PBS组差异无统计学意义(P＞0.05)；正常对照组视网膜可见极少量的NT-3+ DAPI+与CNTF+DAPI+细胞,ROP-模型组与PBS组大鼠视网膜可见少量NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+细胞,较正常对照组增多,但差异无统计学意义(P＞0.05)；BMSCs移植组大鼠视网膜NT-3+ DAPI+与CNTF+DAPI+细胞数均显著多于ROP模型组与PBS组(P＜0.01),而ROP模型组与PBS组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs移植可减轻ROP大鼠视网膜细胞的凋亡,其机制可能与其促进ROP大鼠视网膜细胞NT-3与CNTF的表达有关.
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睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响
目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对培养大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响.方法:15只生后2～3d Wistar大鼠,视网膜采用胰酶消化法制成细胞悬液后接种于24孔培养板(每孔1×105个细胞),取培养72h的细胞行免疫细胞化学鉴定.将培养的细胞随机分为对照组、三种浓度CNTF组(10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml),培养72h后采用TUNEL法和流式细胞仪检测培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的变化.结果:培养72h的细胞90%以上为视网膜神经节细胞,TUNEL法检测显示培养细胞有凋亡细胞存在,流式细胞仪检测结果显示对照组凋亡率为(11.95±4.400)%,10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml CNTF组凋亡率分别为(7.883±2.146)%,(6.417±3.317)%,(8.033±2.023)%,CNTF组凋亡率显著降低(P＜0.01～0.05),其中20ng/mlCNTF组差异非常显著(P<0.01).结论:CNTF能降低培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡率,其促视网膜神经节细胞存活可能是通过减少视网膜神经节细胞凋亡来起作用,而高浓度CNTF对视网膜神经节细胞有毒副作用.
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CNTF联合RA诱导成肌细胞类神经分化及与REST的相关性
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)联合视黄酸(RA)诱导成肌细胞类神经分化的方法以及该诱导过程与神经元限制性沉默因子(REST)相关性.方法 以CNTF诱导C2C12去分化,再以RA诱导 C2C12类神经分化.通过细胞形态学、细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot等技术对去分化及类神经分化的细胞进行鉴定及相关分析,比较细胞类神经分化前后REST表达变化.结果 诱导后细胞聚集生长,呈典型的神经球样.细胞免疫荧光染色显示神经球能够被神经特异性标志物NSE、Sox1、GFAP标记,神经球离散为单个细胞接种后生长状态良好,神经干细胞标志物(nestin)呈阳性表达.Western blot结果显示CNTF去分化诱导后成肌细胞分化相关蛋白Myogenin、P21表达降低,类神经分化后NSE、Sox1、GFAP表达增多,且成肌细胞特异性标志物Desmin及REST表达下降.流式细胞仪分析表面标志物NSE显示诱导组与对照组比较细胞有差异,且诱导组特异性阳性细胞率达84％左右.结论 CNTF联合RA可诱导成肌细胞类神经分化,且该诱导过程可能与REST表达降低相关.
关键词： 成肌细胞 睫状神经营养因子 视黄酸 神经元限制性沉默因子 -
针刺对备用背根节神经元CNTF和PDGF表达的影响
目的 探讨部分去背根后针刺对备用背根节神经元睫状神经营养因子((CNTF)及血小板源性生长因子(17DGF)表达的影响.方法 制备猫双侧备用背根模型(切除双侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6背根节为备用背根节).针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位.针刺7 d及14 d后取备用背根节用CNTF抗血清(1:500)及PDGF抗血清(1:200)行免疫组织化学ABC法染色.分别记数各组阳性总、大及中小神经元的数量.结果 正常组左右L6背根节的细胞数无差异,CNTF、PDGF阳性神经元数在7 d、14 d时与正常组比较无差异.针刺侧CNTF阳性总、大及中小神经元数在针刺7 d时均显著多于非针刺侧(P＜0.05).而针刺14 d时,只有阳性大神经元数多于非针刺侧(P＜0.05).PDGF阳性总及大神经元数针刺7 d时多于非针刺侧(P＜0.05),针刺14 d时,阳性总及中小神经元多于非针刺侧(P＜0.05).结论 针刺可促进去背根后备用背根节CNTF、PDGF的表达,这种促进作用显效的时间因不同因子和不同种类的背根节神经元而异.
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睫状神经营养因子对视网膜色素变性rd小鼠感光细胞作用的电镜观察
目的 观察玻璃体腔注射睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对视网膜色素变性小鼠模型(retinal degeneration,rd)视网膜感光细胞的作用.方法 将12只出生10 d(P10)rd小鼠随机分成3组:CNTF治疗组、PBS(磷酸缓冲液)注射组、空白对照组;CNTF治疗组和PBS注射组的玻璃体腔分别注射鼠CNTF和磷酸缓冲液PBS,在出生后14 d过量麻醉处死小鼠,取眼球行光、电镜观察.结果 透射电镜结果显示凋亡是rd小鼠视网膜色素变性的主要病理表现,同时有炎症的参与,CNTF治疗组的rd小鼠视网膜光感受器细胞的超微结构好于对照组.结论 CNTF玻璃体腔注射对视网膜色素变性rd小鼠视网膜感光细胞凋亡有抑制作用.
关键词： 视网膜色素变性 视网膜色素变性模型小鼠 睫状神经营养因子 电镜 -
CNTF对神经干细胞体外增殖的影响
目的 探讨睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对神经干细胞体外增殖的影响.方法 原代培养新生SD大鼠的室下区神经干细胞并鉴定,经传代纯化后,用不同浓度CNTF (0.1、0.5、1、5、10、20、30 ng/ml)处理5～7 d,MTT实验检测神经干细胞增殖活性.不完全培养5～7 d,免疫荧光技术检测神经干细胞GFAP、NSE表达.结果 MTT结果显示:CNTF浓度为30 ng/ml时对神经干细胞增殖的促进作用明显(P＜0.01)；免疫荧光结果显示:神经干细胞Nestin标记阳性,不完全培养后,NSE及GFAP均表达阳性.结论 CNTF对体外培养神经干细胞有促进增殖作用,并且呈剂量依赖性.
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睫状神经营养因子涂层的聚羟基乙酸聚乳酸神经导管修复犬胫神经缺损
目的 探讨应用脉冲等离子体方法涂层睫状神经营养因子(CNTF)的聚羟基乙酸聚乳酸(PGLA)神经导管修复犬胫神经缺损的疗效.方法 18只杂交犬,每只犬左后肢制成胫神经2.5 cm缺损模型,随机分别应用三种方法修复.A组:应用脉冲等离子体方法涂层CNTF的PGLA神经导管;B组:单纯PGLA神经导管;C组:自体神经.应用苏木精-伊红和Masson染色、S-100免疫组化染色、神经电生理及神经轴突计数方法评价神经再生效果.同时动态记录犬行走步态变化,实验观察期3个月.结果 神经导管血管化良好且大部分降解吸收,再生神经均已通过所有神经导管.A组与C组的神经传导速度和神经轴突计数差异无统计学意义(P＞0.05),而A组和C组的数据均优于B组(P＜0.05).A组和C组的犬基本恢复正常行走步态,而B组犬仍有跛行.结论 脉冲等离子体方法涂层CNTF的PGLA神经导管能有效修复犬2.5 cm胫神经缺损,取得与自体神经相近的效果.
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CNTF对大鼠脊髓运动神经元NF积聚影响的研究
目的观察肌萎缩侧索硬化症(ALS)病人脑脊液和谷氨酸对体外培养SD大鼠脊髓前角运动神经元损伤及神经细丝(Neurofilament,NF)积聚的变化,探讨睫状神经营养因子(Ciliary neurophicfactor,CNTF)保护运动神经元的作用机制.方法体外培养SD大鼠脊髓前角运动神经元,然后分组观察正常脑脊液、ALS病人脑脊液和谷氨酸对神经元损伤作用及CNTF的保护作用,免疫组化观察各组神经元中神经细丝NF积聚的情况.结果ALS病人脑脊液和谷氨酸对体外培养的运动神经元有明显损伤作用,神经元数量减少(P＜0.05),免疫组化显示有明显的NF积聚现象,但先加入CNTF后,运动神经元数量无明显变化(P＞0.05),免疫组化显示无明显NF积聚的现象.结论体外培养SD大鼠脊髓前角运动神经元,在加入CNTF后,可以减少ALS病人脑脊液和谷氨酸对运动神经元的直接损伤作用,并显示有抑制NF积聚的作用,提示CNTF确有保护神经元的作用.
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CNTF转染人脐血干细胞复合壳聚糖支架移植对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞存活的影响
目的 探讨腺病毒介导睫状神经营养因子(CNTF)基因转染的人脐血干细胞(hUCBCs)复合壳聚糖支架(CNTF-hUCBCs复合壳聚糖支架)移植对颅内段视神经损伤的修复作用. 方法 80只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、视神经损伤组、视神经损伤溶剂对照组、hUCBCs移植组、CNTF-hUCBCs复合壳聚糖支架移植组,每组各16只.后4组模拟额下显微外科入路建立颅内段视神经损伤模型,后3组分别在模型鼠眼玻璃体内给予生理盐水注射、hUCBCs移植及CNTF-hUCBCs复合壳聚糖支架移植.损伤后2周采用免疫组化染色检测各组大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)表达并计数比较. 结果 与正常对照组大鼠[(1580.65±84.36)个]比较,视神经损伤组及视神经损伤溶剂对照组每视野下视网膜平均标记RCCs数[(351.38±29.73)个、(382.05±47.22)个]明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);与视神经损伤组及视神经损伤溶剂对照组比较,hUCBCs移植组及CNTF-hUCBCs复合壳聚糖支架移植组每视野下视网膜平均标记RCCs数[(614.82±37.21)个、(937.59±62.25)个]明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);hUCBCs移植组与CNTF-hUCBCs复合壳聚糖支架移植组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05). 结论 CNTF-hUCBCs复合壳聚糖支架移植较单纯hUCBCs移植对大鼠颅内段视神经损伤的修复作用更显著.
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MSC-CNTF靶向性治疗变态反应性脑脊髓炎动物对病情和炎症的影响
目的 探讨重组腺病毒转导的骨髓间充质细胞(MSC)导向的睫状神经营养因子(CNTF)基因靶向性治疗C57小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE),对动物病情和和炎症的影响.方法 用成功构建的Ad-CNTF-IRES-GFP载体,体外观察Ad-CNTF-IRES-GFP转染MSC(MSC-CNTF)对MSC表达CNTF的影响,再用MOG 35-55建立C57BL/6小鼠的EAE模型,将MSC-CNTF移植治疗EAE小鼠,观察EAE动物病情评分;ELISA法观察外周血的促炎症因子TNF-α、IFN-γ,IL-12p35和抗炎症因子IL-10的水平,HE染色观察脑和脊髓炎症细胞浸润,用免疫荧光和免疫组化观察病变部位CD3(+)T细胞、炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ的表达水平.结果 (1)MSC-CNTF在MOI等于100的情况下,分泌的CNTF较DIL染色的MSC(MSC-DIL)、或Ad-eGFP转染的MSC(MSC-GFP)增高20倍(P<0.01).(2)MSC-CNTF治疗的EAE小鼠病情显著减轻.不仅平均发病时间缩短,发病率下降,病情减轻,而且病情严重程度也明显减轻.(2)MSC-CNTF治疗明显减低EAE小鼠外周血TN-α和IFN-γ水平,明显升高外周血IL-10水平.(3)MSC-CNTF治疗EAE小鼠可明显降低病变部位的炎症细胞数量和炎性细胞因子TNF-α水平,而对IFN-γ表达几乎影响不大.结论 MSC-CNTF移植治疗的EAE动物病情明显减轻,其机制是:减低外周血TNF-α和IFN-γ水平,降低病变部位CD3(+)细胞数量和炎性细胞凶子TNF-α水平.
