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外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究
目的探讨应用外源性睫状神经营养因子(CNTF)对成年猫面神经损伤后的再生修复作用.方法猫颞骨内面神经横断损伤后端端对合,局部应用CNTF作实验组,对照组用同等量生理盐水(SAL);于术后2、4和8周各组进行电生理、免疫组织化学细胞化学技术结合免疫电镜观察及形态学分析.结果术后2周两组电刺激面神经均未诱发面肌兴奋,有髓纤维计数实验组(834±326)、对照组(235±152)t检验(P＜0.05),有显著意义.术后4周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(7.832±2.695)、对照组(16.120±3.516);有髓神经纤维数实验组(1435±318)、对照组(957±269),有显著性差异.术后8周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(3.125±0.156)、对照组(3.095±0.17)有髓神经纤维数实验组(1695±283)、对照组(1543±320),t检验(P＞0.05),两组差异均无明显意义.但髓鞘厚度较均匀、结构尚完整,轴突再生明显,雪旺细胞增多.结论局部应用CNTF在正常猫神经损伤的较早期(4周左右)有促进再生修复作用,但远期作用尚不明确.
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脉络丛上皮细胞改良体外纯化培养及其分泌神经再生相关因子的特点
目的 探讨脉络丛上皮细胞(CPECs)的体外纯化培养方法及其分泌脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、睫状神经营养因子(CNTF)和胶质源性神经营养因子(GDNF)的特点.方法 取SD新生大鼠侧脑室脉络丛,分离CPECs并进行传代培养及纯化,采用免疫荧光化学法进行CPECs鉴定.将CPECs分为原代培养组(A组)、传1代培养组(B组)及传2代培养组(C组),并检测各组BDNF、NGF、CNTF和GDNF mRNA及蛋白的表达情况.结果 经荧光显微镜鉴定,所获细胞均为CPECs.BDNF、GDNF的mRNA及蛋白在A组、B组及C组均有表达,B组及C组的表达均较A组降低,C组的表达较B组低(P ＜0.05);NGF、CNTF的mRNA及蛋白在A组、B组及C组也均有表达,B组及C组的表达较A组增加,C组的表达较B组低(P＜0.05).结论 改良体外纯化培养CPECs方法可行.CPECs体外具有分泌BDNF、NGF、CNTF和GDNF的能力,而且具有一定周期规律性.
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睫状神经营养因子、雪旺氏细胞与周围神经再生
雪旺氏细胞(Schwann cells,SCs)与睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)在用围神经(peripheralnerve,PN)再生中有重要作用.SCs可通过促进基底膜产生细胞外基质、增加细胞表面粘附分子的合成、产生神经细胞营养因子及受体,为轴突再生提供有利的微环境,促进PN再生和功能恢复.CNIF具有多种生物活性,能促进各种神经元的存活,对运动神经元有特别的保护作用,有助于提高轴突再生的可能性,CNTF能抑制运动神经轴突变性坏死、促进轴突发芽、提高轴突生长速度、阻止或减少肌肉萎缩,外源性给予CNTF可促进PN再生.
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睫状神经营养因子对大鼠脊髓损伤后GFAP表达的影响
目的研究大鼠脊髓损伤后睫状神经营养因子(CNTF)是否能够影响胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达和脊髓损伤后大鼠功能的恢复情况.方法将动物分为脊髓损伤+CNTF注射组(A组)、脊髓损伤+灭活的CNTF注射组(B组).手术后1、3、7、14、28 d,应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察GFAP的表达,采用计算机图像分析技术,进行定量分析;并用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况.结果大鼠脊髓损伤后GFAP的表达A组明显高于B组,A组损伤脊髓高表达GFAP持续到术后28 d,B组仅持续到术后14 d.增加的GFAP阳性细胞数目与神经功能的改善有一定的平行关系.结论 CNTF能诱导大鼠损伤脊髓高表达GFAP,有助于促进大鼠功能恢复.
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重组睫状神经营养因子对大鼠反应性胶质化的影响
目的:探讨睫状神经营养因子(CNTF)对反应性胶质化的影响.方法:应用大鼠脑顶叶刺伤模型,将动物分为3组.对照组:刺伤后即原位注射生理盐水 10μl;小剂量组:刺伤后即原位注射0.1g/L CNTF 1μg;大剂量组:刺伤后即原位注射1g/L CNTF 10μg,分别于伤后 1、2、7周灌注活杀大鼠,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学染色.结果:对照组1周时伤道及附近GFAP染色增强,星形胶质细胞数目和突起数及突起长度增加,胞体增大,胞浆丰富;2周时,上述变化仍明显 ,开始形成胶质瘢痕;7周时有较明显的胶质瘢痕形成;给予CNTF各时间点上述变化均较对照组明显,大剂量组胶质变化较小剂量组更显著.结论:CNTF具有促进胶质化形成的作用.
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运动训练对大鼠肾上腺睫状神经营养因子表达的影响
目的 研究大鼠游泳运动训练对大鼠肾上腺睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响.方法 成年SD大鼠分四组,除正常组外,三个负重组分别给予占体重1％、3％、5％负重,进行6周游泳训练,每天1h,取各组大鼠肾上腺,用RT-PCR研究CNTF mRNA水平变化.结果 肾上腺能检测到CNTF mRNA表达,与正常组比较,轻度和中度负重组肾上腺CNTF mRNA表达明显增加(P＜0.05).结论 轻、中度负重游泳训练明显增加肾上腺CNTF基因水平,提示CNTF可能与游泳负重导致机体的神经内分泌调节有关.
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靶肌肉注射睫状神经营养因子促周围神经再生的功能评价
目的评价靶肌肉注射睫状神经营养因子(CNTF)对受损周围神经功能恢复的影响.方法用硅胶管桥接80只大鼠左侧坐骨神经长6 mm缺损,随机分为两组,分别行CNTF、生理盐水(NS)靶肌肉注射.术后行坐骨神经功能指数(SFI)测定、电生理检测、轴突图像分析及霍乱毒素-辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行追踪.结果 CNTF组SFI恢复率、各项电生理及轴突图像分析指标、CB-HRP标记的脊髓前角运动细胞数明显优于NS组.结论靶肌肉注射CNTF可明显促进周围神经再生和神经功能恢复.
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睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究进展
以往认为,成年哺乳动物视神经损伤后通常不能再生[1].视神经损伤后,其轴突很快发生变性,胞体死亡,这是个不可逆的过程.但近年来的实验研究发现,视神经轴突可长入移植的周围神经,并且认为在再生过程中,睫状神经营养因子发挥了重要作用,现就睫状神经营养因子及其受体的分子结构、组织分布、基因结构及其在视神经损伤后的作用和作用机制作一综述,为视神经损伤的治疗提供了理论基础.
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逆转录病毒及睫状神经营养因子联合诱导成人视网膜色素上皮细胞转分化成为神经细胞
目的 观察逆转录病毒及睫状神经营养因子(CNTF)诱导的成人视网膜色素上皮(RPE)细胞转分化过程中的形态特征与标志物变化.方法 成人RPE细胞经携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒感染后,进一步用脂质体介导CNTF表达质粒进行转染.倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,酶联免疫吸附实验、免疫组织化学染色及Western blotting方法检测细胞产生和分泌CNTF的能力、CNTF受体(CNTFR)、多种神经细胞标志物及信号传导分子一类蛋白酪氨酸激酶(JAK)的表达水平.结果 体外培养的成人RPE细胞经GFP逆转录病毒感染后,RPE细胞的形态无明显变化,但开始表达神经元和胶质细胞的某些标志物,如神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP);经CNTF表达质粒转染后,持续高水平表达CNTF的RPE细胞出现明显的神经细胞分化,CNTFR的表达量虽无明显变化,但其分布发生改变,主要分布在细胞膜上;此外,信号传导分子JAK表达明显上调.结论 体外培养的成人RPE细胞在逆转录病毒及CNTF的影响下可出现明显的神经细胞形态分化,转分化与CNTF-CNTFR-JAK信号传导通路有关.
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睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞的影响
目的观察不同浓度睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对培养大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)生长、存活的影响.方法取15只生后2～3d Wistar大鼠视网膜组织进行细胞培养,通过Tyy-1、单克隆抗体免疫细胞化学对培养的RGC进行鉴定.实验分对照组和10、20、40ng/mlCNTF组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),记录RGC存活时间,将培养第3、5、7天的RGC行四甲基偶氮唑盐(methylthio-tetrazole,MTT)法测量吸光度(A)值[旧称光密度(OD)].结果Thy-1单克隆抗全免疫组织化学检查显示培养3d的存活细胞90%以上为RGC.细胞存活期间实验组与对照组细胞幸免无明显突起,细胞体积无明显增大,实验组细胞存活时间比对照组长3～4d.培养第5、7d,Ⅰ组A值分别为0.0758±0.0139、0.0693±0.0113,Ⅱ组A值分别为0.0902±0.0114、0.0825±0.0125,Ⅲ组A值分加紧为0.0792±0.013、0.0653±0.0086,对照组分别为0.0620±0.0071、0.0513±0.0068.实验组与同时间对照组A值相比差异有显著性的意义(Ⅱ组与对照组相比P<0.01,Ⅰ、Ⅲ组与对照组相比P<0.05).结论一定浓的CNTF能促进培养大鼠RGC的存活,对RGC形态无影响.
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大鼠脊髓损伤早期CNTF与NT-4表达变化及其相互关系
目的 探讨内源性睫状细胞神经生长因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)和神经营养因子4(neurotrophin-4,NT-4)在大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)早期的表达变化及其相互关系,为SCI神经营养因子疗法提供理论依据.方法 成年Sprague Dawley(SD)大鼠45只随机分为假手术(Sham)组、SCI-12h、SCI-1d、SCI-3d和SCI-7d组(n=9).各SCI组大鼠均采用改良Allen's法制备T10节段脊髓顿挫伤模型,用BBB(Basso-Beattie-Bresnahan locomotor,BBB)评分法评估各组大鼠后肢运动功能;采用荧光定量PCR(Q-PCR)及免疫组织化学染色检测大鼠脊髓顿挫伤后CNTF与NT-4的表达情况;利用GeneMANIA数据库对CNTF与NT-4的相互作用进行预测分析.结果 术后Sham组大鼠BBB评分不变,SCI组大鼠损伤平面以下完全瘫痪,BBB评分为0,SCI-7d组评分较SCI-12h组高(P<0.01),但仍低于Sham组(P<0.01).与Sham组相比,SCI-12h组CNTF mRNA相对表达量降低(P<0.05),于SCI-3d组降至低(P<0.05);NT-4 mRNA相对表达量在SCI-12h组无变化,于SCI-1d组表达增高(P<0.05),至SCI-7d组表达降低(P<0.01),但与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05).免疫组织化学染色结果显示,CNTF在神经元与神经胶质细胞均有表达,NT-4主要在神经元表达.与Sham组相比,CNTF与NT-4阳性神经元数量及IOD值均在SCI-12h组减少(P<0.01);两种蛋白质随后呈现不同的变化趋势:脊髓前角CNTF阳性神经元数量与IOD值分别在SCI-3d组与SCI-7d组再次降低(P<0.01);而NT-4阳性神经元与IOD值分别在SCI-7d组与SCI-3d组增高,表达水平接近Sham组.脊髓后角CNTF阳性神经元数量在SCI-1d组再次降低(P<0.01),至SCI-7d组无变化;NT-4阳性神经元数量及其IOD值分别在SCI-1d组及SCI-7d组增高(P<0.01),且SCI-7d组与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05).GeneMANIA分析结果显示,CNTF和NT-4无直接相互作用,但与NGF、Tmem237、Kcnh6、Tph1、Psisp1和Ghrhr具有共同的共定位和/或共表达关系.结论 机体在SCI急性期上调CNTF表达;在亚急性期上调NT-4,下调CNTF表达,推测与减少胶质瘢痕形成,促进运动神经元再生有关;CNTF与NT-4和多种蛋白质的共表达/共定位关系还需进一步的深入研究.
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大鼠脊髓横断损伤后CNTF mRNA的表达变化
目的 观察睫状神经营养因子(CNTF)mRNA在脊髓全横断大鼠损伤后的表达变化,探讨CNTF在脊髓损伤修复中的作用.方法 40只SD大鼠,随机分为假手术组和脊髓损伤组(SCI组),后者根据取材时间又分为术后1 d、3 d、7 d和14 d组.SCI组动物选择在T10节段全横断脊髓,假手术组除不横断脊髓外其余步骤与SCI组相同.动物处死前进行BBB评分评估后肢运动功能的变化.取手术部位头端和尾端0.5 cm脊髓,采用RT-PCR技术检测CNTF mRNA在各组脊髓中的表达变化.结果 行为学评分随着损伤时间的推移呈小幅度增加,但后肢无运动功能恢复;术后1 d组和3 d组横断点尾端脊髓中CNTF mRNA的表达与假手术组相比上调(P<0.05).而7 d组和14 d组的表达量又逐渐恢复正常,与假手术组比较差异无统计学意义.结论 脊髓损伤早期CNTF的表达变化可能与脊髓损伤修复有关.
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部分背根切断对备用背根节神经元CNTF、PDGF表达的影响
目的研究部分去背根对备用背根节神经元睫状神经营养因子(CNTF)和血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响.方法制作猫备用背根模型,分别在3 d、7 d及14 d时取备用背根节用CNTF抗血清、PDGF抗血清行免疫组织化学ABC法染色.分别计数各组阳性神经元总数以及大、中小阳性神经元的数量.结果两因子在备用背根节的大、中小神经元均有表达.CNTF阳性神经元总数及中小阳性神经元数均在3 d时明显减少(P＜0.05),7 d、14 d时与正常比较无差异,大阳性神经元在各个时间段与正常相比无差异.PDGF阳性神经元总数及中小阳性神经元数在3 d、7 d时均较正常显著减少(P＜0.05),14 d时与正常无差异,大阳性神经元数各个时间段均无差异.结论部分背根切断对备用背根节内不同神经元表达CNTF、PDGF有不同的影响.
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CNTF基因单核苷酸多态性与运动能力的关联性及与一些生化指标的关系
目的 研究睫状神经营养因子基因rs2515362住点在杰出运动员和非运动员中的单核苷酸多态性,并测定运动员的临床生化指标,看它们在rs2515362位点的不同基因型运动员之间有无统计学差异.方法 设计针对rs2515362住点的引物合成,然后将它与其它基因的SNP位点一起用Bakeman的GenomeLab SNPstream基因分型系统进行高通量检测.结果 得到了121个运动员和232个非运动员rs2515362住点的多态性,经过统计学分析发现rs2515362住点在运动员和非运动员组中的AA、AG和GG三种基因型频率有统计学差异(X<'2>=13.9805,P=0.0009),A和G两种等位基因频率也有统计学差异(X<'2>=12.0080,P=0.0005),且AA、AG和GG三种不同基因型的运动员的生化指标Alp、Cr、Ca、TP、GGT、Cl、CO<,2>和Alb也存在统计学差异.结论 睫状神经营养因子基因rs2515362位点的单核苷酸多态性与运动能力有关,且不同基因型运动员之间其生化指标Alp、Cr、Ca、TP、GGT、Cl、CO<,2>和Alb也存在统计学差异.
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神经营养因子前体的研究
60年前,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的发现开辟了肽类生长因子的新纪元,促成了神经生物学研究的新领域.而近30 a中科学家们又相继发现了脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)、神经营养素-4/5 (neurotrophin-4/5,NT-4/5)、神经营养素-6(neurotrophin-6,NT-6)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)和胶质细胞源性神营养因子 (glia cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)等9种相似的因子.认为神经营养素家族(neurotrophins,NTs)作为一类生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化,促进其生长、发育,维持其功能方面具有不可替代的作用,而其前体(pro-neurotrophins,proNTs)不具有生理功能.但2004年Nykjaer A在Nature上发表的关于proNGF可通过与p75NTR和Sortilin受体组成三聚体诱导神经细胞凋亡的研究,使人们对NTs进行了重新的认识[1],其前体proNTs的存在可能在生命中的作用丝毫不亚于NTs.
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壳聚糖-胶原-CNTF复合神经导管修复大鼠周围神经缺损
目的:探究由壳聚糖、胶原和睫状神经营养因子(CNTF)制成的复合神经导管修复大鼠周围神经缺损的可行性.方法:采用冷冻干燥法制备复合神经导管,并进行导管降解实验.取30只SD大鼠随机均分为3组:自体神经移植组(A组)、壳聚糖-胶原-CNTF复合神经导管组(B组)、壳聚糖-胶原导管加管内一次性给CNTF组(C组),制作坐骨神经10 mm缺损,按上述分组进行桥接.术后3个月进行大体观察、神经电生理测定、组织学检测、图像分析.结果:壳聚糖-胶原-CNTF复合神经导管约13周完全降解.术后3个月时3组大鼠术侧后肢运动功能所改善,A组、B组较好,均好于C组.两组复合导管基本降解管内的再生神经己经完整地连接神经断端.电生理测定、组织学检测、图像分析显示:A组和B组神经传导速度、再生神经的数量、质量无显著性差异(P＞0.05),而A组和B组数据均优于C组(P＜0.05).结论:壳聚糖-胶原-CNTF复合神经导管能有效的修复大鼠坐骨神经10 mm缺损,效果接近自体神经移植,优于管内一次性给CNTF的壳聚糖-胶原复合神经导管．
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睫状神经营养因子对大鼠脑缺血后髓鞘再生的影响
目的:研究睫状神经营养因子(CTNF)对脑缺血大鼠胼胝体髓鞘再生的影响.方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、双侧颈总动脉结扎(2-VO)组和CTNF治疗组(CTNF).利用2-VO法制备大鼠脑缺血损伤模型,在术后24h内用0.4μg/kg的CTNF或生理盐水分别给予CTNF治疗组、2-VO组和Sham组大鼠尾静脉注射.给药7d后通过神经缺损功能评分(NSS)和转棒实验(Rota-Rod)检测各组大鼠神经功能,电镜观察胼胝体内髓鞘超微结构的变化,通过免疫荧光染色观察少突胶质细胞转录因子2(O1ig-2)的表达,Western Blot检测髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达.结果:与Sham组相比,2-VO组大鼠神经功能显著受损(P＜0.05);电镜下可观察到大鼠胼胝体髓鞘变薄、完整性差;胼胝体部位Olig-2表达显著减少;MBP表达显著下降(P＜0.05).经CTNF治疗后7d的大鼠出现神经功能明显改善(P＜0.05),胼胝体髓鞘结构明显恢复,Olig-2表达明显增加,MBP表达明显增加(P＜0.05).结论:CTNF处理能够改善脑缺血大鼠神经功能,促进髓鞘再生.
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重组睫状神经营养因子对周围神经再生中多种细胞的作用
为了解重组睫状神经营养因子(CNTF)对周围神经再生中多种细胞的作用,用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经,在受损神经局部一次性给予重组睫状神经营养因子:用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析观测再生神经中GAP-43、S100、CD68、MHC-Ⅱ免疫反应阳性物质的变化.与生理盐水对照组相比,证明CNTF组再生神经中上述四种物质显著增多.结果提示重组睫状神经营养因子能促进轴突的再生、Schwann细胞的迁入、单核细胞的渗出和活化.
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玻璃体腔内植入装置在玻璃体视网膜疾病的临床应用
因血-视网膜屏障的存在，玻璃体视网膜疾病的给药方法常受到限制，玻璃体腔内注射药物直接作用于玻璃体和视网膜，是其有效治疗方法，但对慢性反复发作性疾病，需频繁注射以达到有效药物浓度。玻璃体腔内植入装置既避开了血-视网膜屏障，又延长了药物的作用时间，是治疗玻璃体视网膜疾病的新方法，因其装载的药物不同而治疗不同的疾病。抗病毒药物植入装置能有效治疗获得性免疫缺陷综合征患者的巨细胞病毒性视网膜炎。激素类植入装置能有效治疗眼底慢性炎性疾病如黄斑水肿、非感染性葡萄膜炎，主要副作用为眼压升高和白内障形成。睫状神经营养因子和抗血管内皮生长因子植入装置可能是老年性黄斑变性的有效治疗药物。本文将综述目前常见的玻璃体腔内植入装置在玻璃体视网膜疾病中的临床应用。
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CNTF和Ad-BDNF对视神经夹伤后视网膜神经节细胞存活的影响
目的:观察大鼠视神经夹伤后玻璃体腔内注射睫状神经营养因子(CNTF)和腺病毒介导脑源性神经营养因子(Ad-BDNF)对视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGC)存活的影响.方法:制作大鼠视神经定量夹伤模型,玻璃体腔内注射CNTF和Ad-BDNF,经上丘荧光金(FG)逆行标记RGC,计数视网膜铺片上的RGC并行统计学分析.结果:正常SD大鼠视网膜上RGC密度为2155±265个/mm2(n=12),视神经夹伤后RGC在1～2wk内下降速率快,到3,4wk时RGC细胞数量虽仍有减少但下降速度已经明显减慢.CNTF组在视神经夹伤后1wk时视网膜RGC数显著高于对照组,但2～4wk的结果和对照组比较差异不明显.Ad-BDNF组视神经夹伤后1-4wk视网膜RGC数均显著高于对照组.结论:CNTF治疗组玻璃体腔内一次性注射CNTF可以在损伤早期2wk内为损伤的RGC提供神经营养因子,减少RGC的早期死亡.Ad-BDNF治疗组的这种保护作用可以持续到损伤后4wk,能够为RGC提供长时间地营养支持,但这种作用比较局限,可能与单一营养因子作用有关.
