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环境因素和谷胱甘肽转硫酶基因型与胃癌易患性的分子流行病学研究
胃癌的发生是一个多阶段和多因素的过程,其中饮食、微生物和遗传因素可能具有重要作用.谷胱甘肽转硫酶(GSTs)超基因家族(glutathione S-transferases)做为致癌物质的解毒酶系,可以催化亲电子致癌物与谷胱甘肽结合,形成易溶于水的化合物排出体外,从而保护细胞免受遗传毒性因子的损伤.GSTs包括α(GSTA)、π(GSTP)、θ(GSTT)、σ(GSTs)和μ(GSTM)5种基因型[1].其中GSTM1的遗传多态性主要表现为等位基因的纯合性缺失(空白基因型),可能是环境因素诱发癌症的易患性调节因子[2].对GSTM1纯合性缺失和癌易感性的关系的研究,将有助于理解具有相同致癌物暴露的不同个体的患癌症的危险性不同.近的研究表明GSTM1空白基因型与肺癌、膀胱癌、宫颈癌和皮肤癌有关,但对GSTM1基因多态性与胃癌易患性的研究还较少,而且结果也不一致.目前,把环境因素和遗传易感性结合起来,应用多因素分析评价癌症发生的危险因素成为研究热点.为此我们应用病例对照分子流行病学方法,研究遗传代谢易感性与环境致癌因素暴露在胃癌发病危险中的作用,同时评价GSTM1和吸烟等危险因素之间可能的交互作用,期望为胃癌病因研究和防治提供科学依据.
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胰腺癌细胞基因组范围内的基因缺失
目的:研究胰腺癌细胞基因组范围内的纯合性缺失和杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH).方法:应用高密度单核苷酸多态性芯片和专用分析软件,检测17种胰腺癌细胞株基因组范围内的纯合性缺失和LOH,并筛选可能与胰腺癌发生、发展有关的基因区域,用PCR验证纯合性缺失.结果:经过PCR验证,26个区域确实为纯合性缺失,芯片的准确度为83.9%(26/31).这些缺失区域中,平均每个区域只涉及1.29个基因.每一种细胞都有不同程度的LOH;不同染色体臂出现LOH频率不同,出现频率高的为染色体臂9p和18q,均为94.1%.结论:胰腺癌全基因组范围内出现多处LOH和纯合性缺失,这些区域可能含有新抑癌基因.
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p16基因在消化系肿瘤的研究进展
p16基因又称多重肿瘤抑制基因1(MTS1)、细胞周期素依赖激酶4的抑制物(cyclin dependent kinase 4 inhibitor,CDK4I)或CDKN2,是新近发现的一个重要抑癌基因,与许多肿瘤的发生、发展关系密切.与p53基因相比,它具有突变率高、分子量小,易于标定的特点,因而很快成为肿瘤分子生物学、分子遗传学等学科的研究热点.目前,人们已从基础及临床诊治等多个角度对p16基因进行了研究.本文旨在综述p16基因与消化系肿瘤发生、发展的关系及p16基因治疗情况.
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肿瘤抑制基因p16在胰腺腺癌细胞系中因纯合性缺失而失表达
目的检测肿瘤抑制基因p16在胰腺腺癌细胞系中的基因改变和在mRNA以及蛋白质水平的表达.方法使用PCR方法检测基因的缺失情况;使用单链构象多态性(SSCP)方法检测基因有无突变;使用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测基因启动子区域的甲基化状态;使用RT-PCR方法检测基因在mRNA水平的表达;使用免疫细胞化学染色和Western blot方法检测基因在蛋白质水平的表达.结果被检测的6个胰腺腺癌细胞系中,有3个细胞系存在p16基因的纯合性缺失,这3个细胞系在mRNA水平和蛋白质水平均无p16基因的表达.在全部6个细胞系中没有发现p16基因突变和启动子区域的过甲基化.结论在被检测的6个胰腺腺癌细胞系中,纯合性缺失是造成p16基因失表达的原因.
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大鼠肺鳞癌癌变过程中INK4a/ARF 基因纯合性缺失的研究
INK4a/ARF基因是一个在人类癌症中(包括肺癌)容易被破坏的基因,它可利用不同的第一个外显子(1α、1β)和下游两个共同的外显子编码两个不同的蛋白,一个是细胞周期素依赖激酶抑制剂p16INK4a;另一个是p19ARF(p19 alternative readin g frame)是一个可以改变的阅读框架,能结合MDM2(murine double minute-2, 小鼠双微 2)并促进MDM2的降解,而稳定野生型p53蛋白,从而使p21上调引起细胞周期阻滞或诱导细胞凋亡.本研究在石蜡切片中利用免疫组化S-P法检测p16INK4a蛋白的表达;利用显微切割和聚合酶链反应(PCR)技术检测INK4a/ARF基因纯合性缺失与大鼠肺鳞癌发生发展的关系.
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原发性胃癌p16INK4a基因缺失和突变的研究
目的:探讨p16INK4a基因缺失和突变在胃癌发病机制中所起的作用.方法:采用多重PCR、PCR-SSCP和DNA测序对62例胃癌、癌旁组织及10例正常胃黏膜标本中p16INK4a基因纯合性缺失和突变进行检测.结果:62例胃癌中发现p16INK4a基因第一外显子和第三外显子各有2例纯合性缺失,缺失率6.5%(4/62),PCR-SSCP和DNA测序发现1例p16INK4a基因第一内含子区碱基插入,突变率1.6%(1/62),癌旁和正常胃黏膜均未发现缺失和突变.结论:在原发性胃癌中,p16INK4a基因纯合性缺失率很低、突变罕见.
关键词： 胃肿瘤/遗传学 p16INK4A基因 纯合性缺失 突变 -
p16及p15基因在子宫颈癌中的纯合性缺失及其临床意义
目的:探讨抑癌基因p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中的作用.方法:应用比较PCR技术检测34例子宫颈癌组织和20例正常宫颈组织中p16、p15基因的纯合性缺失.结果:p16、p15基因的纯合性缺失率分别为11.8%、14.7%,p16、p15基因的纯合性缺失与组织学类型、临床分期及组织学分级无关.结论:p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中可能起到一定的作用.
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DPC4基因在胰腺癌中的改变
目的研究DPCA(deleted in pancreatic cancerlocus 4)基因在胰腺癌中的改变.方法用多聚酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术及PCR产物直接测序法检测胰腺癌细胞系P1、P2、P3、P4、P7,11例新鲜冷冻胰腺癌组织中DPCA基因第1,2,3,4,8,11外显子的缺失和突变.结果 5株人胰腺癌细胞系中,3株(P1、P2、P3)存在DPC4基因突变,DPCA基因改变率为3/5.11例新鲜冷冻胰腺癌组织中,3例有DPC4基因的纯合性缺失,2例有基因突变,DPCA基因改变率为5/11(45.5%).结论 DPCA作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要作用.
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葡萄胎中CDKN2A基因纯合性缺失和突变的研究
目的:探讨细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A基因,包括p16INK4a和p14ARF基因)外显子1、2的纯合性缺失和突变情况与葡萄胎发生的关系.方法:对38例葡萄胎和30例早孕绒毛的新鲜组织标本进行基因组DNA抽提、PCR扩增,而后应用变性高效液相色谱分析(DHPLC)的方法对扩增产物进行突变检测.结果:1)38例葡萄胎组织样本中,5例发生p16INK4a基因外显子1的纯合性缺失,其纯合性缺失率为13.16%;而30例早孕绒毛组织标本中,未发现p16INK4a基因外显子1的纯合性缺失.p16INK4a外显子1的纯合性缺失率在早孕绒毛组织和葡萄胎组织中差异具有统计学意义(P=0.036);2)38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中,无一例发生p14ARF基因外显子1和p16INK4a山外显子2的纯合性缺失;3)经DHPLC检测,38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中,p16INK4a基因外显子1、2和p14ARF基因外显子1扩增产物的所有谱图均为单一峰型,未检测到任何位点的突变发生.结论:p16IHK4a基因外显子1的纯合性缺失与葡萄胎的发生具有一定的相关性;在葡萄胎中,CDKN2A基因的遗传变异主要是由于此基因的纯合性缺失造成的,突变可能不是此基因变异的主要形式.
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复发性星形细胞瘤p16基因的研究
目的:结合病理学分级,研究复发星形细胞瘤的p16基因异常,探讨p16基因在星形细胞瘤复发中的作用.方法:采用复合PCR、PCR-SSCP等方法,对 22例星形细胞瘤患者的原、复发标本进行基因缺失及点突变的检测.结果:在全部44个标本中发现纯合性缺失14例,缺失率为31.8%(14/44) .将Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级分别合并后相比差异有显著性.发生p16基因缺失的病例,依其发生的时间先后分为三组.PCR-SSCP检测,点突变发生率为6.8%(3/44).结论:星形细胞瘤在其恶性增殖中发生p16基因缺失,而基因缺失可能在维持其恶性表型中起重要作用.检测p16基因的缺失对判断星形细胞瘤的恶性转化有一定价值.点突变在星形细胞瘤进展中发生频率较低,可能不起重要作用.
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抑癌基因 p15与骨肿瘤
近年来,许多研究表明,人类肿瘤及其细胞系中广泛存在染色体9p21～22区域的异常,如纯合性缺失、杂合性丢失、易位、倒位等.因此认为此区存在着抑癌基因.初发现 p16基因定位于染色体9p21,与许多恶性肿瘤有关,但并非此区惟一抑癌基因,进一步发现该区域的 p15基因毗邻 p16基因.研究表明,p15基因(p15)与 p16基因(p16)组成相似[1],但 p15除与 p16有部分共性外,在恶性肿瘤的发生、进展及转移中尚有其自身的特点.本文就抑癌基因 p15及其与骨肿瘤的关系作一综述.
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p16基因与卵巢癌
1发现、结构与功能p16是近年来发现的一种肿瘤抑制基因.Serrano[1]等用酵母双杂交技术寻找与人CDK4相关蛋白,找到一种阳性cDNA克隆编码的由156个氨基酸构成的含有蛋白-蛋白相互作用所需的4个锚蛋白重复序列、相对分子量为16569的蛋白[2],并将此蛋白质命名为p16INK4.Kamb[3]等对近100个人黑色素细胞系研究后发现有一半以上的细胞系在9P21附近存在纯合性缺失,经部分测序后,其中两个独立的区域与已知的编码人的CDK4抑制因子(即p16)的序列相似,被命名为多种肿瘤抑制因子1(MTS1、CDKN2)即p16.p16基因由三个外显子和两个内显子组成.两个内显子将P16的编码序列分隔为126 bp、307bp、11bp三个外显子.
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喉鳞癌中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及突变研究
目的探讨喉鳞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因第5,8外显子纯合性缺失及突变的情况.方法分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测41例LSCC中FHIT基因第5,8外显子纯合性缺失及点突变.结果LSCC中,第5外显子纯合性缺失率为26.8%(11/41),且与患者TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05);第8外显子纯合性缺失率为29.3%(12/41),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P＜0.05);FHIT基因第5,8外显子的纯合性缺失有明显的相关性(P＜0.01);所有标本没有检测到第5,8外显子的点突变.结论LSCC中,FHIT基因第5,8外显子为其基因缺失的重要靶区,两者的纯合性缺失可作为检测LSCC生物学行为的重要标志.LSCC中,点突变可能不是FHIT基因失活的主要机制.
关键词： 脆性组氨酸三联体基因 喉鳞癌 纯合性缺失 基因突变 -
apc基因突变与B细胞性非霍奇金淋巴瘤发病机理相关性的研究
目的 探讨apc基因第15外显子密集突变区(Mutation cluster region, MCR)突变在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)发生、发展中的作用.方法 应用石蜡组织DNA抽提、PCR扩增和2%琼脂糖凝胶电泳技术检测40例B-NHL和20例直肠腺癌(阳性对照)组织中DNA的apc基因MCR突变情况.结果 在相同PCR反应体系和条件下,从筛选出的20例直肠腺癌组织DNA中扩增出apc基因MCR的产物,而40例B-NHL组织DNA中未扩增出相应产物.结论 apc抑癌基因第15外显子MCR突变是结、直肠腺癌等恶性肿瘤的常见分子改变,但在B-NHL中可能不是普遍现象并有可能发生纯合性缺失.
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分化型甲状腺癌组织中脆性组氨酸三联体基因外显子5、8纯合性缺失及突变检测
目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)组织中脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因外显子5、8(E5、E8)纯合性缺失及突变情况.方法:分别采用外显子特异PCR及PCR-SSCP技术检测65例DTC组织及其相应非癌上皮(NCE)组织中FHIT基因E5、E8纯合性缺失及点突变.结果:甲状腺NCE组织中,E5、E8纯合性缺失率均为0;DTC中,E5纯合性缺失率为30.8%(20/65),且与患者淋巴结转移有关(P<0.05);E8纯合性缺失率为29.2%(19/65),且与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05).DTC组织中,FHIT基因E5、E8纯合性缺失的发生相关(χ2=23.212,P<0.01).所有标本未检测到E5、E8点突变.结论:FHIT基因E5、E8纯合性缺失可作为检测DTC生物学行为的重要标志.点突变可能不是DTC组织中FHIT基因失活的主要机制.
关键词： 脆性组氨酸三联体基因 分化型甲状腺癌 纯合性缺失 基因突变 -
喉鳞癌组织中脆性组氨酸三联体基因编码外显子纯合性缺失检测
目的:探讨喉鳞癌(LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因编码外显子纯合性缺失及其临床意义.方法:分别采用外显子特异PCR技术及免疫组化SP法检测41例LSCC(肿瘤发生部位位于声门上15例,声门24例,声门下2例;TNM分期Ⅰ期10例,Ⅱ期13例,Ⅲ期15例,Ⅳ期3例;病理分级:高分化15例,中分化18例,低分化8例;淋巴结转移阳性15例,阴性26例)及其相对应的喉正常黏膜组织中FHIT基因全部编码外显子E5～E9纯合性缺失及增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并分析其与临床病理特征及PCNA的关系.结果:41例喉正常黏膜组织中,E5～E9无1例发生纯合性缺失.LSCC组织中,E5～E9纯合性缺失率分别为26.8%(11/41)、14.6%(6/41)、9.8%(4/41)、29.3%(12/41)和7.3%(3/41).FHIT基因编码外显子总纯合性缺失率为41.5%(17/41),且与患者TNM分期、淋巴结转移及复发有关(P＜0.05).FHIT基因编码外显子纯合性缺失与PCNA标记指数有明显的负相关关系(P＜0.05).结论:LSCC组织中FHIT基因编码外显子纯合性缺失可能为其基因失活的重要机制之一,可作为检测LSCC生物学行为的重要标志.
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膀胱移行细胞癌患者外周血循环DNA死亡相关蛋白激酶的甲基化与纯合性缺失的研究
为探讨启动子高甲基化与纯合性缺失对死亡相关蛋白激酶(DAPK)表达的影响及其与膀胱移行细胞癌(TCCB)分期分级的关系,我们对45例TCCB患者外周血循环DNA进行DAPK甲基化程度及纯合性缺失情况分析.
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胰腺癌p16基因纯合性缺失和突变的研究
我们应用聚合酶链式反应单链构象多态性分析技术(PCR-SSCP)[1]检测51例胰腺癌和15例正常胰腺组织中p16基因的纯合性缺失和突变情况,现将结果报道如下.
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DMBT1基因纯合性缺失与原发性肺癌临床病理特征的关系
目的探讨DMBT1基因纯合性缺失与原发性肺癌临床病理特征的关系.方法采用聚合酶链反应检测原发性肺癌DMBT1基因纯合性缺失,分析其与肺癌临床病理特征的关系.结果 37例肺癌组织中9例有DMBT1基因纯合性缺失,而其自身癌旁正常肺组织均无缺失.DMBT1基因纯合性缺失率非小细胞肺癌组高于小细胞肺癌组,低、未分化肺癌组高于中、高分化肺癌组,伴有淋巴和/或远处转移组高于不伴转移组,有吸烟史组高于无吸烟史组(P均<0.05).结论 DMBT1基因与肺癌的临床病理特征有密切关系,其可能参与调控原发性肺癌的细胞分化和转移过程.
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抑癌基因CDKN2的变异与原发性胃癌的关系
目的 研究CDKN2基因的突变、缺失与原发性胃癌发生发展的关系.方法 用PCR和银染SSCP分析了45例胃癌组织和22例相应正常胃粘膜中CDKN2基因的突变和纯合性缺失情况.结果 发现CDKN2基因的纯合性缺失率为28.9%,其中β型转录子的缺失率为15.6%;无一例有CDKN2基因的突变.结论 胃癌的发生发展与CDKN2基因纯合性缺失密切相关,与CDKN2基因的突变无关,β型转录子参与维持CDKN2基因的正常功能,其纯合性缺失与胃癌的发生有关.
