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分化型血管平滑肌细胞的原代培养
目的 建立大鼠主动脉分化表型血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)原代培养,为研究VSMC表型转化的分子机制提供体外研究模型.方法 无菌条件下分离大鼠胸主动脉中膜,组织贴壁法在Ⅳ型胶原蛋白包被培养瓶内培养大鼠胸主动脉VSMC,消化、过滤、离心,收集从组织块分离的单个细胞后,接种于含0.2%小牛血清、胰岛素样生长因子Ⅰ、DMEM培养液的层粘连蛋白包被的培养板上,培养1天后将培养液更换为不合血清及生长因子的DMEM.结果 根据细胞形态观察、免疫组织化学鉴定、兴奋剂刺激引发的收缩反应、分化型VSMC标志基因的检测,证实为分化型VSMC,分化状态可持续1周以上.结论 在组织贴壁法基础上,改变培养环境,可使VSMC较长时间保持于分化状态,是研究VSMC表型转化的分子机制良好的体外研究模型.
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β2-肾上腺素受体亚型激动对于血管平滑肌细胞增殖的影响
目的研究β2-肾上腺素受体亚型(beta2-adrenergic receptor,β2-AR)激动对于血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控效应.方法应用携带重组β2-AR片段的腺病毒感染VSMC制备受体过表达模型.分别应用Zinterol(ZIN)以及异丙基肾上腺素(ISO)刺激生理状态和β2-AR过表达的平滑肌细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和细胞计数法检测吸光度(A,曾称光密度OD)值和细胞数目的改变.结果ZIN刺激1天时A值开始下降(P＜0.05),3天时抑制作用达高峰,抑制率为(32.00±1.62)%.细胞计数法测得ZIN激动3天时细胞数为对照组的(69.29±9.26)%.应用CGP20712A阻断β1-AR激活后,非选择性β-AR激动剂ISO刺激细胞后得到结果相似.特异性β2-AR拮抗剂ICI 118,551可逆转此抑制效应.ISO刺激过表达的β2-AR 3天时MTT检测结果相似.结论β2-AR亚型激动可抑制VSMC的增殖.
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增龄对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗和骨骼肌内脂肪的影响
目的 探讨增龄对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗(IR)和骨骼肌内脂肪影响的可能机制.方法 将雄性Wistar 4～5月龄大鼠16只和22～24月龄大鼠16只分别随机分为青年对照组和老年对照组,青年高脂组和老年高脂组(高脂饲料喂养),每组8只.8周后,行葡萄糖耐量试验,测定0、30、60和120 min的血糖和葡萄糖曲线下面积(AUC)；采用正葡萄糖-高胰岛素钳夹试验的葡萄糖输注率(GIR)评价IR.结果 与老年对照组和青年对照组比较,老年高脂组和青年高脂组GIR降低,骨骼肌TG及长链酯酰辅酶A(LCACoA)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；与老年对照组比较,老年高脂组大鼠各时间点血糖及AUC比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).GIR与胰岛素、骨骼肌TG及LCACoA呈负相关.结论 老年和高脂喂养大鼠骨骼肌TG和LCACoA含量增加,可能是老年容易发生IR的原因之一.
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白藜芦醇对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、DNA合成及细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法体外培养大鼠主动脉VSMC,分为不同浓度的Res组及对照组.观察细胞生长曲线;四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应法检测细胞活性;3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响;HE染色,DNA梯带检测及流式细胞术检测细胞凋亡.结果与对照组比较,本研究各浓度Res组VSMC计数均有不同程度的减少,3H-TdR掺入率明显降低,细胞增殖受抑制,VSMC凋亡增加,并呈浓度依赖性.结论Res对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖有明显的抑制作用,可能是通过抑制细胞DNA合成,诱导细胞凋亡等途径发挥作用.
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线粒体融合素2突变体对血管平滑肌细胞凋亡的影响
目的 研究大鼠线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点的2种突变体对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及其相关的信号通路的影响.方法 构建4种重组腺病毒,分别携带磷酸化位点突变为丙氨酸(重组1组)、Mfn2基因(重组2组)、突变为天冬酰胺(重组3组)和半乳糖苷酶基因(对照组),感染培养的VSMCs,另设未感染腺病毒的空白组.流式细胞术比较各组细胞的凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot分析各组Mfn2蛋白的表达以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和活性半胱天冬酶9(caspase-9)表达.结果 与空白组和对照组比较,重组1组、重组2组和重组3组Mfn蛋白显著增加(P<0.01);重组1组和重组2组细胞凋亡率显著增强(P<0.01);线粒体膜电位显著降低(P<0.01);p-Akt表达水平显著降低(P<0.01),活性caspase-9表达水平显著增高(P<0.01);且重组1组作用较重组2组更明显(P<0.01);而重组3组上述指标无显著差异(P>0.05).结论 Mfn2突变为丙氨酸的位点PKA通过Akt信号及线粒体途径诱导VSMCs凋亡的作用较Mfn2更明显,表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2诱导VSMCs凋亡的重要功能位点.
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大鼠局灶性脑缺血再灌注小动脉血管平滑肌细胞表型转化的实验研究
目的观察大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型小动脉血管平滑肌细胞(VSMC)中两种血管舒缩功能相关蛋白(α-平滑肌肌动蛋白和细丝蛋白)的免疫组织化学表达变化,以期了解脑小动脉病变中VSMC的表型转化及细丝蛋白在表型转化中的意义,指导临床小动脉硬化型脑卒中的准确防治.方法缺血再灌注组依照再灌注时间的不同分为2、6、12、24h、3 d及7 d共6个亚组,另设正常对照组及大脑中动脉持续缺血组.按时相点取材,免疫组织化学染色,图像分析.结果α-平滑肌肌动蛋白在再灌注6 h后表达明显下降,在24h时表达低,在3 d时表达有所升高,7 d时表达高;细丝蛋白缺血2 h后表达稍有下降,以12 h时的表达低,24h时表达升高,在3 d时表达高.结论再灌注损伤可引起小动脉VSMC表型的变化;细丝蛋白也可作为VSMC表型变化的指标之一,与α-平滑肌肌动蛋白相比意义更大;细丝蛋白和α-平滑肌肌动蛋白可能在再灌注中起下调炎症反应及保护细胞的作用.
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骨髓基质干细胞种植体外修复内皮及对血管平滑肌细胞增生的影响
目的探讨骨髓基质干细胞(MSCs)种植体外修复内皮的可行性及对血管平滑肌细胞增生的影响.方法培养兔血管内皮、平滑肌和人MSCs,通过细胞共培养模拟血管内皮修复过程,用流式细胞仪分析MSCs分子表型特征,免疫荧光细胞化学法观察与内皮共培养的MSCs Flk-1和vWF蛋白表达,根据下室内皮生长状态及是否接种MSCs将其分为对照组、单纯MSCs组、融合内皮组、对数内皮组和MSCs种植组.氚-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入检测平滑肌细胞DNA合成,Western blot检测平滑肌细胞中增殖细胞核抗原蛋白表达.结果分离的MSCs表达基质细胞标志CD105和CD166,不表达造血干祖细胞和内皮细胞标志CD34、Flk-1、vWF;与内皮共培养5天时,vWF染色仍为阴性,但约25.71%MSCs开始表达Flk-1;MSCs种植组平滑肌细胞3H-TdR掺入虽高于融合内皮组,但与对数内皮组比较显著降低;MSCs种植组平滑肌细胞PCNA蛋白吸光度相对值虽高于融合内皮组,但与对数内皮组比较明显减少.结论MSCs种植能抑制平滑肌细胞增生,种植在成熟内皮中的MSCs具有微环境依赖向内皮分化的能力.
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莪术组分涂层支架预防猪冠状动脉再狭窄的研究
目的 通过中华实验用小型猪冠状动脉再狭窄模型,观察中药莪术组分涂层支架抑制内膜增殖的有效性.方法 将18只小型猪随机分为莪术组分涂层支架组(ZES组)、雷帕霉素涂层支架组(SES组)及金属裸支架组(BMS组),每组6只,分别在左前降支、左回旋支及右冠状动脉置入同一种支架各1枚.术后30 d冠状动脉造影后将猪处死,观察支架血管段的病理形态及影像学变化.结果 30 d时,与BMS组比较,ZES组和SES组平均管腔直径和平均管腔面积均明显增大(P＜0.05),直径狭窄率和面积狭窄率明显减小(P＜0.05);与SES组比较,ZES组和BMS组炎症积分明显降低,内皮化积分明显升高(P＜0.05);3组损伤积分比较,差异无统计学意义(P＞0.05);光学相干断层扫描及扫描电镜观察,SES支架组30 d时可见部分支架节段内皮化不全及炎性细胞浸润.结论 ZES支架可有效地抑制血管内膜增殖,具有良好的生物相容性.
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利拉鲁肽对高脂饲养大鼠骨骼肌脂质沉积及骨骼肌超微结构的影响
目的 研究胰高血糖素样肽1类似物利拉鲁肽对高脂喂养胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌脂质沉积及骨骼肌细胞超微结构的影响.方法 雄性Wistar大鼠54只,随机普通饲养16只、高脂饲养38只,饲养8周后,各取5只大鼠判定大鼠IR状态,造模成功后,将高脂饲养大鼠分为高脂组、干预组1[利拉鲁肽100 μg/(kg·d)]、干预组2[利拉鲁肽200 μg/(kg·d)],每组11只,另11只普通饲养为对照组.药物干预2周后,检测骨骼肌内甘油三酯(mTG)、长链脂肪酰辅酶A(LCACoA),透射电镜观察大鼠骨骼肌细胞超微结构改变.结果 与对照组比较,高脂组mTG、LCACoA含量升高[(19.58±1.63) μmol/g us(9.99±0.90)μmol/g;(6.70±0.18)nmol/g vs (2.51±0.18)nmol/g,P＜0.01];与高脂组比较,干预组1 LCACoA含量下降[(6.10±0.37) nmol/g vs (6.70±0.18)nmol/g,P＜0.05],干预组2 mTG、LCACoA含量明显下降[(13.57±0.66)nmol/g vs(19.58±1.63) nmol/g,(4.73±0.31)nmol/g vs (6.70±0.18) nmol/g,P＜0.01].干预组1和干预组2较高脂组和对照组脂滴减少、线粒体肿胀减轻.结论 利拉鲁肽可呈浓度依赖性减少高脂喂养大鼠mTG和LCACoA含量,可能是减轻IR的原因之一.
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人参皂甙Rg3对血管平滑肌细胞衰老的影响及机制
目的 探讨人参皂甙Rg3对D-半乳糖诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)衰老的影响及机制.方法 取SD大鼠胸主动脉中层,分离并原代培养VSMC,选取3～6代VSMC,通过D-半乳糖共孵育的方法诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色和透射电镜鉴定衰老VSMC;VSMC随机分成对照组、D-半乳糖组、Rg3高浓度组、Rg3低浓度组,Western blot方法检测p16、p21和p53蛋白的表达水平,流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组比较,D-半乳糖组％-半乳糖苷酶阳性细胞明显升高[(58.67±2.52)％ vs (4.67±0.58)％,P＜0.05].电镜下表现为细胞核膜内折,细胞线粒体肿胀,脂褐素堆积;p16、p21和p53蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),细胞周期停滞在G0/G1期.与D-半乳糖组比较,Rg3低浓度组和Rg3高浓度组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显减少,p16、p21和p53蛋白表达水平明显降低,G0/G1期细胞数明显减少(P＜0.05).结论人参皂甙Rg3可抑制VSMC衰老,其机制可能部分通过抑制细胞生长周期p16INK4a/Rb、p53-p21Cip1/Wan信号通路来实现.
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降压药物对高血压大鼠血管平滑肌细胞离子泵活性及分泌血管紧张素Ⅱ的影响
目的 观察不同类型的降压药物对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞钠泵、钙泵活性及分泌血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)的影响.方法 采用组织块种植法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞24 h后,分为WKY大鼠组、SHR组、赖诺普利组、氨氯地平组、伊贝沙坦组、氢氯噻嗪组和美托洛尔组.分别用不同药物对SHR动脉血管平滑肌细胞进行干预.采用生化酶学方法、放射免疫分析法分别测定细胞膜离子泵活性和Ang Ⅱ浓度.结果 与WKY大鼠组比较,SHR组大鼠钠泵和钙泵活性明显降低(P<0.01),Ang Ⅱ浓度明显升高(P< 0.05);与SHR组比较,赖诺普利组、伊贝沙坦组钠泵和钙泵活性明显增高(P<0.05,P<0.01);氨氯地平组钠泵活性明显增高(P< 0.01);氢氯噻嗪组和美托洛尔组钠泵、钙泵活性及Ang Ⅱ浓度差异无统计学意义.与SHR组比较,赖诺普利组、氨氯地平组Ang Ⅱ浓度明显降低(P< 0.05),伊贝沙坦组Ang Ⅱ浓度明显升高(P< 0.05).结论 赖诺普利、伊贝沙坦和氨氯地平能提高SHR动脉血管平滑肌细胞膜离子泵活性,并影响其分泌Ang Ⅱ.
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溶血磷脂酸受体3介导溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞表型转化
目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)受体在LPA诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用及相关信号传导通路.方法 培养SD大鼠分化表型VSMC,培养液加胰岛素样生长因子(IGF-1)为IGF-1组,加溶剂载体为空白组,以不同浓度水平LPA(0.1～10 μmol/L)刺激,依次为LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组,并在LPA(1μmol/L)条件下,以LPA受体1,3拮抗荆二辛烷甘油焦磷酸盐(DGPP 8:0)为DGPP 1组,RT-PCR法检测平滑肌肌动蛋白α(SMA-α)和骨桥蛋白mRNA表达,Western blot法检测p38分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化蛋白水平.结果 与空白组和IGF-1组比较,LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组呈剂量依赖促进骨桥蛋白mRNA表达上升,SMA-α mRNA表达下降(P＜0.01);与空白组比较,LPA 1组p38MAPK和ERK激活(P＜0.01),DGPP 1组p38MAPK和ERK无明显变化(P＞0.05).结论 与Gq蛋白偶联的LPA受体3介导了LPA诱导的VSMC表型转化,阻滞上述通路有可能成为控制与动脉粥样硬化和再狭窄等血管疾病相关的VSMC表型转化潜在的治疗干预靶点.
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脱氢表雄酮对氧化应激诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1 mRNA表达的影响
目的 观察脱氢表雄酮(DHEA)对氧化应激诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA达的影响.方法 贴块法培养雄性Wistar大鼠胸主动脉VSMC,实验分A组(对照组)、B组(50 μmol/L H2O2处理6 h)、C组(50 μmol/L H2O2+1 nmol/L DHEA处理6 h)和D组(50 μmol/L H2O2+10 nmol/L DHEA处理6 h).逆转录聚合酶链式反应检测MCP-1的mRNA表达;比色法检测细胞丙二醛(MDA)含量.结果 B组VSMC的MCP-1mRNA表达及细胞MDA的含量显著高于A组;与B组比较,C组和D组VSMC的MCP-1 mRNA表达及细胞MDA含量显著降低,其中D组降低更为明显.结论 DHEA能显著抑制H2O2引起VSMC的MCP-1 mRNA表达的上调,从而减轻氧化应激对VSMC的损伤,这部分是通过DHEA的直接抗氧化作用达到的.
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卡维地洛对兔颈动脉易损斑块与血管平滑肌细胞凋亡及基因表达的影响
目的 探讨动脉易损斑块(VP)与血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的关系及卡维地洛稳定斑块的作用机制.方法 将45只雄性日本大耳白兔随机分成5组,分别为正常对照组、卡维地洛组、美托洛尔组、单纯转染组和单纯拉伤组,每组9只.正常对照组给予普通饲料,其他组给予球囊损伤颈总动脉加高脂喂养,8周后,除单纯拉伤组,其他3组给予野生型p53基因转染颈总动脉,卡维地洛组和美托洛尔组分别加喂卡维地洛和美托洛尔,继续高脂饲料喂养4周;实验前、实验后8、12周分别测定血脂;实验结束后检测斑块VSMC凋亡率及bc1-2、bax、α平滑肌肌动蛋白(α-actin)的局部表达情况,并分析血管病理形态学.结果 球囊损伤组均出现典型动脉粥样硬化斑块,与单纯转染组比较,美托洛尔组及卡维地洛组纤维帽厚度均明显增加,卡维地洛组更显著(P＜0.01);卡维地洛和美托洛尔对血脂均无明显影响;卡维地洛组斑块中VSMC凋亡率、bax及bax/bc1-2比值下降,上调α-actin、bc1-2阳性表达(P＜0.01).结论 卡维地洛稳定斑块作用优于美托洛尔,其机制可能在于卡维地洛除β受体阻断作用外还具有抑制VSMC凋亡的作用.
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齐墩果酸对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响
目的 研究齐墩果酸(OA)对H2O2诱导血管平滑肌细胞( VSMCs)凋亡的影响.方法 采用贴块法培养大鼠主动脉VSMCs,随机分为对照组、H2O2组、H2O2 +OA组、阻断荆组.采用Hoechst 33342染色和Annexin V/FITC染色检测各组细胞凋亡情况；Western blot检测各组细胞中磷酸化Akt蛋白表达变化.结果 与对照组比较,H2O2组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P＜0.05)；与H2O2组比较,H2O2+OA组细胞凋亡率明显降低,p-Akt蛋白表达明显升高(P＜0.05)；与H2O2 +OA组比较,阻断剂组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P＜0.05).荧光显微镜显示,对照组细胞核呈蓝色,H2O2组细胞核呈致密浓染,H2O2+ OA组细胞核呈蓝染,有少量细胞核致密浓染,阻断刺组细胞核呈致密浓染.结论 OA能减轻H2O2导致的VSMCs凋亡,其机制可能与激活细胞内磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号通路引起下游促生存基因的表达有关.
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血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响
目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶表达的影响,初步探讨在高血压中,AngⅡ导致纤维化病变形成的作用机制.方法 选择体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度AngⅡ作用24 h后,采用实时定量PCR和Western blot法,检测各组细胞弗林蛋白酶mRNA及蛋白的表达量;用荧光分析法检测各组弗林蛋白酶的活性.本实验共分为5组:对照组、AngⅡ 10-7 mol/L组、AngⅡ10-6mol/L组、AngⅡ10-5 mol/L组、AngⅡ10-4 mol/L组.结果 与对照组比较,不同浓度AngⅡ组弗林蛋白酶mRNA表达量及活性均明显升高,AngⅡ10-5 mol/L组和AngⅡ10-4 mol/L组升高更明显,AngⅡ10-4 mol/L组达到大值(P＜0.05,P＜0.01).结论 AngⅡ能够促进大鼠VSMCs中弗林蛋白酶的表达,AngⅡ可能通过促进弗林蛋白酶的表达,使活性转化生长因子β产生增加从而促进纤维化病变的影成.
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高血压大鼠脑血管功能损害的临界关闭压评价
目的通过临界关闭压(CCP)动态观察高血压脑微动脉平滑肌的收缩程度与形态改变间的关系.方法对照组和高血压组大鼠各80只,在高血压形成术后的不同时间点,分别测定脑血管CCP、脑血流自动调节下限(LICA)和脑血管形态变化.结果高血压组大鼠的CCP逐渐升高,到14、16周明显高于对照组(P＜0.05).CCP的升高与平均动脉压、微动脉中膜厚度及LLCA呈正相关(P＜0.05),并且在血压升高初期和血压较高后变化明显,呈倒"S"形改变(P＜0.05).结论高血压大鼠脑微动脉平滑肌的收缩程度明显增强,是微动脉中膜增厚的功能表现,并且在血压升高初期和血压较高后改变比较明显.
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西罗莫司联用阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞氧化应激损伤和一氧化氮合酶的影响
目的 探讨西罗莫司和阿托伐他汀联合使用对大鼠血管平滑肌细胞氧化应激损伤和一氧化氮合酶(NOS)的影响.方法 取大鼠血管平滑肌细胞进行实验,分为空白组、DMSO组、西罗莫司组(100 nmol/L)、阿托伐他汀组(3 μmol/L)和联合组(西罗莫司100 nmol/L加阿托伐他汀3 μmol/L).实验各组细胞给予相应药物干预2h后,加入三丁基过氧化氢诱导氧化应激损伤,24 h后检测各项指标.结果 与空白组比较,DMSO组、西罗莫司组、阿托伐他汀组和联合组细胞增殖率明显下降(P＜0.01).与空白组和DMSO组比较,阿托伐他汀组和联合组超氧化物歧化酶水平明显上升和丙二醛水平明显下降(P＜0.05,P＜0.01).与空白组、DMSO组、西罗莫司组比较,阿托伐他汀组和联合组诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA和蛋白表达明显下降(P＜0.01);联合组iNOS mRNA和蛋白表达较阿托伐他汀组明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 在氧化应激状态下,西罗莫司和阿托伐他汀均能抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖和抗氧化损伤,维持NOS系统平衡,联合应用的效果优于单独应用.
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前蛋白转化酶枯草溶菌素9小分子干扰RNA对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PC SK9)基因沉默后对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,初步探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)蛋白表达在其中的作用.方法 建立PCSK9小分子干扰RNA(siRNA)模型,培养VSMC,分为空白对照组、阴性转染组和阳性转染组,选取转染效率高的PCSK9 siRNA对VSMC进行干预,分别于12、24、36、48、60 h用MTT法测定吸光度(A)值,绘制增殖曲线,观察其对VSMC增殖的影响,转染48 h后用Western blot印迹法检测细胞内LRP-1蛋白表达情况.结果 与阴性转染组比较,阳性转染组24、36、48和60 h的A值明显下降(P＜0.05),PCSK9 siRNA抑制VSMC的增殖(P＜0.05).与空白对照组和阴性转染组比较,阳性转染组LRP-1蛋白表达明显上调(P＜0.05).结论 PCSK9 siRNA能有效抑制VSMC的增殖作用,且这种作用可能与LRP-1蛋白表达上调有一定的关系.
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睾酮抑制大鼠血管平滑肌细胞泡沫化及机制研究
目的 研究睾酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)转化为泡沫细胞的抑制作用,并探讨其可能机制.方法 培养大鼠VSMC,分为对照组、ox-LDL组、低(1 nmol/L)、中(10 nmol/L)、高(100 nmol/L)浓度睾酮组.另外,设置睾酮组(100 nmol/L)、氟他胺组(1μmol/L)、睾酮与氟他胺合用组,并与ox-LDL共培养建立泡沫细胞模型.利用油红O染色及酶荧光法检测不同浓度睾酮及氟他胺预处理对VSMC内脂质含量的影响,免疫印迹法检测各组细胞内线粒体融合素2(Mfn2)、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)的表达变化.结果 与ox-LDL组比较,不同浓度睾酮组VSMC脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P＜0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P＜0.05),CD36表达降低(P＜0.05).与睾酮组比较,睾酮与氟他胺合用组VSMC脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P＜0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P＜0.05),CD36表达增加(P＜0.05).结论 睾酮以雄激素受体依赖的方式,抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化过程,其作用与睾酮上调Mfn2表达进而调节CD36和ABCA1表达有关.
