首页 > 文献资料
-
自发性高血压大鼠大脑中动脉血管肌源性紧张度的时程变化
目的 观察自发性高血压大鼠(SHR)大脑中动脉血管肌源性紧张度的时程变化.方法 选择SHR 32只,随机分为8、12、16、20周龄组,每组8只;另选Wistar大鼠32只按照SHR分组原则分为8、12、16、20周龄对照组,每组8只.测量不同管腔压力下主动态血管内径和被动态血管内径.观察各周龄组大鼠血管肌源性紧张度变化与血压的关系.结果 与不同用龄对照组比较,不同用龄SHR组尾动脉压、血管肌源性紧张度明显升高.8、12、16周龄SHR组血管肌源性紧张度随大鼠周龄增加而缓慢单调增加,20周龄SHR组较16周龄SHR组明显下降;不同周龄SHR组尾动脉压随大鼠周龄增加而缓慢单调增加,与16周龄SHR组比较,20周龄SHR组尾动脉压明显增加(P＜0.01).结论 血管肌源性紧张度作用参与了高血压发生、发展的整个过程.
-
75岁以上急性冠状动脉综合征住院患者注册资料分析
随着年龄的增加,急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者发生心肌梗死甚至死亡的危险性增加.年龄是所有因素中的基本危险因素,对65岁以上的患者,年龄作为危险性因素的重要性相对较小,但对年龄＞75岁的患者,其重要性显著增加,有研究显示,年龄≥75岁是急性ST段抬高,心肌梗死患者未能接受再灌注治疗的预测因素之一[1],与中青年患者相比较,其病死率较高,接受再灌注治疗率较低[2].本研究旨在通过对全国多中心注册的部分年龄≥75岁ACS患者的临床情况作一介绍,并评价我国75岁以上ACS患者临床治疗现状.
-
老年腹股沟疝患者肌肉质量和力量研究
目的 评价老年腹股沟疝患者的肌肉质量和力量. 方法 拟接受腹股沟疝手术,年龄在70～90岁的男性住院患者30例为研究对象,40～50岁10例男性健康受试者为对照组,进行人体测量、应用生物电阻抗和双能X线扫描的方法测定人体组分、CT扫描腹部和大腿,通过专用软件计算相应肌肉面积. 结果 老年男性腹股沟疝患者握力和小腿围低于对照组;全身肌肉组织总量结果相近,均低于对照组,肢体骨骼肌指数为7.53±0.78,其中Ⅰ类肌减症(男性＜7.01 kg/m2)为22.7％,Ⅱ类(男性＜6.08 kg/m2)为0;CT扫描发现老年组腹壁肌肉和大腿肌肉均少于对照组,但竖脊肌结果两组相近,L3骨骼肌指数≤52.4(男性)为70.0％. 结论 老年腹股沟疝患者肌肉质量和力量低于成年人,肌减症发生率增高.
-
高血压导致动脉弹性减退的病理学机制
目的 探讨高血压对大动脉弹性容量顺应性(C1)、小动脉弹性振荡顺应性(C2)和升主动脉中膜组织结构成分的影响及动脉弹性与升主动脉中膜组织结构成分的相关性. 方法 入选在我院行冠状动脉旁路移植术的冠心病患者60例,分为高血压组和非高血压组(各30例).测定C1和C2.将冠状动脉旁路移植术中从升主动脉前壁取下的组织进行病理切片,分别用Masson染平滑肌和胶原纤维,Weigert间苯二酚复红法染弹性纤维.光镜下以计算机图像分析系统测定血管平滑肌、胶原纤维和弹性纤维的相对面积.C1、C2与升主动脉组织结构成分间的相关性应用直线相关分析.结果 高血压组患者大动脉弹性指数C1 11.9±1.8(ml/mmHg×10),1 mrnHg=0.133 kPa,低于非高血压组13.1±2.5 (ml/mmHg×10),t=2.22,P＜0.05;升主动脉壁中膜胶原纤维的相对含量高血压组患者(46.0±3.8)％较非高血压组(42.2±3.0)％升高(t=4.24,P＜0.01),弹性纤维高血压组(17.5±3.5)％,较非高血压组患者(19.3±2.7)％减少(t=2.20,P＜0.05).高血压组和非高血压组大动脉弹性C1均与弹性纤维的相对含量呈正相关(r值分别为0.52、0.39,P＜0.05和P＜0.01),而与胶原纤维的相对含量呈负相关(r值分别为-0.55、0.67,均P＜0.01). 结论 高血压可导致冠心病患者大动脉弹性下降,其主要病理基础是胶原纤维增多和弹性纤维减少及主要成分的排列紊乱.大动脉弹性C1可准确反映高血压对升主动脉中膜胶原纤维和弹性纤维的影响.
-
风湿性多肌痛的骨骼肌病理改变特点
目的 探讨风湿性多肌痛的临床和骨骼肌病理改变特点.方法 13例老年和老年前期患者符合1979年Bird的风湿性多肌痛诊断标准,发病年龄49～78岁,平均60.3岁,主要临床表现为急性发病的四肢近端骨骼肌对称性持续性疼痛.其中5例伴37℃～38℃的低热,1例有轻微贫血,未发现颞浅动脉炎的改变.13例血沉均增快,其中10例血沉大于50 mm/1 h,8例C反应蛋白升高,1例正常,4例未查;9例行肌酶检查,其中2例轻度升高;7例行肌电图检查,2例可见肌源性损害,5例正常.对患者的肱二头肌进行活检,标本进行组织学染色和酶组织化学染色.结果 13例患者均有Ⅱ型肌纤维的萎缩,8例肌纤维氧化酶活性出现虫蚀样改变,8例出现肌纤维内脂肪滴增多,3例可见个别不典型破碎样红肌纤维,2例小血管周围可见少量炎细胞浸润.患者经过激素治疗后症状迅速改善,血沉及C反应蛋白显著下降.结论 本组患者的主要临床特点是出现对称性骨骼肌疼痛和血沉加快,多数患者存在C反应蛋白升高,而贫血和颞浅动脉炎发生率不高.骨骼肌常见病理改变为Ⅱ型肌纤维萎缩和虫蚀样氧化酶活性改变,肌纤维内脂肪滴增多和部分患者出现破碎样红肌纤维提示此病常伴随能量代谢异常.
-
D-松醇对晚期糖基化终末产物诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的保护机制
目的 研究D-松醇(D-pinitol)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的作用及其机制. 方法 体外培养小鼠主动脉VSMC,应用AGEs建立VSMC糖基化损伤模型,观察不同浓度的D-松醇对VSMC增殖和迁移的影响,应用CCK-8测定细胞增殖,细胞划痕检测细胞迁移,并测定各组细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-smad2、p-smad3、Asporin等蛋白的表达. 结果 AGEs组与对照组比较,Asporin(40.06±4.50比17.47±0.57)、TGF-β1(55.25±2.07比14.42±2.07)、p-smad2(0.97±0.02比0.47±0.02)、p-smad3(0.45±0.01比0.26±0.02)蛋白表达升高(均P＜0.01);与AGEs组比较,不同浓度D-松醇可明显抑制VSMC的增殖和迁移,并下调TGF-β1、p-smad2、p-smad3及Asporin蛋白的表达,且呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01). 结论 D-松醇可抑制AGEs诱导的小鼠VSMC的增殖和迁移,Asporin可能通过TGF-β/smad通路参与血管平滑肌细胞外基质重构过程.
-
糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响
目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.
-
人白细胞介素10对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用
目的观察重组人白介素10 (rhIL-10) 对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶的影响. 方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES(methoxyphenyl-tetrazolium salt/phenazine ethosulfate)法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.利用p44/p42磷酸化抗丝裂素活化蛋白激酶抗体的蛋白免疫印迹法测定丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达;对照组为未用AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞. 结果 AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用(1.311±0.201 对 0.781 ±0.236, P<0.05).rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(0.783±0.170 对 0.781±0.236, P>0.05).在AngⅡ刺激下,1、10、100 ng/ml的rhIL-10均可抑制血管平滑肌细胞的生长 (分别为0.984±0.172、 0.932±0.134、 0.784±0.097对1.311±0.201, P<0.05).AngⅡ对p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达有显著的增强作用(512±78对100,P< 0.01), 此作用可被rhIL-10抑制 (512±78对329±59, P< 0.01). 结论 rhIL-10可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达.
-
阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的抑制作用
目的 研究阿托伐他汀对体外大鼠主动脉平滑肌细胞钙化(VSMC)的作用.方法 采用组织块培养法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞.细胞分5组,即正常组(常规细胞培养液)、钙化组(加入10 mmol/Lβ-磷酸甘油、1×10-7mol/L胰岛素及50μg/L维生素C钙化培养基)和阿托伐他汀(1 μmol/L、5μmol/L和10μmol/L)组,后者在诱导血管平滑肌细胞钙化之前,分别给予阿托伐他汀1 μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L预处理24 h后,再加入钙化培养基诱导细胞钙化,连续培养14 d.细胞爬片茜素红S染色观察VSMC钙化;比色法测定细胞Ca2+浓度和细胞蛋白质含量,两者之比作为细胞钙沉积含量;比色法测定细胞ALP活力;MTT法检测细胞增殖.结果 阿托伐他汀各组钙结节计数减少,细胞钙沉积含量减少,ALP活力和细胞增殖均降低,并呈剂量依赖性.结论 阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞体外钙化有抑制作用.
-
糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响
目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)mRNA及蛋白表达的影响.方法将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞用不同浓度(100、200、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0、12、24、36 h,采用RT-PCR方法及流式细胞仪检测MIP-1αmRNA及蛋白的表达水平.结果对照组平滑肌细胞内MIP-1α呈弱表达,100、200、400 mg/L AGEs培养平滑肌细胞24 h显著增高MIP-1αmRNA的表达,其电泳条带相对积分吸光度值分别为对照组的1.36、1.75、2.45倍(P<0.05);100、200、400mg/LAGEs孵育24 h后,各组平滑肌细胞MIP-1α蛋白的平均荧光强度分别为197±3、260±6 及375±6,分别为对照组(158±4)的1.24、1.63、2.37倍(P<0.05).400 mg/L AGEs培养12、24、36 h后,各组平滑肌细胞MIP-1αmRNA的表达也明显增高,其电泳条带相对积分吸光度值分别为0 h组的1.52、2.38、2.53倍(P<0.05);400mg/L AGEs孵育12、24、36 h后,各组平滑肌细胞MIP-1α蛋白的平均荧光强度分别为244±5、375±6及 425±3,分别为0 h组(170±5)的1.43、2.21、2.49倍(P<0.05).结论糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进平滑肌细胞MIP-1αmRNA及蛋白的表达.
-
骨髓间充质干细胞对钙化血管平滑肌细胞的调控作用
目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)对钙化血管平滑肌细胞(CSMC)的调控作用.方法 以地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C作为钙化诱导剂(OS)诱导血管平滑肌细胞(SMC)钙化从而建立CSMC模型,采用Von Kossa染色法评估钙化情况.随后将MSC与CSMC以1∶1的比例分别培养于12孔 Transwell板上室和下室,建立MSC干预CSMC模型.继而将SMC分为4组:正常组:正常SMC;钙化诱导剂组:SMC+ OS;钙化细胞组:CSMC;MSC干预组:CSMC+MSC.其中,钙化诱导剂组应用OS培养基培养,其余各组均使用普通培养基培养.干预14d后收集各组SMC,检测碱性磷酸酶(AKP)活性评估SMC钙化情况,Western blot技术检测SMC中Wnt5a及β-catenin蛋白表达. 结果 与正常组比较,钙化诱导后CSMC矿化结节明显增加,且钙化诱导剂组及钙化细胞组AKP活性、Wnt5a及p-catenin蛋白表达水平均明显升高.钙化细胞组与钙化诱导剂组比较,AKP活性、Wnt5a及p-catenin蛋白表达水平有所降低.不论与钙化诱导剂组还是钙化细胞组比较,MSC干预组上述检测指标均明显降低. 结论 MSC与CSMC间接接触可降低CSMC钙化程度,其可能通过旁分泌途径阻断Wnt5a/p-catenin通路从而减轻钙化.
-
法舒地尔抑制血管平滑肌细胞的增殖及其分子机制
目的 观察法舒地尔对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响并探讨其可能的分子生物学机制.方法 选取80～100 g健康雄性SD大鼠30只,取胸腹主动脉血管中膜用贴块法分离、培养VSMC,细胞共分为5组:无血清组、血清组、血清+法舒地尔1 μmol/L干预组、血清+法舒地尔10 μmol/L干预组和血清+法舒地尔100 μmol/L干预组,应用MTT法及伤口愈合实验测定血管平滑肌细胞增殖和迁移,采用流式细胞术测定血管平滑肌细胞的细胞周期和细胞凋亡,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)法测定促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达,并计算Bax/Bcl-2比值,Western免疫印迹法测定Ras、MEK1/2、ERK1/2和Akt蛋白的表达.结果 法舒地尔呈剂量依赖性地抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移、阻断细胞周期从G0/G1期向S期进展、抑制血管平滑肌细胞早期和晚期细胞凋亡,同时增加促凋亡蛋白Bax mRNA的表达、减少抑制凋亡蛋白Bcl-2mRNA的表达.法舒地尔剂量依赖性抑制Ras通路表达,抑制磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(MEK1/2)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的表达,但对磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)的表达无影响.结论 法舒地尔通过抑制Ras-MEK1/2-ERK1/2通路和促进细胞凋亡发挥抑制血管平滑肌细胞增殖的作用.
-
活性氧诱导血管平滑肌细胞衰老及脱氢表雄酮的干预研究
目的 观察三丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)衰老的诱导作用,及脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)的干预作用.方法 将VSMC分为4组:对照组、t-BHP刺激组(在80 μmol/L t-BHP的DMEM培养液中72 h);10 nmol/L DHEA干预组(给予t-BHP刺激前30 min先加用10 nmol/LDHEA);100 nmol/L DHEA干预组(给予t-BHP刺激前30 min先加用100 nmol/L DHEA).以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标.其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力. 结果 经80 mmol/L的t-BHP持续作用72 h后,VSMC的G_0/G_1期细胞比例和SA-β半乳糖苷酶染色阳性细胞百分比增加[分别为(49.5±5.5)%和(89.4±3.4)%;(3.5±1.2)%和(75.3±4.3)%],差异有统计学意义(P<0.01).表明t-BHP成功诱导了VSMC衰老,而给予100 nmol/L DHEA干预后上述变化改善,为(71.3±3.9)%. 结论 随增龄,活性氧损害的累积可能是VSMC衰老的机制之一,DHEA可能通过抗氧化作用延缓VSMC的衰老.
-
肾素血管紧张素拮抗剂对血管紧张素Ⅱ诱导的基质金属蛋白酶高表达的抑制作用
目的 研究血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-9 mRNA表达的干预作用.方法 体外原代培养雄性Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分为对照组、AngⅡ组、卡托普利组、氯沙坦组和卡托普利与氯沙坦联合应用组.收集各组培养终点细胞,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测所收集标本中MMP-1和MMP-9 mRNA的表达,观察不同浓度AngⅡ和作用时间对血管平滑肌细胞MMP-1、MMP-9 mRNA表达的影响及卡托普利、氯沙坦的干预作用.结果 MMP-1 mRNA表达随AngⅡ浓度增加及作用时间延长而增加(P＜0.05),AngⅡ浓度为10-6mol/L时为显著(P＜0.01).一定浓度的卡托普利(5×10-6mol/L)和氯沙坦(5×10-6mmol/L)可抑制AngⅡ的作用(P＜0.05,P＜0.01);AngⅡ为10-7、10-6、10-5、10-4mol/L时,MMP-9 mRNA表达量分别为0.47±0.03、0.86±0.04、0.94±0.14和1.12±0.19,与对照组0.10±0.04比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).卡托普利和氯沙坦可抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞分泌的MMP-9 mRNA的促进表达作用,以卡托普利和氯沙坦联合应用时抑制作用强;MMP-9 mRNA的表达随AngⅡ作用时间延长而增加;MMP-9 mRNA较MMP-1表达早.结论 AngⅡ可以诱导血管平滑肌细胞分泌的MMP-1和MMP-9 mRNA高表达,且存在剂量和时间依赖性.卡托普利、氯沙坦可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞MMP-1和MMP-9 mRNA高表达;卡托普利和氯沙坦联合应用时抑制作用强;这种抑制作用与作用时间相关.
-
黄芪甲苷对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达的影响
目的 观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)在肿瘤坏死因子(TNF-α)的诱导下,对离体大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响. 方法 (1)采用组织贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,倒置相差显微镜和平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定;(2)以重组大鼠TNF-α(100 μg/L)作为刺激因素,建立体外平滑肌细胞增殖模型,并分组如下:①对照组;②TNF-α组;③TNF α+AS-Ⅳ 0.5 mg/L;④TNF-α+AS-Ⅳ 5 mg/L;⑤TNF-α+ AS-Ⅳ25 mg/L;⑥TNF-α+AS-Ⅳ 50 mg/L;(3)应用CCK-8法检测AS-Ⅳ对TNF-α诱导的VSMCs增殖能力影响;(4)应用实时PCR和Western-blot实验分别检测AS-Ⅳ对VSMCs分泌的MMP 2及其抑制因子(TIMP-2)mRNA和蛋白表达水平的影响. 结果 (1)在TNF-α刺激下,VSMCs增殖活性、迁移距离、侵袭能力与对照组相比均明显提高(P＜0.01),提示TNF-α可促进VSMCs的增殖、迁移,成功建立了体外细胞实验模型.(2)CCK-8实验结果显示,细胞经TNF-α孵育至预定时间后,细胞增殖明显,吸光度(A)值上升(P＜0.01).经药物预处理后,各浓度组细胞增殖均受到抑制,与同期TNF-α组相比A值降低(P＜0.05),且随着药物浓度和作用时间的增加,细胞生长抑制更加明显,提示AS-Ⅳ以时间和浓度依赖方式抑制了TNF-α诱导的VSMCs增殖.(3)实时荧光定量PCR和Western-blot结果显示,TNF-α能够通过诱导act MMP-2的合成,对proMMP-2及TIMP-2的表达无明显影响来改变MMPs与TIMPs的比例,进而促进ECM的降解.经药物干预后,AS-Ⅳ以浓度依赖方式通过下调TNF-α诱导的MMP 2过表达,上调TIMP-2的mRNA及蛋白表达,恢复MMPs与TIMPs的比例,使ECM降解减少,从而实现对VSMCs增殖、迁移的抑制作用. 结论 黄芪甲苷能够以时间和浓度依赖方式抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖、迁移;黄芪甲苷通过下调TNF-α诱导的MMP-2过表达,上调TIMP-2的表达,恢复MMPs与TIMPs的比例,使ECM降解减少,限制了VSMCs的迁移、增殖,从而实现对经皮冠状脉介入治疗术术后再狭窄的防治作用.
-
增龄对大鼠血管平滑肌细胞前胶原α多肽基因转录和蛋白表达的影响
目的 探讨增龄影响下大鼠平滑肌细胞前胶原a多肽基因转录水平和蛋白表达的改变.方法 通过对刚出生的幼龄(对照组)和9个月成年(成年组)健康Wistar大鼠的大动脉进行体外血管平滑肌培养,采用反转录聚合酶链(RT-PCR)半定量和定量技术及免疫印迹法(Western blot)分别检测Ⅰ型和Ⅲ型前胶原α多肽mRNA和蛋白表达.结果 RT-PCR半定量结果显示Ⅰ型前胶原α多肽mRNA在对照组、成年组分别为76.62±1.05、78.37±2.42,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅲ型前胶原α多肽mRNA分别为105.40±2.66、123.10±3.81,两组比较差异亦无统计学意义(P＞0.05);Ⅰ型前胶原α多肽mRNA定量在成年组为4.63±1.03,但与对照组3.13±0.54比较差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅲ型前胶原α多肽mRNA定量成年组、对照组分别为7.68±0.63、6.86±0.41(P＞0.05);Ⅰ型前胶原α多肽蛋白表达分别为0.10±0.03、0.06±0.03(P＜0.05);Ⅲ型前胶原α多肽蛋白表达分别为0.58±0.06、0.40±0.02(P＜0.05).结论 增龄使血管平滑肌细胞前胶原a多肽蛋白表达水平增加,可能影响前胶原的增龄性改变,并参与了血管重构和动脉硬化的发展.
-
碱性成纤维细胞生长因子对大鼠血管平滑肌细胞作用机制的研究
目的 探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)的作用机制. 方法 取用SHR和正常SD大鼠的胸主动脉,运用组织贴块法培养原代VSMC.不同浓度的外源性bFGF(0 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml、60 ng/ml、80 ng/ml、100ng/ml)分别作用于SHR和SD大鼠的VSMC 48 h.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测VSMC增殖.对照组外源性bFGF(100 ng/ml)作用于SHR的VSMC;试验组外源性bFGF(100 ng/ml)+蛋白激酶C(PKC)抑制剂作用于SHR的VSMC,均为48 h. 结果 不同浓度(0 ng/ml、20 ng/ml、40ng/ml、60 ng/ml、80 ng/ml、100 ng/ml) bFGF作用于SD大鼠VSMC 48 h后,吸光度(A)值分别为0.402±0.103、0.605±0.090、0.696±0.131、0.812±0.080、0.901±0.065、1.056±0.078.不同浓度(0 ng/ml,20 ng/ml,40 ng/ml,60 ng/ml,80 ng/ml,100 ng/ml) bFGF作用于SHR大鼠VSMC 48 h后,A值分别为:0.404±0.065、0.507±0.078、0.608±0.057、0.704±0.107、0.812±0.097、0.908±0.032.与对照组比较,试验组加入PKC抑制剂后bFGF对SHR胸主动脉VSMC的促增殖作用减弱,0.402±0.003比0.605±0.004(t=-5.40,P＜0.05);与对照组比较,加入100 ng/ml的bFGF作用48 h后测得的A值为0.929±0.017(t=4.00,P＜0.05). 结论 外源性bFGF对SHR和正常SD大鼠的VSMC均有促增殖效应,且呈浓度依赖性.PKC在外源性bFGF促SHR VSMC增殖的信号转导机制中起着重要的作用.
关键词： 肌 平滑 血管 碱性成纤维细胞生长因子 蛋白激酶C -
丹皮酚抑制血管平滑肌细胞增殖和对增殖细胞抗原及P27kip1表达的影响
目的 探讨丹皮酚对兔血管成形术后再狭窄的作用及其机制. 方法 选用清洁级雄性新西兰大白兔,采用腹主动脉球囊损伤和高脂饲料喂养方法建立腹主动脉粥样硬化模型,对模型兔腹主动脉狭窄段行2次球囊扩张后分为4组,分别为对照组、低剂量丹皮酚组、高剂量丹皮酚组、雷帕霉素组,分别给予生理盐水2 ml· kg-1·d-1、低剂量丹皮酚75 mg· kg-1·d-1、高剂量丹皮酚150mg·kg-1·d-1、雷帕霉素1.25 mg· kg-1·d-1灌胃,每天灌胃1次,连续6周给药.6周后取出腹主动脉,使用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察狭窄动脉的大体形态学及内膜增生厚度.免疫组化检测增殖细胞抗原(PCNA)表达水平,免疫印迹法(Western-blot)检测P27kip1蛋白表达水平.结果 使用丹皮酚、雷帕霉素后内膜增生程度降低.对照组、低剂量丹皮酚组、高剂量丹皮酚组和雷帕霉素组新生内膜面积分别为0.16±0.03、0.09±0.01、0.05±0.01、0.04±0.01;新生内膜面积/中膜面积分别为90.62±3.43、42.30±2.94、33.72±3.19、28.78±6.67;内膜面积增生率分别为(33.3±3.1)％、(23.2±2.2)％、(17.5±1.5)％、(16.2±1.7)％,差异有统计学意义(F值分别为47.98、257.25、74.60,均P＜0.05).对照组、低剂量丹皮酚组、高剂量丹皮酚组和雷帕霉素组PCNA的表达水平分别为0.20±0.04、0.06±0.02、0.05±0.02、0.08±0.02,差异均有统计学意义(F=37.22,P＜0.01);P27kip1表达水平分别为0.47±0.09、0.78±0.20、1.29±0.12、1.83±0.13,差异有统计学意义(F=107.69,P＜0.01). 结论 丹皮酚可能通过抑制PCNA表达,在细胞周期中上调P27kip1蛋白的表达,起到抗血管平滑肌细胞增殖的作用.
-
泛素在肺气肿小鼠骨骼肌中的表达和意义
目的 探讨泛素在肺气肿小鼠模型骨骼肌中的基因和蛋白水平变化及与骨骼肌细胞凋亡的关系.方法 采用单纯熏香烟法制作肺气肿小鼠模型,运用TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术检测上述组织泛素的基因及蛋白水平,结果以光度比值和平均光密度值表示.结果 肺气肿小鼠骨骼肌细胞凋亡增加,骨骼肌泛素的基因及蛋白水平分别为0.48±0.02,0.23±0.05,与正常组骨骼肌泛素的基因水平0.17+0.01和蛋白水平0.14±0.01相比,差异均有统计学意义(t=6.223、4.093,均P＜0.05).结论 肺气肿小鼠骨骼肌细胞的凋亡增加可能与泛素表达水平增加有关.
-
受体活性修饰蛋白-1转染间充质干细胞对兔血管成形术后血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨人受体活性修饰蛋白-1 (hRAMP1)基因修饰的间充质干细胞(MSCs)移植对兔颈动脉粥样硬化并球囊成形术后血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响. 方法 密度梯度离心法加贴壁培养法获得MSCs,并以携带hRAMP1腺病毒和空腺病毒转染MSCs获得hRAMP1基因修饰的MSCs(hRAMP1-MSCs)和空病毒修饰的MSCs(Ad-MSCs).建立动脉粥样硬化狭窄并球囊损伤血管成形术的兔模型,数字抽签随机分为hRAMP1-MSCs组、Ad-MSCs组和对照组,模型建立成功后经球囊局部移植MSCs或PBS,细胞移植后7d,检测MSCs归巢和分化情况,28d检测血管损伤局部RAMP1表达,测量损伤血管新生内膜/中膜面积;检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和细胞凋亡. 结果 细胞移植后7d,hRAMP1-MSCs组和MSCs组损伤血管增生内膜均有CD31和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)分布;细胞移植后28d,RAMP1-MSCs组RAMP1基因表达较Ad-MSCs组和对照组增加,63.0±4.9比28.3±2.5和27.2±7.2,差异有统计学意义(均P＜0.05),而Ad-MSCs组和对照组间RAMP1基因表达差异无统计学意义(P＞0.05);细胞移植后28d,在各组增生内膜细胞中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达均阳性,而hRAMP1-MSCs组内膜厚度低于Ad-MSCs组和对照组(P＜0.05),Ad-MSCs组亦低于对照组(P＜0.05),同时hRAMP1-MSCs组增殖细胞核抗原(PCNA)增殖率也低于Ad MSCs组和对照组(均P＜0.05),而Ad-MSCs组的增值率亦低于对照组(P＜0.05);细胞移植后28 d hRAMP1-MSCs组凋亡率高,对照组凋亡率低(均P＜0.05). 结论 基因修饰后的干细胞治疗可能更有效地抑制内膜增生,从而降低血管成形术后再狭窄的发生.
