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ELlSA法检测抗-HIV实验中灰区设置的探讨
人类免疫缺陷病毒(HIV)感染标志物的检测是采供机构对献血标本进行血液筛查的法定项目之一.在用ELISA方法测定HIV抗体时,是根据临界值(Cut-Off值)来判断是否有反应性,并决定相应的血液是否能用于临床.在计算临界值时,常设置灰区,希望以此提高试剂的敏感度,淘汰处在弱阳性甚至"窗口期"的标本,而灰区设置的范围并没有统一的设置标准,各实验室自行设置.那么设置灰区是否能提高对抗-HIV检测的敏感度?笔者对此进行了探讨,现报告如下.
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两种方法检测梅毒的比较
梅毒是严重危害人类健康的疾病之一,近年来梅毒的发病率呈上升趋势,在一些高危人群中尤为严重.人体受梅毒螺旋体侵袭后,血清中可产生非特异性反应素抗体和特异性抗体,目前广泛用于临床筛查的血清学方法是检测非特异性抗体,主要试验有甲苯胺红血清试验(TRUST)和快速血浆反应素试验(RPR)法[1];而梅毒螺旋体抗原血清学试验如梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)法等,大多作为确证试验.由于TRUST试验具有较高的假阳性率[2],近年来国内外开始采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清梅毒螺旋体抗体,笔者对两种实验方法进行了对比分析,现将结果报告如下.
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无偿献血者梅毒检测方法的探讨
我国血站对献血者血液的梅毒检测普遍采用快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和甲苯胺红试验(TRUST)法作血清试验,由于该两项试验的非特异性,检测结果常出现生物学假阳性[1].按有关规定,采供血机构应将检测异常结果及时反馈给无偿献血者,以便及时得到诊治.由于相当一部分梅毒检测结果属于假阳性,除了造成了一定比例的血液浪费外,把这样的检测结果反馈给献血者,势必给献血者带来精神压力,甚至造成家庭纠纷.笔者对街头无偿献血者梅毒反应素阳性样本用酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)法作了确证试验,现报告如下.
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人类免疫缺陷病毒抗体确证试验假阳性1例分析
目的:通过对1例人类免疫缺陷病毒( HIV)抗体确证试验结果假阳性者进行随访检测分析,探讨HIV抗体确证试验技术在实际工作中存在的问题和解决的方法。方法:对1例受检者进行HIV抗体筛查和确证试验,并于4周、8周和12周随访检测,后两次随访进行HIV-1病毒载量检测以及第四次进行CD4+T淋巴细胞检测。结果:4次HIV抗体检测结果免疫印迹试验带型均为gp160、gp120、p24;后两次病毒载量结果均为TND,第四次CD4+T淋巴细胞检测结果为885 cells/μl,结合流行病学资料,终判定HIV抗体阴性。结论:随着HIV抗体确证试验结果不确定样本不断增多,检测者要格外谨慎判断处于临界状态的样本,必须结合流行病学资料分析及随访检测,才能给予准确的检测报告。
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献血者抗-HCV检测及确认结果研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)全球感染率约2.35%,慢性感染人口约有1.6亿[1]。我国 HCV 的感染率为3.2%[2]。 HCV的传播途径主要是因输血或血液制品,有关调查研究显示随着输血量的增大,输血后丙型肝炎感染的危险性随之增大[3]。因此,如何更好的提高HCV检出的灵敏度、减少漏检、保障血液安全一直是人们注意的焦点。但在低感染率人群中,间接酶联免疫( ELISA)法检测丙肝抗体(抗HCV)存在较高的假阳性率。血站目前多数采用两遍ELISA法对血液进行抗-HCV的检测,其反应性样本确证阳性率较低,约30%左右;单试剂反应性样本和灰区反应性样本的阳性率则更低,这使得很多献血者被误淘汰,因此,近几年越来越多的输血领域学者在关注献血者归队问题[4,5]。故为了避免假阳性结果对献血者心理造成不良影响及减少献血人员的流失,对初筛结果做进一步确认的重要性也日益突出。同时,阴性样本经核酸检测的确证试验发现也存在一定的漏检率。本文将对丙肝抗体的确认情况研究进展综述如下。
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HIV抗体筛查与确证试验结果对比分析
目的 对比分析HIV抗体检测中筛查试验阳性与确证试验结果的不一致性,为艾滋病检测判定提供经验及参考.方法 对汕头市CDC2014-2017年在HIV抗体检测中筛查试验阳性、确证试验判为阴性或不确定者,从标本来源、筛查策略和检测结果及确证试验抗体带型等进行分析.结果 2014-2017年HIV筛查试验呈阳性病例中,确证试验中未达阳性的333例,其中阴性206例,不确定127例;标本来源为无偿献血者占比大(50.2%);对32例不确定病例随访复检后阴性23例、阳性7例、仍不确定2例;仅7.0%的阴性病例3次筛查试验全为阳性,而所有阳性病例的3次筛查试验全为阳性;92.9%的单独p24带型的不确定病例终判为阴性;50.0%的含有gp160带型的不确定病例终判为阳性.结论 3次筛查试验若均呈阳性,则该病例终结果可能为阳性;带型为单独p24的不确定结果,随访复检中很可能为阴性.
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2007-2016年南平地区无偿献血者HIV试验结果及感染状况分析
目的 掌握南平地区无偿献血人群中HIV感染状况,为本地区无偿献血者血液检测和招募提供必要的参考依据.方法 对南平地区2007-2016年206 659份无偿献血者血液标本进行HIV检测,对其中26例HIV确证试验阳性的献血者进行流行病学调查分析.结果 2007-2016年南平市无偿献血者HIV确证试验阳性率为1.3例/万人;性别、年龄、地域和献血形式对无偿献血者HIV感染率无明显影响;献血史和职业对无偿献血者HIV感染率有明显影响,初次献血者感染率较高,农民和商业服务人群感染率较高;再次献血者中有2例合并梅毒感染,有1例在确证试验呈阳性前有3次ALT检测不合格献血记录.结论 本地区无偿献血人群HIV感染率低于全国HIV平均感染率;高危人群献血、检测方法及技术的局限性对临床用血安全的影响大.
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献血者HBV、HCV、HIV检测模式探讨
目的:对献血者样本进行HBV、HCV、HIV的ELISA检测、NAT检测和确证试验,在保证血液安全的前提下,选择佳的献血者HBV、HCV、HIV的检测模式。方法2003年9月1日至2014年8月31日九江血站采集的无偿献血样本共43473例,用两种ELISA试剂进行HBV、HCV和HIV检测,检测阴性样本和单试剂阳性的样本进行NAT检测,单试剂样本分别进行确证试验。结果42161例ELISA 阴性样本有75例NAT阳性,阳性率0.18%;45例HBV单试剂阳性样本有7例NAT阳性,有2例确认试验阳性(其中1例NAT阳性);18例HCV单试剂阳性样本NAT未检出阳性,确证试验5例不确定;15例HIV单试剂阳性样本NAT未检出阳性,确证试验1例不确定,追踪为阴性。结论开展NAT检测十分必要,但NAT检测不能完全代替ELISA检测,献血者的HBV、HCV、HIV检测模式选用一种ELISA试剂加一种NAT试剂检测能大限度地防止阳性样本的漏检,更好地保障血液安全。
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丙肝检测单试剂阳性献血者的分析
目的:分析九江地区献血者丙肝ELISA检测不合格标本,了解丙肝试剂的使用情况,探讨丙肝ELISA检测灰区设置的必要性和单试剂检测阳性献血者的回归问题。方法2013年1月-2015年12月本地区无偿献血标本用2种丙肝ELISA检测,阴性标本再进行核酸检测,单试剂阳性的标本进行核酸检测和丙肝确认试验。结果2种抗-HCV ELISA试剂不相符合率高达53.88%(125/232),但2种试剂无统计学差异;125份单试剂阳性的标本中有5份(4.0%)确认试验为阳性。结论丙肝ELISA检测灰区设置有必要性,但设置的范围有待于进一步的探讨;抗-HCV ELISA检测单试剂阳性标本假阳性高,我们应根据本站的实际情况,制定反应性献血者屏蔽和回归的方案,既大限度地保证血液安全,同时减少不必要的血液资源浪费。
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泉州市82例HIV抗体初筛阳性孕产妇的复检与确证结果分析
目的 及时发现孕产妇HIV感染状况,为促进母婴阻断工作提供依据.方法 用ELISA和硒标对82份孕产妇HIV抗体筛查阳性样品进行复检,两项均阳性或一阴一阳进行确证检测,检测结果结合流行病学资料对孕产妇HIV感染特征进行分析.结果 82份孕产妇HIV抗体筛查阳性样品经复检和确证39份阳性,阳性率为47.6%.阳性样品的ELISA和硒标均阳性,其中ELISA的S/CO值大于10的38份.确证结果阳性带型以全带型和次带型为主,占97.4%(38/39),不确定结果10份,带型多数为p24带.阳性孕产妇多数是流动人口,受教育程度偏低,职业以家务或待业为主.结论 HIV抗体的早期检测和早期诊断对及时发现和排除孕产妇HIV感染、阻断母婴传播、防止医源性感染具有重要意义,特别是流动人口孕产妇的监测.
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探讨化学发光法(CLIA)检测梅毒特异性抗体对梅毒进行筛查的可行性
梅毒是一种慢性传播性性病,主要由苍白密螺旋体引发产生,能够通过胎盘传给新生儿.梅毒感染后可能侵犯人体皮肤黏膜、心血管、神经系统甚至全身组织、器官,也可能很长时间内都没有明显的症状出现[1].由此可见,梅毒的筛查具有十分重要的临床意义.目前国内实验室梅毒螺旋体抗体确证试验主要为TPPA,常见的筛查方法主要为酶联免疫法(ELISA),但是ELISA法检测过程中受干扰因素多,操作步骤繁琐,易出现假阳性结果,而化学发光法(CLIA)属于一种新型的筛查方法,应用尚不广泛.本次为了探究CLIA检测梅毒特异性抗体对梅毒进行筛查的可行性,我中心特做了本次调查研究,现将结果汇报如下:
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几种耐药菌的检测与治疗
当前抗生素的耐药性日趋严重,导致治疗失败、感染复发、延长住院治疗时间等一系列问题的发生,所以检测耐药菌是当务之急.检验科细菌室开展了几项新的细菌耐药实验:超广谱β-内酰胺酶(ES-BL)确证试验、耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)(MRA)检测试验、肠球菌高水平耐氨基糖苷类(HLAR)扩散筛选试验,现总结如下:
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ESBLs检测试验两种药敏纸片的比较
由于近年两种抗生素的大量应用,其对革兰阴性苗的耐药性有所不同,为此我们对两种纸片检测的β-内酰胺酶初筛与确证试验结果进行比对分析,以寻找其差异性.通过对我科三年来所分离到的分离的100株大肠埃希菌株与100株肺炎克雷伯菌株按NCCLS新规则进行ESBLs的初筛与确证试验.
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持续高烧患者HIV抗体检测假阳性一例
我们在对住院病人进行HIV抗体检测中,遇到一例用金标层析法检测为阳性,用酶联免疫法(ELISA)检测为阴性的标本.用蛋白印迹法(WB)确证试验,确认结果HIV抗体阴性.现报告如下:
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1 352例皮肤性病门诊患者梅毒血清学试验结果分析
我科选用快速血浆反应素环状卡片(RPR)试验为筛查试验,并作为病人疗效观察的主要指标,梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)为特异性确证试验,对近7年1 352例梅毒患者均做RPR及TPHA检测,其结果结合临床体征、病史确诊梅毒患者192例,现将结果分析如下.
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2011-2013年广西梅毒实验室血清学检测质量结果分析
梅毒诊断主要依据血清学试验。非梅毒螺旋体抗原血清试验主要用于梅毒筛查、疗效观察、复发或再感染的指针,梅毒螺旋体抗原血清试验是梅毒的确证试验。1为了解并提高广西性病实验室梅毒血清学检测水平和质量状况,我所依据《临床实验室室间质量评价要求》2开展全区梅毒实验室室间质评活动,现将结果报道如下。
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微柱凝胶法在不规则抗体筛查中的应用
2008年7月~2010年12月,我们采用微柱凝胶法对3178例拟行治疗性输血和手术备血患者行输血前抗体筛查,现将结果报告如下.资料与方法:3 178例拟行治疗性输血和手术备血患者,男1 742例,女1 436例;年龄1~75岁.不规则抗体检测方法:向标记好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3个微柱凝胶反应室内分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体鉴定谱细胞悬液各50 μl,再向对应室内分别加入受检血清25μl,置37℃恒温箱中孵育15 min取出,迅速放于专用离心机中,1 030 r/min离心10 min,离心结束后于白色背景前观察结果,红细胞全部沉于微柱底部为阴性,聚于微柱上面或凝胶中为阳性.筛选阳性标本,间接抗人球蛋白法行不规则抗体确证试验.确定为阳性的标本采用微柱凝胶法行抗体特异性鉴定.
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受血者不完全D抗原1例
患者男,25岁。于2002-12因车祸在淄博某医院就诊以“左股骨、胫骨骨折”行“钢板内固定术”,术后伤口不愈合,左下肢内翻、内旋畸形,膝关节不能屈曲。2004-02就诊于我院。检查:左膝关节内翻内旋畸形,左下肢肌肉萎缩,股骨外侧切口瘢痕长约30cm;X线片示左胫骨畸形愈合,以“左胫骨、腓骨近端骨折畸形连接、膝内翻畸形”收入我院骨创伤二科择期手术矫正治疗。血型鉴定为O型,抗-D为阴性,进一步做Rh确证试验,确定为不完全D抗原。
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2例肺结核合并HIV抗体不确定样本的跟踪检测
目的 通过2例肺结核合并HIV抗体不确定样本的跟踪检测,探讨对感染合并不确定样本进行核酸检测的必要性,为检测策略的完善和应用推广提供依据.方法 对2例肺结核合并HIV抗体不确定者跟踪检测,在首次、4周、8周分别进行3次HIV抗体确证检测,在第8周同时进行病毒核酸检测.结果 病例1∶3次HIV抗体确证试验,带型均不能判定为阳性,第3次同时进行病毒核酸定性为阴性,判定为HIV-1抗体阴性.病例2∶3次HIV抗体确证试验,带型在第3次出现进展,核酸定性阳性,核酸定量12000copy/ml,判定为HIV-1抗体阳性.结论 对感染合并HIV抗体不确定样本,进行核酸检测进一步明确诊断非常必要.
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抗-TP ELISA两步法检测反应性与确证结果对比研究
目的 评价ELISA两步法用于献血者血液抗-TP筛检有反应性标本与确证试验结果符合性,了解用于献血者血液筛查的3种国产两步法TP-ELISA检测试剂的特异性,探讨TP-ELISA假阳性献血者归队方案.方法 对留取的127份TP-ELISA呈反应性的标本采用TPPA法进行确证,并比较3种TP-ELISA试剂阳性结果的确证阳性率.结果 60份2种试剂(3种ELISA中的任意两种试剂)检测均阳性的标本中,TPPA阳性的56份;67份单试剂(仅其中1种ELISA)阳性标本经TPPA确证阳性6份,3种TP-ELISA试剂阳性结果的确证阳性率分别为73.08%、69.51%、68.91%,经统计学分析,差异无统计学意义.结论 3种国产TP-ELISA两步法试剂的特异性无差异;单试剂检测存在漏检的可能,采用ELISA试剂联合检测能防止抗-TP漏检.TP-ELISA假阳性献血者可通过确证试验使阴性献血者归队.