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恶性黑素瘤的新动态(一)
恶性黑素瘤(malignant melanoma,MM),简称恶黑,是一种具有攻击性、治疗难度很大的恶性黑素细胞肿瘤,已成为一种威胁人们健康的恶性疾患.紫外线的照射、浅肤色、发育不良痣综合征及家族史等状况,为发生MM的高危因素.遗传学及环境对MM发生的影响已成为当今研究的热点.避免紫外线(UV)照射、监视高危人群有助于降低MM的发病率,对原发性病灶进行活体组织检查,对引流淋巴区的淋巴结进行活检,有利于MM的确诊和分期判断.MM有许多亚型病变需要进一步了解.关于MM的治疗,首选早期手术切除,而辅助疗法对MM效果有限.对有全身性转移者的治疗是一项严峻的挑战,至今还缺乏理想的治疗手段.
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Bowen病合并恶性黑素瘤1例
患者男,77岁.左侧腰部斑块10年.左中下腹黑褐色斑疹4年,同时全身阵发性皮肤瘙痒15年.皮损组织病理诊断:①Bowen病;②恶性黑素瘤.经手术治疗后好转.
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恶性黑素瘤全身转移致死1例
患者女,53岁,农民.因左手食指黑色斑块4年,上肢躯干多个黑色小结节3月余,伴心慌、气喘、背部疼痛半月余,于2000年8月2日来我科就诊.患者1996年因干活时不慎左手指外伤,到当地卫生所处理包扎,并用抗生素治疗,手指处逐渐发黑,不痛,伤口不能完全愈合,当地医院局部手术切除末端手指,伤口愈合后1月余,局部出现黑色丘疹,逐渐增大,服用多种抗生素和外敷中药治疗无效.3年内先后手术切除4次(未行组织病理检查),仍反复发作,2000年1月锁骨处出现结节,随后上肢、躯干部出现多个黑色结节.
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生存素反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤A375细胞生物学行为的影响
目的 研究生存素反义寡核苷酸(AS-ODN)经脂质体介导转染对A375细胞增殖、凋亡的影响.方法 合成生存素硫代反义寡核苷酸(AS-ODN),脂质体携带转染人恶性黑素瘤A375细胞.采用台盼蓝计数、软琼脂克隆形成试验、电镜、流式细胞仪检测AS-ODN对A375细胞增殖及凋亡的影响.通过裸鼠致瘤实验观察AS-ODN对A375细胞动物体内增殖的抑制作用.结果 生存素反义寡核苷酸能降低G2/M期细胞百分比,诱导细胞凋亡发生,明显抑制A375细胞的生长和克隆形成,裸鼠体内A375细胞恶性增殖潜力下降.结论 脂质体介导生存素AS-ODN能有效抑制A375细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡.
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Hpa-ASODN转染裸鼠黑素瘤移植瘤中VEGF和bFGF蛋白的检测
目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(Hpa-ASODN)对裸鼠移植瘤中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的影响.方法 以人恶性黑素瘤A375细胞株及Hpa-ASODN转染A375细胞株建立裸鼠体内移植瘤模型,采用免疫组化检测肿瘤组织Hpa-ASODN,VEGF和bFGF蛋白的表达.结果 Hpa-ASODN转染后裸鼠移植瘤VEGF和bFGF蛋白表达低于对照组(P<0.05).结论 Hpa-ASODN可下调裸鼠移植瘤组织中VEGF和bFGF蛋白的表达.
关键词： 恶性黑素瘤 乙酰肝素酶 寡核苷酸类 反义 血管内皮细胞生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 -
乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤裸鼠皮下移植瘤抑制作用的研究
目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 分空白组、无关序列(N-ODN)组、10 μmol/L ASODN组、20μmol/L ASODN组和30 μmol/L ASODN组5组,以脂质体包埋分别转染人恶性黑素瘤细胞株A375,后接种于裸鼠皮下,观察裸鼠移植瘤体积变化,并采用原位杂交、免疫组化法检测移植瘤中乙酰肝素酶mRNA及其蛋白表达的变化.结果 接种6周后,各ASODN组的裸鼠移植瘤体积均显著小于N-ODN组和对照组(P均＜0.05);各ASODN组裸鼠移植瘤中乙酰肝素酶mRNA和蛋白水平均较对照组、N-ODN组显著下调(P 均:0.000).结论 乙酰肝素酶ASODN对人恶性黑素瘤裸鼠皮下移植瘤具有抑制作用.
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乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达
目的 探讨乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达及意义.方法 选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、恶性黑素瘤A375细胞株及15例正常皮肤组织,分别采用原位杂交、免疫组化法检测皮损及细胞株中乙酰肝素酶mRNA及蛋白的表达.结果 A375细胞株及19例(19/30,63.33%)恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶mRNA呈阳性表达,2例(2/30,6.67%)黑素细胞痣皮损中乙酰肝素酶mRNA表达阳性,正常皮肤组织中无1例呈阳性表达;恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常对照组相比,差异均有显著性意义(x12=19.200,P=0.000;x22=25.714,P=0.000).乙酰肝素酶蛋白在恶性黑素瘤、恶性黑素瘤A375细胞株、黑素细胞痣及正常皮肤组织的表达情况与mRNA相一致.结论 乙酰肝素酶mRNA和蛋白的高表达可能与恶性黑素瘤的发生发展有关,有望作为治疗黑素瘤的靶点.
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pU-VEGF-siRNA表达载体的构建及鉴定
目的构建和鉴定针对VEGF的发卡样siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA.方法人工合成一对互补并编码相应短发夹状VEGF-siRNA的寡核苷酸链,将其插入到pSilencerTM 2.1-U6 neo载体中,经测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用电转染方法将构建的重组载体导入人恶性黑素瘤细胞系A375和人结(直)肠癌细胞系LOVO细胞中,用G418筛选得到稳定表达VEGF-siRNA的细胞;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、ELISA法分别检测转染细胞VEGFmRNA和蛋白的表达变化.结果经测序证明pU-VEGF-siRNA序列正确;G418筛选得到稳定表达VEGF-siRNA的细胞;转染pU-VEGF-siRNA载体后,A375和LOVO细胞VEGF mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降(P＜0.01).结论测序结果表明发卡样的VEGF-siRNA真核表达载体构建成功,转染A375和LOVO细胞后获得稳定表达,并可特异性封闭VEGF的表达,为进一步研究pU-VEGF-siRNA载体在恶性黑素瘤治疗中的作用提供了实验基础.
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TRP-1反义核酸转染黑素细胞黑素瘤细胞的光镜及电镜观察
目的观察TRP-1反义核酸真核表达载体转染的黑素细胞及黑素瘤细胞形态学改变, 探讨TRP-1 功能.方法将TRP-1反义核酸真核表达载体转染黑素细胞及黑素瘤细胞,以倒置光学显微镜及透射电镜分别观察细胞显微结构及超微结构的变化.结果光镜下可见 TRP-1反义核酸转染的黑素细胞及黑素瘤细胞树突变短粗,细胞胞体增大,呈上皮样细胞改变;电镜下可见线粒体变大,电子密度降低,溶酶体、脂滴、糖原颗粒增多,细胞核肿胀及凋亡细胞. 结论 TRP-1在黑素细胞及黑素瘤细胞形态学改变中发挥重要作用,本研究为阐明TRP-1基因的功能提供较为全面的形态学证据.
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恶性黑素瘤Survivin和C-erbB-2的检测及其意义
目的检测恶性黑素瘤的Survivin和C-erbB-2及其与临床病理特征的关系.方法应用免疫组化SP法检测72例恶性黑素瘤、61例瘤旁组织、22例黑色素细胞痣和20例正常皮肤组织中Survivin和C-erbB-2蛋白.结果恶性黑素瘤Survivin蛋白阳性率为59.7%,明显高于瘤旁组织3.3%,黑色素细胞痣4.5%和正常皮肤组织0%(P均<0.01).Survivin阳性与转移状况和组织学分级有显著相关性.恶性黑素瘤无转移组和Ⅰ级分别明显低于转移组和Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级(P均<0.05).恶性黑素瘤C-erbB-2蛋白阳性率为68.1%,明显高于瘤旁组织8.3%,黑色素细胞痣5.6%和正常皮肤组织2.8%(P均<0.01),C-erbB-2阳性与临床病理特征无明显相关性.Survivin在C-erbB-2阳性和阴性患者中阳性率分别为69.4%和39.1%,两者间有显著性差异(P<0.05).结论 Survivin和C-erbB-2蛋白在恶性黑素瘤组织中水平上调,提示两者对恶性黑素瘤发生发展起重要作用.恶性黑素瘤中Survivin蛋白水平与肿瘤转移和组织学分级有关,Survivin可能为临床判断恶性黑素瘤转移和评估预后的有用指标.
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皮肤黑素瘤中MicroRNA-149-3p的表达及与GSK-3α和Mcl-1相关性分析
目的 研究miR-149-3p在皮肤黑素瘤组织中的表达情况及其与GSK-3α和Mcl-1的相关性,探讨p53-miR-149-3p-GSK3-α-Mcl-1通路在皮肤黑素瘤发生、发展中的作用.方法 应用原位杂交法检测89例皮肤黑素瘤和19例痣细胞痣患者病变组织miR-149-3p表达,运用免疫组化法检测皮肤黑素瘤组织中GSK-3α和Mcl-1表达.结果 miR-149-3p在皮肤黑素瘤组织中阳性率为68.5％,在痣细胞痣组织中阳性率为26.3％,两者差异有统计学意义(P＜0.05);皮肤黑素瘤组织中miR-149-3p与GSK-3α的表达、GSK-3α与Mcl-1的表达均呈明显负相关性(P＜0.05).结论 miR-149-3p在皮肤黑素瘤组织中高表达,提示其与黑素瘤的发生发展有密切关系. miR-149-3p与GSK-3α和Mcl-1的表达有明显的相关性,提示p53-miR-149-3 p-GSK-3α-Mcl-1通路存在于人皮肤黑素瘤组织中,可能对黑素瘤细胞的凋亡有重要的影响,其中miR-149-3p作为一种黑素瘤的促癌基因,有望成为一种皮肤黑素瘤有效的生物学标记和治疗靶点.
关键词： 恶性黑素瘤 miR-149-3p Mcl-1 -
一氧化氮在血管内皮生长因子诱导恶性黑素瘤细胞增殖机制中的研究
目的观察血管内皮生长因子(VEGF)过度表达对恶性黑素瘤细胞株A375增殖的影响,研究一氧化氮在其中所起的作用,以明确VEGF的作用机制.方法 VEGF165 cDNA经电穿孔转染A375细胞,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫酶联吸附实验(ELISA)检测转染前后A375细胞VEGF的mRNA和蛋白表达,应用细胞计数和MTT法比较转染组和对照组A375细胞增殖能力和活性,用硝酸还原酶法检测A375细胞转染前后培养上清中一氧化氮含量,并应用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)观察A375细胞转染VEGF165 cDNA后的增殖情况.结果转染VEGF165 cDNA后48 h、72 h和96 h A375细胞VEGF mRNA分别为0.48±0.05,1.27±0.07,1.24±0.01,较转染前的0.24±0.05明显增加(P<0.05);VEGF蛋白表达和一氧化氮水平也呈相同的变化趋势(P<0.05);转染VEGF165 cDNA后A375细胞增殖能力较未转染组明显增强(P<0.05);L-NAME可剂量依赖性地抑制转染后的A375细胞增殖活性(P<0.01).结论内源性的一氧化氮在VEGF促进A375细胞增殖中起重要作用.
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酪氨酸酶相关蛋白-1的基因克隆表达及纯化
目的克隆TRP-1编码基因,表达并纯化TRP-1蛋白.方法通过RT-PCR方法扩增TRP-1编码基因,克隆至pUC19载体并测序,再亚克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达TRP-1/GST融合蛋白,分析鉴定表达蛋白的可溶性,并用谷氨酰胺树脂柱纯化表达的蛋白.结果①从培养的人黑素细胞中扩增出编码TRP-1的cDNA序列,序列测定证实与文献报道的序列一致;②成功构建了GST融合表达载体pGEX-4T-1/TRP-1;③表达了TRP-1/GST融合蛋白;④得到纯化的TRP-1/GST融合蛋白.结论人TRP-1基因的克隆成功及TRP-1/GST融合蛋白的表达与纯化,为进一步探索TRP-1抗原表位打下了基础.
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TNF相关的凋亡诱导配体及其受体与恶性黑素瘤的凋亡
TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(TRAILR)是近年来很受关注的一组凋亡相关分子,目前发现的该家族成员包括TRAIL和它的四个受体.恶性黑素瘤细胞表面表达TRAIL和TRAILR,并可以被其诱导凋亡.由于TRAIL仅能诱导转染细胞或肿瘤细胞凋亡,对正常的细胞没有细胞毒作用,因此在恶性黑素瘤的治疗中具有良好的应用前景.
关键词： 恶性黑素瘤 TNF相关的凋亡诱导配体 凋亡 -
恶性黑素瘤主动特异性免疫治疗进展
近年来,基因工程技术及细胞因子研究方面的重大进展,为肿瘤细胞疫苗的研究提供了科学依据,动物实验及临床应用,显示了强的免疫反应,取得了惊人的临床反应[1,2],半抗原修饰的自体黑素瘤细胞疫苗(Autologous Hapten-Modi-fied Melanoma Vaccine)及多价黑素瘤细胞疫苗(Polyvalent Melanoma Cell Vac-cine,PMCV)的临床应用,产生了特异免疫反应及肿瘤消退[3～7].主动特异性免疫治疗(Active Specific Immunotherapy,ASI)对黑素瘤的治疗已被肯定.本文对黑素瘤主动特异性免疫治疗的临床反应,免疫反应及预后因素等方面予以综述.
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恶性黑素瘤治疗研究现状
我国恶性黑素瘤(MM)发病率较低,对治疗方法的探讨及认识也相应较西方发达国家落后.随着MM在世界范围内发病率的迅速上升,要求人们采取有效的诊治措施加以对待,本文对近年有关MM临床治疗的进展作简要综述. 一、手术治疗手术治疗在今后相当长的时期内仍将是I、Ⅱ期MM治疗重要的手段,正确合理的手术方式直接影响着患者的预后及生存质量.通过近20年大规模的国际性研究,对MM的手术切除范围及局部淋巴结处理已获得了新的认识,这也是MM外科手术治疗中重要的两个问题.
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59例恶性黑素瘤误诊临床分析
报告59例恶性黑素瘤(CM)临床误诊情况,其中皮肤科误诊5例(误诊率29.4%),其它科室误诊54例(误诊率57.4%).59例CM术前诊断"包块待查"占首位,其次为"慢性溃疡、皮肤肿瘤、色素痣"等.皮肤科医生的误诊率低于非皮肤专业医生,但二者的误诊率均高于国外报道.目前为止,活检术仍然是具实用性及权威性的诊断工具,提高临床医生对黑素瘤的认识及警惕性,加强恶性黑素瘤诊治方面的继续教育尤为重要.
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TRP-1编码基因反义核酸对良恶性黑素细胞凋亡的影响
目的观察TRP-1反义核酸对黑素细胞及恶性黑素瘤细胞凋亡的影响.方法将TRP-1反义核酸真核表达载体转染至黑素细胞及恶性黑素瘤细胞,以透射电镜及流式细胞仪分别观察细胞的凋亡情况.结果电镜下可见各期凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞仪检测表明TRP-1反义核酸转染黑素细胞及空载体转染对照组黑素细胞的凋亡率分别为24.4%及1.2%,TRP-1反义核酸转染的恶性黑素瘤细胞及空载体转染对照组恶性黑素瘤细胞的凋亡率分别为7.0%及2.2%.结论TRP-1基因在维持良、恶性黑素细胞生长方面发挥重要作用,其反义核酸能明显促进良恶性黑素细胞的凋亡.
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胸腺肽肠溶胶囊治疗白癜风的疗效观察
1 资料和方法1.1 临床资料 共入选46例,均为本科2005年2月～2007年5月门诊患者,符合白癜风诊断标准[1],年龄4～67岁者入选.排除标准:合并甲状腺疾病、恶性贫血、阿狄森氏病、恶性黑素瘤等疾病或伴有心、肝、肾等脏器功能不全的患者;有胸腺肽和外用糖皮质激素、UVA和补骨脂素的禁忌症者;近3个月内曾应用系统的抗白癜风药物与方法者;治疗期间随意终止治疗或更换药物及方法者;无法判断疗效或资料不全影响疗效判定者.
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临床两次误诊的恶性黑素瘤1例
0 引言部分恶性黑素瘤(MM)无论临床诊断还是病理诊断均有较大难度,尤其是无色素性MM的诊断,在病理学界一直有"凡四不象的切片均需考虑MM"之说. 但只要提高警惕性,多数病例仍能获及时正确的诊断. 本文报告1局部复发转移的MM,对其诊疗过程中的一些重要失误予以分析,引以为戒.
