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脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及糖皮质激素的作用
目的 观察脓毒症状态下大鼠心肌细胞凋亡的变化并探讨糖皮质激素对心肌细胞凋亡的影响及其机制,为临床治疗脓毒症心脏损害提供依据.方法 采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症模型.60只体质量为230 ～ 280 g的Wistar大鼠被随机(随机数字法)分为糖皮质激素实验组(n=30)和对照组(n=30).每组大鼠均行盲肠结扎穿孔术,每组术后4h开始给予舒普深200 mg/kg,2次/d.实验组在以上基础上给予地塞米松0.5 mg/kg.每组随机分为3个亚组(6、24、72 h组),于相应时间点取出各组大鼠心脏,分离左心室,制备单细胞悬液,进行流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.使用SPSS 11.5统计软件系统,所有数据以均数±标准差表示((x-)±s),两组间采取独立样本t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析.同时左心室行免疫组化检测抗细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的表达.结果 激素组大鼠各时间点心肌细胞凋亡率分别较对照组大鼠心肌细胞凋亡率明显减少(F=9.11,t=5.681,P＜0.01)(6 ht =11.416,P＜0.01;24 h=6.217,P＜0.01;72 h t=3.76,P＜0.01);6h对照组大鼠的心肌细胞凋亡率显著低于24 h及72 h对照组大鼠(F=13.254,sig =0.000,P＜0.01;sig=0.004,P＜0.01);24 h对照组大鼠的心肌细胞凋亡率显著高于72 h对照组大鼠(sig=0.039,P＜0.05);激素各组大鼠心肌细胞凋亡率差异无统计学意义(F=2.488,6/24 h sig=0.132,P＞0.05; 24/72 h sig=0.549,P＞0.05;6/72 h sig=0.053,P＞0.05).结论 脓毒症时存在心肌细胞凋亡,以24 h明显,脓毒症时应用糖皮质激素能够减少各个阶段心肌细胞凋亡.
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脓毒症大鼠肠黏膜免疫屏障功能的变化
目的 研究脓毒症对大鼠肠黏膜免疫屏障功能的影响.方法 60只SD大鼠随机(随机数字法)分为对照组(n=15)和脓毒症组(n=45),采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型.模型建立后3 h、6 h和12 h留取回肠黏膜和全血标本.分别进行肠黏膜形态学观察、肠防御素5(RD-5)及肠三叶因子3(TFF_3)Mrna表达水平检测、肠黏膜淋巴细胞凋亡分析,以及外周血中肠源性细菌DNA定性检测.结果 CLP所致脓毒症导致大鼠回肠黏膜明显损害,主要表现为上皮脱落、固有层分离、毛细血管出血和溃疡形成;脓毒症组模型建立后3 h即出现RD-5和TFF_3 Mrna表达显著性减少(与正常组比较,P<0.05),且6 h和12 h组进行下降(与3 h组比较,P<0.05),肠黏膜淋巴细胞凋亡数亦显著增加(P<0.05);同时,脓毒症组全血肠源性细菌DNA扩增全部阳性.结论 脓毒症时大鼠肠黏膜免疫屏障功能显著减退,且随脓毒症的发展而进行性恶化.
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重组人促红细胞生成素对感染致急性肝脏损伤大鼠的保护作用
目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对盲肠结扎穿孔术(CLP)所致大鼠急性肝损伤的保护作用.方法 96只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为:假CLP组(对照组),CLP组(脓毒症组),rHuEPO组.采用盲肠结扎穿孔术复制急性肝损伤的动物模型,rHuEPO组造模后即刻经尾静脉推注rHuEPO 5000U/kg.手术后连续观察24h,选择术后2h、6h、12h、24h为观察点.分别在各时点随机处死大鼠,采用酶联免疫法(ELISA法)检测血清TNF-α、iNOS水平变化;同时检测肝功能(ALT、AST);采用光镜和透射电镜观察肝组织形态学变化.结果 ①各时间点大鼠血清中ALT、AST、TNF-α、iNOS水平的变化为脓毒症组及rHuEPO组上述指标明显高于对照组;rHuEPO组与脓毒症组相比,上述指标明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.01).②光镜及电镜观察发现,脓毒症时肝脏病理学改变为局灶性肝细胞坏死,炎性细胞浸润,小叶间静脉充血扩张,肝细胞核固缩,线粒体、内质网明显减少.rHuEPO组肝脏病理学改变较CLP组明显减轻.结论 rHuEPO能够降低血清中ALT、AST、TNF-α、iNOS水平,发挥调节炎症反应进而改善肝功能的作用,对感染所致急性肝损伤具有一定的保护作用.
关键词： 重组人促红细胞生成素 盲肠结扎穿孔术 脓毒症 急性肝损伤 -
乌司他丁对脓毒症大鼠肠道防御素5 mRNA表达的影响
目的 探讨乌司他丁(ulinastatin,LTI)对脓毒症大鼠肠道潘氏细胞防御素5(rat defemin-5,RD-5)mRNA表达的影响.方法 实验在中山大学医学院药理实验室完成.60只SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组、预处理组及治疗组(n=15).后三组采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation andpuncture,CLP)制作大鼠脓毒症模型.预处理组在CLP前2h经尾静脉注射UTI 25 000 U/kg,治疗组在CLP后2 h经尾静脉注射UTI 50 000 U/kg.于模犁建立后12 h取回肠黏膜,观察其病理改变并以RT-PCR法检测RD-5 mRNA的表达.数据以SPSS 13.0统计软件处理,采用方差分析及LSD-t检验进行数据分析.结果 RD-5 mRNA在脓毒症组显著下降(P<0.05),预处理组及治疗组较脓毒症组有明显升高(P<0.05),预处理组较治疗组明显升高(P<0.05).结论 脓毒症大鼠RD-5mRNA表达明显下降,乌司他丁可显著上调其表达,保护肠黏膜,预防用药较治疗给药可能更有意义.
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ILT4促进脓毒症炎性反应并介导免疫麻痹
目的 探讨脓毒症外周血单核细胞表达ILT4(免疫球蛋白样转录物4)的生物学行为和效应,以及对预后的影响.方法 选取BALB/c ILT4+/+(WT)、BALB/c ILT4雄性小鼠,CLP复制脓毒症模型.用流式细胞仪定量检测CLP术后24h外周血单核细胞ILT4、MHC-Ⅱ表达水平;用ELISA法检测各组0、6、12、24h血清IL-6、TNF-α浓度;并观察168 h内生存预后.结果 CLP术后24h脓毒症小鼠外周血单核细胞高度表达ILT4分子[(1 292.00±143.70)vs.(193.50±52.54),P＜0.05];较WT组ILT4-/-小鼠外周血单核细胞表达MHC-Ⅱ比率明显增高[(49.38±5.66)％vs.(24.25±6.76)％,P＜0.05].CLP术后24h血清IL-6显著增高[(470.75±88.03)vs.(54.25±20.04),P＜0.05],ILT4敲除后很大程度的抑制这一趋势[(241.25±45.10)vs.(470.75±88.03),P＜0.05];但对TNF-α表达无显著性干扰[(50.88±6.38)vs.(53.13±5.49),P＞0.05].且ILT4-/-小鼠CLP术后生存率较WT明显增加(P＜0.05).结论 脓毒症时外周血单核细胞高表达ILT4,与血清IL-6高水平及单核细胞MHC-Ⅱ低表达率相关,导致病死率增加.
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急性肺损伤大鼠肺组织神经导向因子Slit2及Robo4的表达
目的 观察神经导向因子Slit2及Robo4在肺组织的表达并探讨二者在ALI发病中的作用.方法 在南华大学实验动物部将48只SD雄性大鼠随机(随机数字法)分为对照组(n=24)与ALI组(n=24).ALI组采用盲肠结扎穿孔术复制急性肺损伤模型,对照组只开腹关腹,不行盲肠结扎穿孔术,以血清炎症因子浓度、动脉血氧分压(PaO2)、组织水肿、肺部特征性病理改变作为ALI模型成功主要指标.两组又分为术后12、24、48 h3个组,每组8只.取大鼠动脉血测定PaO2;取肺组织测定湿/干质量(W/D)比值,并观察肺毛细血管通透性及组织病理学改变;ELISA检测血清TNF-α水平;RT-PCR测定肺组织Slit2及Robo4mRNA表达,免疫组织化学法观察蛋白表达情况.采用SPSS13.0统计软件行单因素方差分析,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,ALI组致伤后各时间点PaO2均降低,肺W/D比值、肺毛细血管通透性、血清TNF-α水平均升高(P＜0.05),病理观察显示肺组织受损;RT-PCR结果显示ALI组12 h,24h,48 h肺组织Slit2mRNA表达量较同期对照组下降[(0.56±0.13) vs.(0.87 ±0.05),F=41.39,P＜0.05,(0.42±0.10)vs.(0.85±0.07),F=93.54P＜0.05,(0.26±0.08)vs.(0.89±0.09),F=227.05,P＜0.05];ALI组肺组织Robo4 mRNA表达量与同期对照组比较,差异无统计学意义[(0.86±0.07) vs.(0.83±0.05),F=0.695,P＞0.05,(0.82±0.05) vs.(0.89±0.08),F=2.061,P＞0.05,(0.85 ±0.08) vs.(0.86±0.05),F=0.035,P＞0.05];免疫组织化学研究显示Slit2主要表达于内皮细胞膜上,亦可表达于肺上皮细胞胞核及胞浆,Robo4则只表达于内皮细胞膜上;ALI组3个时间点肺组织Slit2蛋白表达量较同期对照组下降[(0.37±0.05) vs.(0.45±0.07),F=6.82,P＜0.05,(0.32±0.06) vs.(0.47±0.09),F=23.54,P＜0.05,(0.28±0.07) vs.(0.46±0.06),F=28.01,P＜0.05];与对照组比较,ALI组肺组织Robo4蛋白表达量差异无统计学意义[(0.53±0.04)vs.(0.52±0.05),F=0.155,P＞0.05,(0.53 ±0.09) vs.(0.50±0.05),F=0.498,P＞0.05,(0.55±0.06) vs.(0.56±0.07),F=0.073,P＞0.05].结论 对照组大鼠肺组织可表达Slit2及Robo4,盲肠结扎穿孔致ALI大鼠肺组织Slit2表达下降,这可能与ALI发病有关.
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己酮可可碱对脓毒症大鼠肝组织生物蝶呤及其合成限速酶表达的影响
目的 探讨己酮可可碱对脓毒症大鼠肝组织生物蝶呤产生的影响及其意义.方法 采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)致脓毒症模型,动物随机分为正常对照组、脓毒症组和己酮可可碱治疗组.分别于CLP后2,8,16 h处死动物,检测肝组织生物蝶呤及其合成限速酶-三磷酸鸟苷环水解酶Ⅰ(GTP-CHⅠ)mRNA及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达的改变,同时监测血清肝功能酶学指标的变化.结果 脓毒症动物肝组织生物蝶呤含量显著升高,GTP-CHⅠ基因表达水平也显著增强,且其改变与局部TNF-α mRNA表达水平呈正相关.给予己酮可可碱治疗后2 h,肝组织生物蝶呤含量、GTP-CHⅠ及TNF-α mRNA表达水平均明显下降(P＜0.05),且血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量也显著降低(P＜0.05).结论 脓毒症早期应用己酮可可碱能有效抑制肝组织生物蝶呤及其合成限速酶基因表达,并且明显减轻脓毒症动物肝损害.
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脓毒症大鼠多器官白介素18表达及其与内毒素血症的关系
目的观察盲肠结扎穿孔术(CLP)所致脓毒症大鼠重要脏器白介素18(IL-18)基因表达的变化规律,并初步探讨IL-18与内毒素血症的关系.方法54只Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=6)、CLP组(n=36)和重组杀菌/通透性增加蛋白(rBPI21)治疗组(n=12),检测动物肝、肺、肾组织中IL-18 mRNA表达水平、内毒素水平和器官功能指标的改变.结果CLP大鼠肝、肺组织内毒素水平迅速升高,于2h达峰值(P＜0.01),48～72h又再度回升;肾组织内毒素水平升高较晚,于12h达峰值(P＜0.01).rBPI21治疗后各组织内毒素水平均显著降低(P＜0.05或0.01).CLP术后各组织中IL-18 mRNA表达显著升高,分别于6～12h达峰值(P＜0.05),其后下降.rBPI21治疗可显著抑制CLP术后12h大鼠肺、肾组织IL-18 mRNA表达(P＜0.05),肝脏IL-18 mRNA表达也降至正常范围.此外,与CLP组相比,rBPI21治疗动物血清谷丙转氨酶、肌酐水平和肺组织髓过氧化物酶活性均显著降低.结论严重腹腔感染后大鼠体内IL-18mRNA表达明显上调,其改变与内毒素的刺激作用密切相关;IL-18作为一种重要的促炎细胞因子参与了脓毒症的发生、发展过程.
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心导管留置术后盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症动物模型的建立
目的 采用留置心导管采血法检测盲肠穿孔术(CLP)后脓毒症模型大鼠血清学指标并观察肝肺组织病理学形态的变化,为用于治疗脓毒症药物的活性评价的动物模型的建立奠定了实验基础.方法 采用改良的心导管留置术结合盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型,术前和术后2、6、12、24、48 h共6个时相点采血,动态浊度法鲎试验检测血浆内毒素(LPS)水平,ELISA法检测血浆TNF-α和1L-6值,全自动血细胞分析仪检测全血白细胞(WBC)及血小板(PLT)值,术后48 h观察大鼠肝、肠、肺的病理学形态改变.结果 术后大鼠的血浆LPS、TNF-α、IL-6及全血WBC水平均于术后6 h后逐渐升高,12 h达到高峰,之后逐渐下降,于48 h达到正常水平;PLT水平6 h内无明显变化,随后逐渐下降,24 h达低值,之后逐渐升高,于48 h接近正常水平;肝、肠、肺组织则呈现以肿胀、灭性细胞浸润为主的病理学改变.结论 通过心导管留置术采血观察CLP模型大鼠血细胞和细胞因子、LPS的动态变化是一稳定可靠的实验方法.
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氯胺酮对急性肺损伤大鼠肺组织HMGB1表达的影响
目的:探讨氯胺酮在盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症肺损伤大鼠中对肺组织HMGB1表达的影响.方法:45只SPF级雄性成年Wister 大鼠随机分为三组:(1)假手术组(sham组)、(2)盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture.CLP)组(CLP组)、(3)氧胺酮干预组(KET组).CLP组和KET组施行盲肠结扎穿孔术.术毕半小时开始给药,KET组给予5%氯胺酮50g/kg,im,q12h;Sham组和CLP组则给予等容积生理盐水a在术后6h、24h、72h各随机处死大鼠5只,分别作为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚组,无菌留取大鼠肺组织、动脉血待测.采用热干法测肺组织湿/干(weVdry,W/D)重比值;光镜下观察肺脏组织形态学变化,并进行中性粒细胞计数:测定各组大鼠不同时问点动脉血氧分压(PaO2);免疫组织化学法(IHC)和逆转录聚合酶链(RT-PCR)法分别检测肺组织HMGB1蛋白和HMGB1mRNA.结果:与CLP组相比,氯胺酮组在CLP术后6h、24h和72h时间点PaO2较CLP组明显增高,而肺组织W/D比值、中性粒细胞计数、HMGB,免疫组化及HMGB.mRNA表达明显降低(P<0.05).结论:氯胺酮能够抑制CLP脓毒症大鼠肺组织HMGB1mRNA和蛋白表达水平,减轻肺组织PMN浸润,减轻CLP诱导的大鼠肺损伤的程度.
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复方高渗盐溶液对脓毒症大鼠的治疗作用
目的 探讨复方高渗盐溶液(HSD)对脓毒症的治疗作用.方法 雄性Wistar大鼠133只,按随机数字表法分为假手术组(n=15)、盲肠结扎穿孔术(CLP)组(n=45)、CLP+生理盐水(NS)组(n=45)、CLP+HSD组(n=28)4组.采用CLP方法制备脓毒症大鼠模型,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余手术步骤相同.4组大鼠术毕均皮下注射0.9％氯化钠30 mL/kg;CLP+NS组、CLP+HSD组分别于术后3h自颈静脉内输注0.9％氯化钠或7.5％氯化钠/6％右旋糖酐70 5 mL/kg (0.4 mL·kg-1·min-1).各组于术后9h、18h观察大鼠生存率.术后0、9、18h监测平均动脉压(MAP),采用酶联免疫吸附试验(EALIS)检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、降钙素原(PCT)的含量.术后18h处死大鼠,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞比例、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,计算肺组织湿/干质量(W/D)比值,并观察肺组织病理学改变.结果 假手术组动物未发生死亡,CLP组9h、18h生存率分别为62.2％、31.1％,CLP+NS组分别为57.8％、35.6％,CLP+HSD组分别为85.7％、64.3％;CLP+HSD组生存率较CLP组及CLP+NS组明显改善(P＜0.05或P＜0.01).与假手术组比较,CLP组及CLP+NS组术后MAP明显下降,血浆TNF-α、IL-1β、PCT水平明显升高;而CLP组与CLP+NS组比较无差异.CLP+HSD组术后9h、18h时MAP、血浆TNF-α、IL-1β、PCT水平较CLP+NS组明显改善[MAP (mmHg,1 mmHg=0.133 kPa)9 h:102±5比94±6,18h:90±2比72±3;TNF-α (ng/L) 9h:284.19±57.18比329.67±45.79,18 h:263.46±42.58比349.68±52.40; IL-1β (ng/L)9 h:219.28±39.21比263.47±32.36,18 h:195.98±39.06比250.10±41.57; PCT(μg/L)9h:2.32±0.37比4.52±0.75,18h:2.89±0.62比5.02±0.84;P＜ 0.05或P＜0.01].术后18h,CLP组及CLP+NS组BALF中性粒细胞比例、肺组织MPO活性及肺W/D比值均较假手术组显著升高,但CLP+HSD组各指标均较CLP组及CLP+NS组明显降低[中性粒细胞比例:0.094±0.019比0.148±0.062、0.151±0.055,MPO (U/g):1.19±0.45比2.31±0.79、2.64±0.69,肺W/D比值:4.02±0.63比5.14±0.59、5.12±0.83,均P＜0.05].光镜下观察,假手术组肺组织未见病理改变;CLP组及CLP+NS组可见淤血、水肿,浸润性炎性改变;而CLP+HSD组肺组织炎性改变明显减轻.结论 HSD可明显改善脓毒症大鼠循环衰竭,调节免疫紊乱,减轻急性肺损伤,并提高脓毒症大鼠生存率,推测其治疗作用是多方面的.
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脓毒症早期大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴超微结构变化与功能的关系
目的 观察脓毒症早期下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴结构及功能的变化,并探讨其相互关系.方法 雄性SD大鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、假手术组和脓毒症组.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症大鼠模型,术后6 h取血并处死动物,检测血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CoRT)以及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平;透射电镜下观察HPA轴的超微结构改变.结果 脓毒症组血浆ACTH、CORT和下丘脑CRH水平均明显高于正常对照组和假手术组[ACTH(pmol/L):5.78±0.36比1.94±0.31、2.51±0.10;CORT(nmol/L):88.48±4.47比22.02±1.62、34.20±2.51,CRH(μg/L):101.92±6.61比61.65±6.05、66.65±4.03,P＜0.05或P＜0.01].透射电镜下观察:脓毒症组大鼠下丘脑粗面内质网囊状扩张、脱颗粒,高尔基体肿胀,垂体ACTH细胞分泌颗粒增多,肾上腺组织脂滴减少.结论 脓毒症早期大鼠HPA轴处于过度激活状态,血浆ACTH、CORT和下丘脑CRH水平明显升高;HPA轴的超微结构明显改变,且与功能变化有密切联系.
关键词： 脓毒症 盲肠结扎穿孔术 下丘脑-垂体-肾上腺轴 透射电镜 -
脑肠肽Ghrelin对脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体1调节作用的研究
目的 探讨脑肠肽Ghrelin对脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体1(PepT1)表达及功能的影响.方法 雄性SD大鼠80只,按随机数字表法分为正常组、假手术组、脓毒症组和Ghrelin干预组4组,每组20只.采用盲肠结扎穿孔术(GLP)制备脓毒症大鼠模型；制模后即静脉给予Ghrelin干预.各组术后20 h随机取10只大鼠,进行小肠黏膜病理观察,实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹试验分别检测PepT1的mRNA和蛋白表达,同时检测小肠上皮PepT1对底物Gly-Sar的摄取浓度；另10只大鼠记录7d生存率.结果 与正常组和假手术组相比,脓毒症组小肠黏膜受损明显,PepT1 mRNA表达(21.43±1.37比23.29±1.24、23.23±1.48)、蛋白表达(7832.55±699.74比13 584.74±360.66、13 152.51±605.72)以及Gly-Sar浓度(60 min:3.23±0.30比6.67±0.51、6.52±0.47)均明显降低(均P＜0.05)；与脓毒症组比较,Ghrelin干预组大鼠小肠黏膜损伤较轻,生存率(40％比20％)、PepT1 mRNA表达(22.73±1.16比21.43±1.37)、蛋白表达(10 506.26±850.59比7832.55±699.74)及Gly-Sar浓度(60 min:4.83±0.32比3.23±0.30)均显著升高(均P＜0.05).正常组与假手术组各指标比较无显著差异.结论 脓毒症大鼠小肠上皮PepT1mRNA及蛋白表达明显下降,机体在基因及蛋白水平下调了小肠上皮PepT1生物学功能；Ghrelin干预对脓毒症小肠上皮PepT1 mRNA、蛋白表达以及摄取能力均有上调作用.
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杀菌-通透性增加蛋白对脓毒症大鼠肝组织致炎与抗炎细胞因子表达的影响
目的:探讨杀菌- 通透性增加蛋白(BPI)对脓毒症大鼠肝组织致炎与抗炎细胞因子表达的影响.方法:采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)致脓毒症模型,动物随机分为正常对照组、脓毒症组和BPI治疗组.分别于CLP后12和24小时处死动物,检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)mRN A及其蛋白表达以及肝功能指标的改变.结果:脓毒症动物肝组织TNF-α及IL-10基因和蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01),其中CLP后12小时组织TNF α蛋白水平升高幅度明显大于IL-10的改变.BPI治疗12小时组TNFα基因及蛋白均显著下降(P<0.05或P<0.01),而IL-1 0则不同程度地升高;同时,治疗组12小时肝功能指标亦明显改善.结论:脓毒症早期应用BPI治疗可明显抑制肝组织TNF-α等致炎细胞因子表达,并上调局部组织IL-10等抗炎细胞因子的产生,从而有助于恢复体内炎症反应平衡与减轻脓毒症所致肝损伤.
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姜黄素对脓毒症大鼠肝细胞的剂量保护效应
目的：观察不同剂量姜黄素对脓毒症大鼠肝细胞的保护作用。方法按随机数字表法将100只雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组、脓毒症组及低、中、高剂量姜黄素干预组（L-cur、M-cur、H-cur组），每组20只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症动物模型；Sham组仅开腹取出盲肠后还纳关腹。L-cur、M-cur、H-cur组于术后即刻腹腔注射姜黄素50、100、150mg/kg，Sham组和脓毒症组给予等量生理盐水。分别于术后2、6、12、24h处死5只大鼠，取肝组织和血液标本，镜下观察肝组织病理改变；用原位末端缺刻标记试验（TUNEL）检测肝细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI），用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清降钙素原（PCT）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平。结果光镜下观察显示，脓毒症组肝组织损伤严重，凋亡细胞增多，且随时间延长损伤程度和凋亡细胞进一步增加；但姜黄素各剂量组损伤程度明显轻于脓毒症组，以中剂量尤甚。Sham组术后各时间点肝细胞AI及血清PCT、TNF-α和IL-1β水平均无明显变化。脓毒症组术后2h起肝细胞AI及血清PCT、TNF-α和IL-1β水平即较Sham组明显升高〔AI：（23.59±2.00）%比（2.02±0.13）%，PCT（μg/L）：2.41±0.21比0.81±0.01，TNF-α（ng/L）：217.28±14.24比80.02±2.26，IL-1β（ng/L）：61.84±3.21比25.78±1.29，均P＜0.05〕，且随时间延长呈逐渐升高趋势，AI于术后24h达峰值〔（52.05±1.31）%〕，PCT、TNF-α和IL-1β均于术后12h达峰值〔分别为（8.68±0.58）μg/L、（314.13±14.39）ng/L、（132.24±2.58）ng/L〕。姜黄素干预后可明显降低脓毒症大鼠肝细胞AI及血清PCT、TNF-α和IL-1β水平，以M-cur组降低尤为显著〔AI：2h为（11.56±0.96）%比（23.59±2.00）%，24h为（30.35±1.20）%比（52.05±1.31）%；PCT（μg/L）：2h为1.13±0.19比2.41±0.21，12h为5.09±0.42比8.68±0.58；TNF-α（ng/L）：2h为124.73±7.47比217.28±14.24，12h为168.68±6.95比314.13±14.39；IL-1β（ng/L）：2h为35.05±1.00比61.84±3.21，12h为84.06±3.42比132.24±2.58，均P＜0.05〕。结论姜黄素能抑制脓毒症大鼠肝细胞炎症反应，阻止肝细胞凋亡，从而对肝脏起到保护作用，以100mg/kg中剂量姜黄素作用强。
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山莨菪碱对脓毒症大鼠肺组织生物喋呤的影响
目的:探讨山莨菪碱对脓毒症大鼠肺组织生物喋呤产生的影响及其意义.方法:采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)致脓毒症模型,动物随机分为正常对照组、脓毒症组和山莨菪碱治疗组.分别于CLP后2、8、16小时处死动物,检测肺组织生物喋呤及其合成限速酶三磷酸鸟苷环水解酶I(GTPCHI)mRNA表达和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA表达的改变.结果:脓毒症动物肺组织生物喋呤含量显著升高,GTPCHI基因表达水平也显著增强,而且其改变与局部TNFα mRNA表达水平呈正相关.给予山莨菪碱治疗后2小时,组织生物喋呤含量、GTPCHI mRNA表达及TNFα mRNA表达水平均明显下降(P<0.05或P<0.01),且肺组织髓过氧化物酶活性也显著降低(P<0.05).结论:脓毒症早期应用山莨菪碱能有效抑制肺组织生物喋呤及其合成限速酶基因表达,并且明显减轻腹腔感染后急性肺损伤.
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依达拉奉对脓毒症大鼠的保护作用研究
目的 探讨依达拉奉及地塞米松对脓毒症大鼠的保护作用.方法 将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松治疗组、依达拉奉治疗组、地塞米松与依达拉奉联合治疗组,每组10只.用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型.各治疗组于术后即刻经阴茎背静脉分别注射地塞米松和(或)依达拉奉各5 mg/kg,假手术组及模型组给予等量生理盐水.于术后12 h采集腹主动脉血,用化学反应法检测血清丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC);取肺组织,采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡情况,并进行病理评分.结果 与假手术组比较,模型组MDA及细胞凋亡指数(AI)升高,而T-AOC水平下降;与模型组比较,各治疗组MDA及AI降低,T-AOC升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且联合治疗组疗效优于地塞米松组和依达拉奉组.模型组大鼠肺组织中肺泡破坏、间质水肿、炎性细胞浸润明显,用药物干预后损害程度降低.结论 依达拉奉可通过减少氧自由基产物,抑制组织中脂质过氧化,从而减轻脓毒症.依达拉奉和地塞米松联合应用对脓毒症有更好的治疗效果.
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脓毒症大鼠肺损伤时基质金属蛋白酶9的变化及乌司他丁的干预作用
急性肺损伤(ALI)是严重脓毒症的常见并发症,病理上表现为肺部大量炎性细胞浸润和肺水肿的形成.基质金属蛋白酶(MMPs)可由多种基质细胞和炎性细胞产生,是一类高度保守的依赖Zn2+和Ca2+的内切蛋白水解酶家族[1],几乎能降解细胞外基质( ECM)的所有成分,在ALI发病机制中起着重要作用.其中MMP-9能降解肺毛细血管基底膜中的ECM成分,使肺毛细血管通透性增加和炎性细胞进一步浸润,在ALI中发挥关键作用而倍受关注[2-3].
关键词： 乌司他丁 基质金属蛋白酶9 脓毒症 盲肠结扎穿孔术 逆转录-聚合酶链反应 -
内皮功能障碍是老龄小鼠感染性休克多器官功能衰竭和死亡的潜在原因：一项盲肠结扎穿孔术小鼠模型的临床前研究
近一项研究利用盲肠结扎穿孔术（CLP）小鼠模型揭示了年龄对血管内皮功能障碍发展的作用，同时比较了在内皮型一氧化氮合酶（eNOS）遗传缺陷中的效果。在体实验包括对存活率和反映器官功能的血浆指标的监测。体外实验包括胸主动脉血管功能的测量，各器官氧化应激和细胞损伤评估，以及测量离体肝线粒体功能。结果显示，eNOS不足和老化均可加剧脓毒症小鼠的死亡率。eNOS遗传缺陷和老龄小鼠表现出较严重的脓毒症多器官功能障碍综合征（MODS）、单核细胞浸润和组织氧化应激。在eNOS遗传缺陷和老龄小鼠的胸主动脉局部检测到严重脓毒症引起的血管损伤与血管内皮功能障碍（功能分析和内皮功能障碍的多个血清标志物证明）。无论在eNOS基因敲除小鼠还是老龄小鼠都存在严重的线粒体功能障碍，对存活组和非存活组动物的比较表明，内皮功能障碍的严重程度可能是CLP小鼠死亡的一个预测因素。因此研究人员得出结论：就其本身而言， eNOS产生不足足以加重脓毒性休克的严重程度。老龄小鼠内皮功能出现障碍，从而影响脓毒症预后。因此，内皮功能障碍可能是早期预测脓毒症老龄小鼠MODS发生率和死亡率的独立危险因素。
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本刊常用的不需要标注中文的缩略语（四）
大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）
盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture，CLP）
脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）
改良经皮扩张气管切开术（modified percutaneous dilative tracheostomy，MPDT）
乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）
Dulbecco改良的Eagle培养基（Dulbecco minimum essential medium，DMEM）
