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Slit/Robo信号与肿瘤
神经导向因子Slit信号早是在神经系统发现,并通过受体Robo家族成员发挥轴突导向排斥作用,近年来的研究表明其在包括肾脏、肺、皮肤等多种组织表达,参与调控正常的组织细胞生理功能,此外,在肿瘤中的研究表明Slit/Robo在肿瘤细胞的表达受到动态调控,从而参与多种肿瘤的发生发展过程.本文侧重于从Slit/Robo结构、Slit/Robo信号在肿瘤细胞中的表达,对肿瘤细胞恶变、增殖、迁移的作用,以及对肿瘤血管再生的影响等几个方面做一综述,探讨Slit/Robo信号的复杂性及其对不同肿瘤发生发展的作用,对其深入研究能够揭示Slit/Robo作为辅助诊断标志和肿瘤治疗靶点的潜在意义.
关键词： 神经导向因子 Slit/Robo信号 肿瘤 综述 -
急性肺损伤大鼠肺组织神经导向因子Slit2及Robo4的表达
目的 观察神经导向因子Slit2及Robo4在肺组织的表达并探讨二者在ALI发病中的作用.方法 在南华大学实验动物部将48只SD雄性大鼠随机(随机数字法)分为对照组(n=24)与ALI组(n=24).ALI组采用盲肠结扎穿孔术复制急性肺损伤模型,对照组只开腹关腹,不行盲肠结扎穿孔术,以血清炎症因子浓度、动脉血氧分压(PaO2)、组织水肿、肺部特征性病理改变作为ALI模型成功主要指标.两组又分为术后12、24、48 h3个组,每组8只.取大鼠动脉血测定PaO2;取肺组织测定湿/干质量(W/D)比值,并观察肺毛细血管通透性及组织病理学改变;ELISA检测血清TNF-α水平;RT-PCR测定肺组织Slit2及Robo4mRNA表达,免疫组织化学法观察蛋白表达情况.采用SPSS13.0统计软件行单因素方差分析,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,ALI组致伤后各时间点PaO2均降低,肺W/D比值、肺毛细血管通透性、血清TNF-α水平均升高(P＜0.05),病理观察显示肺组织受损;RT-PCR结果显示ALI组12 h,24h,48 h肺组织Slit2mRNA表达量较同期对照组下降[(0.56±0.13) vs.(0.87 ±0.05),F=41.39,P＜0.05,(0.42±0.10)vs.(0.85±0.07),F=93.54P＜0.05,(0.26±0.08)vs.(0.89±0.09),F=227.05,P＜0.05];ALI组肺组织Robo4 mRNA表达量与同期对照组比较,差异无统计学意义[(0.86±0.07) vs.(0.83±0.05),F=0.695,P＞0.05,(0.82±0.05) vs.(0.89±0.08),F=2.061,P＞0.05,(0.85 ±0.08) vs.(0.86±0.05),F=0.035,P＞0.05];免疫组织化学研究显示Slit2主要表达于内皮细胞膜上,亦可表达于肺上皮细胞胞核及胞浆,Robo4则只表达于内皮细胞膜上;ALI组3个时间点肺组织Slit2蛋白表达量较同期对照组下降[(0.37±0.05) vs.(0.45±0.07),F=6.82,P＜0.05,(0.32±0.06) vs.(0.47±0.09),F=23.54,P＜0.05,(0.28±0.07) vs.(0.46±0.06),F=28.01,P＜0.05];与对照组比较,ALI组肺组织Robo4蛋白表达量差异无统计学意义[(0.53±0.04)vs.(0.52±0.05),F=0.155,P＞0.05,(0.53 ±0.09) vs.(0.50±0.05),F=0.498,P＞0.05,(0.55±0.06) vs.(0.56±0.07),F=0.073,P＞0.05].结论 对照组大鼠肺组织可表达Slit2及Robo4,盲肠结扎穿孔致ALI大鼠肺组织Slit2表达下降,这可能与ALI发病有关.
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Slit/Robo信号通路在肿瘤发生发展中的作用
分泌型糖蛋白Slit通过结合跨膜受体Roundabout(Robo)发挥生物学活性.Slit/Robo信号通路除了在神经系统中发挥轴突导向作用外,还参与了肿瘤的发生、发展.本文侧重于从Slit/Robo结构、Slit/Robo信号在肿瘤中的表达,Slit/Robo信号对肿瘤新生血管、肿瘤细胞生长及迁移的作用等方面进行综述,为深入研究Slit/Robo信号通路与肿瘤的关系提供参考依据.
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利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能
目的:采用碱性磷酸酶(AP4)标记技术研究netrin-4的神经导向功能和受体结合特征,并评估碱性磷酸酶作为标签分子在真核基因功能研究中的意义.方法:将netrin-4全长及3个结构域编码区cDNA克隆到碱性磷酸酶表达载体APtag4,成功构建真核表达载体AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT,进而在COS7细胞中表达出含有AP标签的融合蛋白,并通过神经组织块培养技术和神经元原代培养技术对其活性进行鉴定.结果:确认了netrin-4的神经突起导向功能.进一步通过对AP标签进行检测,发现netrin-4全长、LNT和NCT可与原代培养的神经元表面相结合,而EGFL不结合,说明神经元表面含有netrin-4受体或结合位点,且可能通过LNT和NCT结构域起作用.结论:netrin-4具有明确的神经突起导向功能,在神经元表面含有结合位点,同时发现碱性磷酸酶标签融合表达技术在真核基因功能研究方面具有一定优势.
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神经导向因子Netrin-1在血管生成中可能的双向作用
Netrin家族以经典的神经导向因子而闻名.但近年来一系列的研究发现在非神经组织中也有netrins广泛表达,提示netrin家族的功能并不像先前理解的那么简单.其中netrin-1在促进和抑制血管生成中可能具有的双向作用无疑是netrin家族新功能中令人关注的.尽管netrin-1在血管生成中的确切作用还存在不少争论,仍加深了我们对神经系统与脉管系统间的密切联系的了解,也为临床心脑缺血性疾病、糖尿病引起的血管和神经病变等的治疗以及抑制肿瘤血管生成提供了新思路.本文综述了netrin-1在血管生成中的可能的双向作用及其潜在的临床意义.
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神经导向因子在缺血肠道及缺氧细胞中的表达及作用
目的:探讨神经导向因子(Netrin-1)在急性肠系膜缺血(AMI)病人肠道组织及低氧条件下人结直肠腺癌(Caco-2)细胞中的表达及其对肠道功能恢复和微血管新生的作用. 方法:采用免疫印迹、免疫组化技术分别检测46例肠系膜上静脉血栓病人缺血肠道Netrin-1表达情况,并分析其表达量与病人主要临床结果之间的关系;培养Caco-2细胞,应用免疫印迹、Real-time PCR和免疫荧光技术检测不同低氧时间下Caco-2细胞Netrin-1 mRNA和蛋白的表达. 结果:预后较好的病人肠道局部Netrin-1表达量明显高于有严重并发症(30 d内死亡、二次手术探查、全肠外营养(TPN)时间＜14 d、脓毒症、需机械通气的ARDS、MODS、SBS)的病人,差异有显著性统计学意义(P＜0.05).同时,Caco-2细胞低氧时间与细胞Nertin-1存在一定相关性,且随着低氧时间逐渐延长,Netrin-1 mRNA及其蛋白表达量逐渐增加. 结论:AMI病人肠道局部的Netrin-1可能参与微血管新生及血管网络的构建而保护已缺血肠道,进而减少肠坏死等并发症,促进肠道功能恢复.
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携带神经导向因子netrin-1基因的重组腺病毒构建
目的:制备并构建神经导向因子netrin-1(NT-1)和EGFP双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续的基因转染做准备.方法:采用基因克隆技术克隆目的基因NT-1,并将目的基因克隆入含有报告基因EGFP的穿梭载体pDC316质粒;构建的质粒pDC316-netrin经酶切及测序鉴定正确后.通过脂质体lipofeetamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGlox_E1.3Cre共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后得到携带鼠NT-1的重组腺病毒Ad5-netrin-CMV-EGFP.应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒.以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.结果:PCR鉴定证实重组腺病毒含有鼠NT-1基因,病毒滴度为5.2×109pfu/ml,EGFP活性检测腺病毒感染阳性细胞率在40%以上.结论:成功制备Ad5-netrin-CMV-EGFP腺病毒,为以后基因治疗研究打下基础.
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尿Netrin-1与NGAL联合检测在成人体外循环术后急性肾损伤早期诊断中的意义
目的 探讨尿神经导向因子-1 (Netrin-1)及中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)联合检测在体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)术后急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)早期诊断中的价值与意义.方法 选择213例在CPB下行心脏手术的成人心脏病患者,CPB结束后第一个12h内每2h采集尿样及血样1次,此后72h内每12h采集1次,对尿中Netrin-1 、NGAL进行定量分析,同时检测相应时间点血清肌酐(Scr)水平,Scr比正常基础水平升高50％以上为发生AKI的标准.结果 术后3d内有40例患者发生不同程度AKI,发生率18.8％,AKI组Scr在CPB术后24 h才开始上升,而尿Netrin-1及NAGL在术后2h均显著升高,术后2hROC曲线下面积分别为0.906、0.901,两者联合检测ROC曲线下面积则为0.958.结论 尿Netrin-1和NAGL可以作为早期诊断CPB术后AKI的敏感性和特异性较高的生物学标志物,两者联合检测可提高AKI早期诊断的效果.
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Netrin-1在糖尿病肾病及糖尿病视网膜病变中作用的研究进展
糖尿病视网膜病变(DR)及糖尿病肾病(DN)是糖尿病的典型并发症.神经导向因子Netrin-1是具有促进神经组织生长发育作用的神经生长因子,具有促进血管生成、抑制炎性细胞迁移和减轻炎症反应的作用.近年来研究发现,Netrin-1在DR、DN患者血清和病变组织上皮细胞中的表达均上调.Netrin-1在糖尿病增殖期视网膜病变患者玻璃体液中表达上调,通过检测糖尿病患者玻璃体液中的Netrin-1因子,可用于早期判断DR的发病.Netrin-1在DN患者中高表达,Netrin-1及其UNC5B受体对DN具有保护作用.
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神经导向因子Netrin-1调节单核巨噬细胞迁移与动脉粥样斑块关系的研究进展
动脉粥样硬化是动脉壁的一种慢性炎症性疾病,单核巨噬细胞在其发生发展中起着关键作用.动脉粥样斑块中单核巨噬细胞迁移能力受损,滞留于斑块内,增加了斑块不稳定性,加速动脉粥样硬化病变的进展.目前研究表明动脉粥样斑块中巨噬细胞分泌的神经导向因子Netrin-1通过与巨噬细胞表面相应受体结合,可以抑制巨噬细胞迁出斑块促进动脉粥样硬化的进展.但在动脉粥样硬化形成初期,血管内皮细胞表达的Netrin-1却被发现对动脉粥样硬化起到保护作用.
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神经导向因子调节海马苔藓状纤维出芽及其与颞叶癫癎相关性
神经导向因子参与神经导向和中枢神经系统发展过程中神经元的迁移,它负责提供目标信息引导轴突沿预定的路径发展.海马苔藓状纤维异常出芽(MFS)是颞叶癫癎患者常见的病理现象,被认为与颞叶癫癎的发病密切相关.近年来研究发现,神经导向因子在MFS的形成中有重要作用,本文主要就目前有关于神经导向因子在颞叶癫癎患者海马苔藓状纤维出芽中的研究进展做一综述.
