首页 > 文献资料
-
ROBO4在上皮性卵巢癌组织和血清中的表达及临床意义
目的 探讨ROBO4在上皮性卵巢癌组织和血清中的表达及其在卵巢癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测110例卵巢癌,54例卵巢良性肿瘤,40例正常卵巢组织中ROBO4蛋白和ROBO4mRNA表达,比较其表达与卵巢癌临床病理特征的关系;并采用ELISA检测卵巢癌、卵巢良性肿瘤和正常人血清中ROBO4表达水平.结果 卵巢癌组织中ROBO4蛋白和ROBO4mRNA表达显著低于正常对照组和卵巢良性肿瘤组(P＜0.05);上皮性卵巢癌血清中ROBO4的表达明显低于卵巢良性肿瘤和正常人(P＜0.05);卵巢癌组织中ROBO4表达降低与卵巢癌FIGO分期、淋巴结转移、大网膜转移和腹水相关(P＜0.05);卵巢癌组织中ROBO4表达与年龄、组织学类型和病理分级无相关性.卵巢癌患者血清ROBO4、CA125的相关分析显示,两者之间无相关性.结论 在卵巢癌发生过程中ROBO4表达降低起到重要作用,表达异常的ROBO4与卵巢癌的侵袭转移能力相关,并与卵巢癌的临床病理学特征有明显的相关性.
-
急性肺损伤大鼠肺组织神经导向因子Slit2及Robo4的表达
目的 观察神经导向因子Slit2及Robo4在肺组织的表达并探讨二者在ALI发病中的作用.方法 在南华大学实验动物部将48只SD雄性大鼠随机(随机数字法)分为对照组(n=24)与ALI组(n=24).ALI组采用盲肠结扎穿孔术复制急性肺损伤模型,对照组只开腹关腹,不行盲肠结扎穿孔术,以血清炎症因子浓度、动脉血氧分压(PaO2)、组织水肿、肺部特征性病理改变作为ALI模型成功主要指标.两组又分为术后12、24、48 h3个组,每组8只.取大鼠动脉血测定PaO2;取肺组织测定湿/干质量(W/D)比值,并观察肺毛细血管通透性及组织病理学改变;ELISA检测血清TNF-α水平;RT-PCR测定肺组织Slit2及Robo4mRNA表达,免疫组织化学法观察蛋白表达情况.采用SPSS13.0统计软件行单因素方差分析,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,ALI组致伤后各时间点PaO2均降低,肺W/D比值、肺毛细血管通透性、血清TNF-α水平均升高(P＜0.05),病理观察显示肺组织受损;RT-PCR结果显示ALI组12 h,24h,48 h肺组织Slit2mRNA表达量较同期对照组下降[(0.56±0.13) vs.(0.87 ±0.05),F=41.39,P＜0.05,(0.42±0.10)vs.(0.85±0.07),F=93.54P＜0.05,(0.26±0.08)vs.(0.89±0.09),F=227.05,P＜0.05];ALI组肺组织Robo4 mRNA表达量与同期对照组比较,差异无统计学意义[(0.86±0.07) vs.(0.83±0.05),F=0.695,P＞0.05,(0.82±0.05) vs.(0.89±0.08),F=2.061,P＞0.05,(0.85 ±0.08) vs.(0.86±0.05),F=0.035,P＞0.05];免疫组织化学研究显示Slit2主要表达于内皮细胞膜上,亦可表达于肺上皮细胞胞核及胞浆,Robo4则只表达于内皮细胞膜上;ALI组3个时间点肺组织Slit2蛋白表达量较同期对照组下降[(0.37±0.05) vs.(0.45±0.07),F=6.82,P＜0.05,(0.32±0.06) vs.(0.47±0.09),F=23.54,P＜0.05,(0.28±0.07) vs.(0.46±0.06),F=28.01,P＜0.05];与对照组比较,ALI组肺组织Robo4蛋白表达量差异无统计学意义[(0.53±0.04)vs.(0.52±0.05),F=0.155,P＞0.05,(0.53 ±0.09) vs.(0.50±0.05),F=0.498,P＞0.05,(0.55±0.06) vs.(0.56±0.07),F=0.073,P＞0.05].结论 对照组大鼠肺组织可表达Slit2及Robo4,盲肠结扎穿孔致ALI大鼠肺组织Slit2表达下降,这可能与ALI发病有关.
-
ROBO4/ARF6信号通路在糖尿病肾病患者肾小球组织的表达及意义
目的 探讨不同病理分期糖尿病肾病(DKD)患者肾小球中ROBO4/ARF6的表达情况及其与肾小球内皮细胞(MGECs)通透性的相关性.方法 收集30例DKD患者肾穿刺活检标本,参考Tervaert病理分期将DKD肾组织分为早、中、晚期各10例,以10例正常肾组织标本作为对照.采用免疫组化法检测ROBO4/ARF6在MGECs中的表达,分析其与蛋白尿、血清肌酐、肾小球滤过率(eGFR)、糖化血红蛋白的相关性.结果 正常MGECs中有丰富的ROBO4表达,而ARF6表达较少.DKD组ROBO4主要在MGECs中表达,而ARF6在MGECs和肾小管上皮细胞中均有表达.与正常对照组相比,DKD组ROBO4染色阳性强度明显降低(P＜0.05),且随病理分期的增加阳性强度逐渐减弱;而ARF6阳性强度随DKD病理分期的增加逐渐增高(P＜0.05).ROBO4在MGECs中的阳性强度与24h蛋白尿呈负相关(r=-0.840,P＜0.01),与血清肌酐呈负相关(r=-0.689,P＜0.01),与糖化血红蛋白呈负相关(r=-0.660,P＜0.01),与eGFR呈正相关(r=0.589,P＜0.01);ARF6在MGECs中的染色强度与血清肌酐、eGFR无相关性(P＞0.05),与24h蛋白尿呈正相关(r=0.603,P＜0.01),与糖化血红蛋白呈正相关(r=0.582,P＜0.01).结论 DKD患者MGECs中存在ROBO4低表达和ARF6高表达,提示ROBO4/ARF6信号通路可能参与了DKD肾小球内皮、血管的病理损伤和尿蛋白的进展.
-
ROBO4过表达抑制高糖条件下人肾小球内皮细胞高通透性的体外研究
目的 探讨ROBO4基因过表达对高糖诱导的人肾小球内皮细胞(HRGEC)高通透性的影响.方法 体外培养HRGEC,以携带ROBO4基因的重组慢病毒载体感染HRGEC获得过表达ROBO4的HRGEC.将细胞分为低糖培养组和高糖培养组,采用Western blotting检测ROBO4和ARF6蛋白的表达,异硫氰酸荧光素右旋糖酐(FITC-Dextran)法检测HRGEC的通透性,CCK-8法测定细胞存活率.结果 慢病毒在HRGEC中的72h转染率达80％,与空载体组相比ROBO4转染组HRGEC细胞的ROBO4蛋白明显过表达(P＜0.05),CCK8检测显示慢病毒转染后HRGEC细胞活性不受影响.与低糖组相比,高糖组ROBO4蛋白表达在12h时点明显增高(P＜0.05),24h回落,72h下降为明显(P＜0.05),而ARF6蛋白的表达在12h开始明显升高,72h时升高为明显(P＜0.05).高糖组FITC-Dextran层HRGEC屏障的通透性在24h开始逐步升高,72h时升高为明显(P＜0.05);与空载体组相比,ROBO4过表达可显著抑制高糖条件下ARF6的表达及降低体外单层HRGEC屏障的FITC-Dextran通透性.结论 ROBO4过表达可降低高糖条件下HRGEC的通透性,激活ROBO4有望成为治疗糖尿病肾病内皮功能障碍的新方向.
-
RNA干扰沉默神经轴突导向因子受体4基因增加血肿瘤屏障通透性
目的 研究神经轴突导向因子受体(Robo4)对血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响.方法 建立了体外BTB模型,应用Real-time PCR和Western blot检测Robo4在正常人脑微血管内皮细胞和胶质瘤微血管内皮细胞中的表达变化.设计合成针对Robo4基因的小干扰RNA,转染至人脑微血管内皮hCMEC/D3细胞,下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Robo4的表达,跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗透试验分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测hCMEC/D3细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达和分布变化.结果 和正常人脑微血管内皮细胞相比,Robo4在胶质瘤微血管内皮细胞中的表达显著上调.下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞Robo4的表达后,TEER值显著降低,辣根过氧化物酶透过率显著增高;同时胶质瘤微血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达显著降低,在细胞膜上呈不连续分布.结论 RNA干扰沉默Robo4表达能够显著降低紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达,增加BTB通透性.
-
人Robo4基因的重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的 构建人Robo4(h Robo4)基因的重组腺病毒表达载体,为研究Robo4的功能和作用机制以及Robo4的基因治疗奠定基础.方法 采用DNA重组与细菌内同源重组技术,通过PCR方法以hRobo4的表达质粒为模板扩增得到hRobo4的编码序列,克隆到穿梭质粒pDC316-hRobo4中,经测序验证后,将骨架质粒(pBHGlox E1)和穿梭质粒共转染到HEK293细胞中,同源重组产生重组腺病毒;包装收获病毒颗粒;PCR鉴定该重组腺病毒是否携带目的 基因.结果 PCR及限制性内切酶酶切鉴定表明成功构建携带人Robo4基因的腺病毒载体.结论 运用同源重组技术能够构建携带人Robo4基因的重组腺病毒载体.
-
Robo4在实体肿瘤血管新生中的表达及其意义
目的 了解引导神经发育的Robo4基因在实体肿瘤血管新生中的表达,证实Robo4是肿瘤血管新生特异性标志物(tumor endothelial marker, TEM).方法 采用RT-PCR技术检测多种不同细胞中Robo4 mRNA的表达情况;采用原位杂交和免疫组化染色检测多种肿瘤组织及其对应正常组织的相邻组织切片中Robo4和CD31在微血管的表达情况.结果 RT-PCR显示在包括肿瘤细胞和正常细胞的9种受检细胞株中,Robo4 mRNA特异性表达于血管内皮细胞HUVEC和HMVEC中;Robo4在各种正常组织的微血管中表达极其微弱,而在肿瘤组织的微血管上显著表达;CD31在正常和肿瘤组织的微血管上均显著表达.结论 Robo4仅特异性表达于肿瘤血管新生的部位,是肿瘤血管新生标志物.
-
Robo4敲除对急性心肌梗死大鼠心功能的影响
目的 探讨Robo4敲除对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响.方法 采用结扎左冠状动脉主干方法复制大鼠急性心肌梗死模型,分为Robo4敲除大鼠假手术组(Robo4 sham)、SD大鼠假手术组(SD sham)、Robo4敲除大鼠心肌梗死组(Robo4 MI)和SD大鼠心肌梗死组(SD MI).14d后通过右颈总动脉插管法分析大鼠心功能的变化.结果 两组假手术组相比,心功能无明显变化.与SD sham组相比,SD MI组左室舒张末压(LVEDP)显著升高,左室大收缩速率(+dp/dtmax)和左室大舒张速率(一dp/dtmax)显著下降.与SD MI组相比,Robo4 MI组LVEDP显著下降,+dp/dtmax、-dp/dtmax显著升高.结论 心肌梗死14d后大鼠心功能下降,但Robo4敲除可以改善大鼠心功能.
-
小鼠主动脉平滑肌细胞 Robo4膜蛋白的提取
目的：优化小鼠主动脉平滑肌细胞膜蛋白提取方法，获得高纯度的Robo4膜蛋白。方法高速离心法选择性地分离提取总膜蛋白，BCA法测定总膜蛋白含量，Western-Blot检测目的蛋白条带。结果成功提取总膜蛋白，总膜蛋白浓度达1．47μg/μL ，Western-Blot检测出Robo4膜蛋白条带。结论该提取方法简单、可靠、快速，获得的膜蛋白纯度高，可用于Western-Blot后续试验。
-
Slit3的研究进展
1984年NüSSLEIN-VOLHARD等[1]首次发现了Slit家族.1988年ROTHBERG等[2]在果蝇的中枢神经系统中发现一种神经突触导向分子Slit并克隆成功.Slit在脊柱动物中有3种同源亚型(Slit1、Slit2、Slit3),均在中枢神经系统中表达.其中Slit3由N末端信号肽、4个富含亮氨酸的重复(LRR)单位D1-D3、哺乳动物中9个(非哺乳动物中有7个)表皮生长因子的重复序列、1个层粘连蛋白-G样结构域和1个C末端的半胱氨酸结构域组成,具有高度的保守性[3].Robo是Slit的单跨膜受体,属于神经细胞的黏附分子,又称为Robo受体.Robo受体在哺乳动物中分为Robo1、Robo2、Robo3、Ro-bo4亚型[4].
-
Slit3/Rob04信号通路功能研究进展
Slit是一种高度保守的分泌型细胞外基质蛋白,Robo作为Slit蛋白的单次跨膜受体,二者相互作用共同调节神经细胞和非神经细胞的生长发育.Slit3是近年发现的一种强有力的促血管生成因子,与其受体Robo4结合参与血管新生、器官发育、肿瘤发生、生殖系统和乳腺调节及人类干细胞工程等过程,该文就Slit3/Robo4的新研究现状作一综述.
-
Slit3/Robo4信号通道对血管新生作用的研究进展
Slit蛋白是一种在进化上高度保守的分泌型糖蛋白,其通过与跨膜蛋白受体Robo结合调节神经元前体细胞定向迁移、神经轴突的定向生长和促进轴突发芽.Slit/Robo信号通道还对肿瘤转移、血管生成、心脏形态发生等多种生命活动具有调节作用.Robo4特异性表达于血管内皮细胞,这意味着Robo4在血管新生中起着重要作用.但近来发现Slit3是新的血管新生活性因子,可与其配体Robo4结合促进血管内皮细胞的增殖迁移,本文就Slit3/Robo4信号通道对血管新生的作用进行综述.
-
Slit3/Robo4在大鼠角膜新生血管中的表达
目的：通过研究神经轴突导向因子Slit3及Robo4受体在大鼠正常角膜与新生血管化角膜中的差异性表达,探讨其在角膜新生血管( corneal neovascularization,CNV)形成中的作用。
方法：采用角膜微囊袋法建立以碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)诱导的大鼠CNV模型,采用眼前段照相,免疫组化染色、彩色图像分析系统分别计算1,4,7,10,14d共5个时间点的CNV面积和Slit3, Robo4的平均光密度值。结果：Slit3及Robo4在新生血管化角膜中表达增加,在第7 d达到高,且二者的表达水平与 CNV 的面积除第1 d外,在其他各时间点均呈正相关(r=0.84~0.91,P<0.05)。结论：Slit3/Robo4与CNV形成明显相关,其可能成为抑制CNV的重要靶点。
