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膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达和意义
目的 检测膜联蛋白A7(ANXA7)在胃癌组织中的表达改变,探讨胃癌的发生机制.方法 收集人胃癌组织55例及正常胃组织25例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Western blotting法和Real-time PCR法分别于蛋白水平和基因转录水平检测ANXA7在胃癌组织和正常胃组织中的表达改变,并用免疫组织化学法对ANXA7在细胞中的定位和表达进行检测.结果 ANXA7在胃癌中蛋白水平和转录水平的表达均显著增高,与正常组相比差异有显著性(P＜0.05);ANXA7在胃癌细胞中定位于细胞质.结论 膜联蛋白A7在胃癌中的表达增高有可能是胃癌发生的机制之一.
关键词： 膜联蛋白A7 胃癌 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 人 -
Galecin-3在膜联蛋白A7表达抑制的HeLa细胞中的表达变化
目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)表达抑制的HeLa细胞galectin-3(gal-3)的表达改变.方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组.采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA脂质体2000转染法分别转染宫颈癌细胞系HeLa细胞,空白对照组不予任何处理.转染48h后采用Western blotting法和RT-PCR法分别在蛋白水平和mRNA水平进行抑制效果的鉴定.Western blotting和实时定量PCR法分别检测ANXA7表达抑制的HeLa细胞中galectin-3的表达改变.结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;当ANXA7表达受抑后,galectin-3在HeLa细胞中的表达显著下降,与阴性对照组和空白对照组相比,差异有显著性(P＜0.05).结论 ANXA7表达抑制的宫颈癌细胞系HeLa细胞中galectin-3的表达显著下调,这可能是ANXA7表达受抑的细胞行为学发生改变的机制之一.
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膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响
目的 探讨膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞的增殖产生的影响.方法 采用Westernblotting法鉴定siRNA可有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HepG2细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,在转染后24h、48h、72h进行细胞计数以绘制细胞增殖曲线,转染后48h进行MTT实验以检测细胞增殖活力;免疫组织化学法检测cyclinD1和Ki67的表达,Western blotting法检测cyclinD1的表达情况.结果 转染了靶向膜联蛋白A7的siRNA后48h的HepG2细胞,细胞计数和MTT实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力较阴性对照组和空白对照组显著降低(P＜0.05);cyclinD1和Ki67蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组(P＜0.05).结论 联蛋白A7低表达可能对HepG2细胞的增殖具有一定的抑制作用.
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膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响
目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响.方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组.采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞,空白对照组不予任何处理.转染48h后,采用Western blotting和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定.检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响.结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著(P＜0.05).细胞迁移变化不显著.结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变.
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敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响
目的 探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bel-2和Bax表达的影响.方法 将HepG2细胞接种于6孔板,分为3组:siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂.通过Westernblotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达.结果 与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高(P＜0.05),Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低(P＜0.05),而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化(P＞0.05).结论 敲低膜联蛋白A7可促进HepG2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值.
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膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学特征的关系
目的：探讨膜联蛋白A7（ ANXA7）在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学特征的关系。方法收集124例胃癌手术患者的临床病理资料，采用免疫组化和Western blot 法检测ANXA7在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况，分析其与胃癌生物学特征的关系。结果 ANXA7在胃癌组织中的阳性表达率为65．3％（81／124）。 ANXA7的阳性表达与胃癌分化程度、病理分期、淋巴结转移及黏膜下侵犯情况有关（均P＜0．05）。全组胃癌患者的3年生存率为45．1％，其中ANXA7阳性表达和阴性表达患者的3年生存率分别为28．4％和76．7％，差异有统计学意义（ P＜0．001）。 Cox回归分析显示，ANXA7表达、黏膜下侵袭情况和病理分期是影响胃癌患者预后的独立因素（均P＜0．05）。有淋巴结转移和无淋巴结转移的胃癌组织中，ANXA7的相对表达水平分别为0．51±0．07和0．39±0．06，差异有统计学意义（ P＜0．001）。 ROC曲线分析显示，以ANXA7表达水平0．419为截点值，ANXA7表达水平预测胃癌淋巴结转移的敏感度为91．2％，特异度为72．7％，曲线下面积为0．884（ P＜0．001）。结论 ANXA7表达与胃癌患者的预后和淋巴结转移有关，ANXA7可能可以作为判断胃癌淋巴结转移的预测因素。
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膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达及意义
目的：探讨膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达变化和意义。方法：分别采用SP免疫组织化学染色法和Western Blotting法检测膜联蛋白A7在55例胃癌组织和25例癌旁正常胃组织中的表达情况。结果：胃癌组织膜联蛋白A7的表达水平明显高于癌旁正常胃组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论：膜联蛋白A7高
表达可能参与了胃癌的发生发展。 -
吉非替尼对敲低联蛋白 A7的 HepG2细胞增殖的影响
目的：探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对敲低膜联蛋白A7后的人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响，为肝癌的分子靶向治疗提供实验依据。方法：将细胞分为吉非替尼组、siRNA转染、siRNA转染＋吉非替尼、转染阴性对照组和空白对照组，用脂质体转染法靶向将ANXA7的siRNA转染入HepG2细胞，在转染后6h在siRNA转染组和siRNA转染组＋吉非替尼组加入一定浓度的吉非替尼，加药后72h进行MTT实验以检测细胞增殖活力，从而计算增殖抑制率。结果：MTT检测得知， siRNA转染组、吉非替尼组和siRNA转染＋吉非替尼组，对细胞增殖有明显的抑制作用，较对照组差别有统计学意义（ P＜0．05）。结论：吉非替尼对敲低ANXA7后的HepG2细胞的增殖具有更为明显的抑制作用。
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pCDNA3.1-Annexin A7载体的构建及在Hea-P细胞中的表达
[目的]构建pCDNA3.1-Annexin A7载体并稳定转染Hca-P细胞.[方法]提取小鼠总RNA,逆转录成cD-NA,PCR扩增,获取Annexin A7 CDS,将PcDNA3.1(+)质粒和Annexin A7 CDS片段行BamH I和EcoR I双酶切,构建并抽提pCDNA3.1-Annexin A7质粒,测序鉴定后转染Hca-P细胞,经400 μg/mL G418完全培养基筛选获得pCDNA3.1-Armexin A7载体稳定转染的Hca-P细胞,在蛋白质水平检验Annexin A7的表达并行基因组DNA鉴定.[结果]成功构建pCDNA3.1-Annexin A7载体,经测序鉴定,所得到的载体中的CDS经比对与库中序列一致.pCDNA3.1-Annexin A7载体转染Hca-P细胞后,获得稳定上调表达Annexin A7的Hca-P细胞株;行基因组DNA鉴定,证实pCDNA3.1-Annexin A7已转入Hca-P细胞中,western-blotting结果显示转染前后蛋白的表达相对值Annexin A7/GAPDH分别为0.43544±0.0112和0.45957±0.0065(P＜0.05).[结论]pCDNA3.1-Annexin A7的构建并稳定转染Hca-P细胞成功,为通过上调Annexin A7在Hca-P的表达以证实Annexin A7与恶性肿瘤淋巴道转移潜能关系的相关研究打下了基础.
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膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖
目的 分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制.方法 通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响.采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响.结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达.胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点.肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P＜0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低.下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P＜0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高.结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控.
关键词： 膜联蛋白A7 肝细胞癌 胰岛素样生长因子结合蛋白2 细胞增殖 -
膜联蛋白A7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株的建立
目的:建立针对膜联蛋白A7(annexin A7)的shRNA(small hairpin RNA)稳定转染的小鼠肝癌细胞株Hca-F,为后续研究奠定基础.方法:构建3条针对annexin A7的shRNA(shRNA1、2、3),分别与pSilencer连接,构建表达载体并分别转染Hca-F细胞,在mRNA和蛋白质水平比较3条shRNA对annexin A7表达的抑制作用,筛选抑制效果好的shRNA转染Hca-F.稳转后用含400 μg/ml G418的完全培养基筛选,获得annexin A7表达稳定下调的Hca-F细胞株后传代扩增,应用Western印迹法检测Hca-F细胞annexin A7蛋白的表达,并与空载体转染组及正常对照组进行比较.结果:经DNA测序鉴定,所得到干扰序列与GenBank中序列一致;筛选出其中shRNA1对annexin A7的表达抑制效果好.pSilencer-shRNA1转染Hca-F细胞株后,annexin A7蛋白的表达远低于空载体转染组和正常对照组(0.318 6 vs 0.798 7,0.824 3,P<0.05),而后二者间无统计学差异.结论:成功建立了annexin A7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株,为后续研究奠定了基础.
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膜联蛋白A7在常见消化系统肿瘤中的作用
膜联蛋白A7(Annexin A7)是一个Ca2+依赖磷脂结合蛋白多基因家族的成员.既往研究表明Annexin A7亚细胞水平异常杂合性缺失与多种肿瘤的发生、发展、转移以及侵袭相关.Annexin A7在胶质母细胞瘤、黑色素瘤以及前列腺癌的发病过程中似乎起到肿瘤抑制作用;但是Annexin A7在肝癌、胃癌、鼻咽癌、结直肠癌和乳腺癌中似乎促进恶性肿瘤发展,但是其确切作用仍存在争议.文章将就Annexin A7与消化系统恶性肿瘤之间的关系及其作用机制进行总结和讨论,探讨其作为评价某些肿瘤的诊断、治疗和预后生物标志物的潜在价值.
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胃癌患者血清E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7水平及临床意义
目的 分析胃癌患者血清中E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7水平及其与临床病理特征间的相关性.方法 纳入该院肿瘤科收治的胃癌患者96例,收集同期在该院体检健康者60例作为对照组.检测两组研究对象血清E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7水平;分析胃癌组患者血清E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7水平与胃癌临床病理特征间的相关性;比较随访期间存活组与死亡组患者间血清E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7表达.结果 与对照组比较,胃癌组患者血清E-钙黏蛋白显著降低而膜联蛋白A7显著增高(P<0.01).胃癌患者的年龄、性别以及胃癌的大小、位置对血清E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7水平的影响差异无统计学意义(P>0.05),不同分化程度、TNM 分期、淋巴结转移的血清E-钙黏蛋白和膜联蛋白A7水平差异有统计学意义(P<0.01).1年期随访发现30例死亡,66例存活;死亡组患者入院时血清E-钙黏蛋白水平明显低于存活组,膜联蛋白A7水平显著高于存活组,比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 胃癌患者血清E-钙黏蛋白水平明显降低而膜联蛋白A7水平明显增高,与胃癌的分化、临床分期及淋巴转移联系密切,对胃癌患者的预后有重要评价作用.
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神经胶质瘤组织中膜联蛋白A7表达与患者预后的关系
目的 探讨神经胶质瘤组织中膜联蛋白A7(Anxa7)表达与患者预后的关系.方法 收集2009年3月至2014年4月郑州大学第五附属医院神经外科经病理学确诊的神经胶质瘤组织标本56例和脑外伤患者因行内减压术留取的正常脑组织标本40例,采用免疫组织化学染色法检测神经胶质瘤组织和正常脑组织中Anxa7表达,实时荧光定量聚合酶链式反应检测神经胶质瘤组织和正常脑组织中Anxa7 mRNA表达.结果 神经胶质瘤组织中Anxa7高表达率及Anxa7 mRNA相对表达量显著高于正常脑组织(P＜0.05);神经胶质瘤组织中Anxa7 mRNA相对表达量与病理分级有关(P＜0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,神经胶质瘤组织中Anxa7 mRNA低表达者的中位生存时间为21.2个月,高表达者的中位生存时间为14.5个月,差异有统计学意义(P＜0.05);Cox多因素回归分析显示,病理分级和Anxa7 mRNA相对表达量是影响神经胶质瘤患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 Anxa7 mRNA在神经胶质瘤组织中呈高表达,且与患者预后有关,有望成为判定患者预后的指标.
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AnnexinA7及其共相关蛋白研究进展
膜联蛋白(annexin A7)是一种能促进膜融合的钙依赖性磷脂结合蛋白，近来研究表明其在多种肿瘤的发生、发展、转归中起重要作用。Annexin A7可与多种蛋白(如半乳糖凝集素3，抗药蛋白，凋亡相关基因2，死亡结构域沉默子等)相互作用。Annexin A7及其共相关蛋白的研究有助于阐明Annexin A7在肿瘤细胞发生、发展机制中的作用，有利于发现新的肿瘤治疗靶点。
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不同小鼠腹水型肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型表达研究
目的 探讨在小鼠淋巴道转移潜能不同的肝癌细胞中,肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型的表达.方法 以小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F细胞和Hca-P细胞为研究对象,通过CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力；Western blotting方法检测膜联蛋白A7在体外增殖侵袭能力不同的肿瘤细胞中的亚细胞定位和亚型的变化.结果 发现Hca-F细胞无论是增殖能力还是侵袭能力都高于Hca-P细胞.膜联蛋白A7在Hca-F细胞和Hca-P细胞主要为47 kD亚型表达,而51kD亚型只少量表达于细胞浆.47 kD亚型在Hca-F细胞的细胞浆、细胞膜、细胞器膜以及细胞骨架中的表达均明显高于Hca-P细胞,分别为(73％±7％)vs(49％±19％)、(36％±8％) vs(24％±9％)和(53％±7％)vs(40％±12％)(均P＜0.05).结论 膜联蛋白A7的47 kDa亚型在细胞浆、细胞膜、细胞器膜和细胞骨架的定位表达,可能与肝癌细胞增殖侵袭能力密切相关.
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MTT与HOECHST染色法检测膜联蛋白A7基因沉默对Hela细胞的影响
目的 探讨膜联蛋白A7 (ANXA7)低表达对人宫颈癌细胞系Hela细胞增殖和凋亡的影响.方法 (1)体外培养Hela细胞,应用免疫组化和Western blot鉴定细胞膜联蛋白A7的表达,Westernblot鉴定siRNA干扰对膜联蛋白A7表达的抑制效果;(2)MTT实验检测siRNA抑制膜联蛋白A7的表达后对Hela细胞增殖情况的影响;(3)激光共聚焦检测siRNA抑制膜联蛋白A7的表达后对Hela细胞凋亡情况的影响.结果 (1)免疫组化和Western blot结果均显示Hela细胞内有膜联蛋白A7的表达.siRNA干扰效率的检测显示:siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较膜联蛋白A7的表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);(2) MTT实验显示:siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较细胞增殖速度无显著性差异(P＞0.05);(3)激光共聚焦检测结果显示:与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 膜联蛋白A7的低表达可促进人宫颈癌细胞系HeLa细胞的凋亡.
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膜联蛋白A7在结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨膜联蛋白A7在结直肠癌组织中的表达情况及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法(S-P法)检测76例结直肠癌组织及相应癌旁黏膜组织(>5 cm)膜联蛋白A7的表达情况,分析其表达情况与临床病理特征的关系.结果 结直肠癌组织中膜联蛋白A7的阳性表达率为80.3%(61/76),癌旁黏膜组织中膜联蛋白A7的阳性表达率为30.3%(23/76),差异有统计学意义(P<0.05).TNM Ⅲ+Ⅳ期,淋巴结转移及黏液腺癌/印戒细胞癌患者的癌组织膜联蛋白A7的阳性表达率较低(P<0.05),在不同年龄、性别、肿瘤直径、CEA含量组间表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 膜联蛋白A7可能参与了结直肠癌的发生、发展,具有一定的潜在诊断价值.
