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DADS通过miR-222抑制人胃癌细胞系的增殖与侵袭
目的 通过miRNA途径研究二烯丙基二硫(DADS)的抑瘤机制,以进一步阐明DADS抑制胃癌细胞增殖与转移的分子机制.方法 将胃癌细胞系MGC-803细胞分为DADS处理组、miR-222模拟物组、miR-222抑制物组和阴性对照组;分别采用0、25、50、100、200和400μmol/L DADS处理MGC-803细胞;分别将miR-222模拟物、miR-222抑制物和scramble转染MGC-803细胞.qRT-PCR检测MGC-803细胞中miR-222表达;MTT法和Transwell侵袭实验检测MGC-803细胞增殖与侵袭能力;蛋白质印迹试验检测MGC-803细胞中TIMP3蛋白表达.结果 DADS可呈剂量依赖性下调MGC-803细胞中miR-222表达(P＜0.05);DADS能抑制MGC-803细胞的增殖与侵袭,外源高表达miR-222能促进MGC-803细胞的增殖与侵袭,而miR-222抑制物与DADS共同处理,MGC-803细胞的增殖与侵袭抑制作用为显著(P＜0.05);DADS可下调MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达,外源高表达miR-222能上调MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达,而miR-222抑制物与DADS共同处理,MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达下调为显著(P＜0.05).结论 DADS通过下调miR-222的表达,靶向TIMP3抑制胃癌细胞的增殖与侵袭.
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微小RNA在肿瘤诊治中的应用
在小分子RNA家族中,微小RNA(miRNA)是一类存在于动植物中长度约为18～25个核苷酸的单链RNA,通过特异性结合靶mRNA引起相应基因沉默,抑制相关蛋白合成,从而进行转录后基因水平调控,参与生物发育的进行,维持细胞功能的稳定等,同时在肿瘤的形成中扮演着双重角色:作为抑癌基因控制肿瘤的形成、转移与扩散,也可作为癌基因促进肿瘤的发生、增殖与侵袭.
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环境雌激素双酚AF诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖与侵袭的体外实验
目的 探讨环境雌激素双酚AF(bisphenol AF,BPAF)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖,及雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)转录活性的影响.方法 SH-SY5Y细胞转染ERE-Luc或CatD-Luc荧光素酶报告基因后,使用0.01 μ mol/L、0.03μmol/L、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L和10μmol/L浓度梯度的BPAF处理SH-SY5Y细胞,采用荧光素酶报告基因实验(luciferase)检测BPAF对ER α转录活性的影响;使用BPAF作用诱导ER α转录活性的ECmax浓度处理SH-SY5Y细胞,采用CCK-8实验检测细胞样品在450 nm波长的吸光度值;在ERα表达阴性的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞系MDA-MB-231中转染ERα表达载体;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的小干扰RNA (siRNA)或使用ERα的拮抗剂ICI-182780 (100 nmol/L)预处理SH-SY5Y细胞后,检测BPAF对ERα转录活性的诱导作用或对SH-SY5Y细胞增殖/侵袭的促进作用.结果 BPAF能够剂量依赖性地(R2=0.94,P=0.007 6)在SH-SY5Y细胞中提高ERα的转录活性,其EC50值为(0.44±0.09)μmol/L,ECmax值为3μmol/L;在SH-SY5Y细胞中转染ER α的siRNA载体,或使用ERα的拮抗剂(100 nmol/L ICI-182780)处理SH-SY5Y细胞能够显著下调BPAF诱导的ERα转录活性(抑制率分别为76.97％和77.75％),及其对SH-SY5Y细胞增殖(抑制率分别为77.42％和86.76％)、侵袭的促进作用(抑制率分别为95.87％和105.56％).结论 BPAF可能通过诱导ERα的转录活性,促进神经母细胞瘤细胞系的增殖与侵袭.
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5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制
目的 观察5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制.方法 常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为o、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率；Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点；Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达.结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性(P＜0.05)；与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加.结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关.5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关.
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不同小鼠腹水型肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型表达研究
目的 探讨在小鼠淋巴道转移潜能不同的肝癌细胞中,肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型的表达.方法 以小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F细胞和Hca-P细胞为研究对象,通过CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力；Western blotting方法检测膜联蛋白A7在体外增殖侵袭能力不同的肿瘤细胞中的亚细胞定位和亚型的变化.结果 发现Hca-F细胞无论是增殖能力还是侵袭能力都高于Hca-P细胞.膜联蛋白A7在Hca-F细胞和Hca-P细胞主要为47 kD亚型表达,而51kD亚型只少量表达于细胞浆.47 kD亚型在Hca-F细胞的细胞浆、细胞膜、细胞器膜以及细胞骨架中的表达均明显高于Hca-P细胞,分别为(73％±7％)vs(49％±19％)、(36％±8％) vs(24％±9％)和(53％±7％)vs(40％±12％)(均P＜0.05).结论 膜联蛋白A7的47 kDa亚型在细胞浆、细胞膜、细胞器膜和细胞骨架的定位表达,可能与肝癌细胞增殖侵袭能力密切相关.
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PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响
背景与目的:PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted from chromosome 10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关.本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变.方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化.结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P＜0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%.细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P＜0.05).结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性.
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hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响
目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的-类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性.本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinorna,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响.方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)Ty法检测hepaCAM mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比heP-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6 d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P＜0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6 ±5.3(实验组)、35.5 4±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01).结论:抑癌基闪hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性.
