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环境雌激素双酚AF诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖与侵袭的体外实验
目的 探讨环境雌激素双酚AF(bisphenol AF,BPAF)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖,及雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)转录活性的影响.方法 SH-SY5Y细胞转染ERE-Luc或CatD-Luc荧光素酶报告基因后,使用0.01 μ mol/L、0.03μmol/L、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L和10μmol/L浓度梯度的BPAF处理SH-SY5Y细胞,采用荧光素酶报告基因实验(luciferase)检测BPAF对ER α转录活性的影响;使用BPAF作用诱导ER α转录活性的ECmax浓度处理SH-SY5Y细胞,采用CCK-8实验检测细胞样品在450 nm波长的吸光度值;在ERα表达阴性的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞系MDA-MB-231中转染ERα表达载体;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的小干扰RNA (siRNA)或使用ERα的拮抗剂ICI-182780 (100 nmol/L)预处理SH-SY5Y细胞后,检测BPAF对ERα转录活性的诱导作用或对SH-SY5Y细胞增殖/侵袭的促进作用.结果 BPAF能够剂量依赖性地(R2=0.94,P=0.007 6)在SH-SY5Y细胞中提高ERα的转录活性,其EC50值为(0.44±0.09)μmol/L,ECmax值为3μmol/L;在SH-SY5Y细胞中转染ER α的siRNA载体,或使用ERα的拮抗剂(100 nmol/L ICI-182780)处理SH-SY5Y细胞能够显著下调BPAF诱导的ERα转录活性(抑制率分别为76.97％和77.75％),及其对SH-SY5Y细胞增殖(抑制率分别为77.42％和86.76％)、侵袭的促进作用(抑制率分别为95.87％和105.56％).结论 BPAF可能通过诱导ERα的转录活性,促进神经母细胞瘤细胞系的增殖与侵袭.
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双酚AP和双酚AF对斑马鱼的早期神经发育毒性作用研究
[目的]双酚AP (bisphenol AP,BPAP)和双酚AF (bisphenol AF,BPAF)大规模的生产和使用,对水生生态环境具有潜在威胁.关于BPAP和BPAF的神经毒性研究甚少,本文以斑马鱼作为模式动物,研究BPAP和BPAF对斑马鱼的早期神经发育毒性作用.[方法]本研究选取斑马鱼幼鱼作为实验对象,将斑马鱼胚胎随机分为5组,以BPAP(20 μg/L和200μg/L)和BPAF(20μg/L和200μg/L)进行染毒,染毒时间为受精后4h至受精后144h.通过斑马鱼的运动行为学测试,原位杂交和荧光定量PCR方法来阐述BPAP和BPAF的早期神经发育毒性作用及其可能的作用机制.[结果]行为学测试结果显示,与对照组相比,染毒组的斑马鱼幼鱼的运动总距离和速度均明显下降,热图显示染毒组幼鱼有过多呆滞不动的现象,表明BPAP、BPAF均抑制了斑马鱼幼鱼的移动距离和速度.荧光定量PCR结果可见,与对照组相比,BPAP(20μg/L和200μg/L)和BPAF(20μg/L和200μg/L)都抑制了斑马鱼神经发育关键基因(mbp和syn2a)的表达(P＜0.001),同时原位杂交结果也验证了基因的结果.[结论]初步认为BPAF和BPAP对斑马鱼具有潜在的神经发育毒性作用.
