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甲状腺疾病常合并哪些心脏病
甲状腺激素对心血管系统有明显的作用.甲状腺激素会增加儿茶酚胺的敏感性,增加交感神经的兴奋性,病人表现神经质、多语多动、手颤、失眠、脾气急躁、震颤、易激动.过量甲状腺激素作用心血管系统,使窦房结兴奋性增加,心肌细胞不应期缩短,传导加快,引起心慌、窦性心动过速、憋气.
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引发心律失常的四根"导火索"
心律失常的发病机理非常复杂,大致有以下四种,即心脏起搏传导系统异常,心脏自主神经功能异常,心肌细胞代谢紊乱,以及心肌供血不足.它们就像四根连接在心脏上的"导火索"一样,如果"引燃"了其中任何一根,都可以引发心律失常.
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桃红芩连汤对脓毒症大鼠心肌能量代谢影响
目的 观察脓毒症大鼠心肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、肌钙蛋白I(TnI)的浓度变化,探讨桃红芩连汤对脓毒症心肌能量代谢的改善.方法 24只清洁级健康雄性Wistar大鼠随机分成假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、中药治疗组(ZY组),每组8只.于手术后24 h分别检测TNF-α、IL-6、TnI、PGC-1α浓度,光镜观察心肌病理变化.结果 与Sham组比较,CLP组PGC-1α、TNF-α、IL-6及TnI水平显著升高(P<0.01);与CLP组比较,ZY组PGC-1α、TNF-α、IL-6及TnI浓度明显下降(P<0.05).光镜下CLP组和ZY组可见心肌损伤,CLP组较ZY组损伤明显.结论 桃红芩连汤可降低脓毒症相关炎症因子水平,对心肌有保护作用.
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加味丹参饮预处理诱导大鼠心肌细胞HSP70 mRNA的表达
目的 观察加味丹参饮预处理诱导大鼠缺氧/复氧心肌细胞热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达.方法 将培养72小时的乳鼠心肌细胞随机分6组,空白组正常培养;血清对照组加50%大鼠血清培养;含药血清组加50%含加味丹参饮的药物血清培养;缺氧/复氧组予缺氧再给氧.缺氧预处理组、加味丹参饮预处理组先给了;缺氧预处理和加味丹参饮预处理,24小时后再予缺氧再给氧.结果 加味丹参饮预处理和缺氧预处理24小时后心肌细胞存活率显著高于缺氧/复氧组(P<0.01),乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)显著低于缺氧/复氧组(P<0.01),HSPT0 mRNA表达显著高于缺氧/复氧组(P<0.01).结论 加味丹参饮预处理具有延迟保护作用,其机理与诱导细胞内HSP70 mRNA合成有关.
关键词： 加味丹参饮 预处理 延迟保护 心肌细胞 HSP70 mRNA -
芳香新塔花黄酮抗氧化活性及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用
目的 探讨芳香新塔花黄酮(ZCF)的抗氧化活性,以及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)清除法测定ZCF的自由基捕获清除能力.体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后丙二醛(MDA)的变化.结果 ZCF浓度与 DPPH自由基的清除率存在量效关系,半数清除浓度IC50为0.017 mg/ml.ZCF能明显降低缺氧-复氧模型下培养液中的MDA浓度(P<0.05).结论 ZCF具有潜在的抗氧化和心肌保护作用.其心肌保护作用机制可能与抑制脂质过氧化,增强心肌细胞抗氧化能力有关.
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活血药对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞内钙浓度变化的影响
目的 研究活血药丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞内和心肌成纤维细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抑制心肌肥大的作用机理.方法 应用Fura-3荧光染料.用流式细胞仪检测乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞内钙离子浓度.结果 Ang Ⅱ可明显增加心肌细胞和心肌成纤维细胞内钙离子浓度,并随着时间的延长,于第5天其浓度达到高峰,然后下降,洛沙坦(Losartan)明显抑制其心肌和心肌成纤维内钙离子浓度的增加;研究显示丹参素和川芎嗪不仅明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞内钙离子浓度的升高,同时也明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞内钙离子浓度的升高.结论 丹参素和川芎嗪不仅明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞内钙离子浓度的升高,同时也明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞内钙离子浓度的升高,表明丹参素和川芎嗪可能具有钙拮抗剂的作用,抑制血管紧张素Ⅱ所介导引起细胞内钙离子升高,从而抑制心肌细胞肥大和心肌成纤维细胞增殖.
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提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨
目的：探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法：应用0.08%心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次；收集的细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基中和。用差速贴壁分离法分离后，加入红细胞裂解液，以除去红细胞，加入溴脱氧尿嘧啶（Brdu）纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育2天，无血清同步化1天。结果：分离1只乳鼠获得的心肌细胞产量约为1.2×106个，有活力心肌细胞占90%以上，心肌细胞纯度>90%，3-4天后心肌细胞融合成片，并出现自发性节律性搏动。结论：该方法在保证心肌细胞产量和心肌细胞活性的同时，能大幅度提高心肌细胞纯度。
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当归红芪超滤物抗辐射致心肌细胞损伤的作用及机制
目的：探讨当归红芪超滤物抗辐射致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制。方法用X线照射Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立辐射损伤模型，用不同浓度的当归红芪超滤物进行干预，实验分正常对照组、辐射损伤模型组、当归红芪超滤物不同浓度（3、6、9 mg·mL-1）干预组（UFE-AH）。MTT法检测各组心肌细胞的存活率，2，4二硝基苯肼显色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（ LDH）的含量，黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞内超氧化物歧化酶（ SOD）的活性，免疫组化法观测各组细胞Bax的表达，蛋白印迹半定量测定各组细胞Bax蛋白的表达。结果与辐射损伤模型组比较，当归红芪超滤物各干预组心肌细胞存活率明显升高，LDH含量显著降低（ P﹤0.05）， SOD活性显著提高（ P﹤0.05），Bax表达显著降低（ P﹤0.05）。结论当归红芪超滤物具有拮抗辐射致心肌细胞损伤的作用，其机制与清除自由基有关。
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九龙藤总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的：研究九龙藤总黄酮（ BCF）对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法分离出生1~3 d的大鼠乳鼠心肌细胞，培养72 h后随机分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、九龙藤总黄酮（60、120和240μg/ml）干预组和舒血宁注射液（SXN，100μg/ml）阳性对照组，每组设8个复孔。药物干预6 h后，观察各组细胞形态学变化，通过MTT比色法测定细胞存活率；测定各组细胞培养液中谷草氨酸氨基转移酶（ AST）、磷酸肌酸激酶（ CPK）、乳酸脱氢酶（ LDH）释放量；测定各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量；通过流式细胞术测定细胞凋亡率。结果与空白对照组相比，缺氧/复氧模型组心肌细胞形态明显异常、细胞存活数明显减少，培养液中AST、CPK、LDH释放量显著升高，细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低且MDA含量显著升高，差异均具有统计学意义（P﹤0.05，P﹤0.01）。与缺氧/复氧模型组比较，九龙藤总黄酮120、240μg/ml干预组心肌细胞形态明显好转，存活细胞数明显增加，培养液中AST、CPK释放量显著减少，细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低，细胞凋亡率显著降低，并且九龙藤总黄酮240μg/ml干预组培养液中LDH释放量显著降低及细胞中GSH-Px活性显著升高，差异均具有统计学意义（P﹤0.05，P﹤0.01）。结论九龙藤总黄酮能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤、并降低细胞凋亡率，提示九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有剂量依赖性的保护作用。
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甘草查尔酮A对H2O2所致心肌细胞损伤的保护作用研究
目的 探讨甘草查尔酮A(LCA)对双氧水(H2 O2)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制.方法将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为空白组、模型组(H2 O2)、LCA低剂量组(10μmol/L)、LCA中剂量组(20μmol/L)、LCA高剂量组(40μmol/L).经LCA给药4 h后,与100μM的H2 O2共孵育24 h后检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH),脂质过氧化物丙二醛(MDA),活性氧自由基(ROS),Na+-K+-ATP酶,Ca2+-ATP酶活性,同时检测过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ),核因子E2相关因子2(Nrf2),和血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA的表达情况.结果LCA对H2O2所致心肌细胞损伤模型有保护作用,可抑制脂质过氧化MDA,ROS的生成,抑制Na+-K+-ATP酶活性,升高Ca2+-ATP酶活性,上调PPARγ,Nrf2和HO-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01).结论甘草查尔酮A对H2 O2所致心肌细胞损伤有显著保护作用,且其作用机制可能与激活PPARγ/Nrf2/HO-1通路,缓解线粒体氧化应激有关.
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新生大鼠心肌细胞原代培养方法
目的 探讨乳鼠心肌细胞的原代培养方法,更好地获取高存活率、高搏动率及高纯度的心肌细胞,以建立良好的原代心肌细胞研究模型.方法 无菌状态下取出生3 d以内Wistar乳鼠心室肌,以混合消化酶(0.06%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型胶原酶均量混合液)反复进行短时间多次消化,用差速贴壁法纯化心肌细胞,并加入5-溴脱氧尿嘧啶抑制非心肌细胞分裂增殖,2 d后首次换液,以后隔日换液.结果 心肌细胞24 h左右已基本贴壁,并可见单个细胞搏动,2～6 d形成单层心肌细胞和其细胞簇的同步搏动,经培养所获细胞搏动良好,存活率高,免疫组化鉴定显示培养的心肌细胞纯度95%以上.结论 该方法是一种较为理想的乳鼠原代心肌细胞培养方法,值得进一步推广.
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CaMKⅡ对心肌细胞影响的研究进展
随着心脏疾病的增加,对其发病机理以及干预防治成为当今学术界重点深入研究的方向.大量研究证明[1],钙调蛋白(CaM)是Ca2+信号变化的重要感受器,也是Ca2+调节蛋白及转录反应的重要效应器.钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)能调节基因的转录表达,在信号传导和调节心脏功能中的作用与其异构体的亚细胞定位有关.CaMKⅡ的活性和表达程度在心律失常、心肌肥厚、心肌细胞凋亡的发生中起着非常重要的作用.
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丹参酚酸B调节缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的量效时效关系研究
目的:探讨丹参酚酸B不同给药浓度和不同给药时间窗对缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的调节作用.方法:分离纯化出生1～3 d Wistar乳鼠心肌细胞、建立体外缺氧细胞模型.丹参酚酸B(SalB)大、中、小剂量浓度分别为10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7 mol/L并按照缺氧前6 h、缺氧同时和缺氧后6 h 3种给药方式进行干预.qRT-PCR法检测心肌细胞tool样受体4(TLR4)和核因子κB(NFκB)mRNA的表达,细胞爬片免疫组化法检测TLR4和NFκB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度.结果:与正常组比较,缺氧模型组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα浓度均显著升高(P<0.05或P<0.01).和缺氧模型组比较,丹参酚酸B预防给药和同时给药大、中剂量组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα的浓度均显著下降(P<0.05或P<0.01).预防给药大剂量组下降显著(P<0.01).结论:TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路在缺氧损伤6 h即明显激活.SalB预防或同时干预对缺氧损伤的心肌细胞有明显的保护作用,该作用与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎性反应损伤通路相关.SalB具有量效和时效性,以大剂量预防给药效果佳.
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逆灸对不同运动强度小鼠心肌细胞的保护作用
目的:探讨逆灸对不同运动强度小鼠心肌细胞凋亡损伤的影响.方法:将60只昆明小鼠随机分为空白对照组、空白逆灸组、中等运动对照组、中等运动逆灸组、力竭运动对照组、力竭运动逆灸组,每组10只.采用不同运动强度对小鼠进行训练.各逆灸组取“足三里”“关元”穴进行艾灸治疗,每穴每日灸5壮,每日1次,每周休息1d,共治疗3周.采用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡率,电镜观察各组心肌亚细胞结构破坏程度.结果:中等运动对照组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率升高(P＜0.05);中等运动逆灸组与中等运动对照组相比心肌细胞凋亡率下降(P＜0.05);力竭运动对照组与中等运动对照组相比,心肌细胞凋亡率升高(P＜0.05);力竭运动逆灸组与力竭运动对照组相比,心肌细胞凋亡率明显下降(P＜0.05).电镜观察显示,中等运动逆灸组比中等运动对照组心肌细胞亚细胞结构破坏程度轻,力竭运动逆灸组比力竭运动对照组心肌细胞亚细胞结构破坏程度轻.结论:不同运动强度的运动训练均可引起心肌细胞发生凋亡损伤,且伴有心肌组织损伤,随着运动强度加大,心肌细胞发生凋亡更加明显;艾灸可减轻高强度运动对小鼠心肌细胞造成的损伤,减少细胞的凋亡.
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针灸对心肌细胞钙超载保护机制的研究进展
钙离子(Ca2+)作为细胞内普遍存在的第二信使,其相关的信号转导通路参与了机体内多种生理活动和病理变化的信号转导,具有广泛和重要的生理学作用,但其具体机制尚未被完全阐明.目前在心肌损伤的机制研究中,钙超载学说已得到医学学术界的公认,越来越多的研究证明钙超载是引发心肌细胞损伤的重要原因之一.笔者查阅了近10年国内外相关的文献资料发现,针灸对心肌细胞钙超载的保护机制主要有细胞膜Ca2+转运途径、肌浆网膜Ca2+转运途径及线粒体途径(即能量代谢途径)等.
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马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制研究
目的:研究马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制.方法:利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型.将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤加10 mg·L-1 PTF组、缺氧/复氧损伤加20 mg·L-PTF组、缺氧/复氧损伤加40 mg·L-1PTF组.MTT法检测心肌细胞存活率,荧光分光光度法 测定心肌细胞内钙离子浓度,比色法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达.结果:与A/R组比较,PTF组(终质量浓度为10,20,40 mg·L-1)均可明显提高缺氧/复氧损伤的心肌细胞存活率,降低NO浓度、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率[(18.25 ±2.64,P＜0.05),(13.83±1.52,11.21 ±1.76,P＜0.01)],PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达.结论:PTF可通过抑制心肌细胞内钙超载、减轻过量NO的细胞毒性作用、下调Caspase-3表达,从而保护心肌细胞.
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参附注射液对戊巴比妥钠致心衰模型心肌细胞膜ATP酶和相关离子的影响
目的:通过探讨参附注射液对新生大鼠心力衰竭心肌细胞Ca2+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶活性及细胞内Na+,Mg2+,K+,Ca2+浓度的影响,揭示参附注射液强心作用的机制.方法:通过胰蛋白酶消化法和差速贴壁法获得心肌细胞,经0.8％戊巴比妥钠作用5 min后,分别给予1.5,3,6 mg·L-1(5,10,20 mL·L-1)3个不同浓度的参附注射液,作用1h,检测心肌细胞Ca2+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶,Na+-K+-ATP酶的活性和细胞内Na+,Mg2+,K+,Ca2+的浓度.结果:参附注射液能增加心衰模型心肌细胞的搏动强度,提高Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,抑制Na+-K+-ATP酶的活性,降低细胞内K+,Ca2+的浓度,升高细胞内Na+,Mg2+的浓度.结论:参附注射液对戊巴比妥钠致心衰细胞有明显的保护作用,且作用的发挥与调节心肌细胞Ca2+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶,Na+-K+-ATP酶的活性和细胞内Na+,Mg2+,K+,Ca2+的浓度有关.
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地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响
目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg· L-1干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L-1)干预组,每组设10个复孔.各组细胞经药物干预6h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析.结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P＜0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P＜0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P＜0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P＜0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg-L-1干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关.
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气血并治方有效组分干预H/R损伤心肌细胞AMPK相关糖脂代谢通路的分析
目的:观察气血并治方有效组分对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)相关糖脂代谢通路的作用机制.方法:分离、提取、培养出生1 ～2dSD乳鼠原代心肌细胞,于常规倒置相差显微镜下观察原代心肌细胞形态及生长状态,经α-横纹肌辅肌动蛋白(α-actinin)免疫荧光染色鉴定为心肌细胞后,进行缺氧3h复氧2h处理制作H/R损伤模型,随机分为正常组(正常氧),模型组(缺氧/复氧),曲美他嗪组(缺氧/复氧+100 μmol·L-1盐酸曲美他嗪,TMZ),气血并治方有效组分组(缺氧/复氧+1 mmol·L-1气血并治方有效组分,CWQB).采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定AMPK代表性亚基心肌一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα),及其糖代谢通路中葡萄糖转运体4(GLUT4),磷酸果糖激酶2(PFK2),脂肪酸代谢通路中乙酰辅酶A羧化酶(ACC2),脂肪酸移位酶(FAT/CD36)的基因及蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组,TMZ组,CWQB组的AMPKα,GLUT4,PFK2基因和蛋白表达上调,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达下调(P＜0.05);与模型组比较,TMZ组,CWQB组AMPKα,GLUT4,PFK2,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达均上调(P＜0.05),其中TMZ组上调AMPKα,FAT/CD36基因和蛋白,上调GLUT4,PFK2基因表达的效果更为显著(P＜0.05).结论:气血并治方有效组分可以激活H/R损伤心肌细胞的AMPK信号通路,增强GLUT4介导的葡萄糖转送,PFK2参与的糖酵解,同时促进FAT/CD36调控的脂肪酸转运,上调ACC2抑制脂肪酸氧化过程,进而提高缺氧/复氧条件下心肌细胞对葡萄糖、脂肪酸等产能底物的利用能力,改善H/R损伤心肌细胞的能量代谢.
关键词： 气血并治方 缺氧/复氧 心肌细胞 糖脂代谢 一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶 -
氧化苦参碱对醛固酮诱导心肌细胞损伤的保护作用
目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌细胞损伤的保护作用,并分析其对盐皮质激素受体(MR)转录和表达的影响.方法:采用胰酶消化差速贴壁法分离纯化新生Sprague-Dawley(SD)大鼠原代心肌细胞,采用肌钙蛋白和肌动蛋白免疫细胞化学法鉴定心肌细胞及其纯度,并建立ALD诱导的细胞损伤模型.采用噻唑蓝(MTT)法确定ALD导致心肌细胞损伤的佳作用浓度与时间.实验分为空白组(无血清培养基),ALD组(佳刺激浓度组),OMT高剂量(ALD+100 mg·L-1OMT)组和OMT低剂量(ALD +50 mg·L-10MT)组.OMT预保护2h,继续加入ALD共同作用36 h,并用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)外漏检测分析OMT对ALD诱导心肌细胞膜损伤的保护作用.逆转录-PCR (RT-PCR)分析MR mRNA水平.免疫印迹法(Western blot)检测MR和醛固酮合成酶(CYP11 B2)的蛋白表达.结果:16 mg·L-1 ALD诱导心肌细胞36 h后能显著引起细胞损伤,OMT(50,100 mg·L-1)能够抑制ALD诱导的细胞活力下降及LDH外漏量升高.同时,OMT(50,100mg· L-1)能够抑制ALD诱导的MR mRNA水平和蛋白表达升高,上调CYP11 B2蛋白表达.结论:OMT对ALD诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制ALD-MR系统激活有关.
