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芳香新塔花黄酮抗氧化活性及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用
目的 探讨芳香新塔花黄酮(ZCF)的抗氧化活性,以及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)清除法测定ZCF的自由基捕获清除能力.体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后丙二醛(MDA)的变化.结果 ZCF浓度与 DPPH自由基的清除率存在量效关系,半数清除浓度IC50为0.017 mg/ml.ZCF能明显降低缺氧-复氧模型下培养液中的MDA浓度(P<0.05).结论 ZCF具有潜在的抗氧化和心肌保护作用.其心肌保护作用机制可能与抑制脂质过氧化,增强心肌细胞抗氧化能力有关.
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四逆汤水提物对缺氧-复氧损伤心肌细胞的保护作用
目的:观察四逆汤水提物(Sini decoction,SND)对培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧条件下的直接保护作用.方法:动态采集并分析正常对照组、缺氧复氧组、四逆汤水提物8.0、17.9、40.0、89.4、200μg/ml给药组心肌细胞在缺氧前,缺氧30、60、90、120、150、180min以及复氧30min和60min细胞搏动频率及收缩面积的变化;比色法测定培养液中LDH;使用MTT法测定心肌细胞存活量.结果:心肌细胞搏动频率及收缩幅度随着缺氧时间延长而逐渐降低,四逆汤水提物给药组(除8.0μg/ml组外)较缺氧复氧组搏动维持时间长,且200.0μg/ml组在复氧后能恢复搏动.缺氧3h缺氧复氧组乳酸脱氢酶(LDH)漏出率较正常对照组升高(P＜0.05);除8.0μg/ml组外,四逆汤水提物不同浓度组LDH漏出率较缺氧复氧组降低,存在浓度-效应关系.复氧1h,各给药组LDH漏出率也较缺氧复氧组低.缺氧复氧组与正常对照组比较,存活的心肌细胞减少(P＜0.01);给药组心肌细胞存活量较高,呈浓度-效应关系.结论:四逆汤水提物可延长缺氧状态下心肌细胞的搏动时间,减缓收缩力的衰减,减少细胞膜损伤及提高缺氧复氧心肌细胞的存活量,表现出对心肌细胞的直接保护作用.
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葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤时NO产量增加的抑制作用
目的:观察葛根素对缺氧-复氧损伤诱导的大鼠乳鼠心肌细胞一氧化氮(NO)产生的作用.方法:采用硝酸还原酶法测定对照组、模型组、及1,0.1,0.01 g@L-1 Pue给药组在各个时间点时细胞培养上清液中NO含量的变化.结果:复氧开始后,模型组NO合成显著性地增加(P＜0.01).复氧后6 h,NO合成激增,并一直保持.3种剂量的Pue在复氧后6 h才表现显著性抑制(P＜0.01)NO合成的作用,并保持至其后抖h.结论:在NO合成量激增时Pue才表现出显著降低缺氧-复氧损伤时心肌细胞分泌的NO,并呈剂量依赖趋势.
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黄连解毒汤有效成分对缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞VCAM-1表达的影响
目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧.复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制.方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型.用0.128,0.064,0.032 μmol·mL-1栀子苷,0.028,0.014,0.007 μmol.mL-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006 μmol·mL-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术,检测平均吸光度和平均面积,比较各组血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达的变化;采用RT-PCR方法检测并比较各组VCAM-1 mRNA表达的变化.结果:模型组VCAM-1蛋白表达的平均吸光度值和平均面积以及VCAM-1 mRNA表达显著高于正常组(均P<0.01).所有给药组的平均吸光度值和平均面积均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.01).0.007 μmol·mL-1黄芩苷组、0.012,0.006 μmol.mL-1小檗碱组的平均吸光度值较正常组高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.01),其余各给药组与正常组的差异无统计学意义.0.014 μmol.mL-1黄芩苷组平均面积高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05),其余各给药组与正常组的差异无统计学意义.各给药组mRNA表达高于正常组且低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧-复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制VCAM-1的表达.
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环氧化酶-2参与血红素氧化酶1对抗大鼠心肌缺氧-复氧的损伤
目的 研究环氧化酶-2是否参与血红素氧化酶1(HO-1)对抗大鼠心肌缺氧.复氧的损伤及其可能的机制.方法 采用离体大鼠心脏Langendorff灌流法观察左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)和大左室收缩、舒张速率(±dp/dtmax).用全自动生化分析仪分析冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)释放量.应用双波长分光光度计法间接测定大鼠血中COHb含量.心脏冷冻切片法观察心肌梗死面积.用6-keto-PGF1αRIA kit测定样本中前列腺素I2(PGI2)的稳定产物6-keto-PGF1α的含量.结果 ①HO-1的诱导剂高铁血红素明显抑制缺氧-复氧心脏LVEDP增高,降低LVDP和±dp/dtmax;减少复氧期LDH释放,缩小心肌梗死面积(P＜0.01).②HO-1的抑制剂可加重缺氧-复氧心脏LVDP和±dp/dtmax下降,LDH释放和梗死面积明显高于单纯缺氧-复氧组(P＜0.05).③环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布有部分取消高铁血红素降低缺氧-复氧心脏LVEDP、增加LVDP和±dp/dtmax,的作用,使LDH的释放和梗死面积明显增加(P＜0.05).结论 诱导HO-1增加可保护缺氧-复氧心肌,其作用可能通过调节COX-2的活性来完成.
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左旋四氢巴马汀对大鼠脑微血管内皮细胞缺氧-复氧时细胞间粘附分子-1的影响
目的探讨左旋四氢巴马汀(L-THP)对缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法采用流式细胞仪检测脑微血管内皮细胞在缺氧、缺氧-复氧及加入L-THP后ICAM-1的阳性细胞百分率.结果缺氧12h,脑微血管内皮细胞ICAM-1的表达与常氧时差异无显著意义,缺氧12h再给氧12h,ICAM-1的表达明显增加,加入L-THP后,ICAM-1的阳性细胞百分率明显降低.结论 L-THP可减少缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞ICAM-1的表达.
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丹参水提物对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用
本文研究丹参水提物对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用。以乳鼠心室肌进行心肌细胞培养并建立缺氧-复氧损伤模型，检测不同浓度丹参水提物预处理后细胞的存活率，乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转移酶(AST)的泄漏量及Akt的磷酸化水平。丹参水提物对缺氧-复氧损伤的心肌细胞具有明显的保护作用，这可能与它激活PI3K/Akt信号通路有关。
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油茶皂苷对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的影响
目的研究油茶皂苷(SQS)对缺氧-复氧诱导的内皮细胞损伤及中性粒细胞黏附的作用及可能的机制.方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧-复氧损伤模型,取培养细胞上清液测定LDH活性,分别测定HU-VEC存活率,中性粒细胞黏附率、线粒体丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.同法检测中性粒细胞黏附.结果缺氧-复氧可导致HUVEC损伤及中性粒细胞黏附的增加,表现为LDH活性、MDA水平及中性粒细胞黏附率显著升高,而SOD和GSH-Px活性显著下降;SQS呈浓度依赖性地对抗上述改变.结论 SQS对缺氧-复氧诱导的HUVEC损伤有保护作用,其机制可能与其抗脂质过氧化和抑制白细胞黏附有关.
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葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧时脂质过氧化损伤的保护作用
目的观察葛根素(puerarin,Pue)对缺氧-复氧损伤造成的大鼠乳鼠心肌细胞脂质过氧化反应的作用.方法分别测定各个时点对照组、模型组及各给药组(1,0.1,0.01 g/L Pue)培养上清中SOD活性和MDA含量,细胞MTT代谢率的变化.结果缺氧及复氧都可造成SOD活性下降、MDA含量升高及MTT代谢率下降,复氧后2h为显著(P＜0.01).3种剂量Pue均能对抗这3个指标的异常变化,但浓度越小,作用越弱.结论Pue能减轻缺氧时产生的自由基损害,减少SOD的消耗,并可能促进其合成,亦可保护心肌细胞的线粒体功能,这些作用呈剂量依赖趋势.
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缺氧-复氧对肾小管上皮细胞内DRP1及OPAl表达的影响
目的:探讨缺氧-复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内动力相关蛋白1(Dynamin related protein 1,DRP1)及视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy,OPA1)表达的变化.方法:以人近曲肾小管上皮细胞株为研究对象,将培养细胞随机分为正常对照组和H/R组.正常对照组常规培养,H/R组先缺氧24h,然后复氧培养6h.光镜观察细胞形态变化,CCK -8检测细胞活力,透射电子显微镜观察线粒体形态改变,免疫组织化学法检测细胞内DRP(1)和OPA1蛋白表达.结果:H/R组与对照组相比,细胞活力下降,线粒体出现凋亡相关改变,OPA1表达减少而DRP1的表达增加.结论:缺氧-复氧可导致HK -2细胞发生凋亡相关改变,其机制可能与诱导线粒体形态相关蛋白DRP1、OPA1的表达改变相关.
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丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧所致细胞凋亡的保护作用
目的:观察丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用,并探讨其可能机制.方法:采用原代培养乳鼠的心肌细胞,ox-LDL孵育24小时,再采用95%N2+5%CO2模拟缺氧培养3小时后,更换为正常DMEM培养液培养9小时的方法建立心肌细胞缺氧/复氧模型.乳鼠心肌细胞随机分为6组:正常对照组(Control group);ox-LDL组(ox-LDL group);ox-LDL缺氧-复氧组(ox-LDL +A/R group);丹参保护组,加丹参低剂量(SM L/ox-LDL +A/R group)、中剂量(SM M/ox-LDL +A/R group)、高剂量(SM H/ox-LDL +A/R group)组.利用MTT比色法检测心肌细胞存活率,Hoechst33342染色检测凋亡率,采用Western blot分别观察Cytc、Bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达.结果:通过MTT比色法检测,加入丹参高剂量组对细胞保护有效.与Control组比较,ox-LDL组:细胞核有固缩和断裂,Cytc、Bax和caspase-3的表达升高,细胞存活率和bcl-2表达降低;与ox-LDL组比较,ox-LDL +A/R组:细胞核固缩和断裂加重,Cytc、Bax和caspase-3的表达进一步增加,细胞存活率和bcl-2表达则显著降低;SM /ox-LDL +A/R组:缺氧-复氧诱导的上述变化显著减轻.结论:丹参对ox-LDL孵育乳鼠心肌细胞的缺氧-复氧损伤具有保护作用,其机制与抑制氧化应激所致的细胞凋亡有关.
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山莨菪碱对脑微血管内皮细胞缺氧-复氧时细胞间黏附分子-1的影响
目的探讨山莨菪碱(Ani)对缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法采用流式细胞仪检测脑微血管内皮细胞在缺氧、缺氧-复氧及加入Ani后ICAM-1的阳性细胞百分率.结果缺氧12 h,脑微血管内皮细胞ICAM-1的表达与常氧时差异无显著意义,缺氧12 h再给氧12 h,ICAM-1的表达明显增加,加入Ani后,ICAM-1的阳性细胞百分率明显降低.结论 Ani可减少缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞ICAM-1的表达.
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阿那白滞素对缺氧-复氧和兴奋性氨基酸所致神经细胞损伤的保护作用
用缺氧-复氧环境和兴奋性氨基酸谷氨酸诱导培养神经元细胞损伤和坏死,观察阿那白滞素(1)对体外培养大鼠脑神经元细胞坏死的保护作用,以研究其抗缺血性脑损伤的作用机制.结果表明,1的3个剂量组(25、50、100μg/ml)均能明显减轻缺氧-复氧所致的神经元细胞损伤,浓度效应呈正相关.定性观察表明,1的3个剂量组对谷氨酸致神经元细胞损伤亦有改善作用,且与浓度相关.提示在缺氧-复氧和兴奋性氨基酸导致的大鼠神经元细胞损伤中可能有IL-1炎症通路参与.
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异氟烷改善离体鼠肝缺氧-复氧后氧供耗平衡
目的:研究异氟烷对离体鼠肝在缺氧-复氧状态下肝流量和肝氧耗的作用.方法:建立离体鼠肝灌流模型.将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林碳酸氢盐缓冲液恒压灌流(有氧状态用1.2 kPa,缺氧状态用0.2 kPa),另外加入葡萄糖10 mmol/L维持营养,加入1%牛血清白蛋白维持胶体渗透压,控制在生理pH值和温度,实时监测氧分压和肝流量变化.不同浓度异氟烷随混合气带入离体鼠肝灌注的人工肺.结果: (1)异氟烷对基础状态下鼠肝流量无明显影响,但可改善缺氧后复氧状态下鼠肝流量的减少.(2)异氟烷对基础状态下鼠肝氧耗有降低作用,但在复氧状态下却改善了鼠肝氧耗的下降.结论:异氟烷能改善离体鼠肝缺氧-复氧后氧供耗平衡,保护肝脏功能.
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重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax 表达和神经元凋亡的影响
实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素-6(recombinant human interleukin-6,rhIL-6)对缺氧-复氧后Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响.把培养12 d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL-6组,同时于缺氧环境(90% N2+10% CO2)中培养2、4 h后,再于常氧培养箱内复氧培养24和72 h.于不同时间取出,分别用抗Bcl-2和Bax 抗血清进行免疫组织化学染色,观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax的表达,并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响.结果可见,与缺氧前相比,缺氧-复氧后24和72 h,海马神经元Bcl-2表达明显减弱,Bax表达明显增强,凋亡神经元明显增多.经rhIL-6预处理的海马神经元与对照组相比,缺氧-复氧后24和72 h ,Bcl-2表达明显增强,Bax表达明显减弱,凋亡神经元明显减少.本实验结果提示,rhIL-6对海马神经元缺氧-复氧损伤具有一定的保护作用.
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丙泊酚对高糖环境下心肌细胞缺氧后损伤的保护作用
目的 研究丙泊酚对高糖环境下心肌细胞缺氧后损伤的保护作用.方法 培养大鼠原代 H9C2 心肌细胞,构建细胞缺氧-复氧模型.将这些心肌行实验分组:正常培养组(NC 组)、高糖培养组(HG组)、高糖缺氧-复氧组(GR组),在高糖缺氧-复氧环境下,培养基中分别加入终浓度分别为 12.5 μmol/L(P12.5 组)、25 μmol/L(P25 组)、50 μmol/L(P50 组)以及 100 μmol/L(P100 组)的丙泊酚以及终浓度为 100 μmol/L的二甲基亚砜(DMSO)溶剂组(D100 组).检测各组的细胞活力、肌酸激酶-MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度以及细胞内氧化应激水平和线粒体依赖性细胞凋亡水平.结果 与 NC 和 HG 组比较,其余组的细胞活力明显降低,LDH、MDA浓度、CK-MB和 cTnI 相对浓度明显升高,T-SOD、线粒体活性和 ATP 相对浓度明显降低(P<0.05);与 GR组比较,P12.5 组、P25 组、P50 组细胞活力明显升高,LDH、MDA 浓度、CK-MB和 cTnI相对浓度明显降低,T-SOD、线粒体活性和 ATP 相对浓度明显升高(P<0.05);与 P25 组比较,P50 组、P100 组以及D100 组细胞活力明显降低,LDH、MDA 浓度、CK-MB 和 cTnI 相对浓度明显升高,T-SOD、线粒体活性和 ATP相对浓度明显降低(P<0.05).结论 一定浓度的丙泊酚可以通过减轻氧化应激,减少线粒体的损伤从而减轻高糖缺氧对心肌细胞的损伤.
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硫化氢后处理对大鼠缺氧-复氧心肌细胞的保护作用
目的：探讨硫化氢(H 2 S)后处理对缺氧-复氧损伤成年大鼠心肌细胞的影响,评价其心肌保护作用及其可能的机制。方法分离成年 SD 大鼠心肌细胞,随机均分为四组：正常组(N 组)、缺氧-复氧组(HR 组)、缺氧后处理组(IPTC 组)和 H 2 S 后处理组(S 组),在激光扫描共聚焦显微镜下检测 F-肌动蛋白/G-肌动蛋白荧光强度及 Western blot 技术检测各组心肌细胞 p38MAPK 磷酸化(p-p38MAPK)水平；再将上述四组又分为加或不加细胞松弛素 D(CyD)两个亚组,激光扫描共聚焦显微镜下检测细胞内 Ca2+、pH 值荧光强度。结果 HR 组、IPTC 组和 S 组 F/G-肌动蛋白明显高于N 组(P <0.05)；IPTC 组和 S 组 F/G-肌动蛋白明显高于 HR 组(P <0.05),且 S 组明显高于 IPTC组(P <0.05)。与无 CyD 处理比较,CyD 处理时四组 Ca2+荧光强度明显升高(P <0.05)；N 组与HR 组 pH 荧光强度升高,IPTC 组与 S 组 pH 荧光强度降低。无 CyD 处理时 N 组、IPTC 组和 S 组Ca2+荧光强度明显低于、pH 值荧光强度明显高于 HR 组(P <0.05)；CyD 处理后 HR 组、IPTC 组和 S 组 Ca2+荧光强度明显高于,IPTC 组和 S 组 pH 值荧光强度明显低于 N 组(P <0.05)。心肌细胞内 HR 组 p-p38MAPK 水平明显高于 N 组、IPTC 组和 S 组(P <0.05)。结论硫化氢后处理可以促进 F-肌动蛋白的重塑,稳定缺血缺氧成年大鼠心肌细胞内环境；硫化氢后处理可降低缺血缺氧成年大鼠心肌细胞 p38MAPK 磷酸化水平。
关键词： 硫化氢 缺氧-复氧 肌动蛋白 钙超载 p38MAPK 磷酸化 -
地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对缺氧-复氧心肌细胞内游离Ca2+的影响
目的观察地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对缺氧-复氧心肌细胞内Ca2+的影响.方法将原代培养乳鼠心肌细胞随机分为对照、缺氧-复氧及1.5MAC地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理后缺氧-复氧五组.用Fra-2标记细胞内Ca2+,荧光光度计进行测定.结果与对照组比,复氧20分钟时,其余四组细胞内Ca2+均显著升高;而地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理组的升高幅度明显低于缺氧-复氧组;三个吸入麻醉药组间无差异.复氧60分钟,缺氧-复氧组虽有明显下降,但仍显著高于对照组,地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理组则降至对照组水平.结论地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理,可明显减轻缺氧-复氧心肌引起的细胞内游离Ca2+升高.
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钙敏感受体及钙蛋白酶在大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中的表达及其意义
目的：探究大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体及钙蛋白酶的表达变化及其意义。方法：将原代培养的新生SD大鼠脊髓神经元随机分成4组：正常对照组、缺氧复氧组、激活组、抑制组。后3组神经元均制备缺氧复氧损伤模型，激活组加入钙敏感受体激动剂GdCl3，抑制组加入受体抑制剂NPS2390。应用Hoechst 33258染色观察各组脊髓神经元凋亡；应用免疫荧光技术分析钙敏感受体及钙蛋白酶蛋白在脊髓神经元的表达定位；采用蛋白质印迹法检测各组钙敏感受体、钙蛋白酶以及Bax蛋白的表达水平。结果：与对照组比较，缺氧复氧组脊髓神经元凋亡增加，并且钙敏感受体、钙蛋白酶、Bax蛋白的表达明显升高（均P＜0．01）；GdCl3可明显增强上述作用，而NPS2390可明显抑制上述作用。结论：在缺氧复氧损伤过程中，脊髓神经元凋亡增加，钙敏感受体及钙蛋白酶表达增多。
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红花黄色素对幼鼠缺氧-复氧损伤的保护作用
目的:观察幼鼠缺氧-复氧后脑水肿和脂质过氧化作用的变化及红花黄色素对其影响和意义.方法:采用SD幼鼠缺氧-复氧模型,于缺氧前30min腹腔注射红花黄色素(7g生药/kg体重).幼鼠窒息缺氧40min后,再复氧24h、48h,用干湿质量法测定脑组织含水量.以硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化酶法测超氧化物歧化酶(SOD)活性.观察红花黄色素对缺氧-复氧24h、48h时脑组织含水量、MDA及SOD活性的影响.结果:缺氧-复氧48h时脑组织含水量、MDA含量明显增加,而SOD活性下降,红花黄色素能减轻脑组织水肿程度,抑制MDA生成,增强SOD活性.结论:红花黄色素通过减少脂质过氧化作用对缺氧-复氧脑损伤有保护作用.
