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气血并治方有效组分对缺氧/复氧损伤心肌保护作用的机制研究
目的:观察气血并治方组分配伍(Components of water extract from Qixue Bingzhi Recipe,CWQB)对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞的保护作用,探讨其改善心肌能量代谢从而防止细胞凋亡的相关性机制.方法:分离、提取、培养出生1-2天的SD乳鼠原代心肌细胞,缺氧3h复氧2h制作H/R模型,分为Control组(正常氧组)、H/R组(缺氧/复氧模型)、TMZ组(缺氧/复氧模型+100μmol/L曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ))和CWQB组(缺氧/复氧模型+1mmol/L气血并治方有效组分).采用高效液相色谱分析法(High Performance Liquid Chromato-graph,HPLC)测定各组细胞高能磷酸化合物-一磷酸腺苷(Adenosine mono-phosphate,AMP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)的含量并计算总腺苷酸量(Total adenylic acid,TAN)、能荷(Energy charge,EC)水平;酶联免疫吸附法(Enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)法检测心肌细胞损伤标志物肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白T(Troponin,cTnT)水平,流式细胞术检测心肌细胞早期凋亡率.Pearson相关性检验分析心肌损伤标志物、早期凋亡率与高能磷酸化合物含量之间的关系.结果:与H/R组比较,TMZ组、CWQB组AMP含量下降,ADP、ATP含量和TAN、EC水平均有所升高,其中TMZ组ADP、ATP、TAN升高程度较CWQB组更为显著(p＜0.05);TMZ组、CWQB组CK-MB、cTnT含量显著下降,其中CWQB组cTnT含量下降更为显著(p＜0.05);TMZ组、CWQB组早期凋亡率有所下降,TMZ组下降更为显著(p＜0.05).相关性分析显示,CK-MB水平与ADP浓度呈显著负相关;早期凋亡率与AMP浓度呈显著正相关,与ADP、ATP浓度呈负相关(P＜0.01).结论:CWQB能够在降低H/R心肌细胞AMP浓度,升高ADP、ATP浓度和TAN、EC水平的同时,减轻心肌损伤标志物CK-MB、cTnT含量,抑制心肌细胞的早期凋亡率,从而发挥对H/R损伤心肌细胞的保护作用.
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气血并治方组分不同配伍干预高脂血症大鼠的比较研究
目的：对优化均匀设计的气血并治方有效组分D、E、F进行不同配伍配比的进一步验证，观察和比较其对高脂血症模型大鼠的病理环节作用强度和作用靶点的差异。方法：采用SD大鼠，100只，其中90只给予高脂饲料喂食7天后，随机分层分组：全方组；D、E原方配伍组；D、E优化配伍组；D、E优全之间组；D、E 优化反伍组；原方配伍加 F组；优化配伍加 F组；气血并治方组分 D 主要为芍药苷约占49.12%、E组分主要为总黄酮约占30.0%，F组分主要为总酸约占32.07%；阳性药物对照组（血脂康，0.108 g·kg-1）和高脂模型组。另设空白对照组（喂普通饲料）。各药物组按药物配伍比例给予灌胃14天后，动物麻醉后取血测定血脂、血小板聚集性、血管活性物质和炎症水平指标。结果：与模型组比较，气血并治方有效组分D、E原方配伍组及优化配伍组对胆固醇（TC）有显著降低作用（P<0.05），优化配伍组降低TC的水平低为（3.49依0.86）mmol·L-1；全方组、D、E原方配伍组和优化配伍组对血小板大聚集率有显著抑制作用（P<0.05，P<0.01），而优化反配伍（D、E反比例）组则无作用；D、E原方配伍组、优化配伍组及优全之间组对6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-GPF1α）有显著升高作用（P<0.05），D、E优化组对内皮素（ET）有降低作用（P<0.05），其他各组对血管活性物质没有显著影响；全方组、D、E原方配伍加F组对白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平有显著抑制作用（P<0.05，P<0.01）。结论：气血并治方有效组分原方配伍和优化配伍的作用环节及作用强度有一定差异，加入F部位后对炎症水平的抑制作用有一定的增强。
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均匀设计筛选理气活血中药提取物优化配伍的实验研究
目的：通过优化的均匀设计方法，以脂质代谢、血小板功能、血管活性物质和炎症因子等药理学指标，对理气活血中药配伍（简称气血并治方）水溶性提取物进行配伍配比，寻找和辨识其防治动脉粥样硬化的有效组分及佳配比。方法：将气血并治方水溶性提取物通过大孔树脂按照不同极性分为6组分，运用优化的均匀设计方法进行不同比例的配伍，观察各配伍组分对高脂血症模型大鼠的血脂水平、血小板聚集性、炎症因子和血管内皮因子的影响，比较其作用强度和作用环节的差异。结果：通过优化均匀设计的药理实验和统计分析，与模型组比较，气血并治方水溶性提取物的D组分（主要为芍药苷，约占49.12%）、E组分（主要为总黄酮，约占30.0%）配伍具有显著降低血清胆固醇和甘油三酯水平的作用（P<0.01），同时对血浆内皮素（ET）和血小板大聚集率有显著抑制作用（P<0.01）。方中F组分（主要为总酸，约占32.7%）具有抑制血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）水平的作用（P<0.01）。结论：气血并治方中药水溶性提取物不同配伍可作用于机体的不同靶点或环节，其全方提取物的有效组分主要是芍药苷、黄酮类、总酸，佳比例约为1、1、1。
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气血并治方胶囊治疗颈动脉粥样硬化的临床研究
目的:观察气血并治方胶囊治疗颈动脉粥样硬化(CAS)的临床疗效并探讨其可能的作用机理.方法:CAS患者100例随机分为两组:对照组(50例)给予西医常规治疗,治疗组(50例)在西医常规治疗的基础上给予气血并治方胶囊,连续服用3个月.治疗前后对患者进行血瘀证积分统计,并测定患者血脂、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素PGF1α(6-Keto-PGF1α)的含量.结果:气血并治方胶囊可以改善患者血瘀证积分,降低甘油三脂、低密度脂蛋白.升高高密度脂蛋白,减少hs-CRP水平,抑制TXB2合成、增加PGF1α水平,与对照组相比,有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).结论:气血并治方胶囊能有效地改善CAS患者的临床症状,调节患者脂质代谢,降低患者血浆炎性因子hs-CRP含量.
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气血并治方有效组分干预H/R损伤心肌细胞AMPK相关糖脂代谢通路的分析
目的:观察气血并治方有效组分对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)相关糖脂代谢通路的作用机制.方法:分离、提取、培养出生1 ～2dSD乳鼠原代心肌细胞,于常规倒置相差显微镜下观察原代心肌细胞形态及生长状态,经α-横纹肌辅肌动蛋白(α-actinin)免疫荧光染色鉴定为心肌细胞后,进行缺氧3h复氧2h处理制作H/R损伤模型,随机分为正常组(正常氧),模型组(缺氧/复氧),曲美他嗪组(缺氧/复氧+100 μmol·L-1盐酸曲美他嗪,TMZ),气血并治方有效组分组(缺氧/复氧+1 mmol·L-1气血并治方有效组分,CWQB).采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定AMPK代表性亚基心肌一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα),及其糖代谢通路中葡萄糖转运体4(GLUT4),磷酸果糖激酶2(PFK2),脂肪酸代谢通路中乙酰辅酶A羧化酶(ACC2),脂肪酸移位酶(FAT/CD36)的基因及蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组,TMZ组,CWQB组的AMPKα,GLUT4,PFK2基因和蛋白表达上调,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达下调(P＜0.05);与模型组比较,TMZ组,CWQB组AMPKα,GLUT4,PFK2,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达均上调(P＜0.05),其中TMZ组上调AMPKα,FAT/CD36基因和蛋白,上调GLUT4,PFK2基因表达的效果更为显著(P＜0.05).结论:气血并治方有效组分可以激活H/R损伤心肌细胞的AMPK信号通路,增强GLUT4介导的葡萄糖转送,PFK2参与的糖酵解,同时促进FAT/CD36调控的脂肪酸转运,上调ACC2抑制脂肪酸氧化过程,进而提高缺氧/复氧条件下心肌细胞对葡萄糖、脂肪酸等产能底物的利用能力,改善H/R损伤心肌细胞的能量代谢.
关键词： 气血并治方 缺氧/复氧 心肌细胞 糖脂代谢 一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶 -
气血并治方及其配伍对高脂血症血瘀大鼠血管活性物质的影响
目的:观察气血并治方及方中活血药和理气药对大鼠脂质代谢、血管活性因子及活血化瘀的作用,比较全方及方中活血药和理气药的作用差异.方法:实验采用高脂饲料和应激方法造成大鼠高脂血症血瘀模型,灌胃给药2周后,检测大鼠血脂水平、血管活性物质含量和血液流变性指标的变化.结果:全方组、活血药组及理气药组对TC均有显著降低作用,作用强度依次为全方组、理气药、活血药,对LDL-C也有显著降低作用,和模型组比较有明显差异(P＜0.05,P＜0.01);理气药组和全方组对TG有显著降低作用,和模型组比较有明显差异(P＜0.05,P＜0.01);全方组能显著降低TC/HDL比值,和模型组比较有明显差异(P＜0.01);全方组对内皮素(ET)含量有显著抑制作用,和模型组比较有明显差异(P＜0.01),全方、活血药对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)有显著抑制作用.全方和活血药均有降低大鼠血液黏度、抑制血小板聚集性,降低红细胞聚集等作用.结论:气血并治方及方中活血药和理气药可作用于引起动脉粥样硬化的不同环节,二者配伍后的疗效在某些方面有一定增加;活血药组对血液流变性作用明显,全方组、理气药组次之,有效作用项目较少.
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气血并治方及其配伍药对对高脂血症血瘀大鼠血小板聚集性和血小板活化表达率的影响
目的:研究观察气血并治方及其方中配伍药对对高脂血症大鼠脂质代谢、血小板聚集性、血小板活化分子表达率的影响,比较它们作用强度和作用环节的差异.方法:采用高脂饲料和应激(肾上腺素)造成大鼠高脂血症血瘀模型,灌胃给药,观察全方及方中活血药药对、理气药药对对高脂血症血瘀动物模型的影响.结果:全方组、川芎-赤芍组、柴胡-赤芍组及柴胡-枳壳组对大鼠总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)均有显著降低作用(P＜0.05,P＜0.01);全方组对甘油三酯(TG)和脂蛋白(α)也有显著降低作用(P＜0.05);柴胡-赤芍组及柴胡-枳壳组对脂蛋白(α)有显著降低作用(P＜0.05).全方组、川芎-赤芍组对血小板聚集性有显著抑制作用(P＜0.05);柴胡-赤芍组、柴胡-枳壳组对血小板活表达率有显著抑制作用(P＜0.05).结论:气血并治方及方中活血药药对和理气药药对可作用于动物高脂血症模型的不同环节,二者配伍后的疗效在某些方面有一定增加.
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气血并治方对颈动脉粥样硬化患者超敏C反应蛋白等指标的影响
目的:探讨气血并治方对颈动脉粥样硬化(AS)患者的干预作用.方法:63例颈AS患者,随机单盲分为治疗组(33例)和对照组(30例).另设相同年龄段健康组25例.对照组给予西药基础治疗,治疗组在此基础上加气血并治方.疗程1个月,观察患者血脂代谢、白细胞介素水平、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)含量和白细胞粘附表达率的变化.结果:治疗组对总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、AS指数(TC/HDL-C)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、Hs-CRP水平以及淋巴细胞和中性粒细胞粘附分子表达率(1CD11b和zCD11b)有显著降低作用(P＜0.05);与对照组治疗后比较,治疗组明显降低TC/HLD-C,且对IL-6、Hs-CRP和1CD11b的影响更为明显(P＜0.05).安全性指标治疗前后均无明显改变(P＞0.05).结论:气血并治方可有效、安全干预颈AS患者的血脂代谢和炎症反应,在预防AS形成、稳定斑块方面具有发展前景.
关键词： 动脉粥样硬化/中医药疗法 @ 气血并治方 C反应蛋白/药物作用 -
气血并治方联合西药治疗下肢动脉硬化闭塞症股动脉支架植入术后60例远期疗效观察
目的 观察气血并治方对下肢动脉硬化闭塞症(ASO)股动脉支架植入后的临床疗效.方法 选择ASO股动脉支架植入患者120例(142条患肢),随机分为中药组60例(72条患肢),对照组60例(70条患肢).所有患者均予长期口服抗血小板药物治疗,中药组加用气血并治方口服.观察两组患者术后6、12、24个月间歇性跛行、静息痛、截肢情况、踝/肱指数(ABI)、血管通畅率等.结果 两组患者术后6、12、24个月与本组术前比较,间歇性跛行、静息痛均明显改善(P＜0.01).术后6、12个月中药组与对照组比较间歇性跛行、静息痛症状差异无统计学意义(P＞0.05),术后24个月间歇性跛行明显降低(P＜0.05).对照组与中药组患者术后6个月血管通畅率分别为83％(45/54例)、88％(46/52例)；12个月分别为69％(37/54例)、81％(42/52例)；24个月分别为54 ％(29/54例)、77％(40/52例).两组术后6个月和12个月血管通畅率差异无统计学意义(P＞0.05)；中药组术后24个月血管通畅率显著高于对照组(P＜0.05).两组患者术后6、12、24个月ABI与本组术前比较差异有统计学意义(P＜0.01).术后6个月中药组ABI与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),术后12个月、24个月中药组ABI较对照组显著增加(P＜0.05).结论 气血并治方可明显提高ASO患者股动脉支架术后血管通畅率,改善肢体缺血症状.
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气血并治方有效组分对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块的干预作用
目的 探讨气血并治方水提取物有效组分(CWQB)配伍对载脂蛋E基因敲除(ApoE-)小鼠晚期动脉粥样硬化不稳定斑块的干预作用及其可能的作用机制. 方法 6周龄ApoE-小鼠,给予高脂饲料,随机分为模型组、辛伐他汀2.5 mg·kg-1组、CWQB 72和360 mg·kg-1组.从24周龄起灌胃给药,每日1次,连续12周.同时取同龄C57BL/6小鼠作为正常对照.36周龄时麻醉处死,检测血脂水平和主动脉病理变化,免疫组织化学及计算机图像处理系统分析主动脉斑块中巨噬细胞内CD68的表达和平滑肌细胞内α-肌动蛋白的表达. 结果 CWQB及辛伐他汀均能降低小鼠的血脂水平,降低其胆固醇含量,升高高密度脂蛋白水平.CWQB大剂量组和辛伐他汀组可见主动脉斑块纤维帽厚度增加,斑块面积和管腔面积的比值下降;斑块中平滑肌细胞内α-肌动蛋白表达增加,巨噬细胞内CD68表达减少. 结论 CWQB具有一定的消减和稳定主动脉斑块的作用,其机制可能与其降低血脂水平、减少斑块内巨噬细胞浸润和增加血管平滑肌细胞数量有关.
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气血并治方提取物对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病理形态和基质金属蛋白酶-1及其抑制物表达的影响
目的 观察气血并治方提取物对ApoE基因缺陷小鼠(AtroE-小鼠)36周时动脉粥样硬化(As)的病理形态、超微结构和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制物-1(TIMP-1)表达的影响方法采用6周龄ApoE-小鼠40只,给予高脂饲料.并从24周起连续给药,中药组分为大剂量组360 mg·kg-1体重(下同)和小剂量组72 mg·kg-1,阳性对照组为辛伐他汀0.52 mg·kg-1,同时取同周龄的C57B1/6小鼠做空白对照,至36周麻醉处死,利用免疫组织化学检测As斑块MMP-1和TIMP-1表达及观察As血管弹力纤维和胶原双重染色、电子显微镜下的病理变化、结果与模型组比较,气血并治方大、小别量及辛伐他汀均能降低纤维帽厚度和脂质核心面积比值,增加斑块的纤维帽厚度等(P＜0.05,P＜0.01).气血并治方大剂量组和辛伐他汀组还能减少MMP-1在As血管中的表达,增强TIMP-1的表达(P＜0.05).结论 气血并治方提取物可以改善ApoE-小鼠晚期As的形成,具有保护血管内皮、抑制MMP-1的表达,改善斑块构成,稳定斑块的作用.
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ox-LDL诱导内皮细胞损伤条件培养基及气血并治方有效组分配伍对平滑肌细胞MAPK、PKC活性和胞内Ca2+荧光强度的影响
目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞(VEC)损伤条件培养基及气血并治方有效组分D(主要为芍药苷)和E(主要为总黄酮)配伍(重量比1:2)是否对血管平滑肌细胞(VSMC)MAPK、PKC活性和胞内Ca2+荧光强度有影响.方法将VSMC正常培养液、ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、辛伐他汀加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E优化配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基等分别作用于VSMC,采用β-放射活性法测定丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性,流式细胞仪检测VSMC内的Ca2+荧光强度.结果 VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与正常培养VSMC相比,细胞MAPK、PKC活性明显增加(P＜0.01),细胞内Ca2+荧光强度增加;有效组分D和E配伍作用于VEC损伤条件培养基培养的VSMC后,与模型组相比,MAPK及PKC活性明显减少(P＜0.01)、细胞内Ca2+荧光强度降低.结论气血并治方中有效组分D和E优化配伍可以拮抗MAPK、PKC活性和细胞内Ca2+荧光强度的增加,气血并治方防治动脉粥样硬化(AS)的作用可能与此有关.
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气血并治方有效组分不同配伍对血管内皮细胞损伤条件培养基诱导血管平滑肌细胞增殖的影响
目的观察气血并治方中有效组分D(主要为芍药苷)和E(主要为总黄酮)原方配伍、D和E优化配伍,对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞(VEC)损伤条件培养基引起血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用.方法将正常VSMC培养液、ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、辛伐他汀加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E原方配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E优化配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基分别作用于VSMC,采用MTT染色法检测VSMC生长状态,流式细胞仪测定VSMC细胞周期.结果与正常组相比较,VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,细胞增殖活性明显增加(P＜0.01)、S期细胞数增加;与VEC损伤条件培养基组相比较,气血并治方中有效组分D和E 原方配伍组(终浓度为1 mg/L)、D和E优化配伍组(终浓度为1 mg/L)细胞增殖活性明显降低(P＜0.01)、细胞周期S期细胞数减少,作用和阳性药辛伐他汀组相似.结论气血并治方有效组分不同配伍能有效地抑制VEC损伤条件培养基诱导VSMC增殖,气血并治方防治AS作用机理与此密切相关.
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ox-LDL诱导内皮细胞损伤条件培养基及气血并治方有效组分D、E配伍对平滑肌细胞增殖及c-myc mRNA表达的影响
目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞(VEC)损伤条件培养基及气血并治方有效组分D(主要为芍药苷)和E(主要为总黄酮)配伍(重量比为1:2)是否对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖相关基因表达有影响.方法将VSMC正常培养液、ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、辛伐他汀加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基等分别作用于VSMC,采用MTT染色法检测VSMC生长活性,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定c-myc mRNA表达.结果 VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与正常培养VSMC相比,细胞生长活性明显增加(P＜0.01),细胞c-myc mRNA表达增强,有效组分D、E配伍与VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与模型组相比,细胞生长活性明显降低(P＜0.01),细胞c-myc mRNA表达减弱.结论气血并治方中有效组分芍药苷和总黄酮配伍可以拮抗ox-LDL诱导VEC损伤条件培养基引起VSMC增殖及c-myc mRNA表达增加,气血并治方防治AS的作用可能与方中有效组分芍药苷和总黄酮配伍抑制VEC损伤条件培养基引起的VSMC增殖相关基因表达增加有关.
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气血并治方有效组分配伍对平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子及其受体基因表达的影响
目的:观察氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤条件培养基及气血并治方有效组分芍药苷和总黄酮配伍(重量比为1∶2)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖相关基因表达的影响.方法:将VSMCs正常培养液、氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导血管内皮细胞损伤条件培养基、辛伐他汀加ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤条件培养基、芍药苷和总黄酮配伍(高、中、低剂量)加ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤条件培养基等分别作用于VSMCs,采用MTT染色法检测VSMCs生长活性,逆转录聚合酶链反应法测定血小板源生长因子BB(platelet-derived growth factor BB, PDGF-BB)和血小板源生长因子受体α(platelet derived growth factor receptor-α, PDGFR-α)基因的表达.结果:ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤条件培养基作用于VSMCs后,与正常培养VSMCs比较,细胞生长活性明显增加(P＜0.01),PDGF-BB和PDGFR-α mRNA表达增强.芍药苷和总黄酮配伍加ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤条件培养基作用于VSMCs后,与ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤条件培养基比较,细胞生长活性明显降低(P＜0.01),PDGF-BB和PDGFR-α mRNA表达减弱.结论:气血并治方防治动脉粥样硬化的作用可能与方中有效组分芍药苷和总黄酮配伍抑制ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤条件培养基引起的VSMCs增殖相关基因的表达有关.
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气血并治方水溶性提取物对正常大鼠血液流变性和血管活性物质的影响
目的:观察气血并治方与方中活血药、理气药等三组水溶性提取物对正常大鼠脂质代谢、血液流变性及血管活性物质等的影响.方法:实验用Wistar大鼠,采用灌胃给药方式,检测给药后14天三组药物的指标变化.结果:全方和方中活血药组对大鼠胆固醇、理气药组对甘油三酯有降低作用及对高密度脂蛋白有升高作用(P＜0.01,P＜0.05);全方和方中活血药对血小板聚集有降低作用,并可降低大鼠的红细胞聚集性,理气药对血小板活化有一定抑制作用.结论:气血并治方与方中活血药、理气药能降低大鼠血脂、抑制血管活性和改善血液流变性,其影响环节和作用强度不尽相同.
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气血并治方有效组分对骨髓源性巨噬细胞及其诱导M1型IL-8、IL-10、TGF-β水平的影响
目的 观察气血并治方有效组分(CWQB)对C57BL/6J小鼠骨髓源性巨噬细胞(M0型)及脂多糖(LPS)联合干扰素-α(IFN-α)诱导M1型巨噬细胞白细胞介素8(IL-8)、 白细胞介素10(IL-10)、转化因子-β(TGF-β)表达水平的影响.方法 从C57BL/6J小鼠股骨中分离、 提取、 培养骨髓细胞(BMC),以粒细胞集落刺激生物因子(GM-CSF)诱导分化为M0型巨噬细胞,LPS+IFN-α诱导M0型巨噬细胞分化为M1型,采用流式细胞法检测M0型和M1型巨噬细胞表面标志性细胞因子表达情况.根据MTT检测结果 ,CWQB和辛伐他汀分别作用于M0和M1型巨噬细胞10 h,常规倒置相差显微镜下观察细胞形态,ELISA法检测细胞上清液IL-8、IL-10、TGF-β的含量,RT-PCR法检测细胞裂解液IL-8、IL-10、TGF-βmRNA的表达水平.结果经上述方法培养和诱导的M0型巨噬细胞84%呈F4/80和CD11b双阳性,M1型巨噬细胞83.4%呈CD86和iNOS双阳性;常规倒置相差显微镜下观察,M0型巨噬细胞呈圆形或椭圆形,伴有伪足,M1型巨噬细胞呈梭形,伴伪足伸展,药物干预后巨噬细胞均呈圆形伴短伪足,整体形态较为收拢;在加入CWQB作用10 h后,M0型巨噬细胞组IL-8分泌量由(2.07±0.14)pg·mL-1降低至(1.69±0.17)pg·mL-1(P<0.05),TGF-β分泌量由(1.24±0.14)pg·mL-1升高至(1.41±0.15)pg·mL-1(P<0.05).M1型巨噬细胞组IL-10分泌量由(0.73±0.12)pg·mL-1升高至(1.03±0.10)pg·mL-1(P<0.05),TGF-β分泌量由(1.13±0.32)pg·mL-1升高至(1.33±0.26)pg·mL-1(P<0.05).基因相对表达量方面,与M0组比较,M0+CWQB组IL-8 mRNA下降,IL-10、TGF-βmRNA升高(P<0.05);与M1组比较,M1+CWQB组IL-8 mRNA下降,IL-10、TGF-βmRNA升高(P<0.05).结论 CWQB可以抑制骨髓源性巨噬细胞及LPS+IFN-ɑ诱导M1型巨噬细胞IL-8的表达,促进IL-10、TGF-β的表达,从而发挥其调节炎症反应的作用.
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气血并治方组分配伍防治兔动脉粥样硬化的实验研究
目的：从脂质代谢、血管内皮功能、炎症介质水平和斑块稳定性等方面探讨气血并治方组分配伍防治免疫损伤结合高脂饲料致兔实验性动脉粥样硬化（AS）模型的药理效应和作用机制。方法日本大耳白兔70只，雄性，经耳缘静脉注射牛血清白蛋白生理盐水溶液（250 mg·kg-1）造成免疫应激损伤，注射后即喂食高脂饲料复制AS模型，气血并治方组分配伍分为A、B、C、D、E、F共6个部位。实验分为①正常对照组（普通颗粒饲料）；②模型组（高脂颗粒饲料，以下各组相同）；③阳性对照药组，辛伐他汀3.60 mg·kg-1；榆全方提取物配伍组，气血并治方1.11 g·kg-1；虞D+E配伍组，0.247 g·kg-1；愚D+E优化组，0.247 g·kg-1；舆D+E原方配伍+F部位提取物组（D+E+F配伍组），0.26 g·kg-1。所试药物用自来水稀释所需浓度，连续灌胃72 d，实验结束后测定兔主动脉斑块病理、血脂水平、血浆内皮素（ET）和降钙素基因相关肽（CGRP）含量、白介素-6（IL-6）和白介素-8（IL-8）水平等指标。结果病理图像分析表明，全方提取物组、D+E+F配伍组、辛伐他汀组与模型组的斑块管腔面积比较，差异有统计学意义（P <0.01），各给药组的兔主动脉斑块积分值均较模型组显著降低（P <0.01，P <0.05）。与模型组比较，D+E配伍组、D+E优化组、D+E+F配伍组能显著降低甘油三酯（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）和载脂蛋白（ApoB）的水平（P<0.05，P<0.01）；全方提取物组、D+E配伍组、D+E优化组及D+E+F配伍组均有降低ET和升高一氧化氮（NO）的作用（P<0.05，P<0.01），全方提取物组、D+E+F配伍组可显著降低IL-6水平（P <0.05，P<0.01）。结论气血并治方全方提取物和D+E+F配伍对兔AS的诸多环节均有一定的药理作用，不同提取物配伍对防治AS的环节不尽相同，综合效果，气血并治全方提取物组和D+E+F配伍组具有一定的优势。
