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四逆汤水提物对缺氧-复氧损伤心肌细胞的保护作用
目的:观察四逆汤水提物(Sini decoction,SND)对培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧条件下的直接保护作用.方法:动态采集并分析正常对照组、缺氧复氧组、四逆汤水提物8.0、17.9、40.0、89.4、200μg/ml给药组心肌细胞在缺氧前,缺氧30、60、90、120、150、180min以及复氧30min和60min细胞搏动频率及收缩面积的变化;比色法测定培养液中LDH;使用MTT法测定心肌细胞存活量.结果:心肌细胞搏动频率及收缩幅度随着缺氧时间延长而逐渐降低,四逆汤水提物给药组(除8.0μg/ml组外)较缺氧复氧组搏动维持时间长,且200.0μg/ml组在复氧后能恢复搏动.缺氧3h缺氧复氧组乳酸脱氢酶(LDH)漏出率较正常对照组升高(P＜0.05);除8.0μg/ml组外,四逆汤水提物不同浓度组LDH漏出率较缺氧复氧组降低,存在浓度-效应关系.复氧1h,各给药组LDH漏出率也较缺氧复氧组低.缺氧复氧组与正常对照组比较,存活的心肌细胞减少(P＜0.01);给药组心肌细胞存活量较高,呈浓度-效应关系.结论:四逆汤水提物可延长缺氧状态下心肌细胞的搏动时间,减缓收缩力的衰减,减少细胞膜损伤及提高缺氧复氧心肌细胞的存活量,表现出对心肌细胞的直接保护作用.
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佐木阿汤对缺氧大鼠心肌细胞Ca2+浓度及Cx43表达的影响
目的:探究佐木阿汤对缺氧大鼠H9C2心肌细胞Ca2+及缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响与机制.方法:将H9C2心肌细胞株分为正常组,模型组,5％、10％、15％佐木阿汤组,依那普利组和生理盐水组.通过含药血清干预与建立缺氧模型,应用CCK-8比色法检测细胞存活率,荧光酶标仪法检测心肌细胞内Ca“浓度变化,Western Blot法测定心肌细胞中Cx43与p-Cx43表达.结果:①细胞存活率:15％佐木阿汤组、依那普利组显著高于模型组(P＜0.05);②C a2+浓度:5％、10％、15％佐木阿汤组、依那普利组显著低于模型组(P＜0.05);③Cx43与p-Cx43:15％佐木阿汤组、依那普利组表达显著高于模型组(P＜0.01).结论:佐木阿汤可能通过降低细胞内Ca2+浓度,提高Cx43与p-Cx43表达,改善细胞间隙通讯,对缺氧心肌细胞具有一定的预防和保护作用.
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基于Ang Ⅱ诱导心肌细胞凋亡探讨中医药在离体实验中的研究方法
目的:基于Ang Ⅱ诱导心肌细胞凋亡模型的建立,探讨离体实验中中药复方的研究方法.方法:以原代心肌细胞、心肌细胞株H9c2为研究对象,含药血清为介质,Ang Ⅱ为刺激因子,建立凋亡模型,采用MTT、流式、荧光定量PCR、DAPI染色检验凋亡率及凋亡相关基因的表达.结果:①以原代心肌细胞为研究对象,胎牛血清为介质,分为正常组和Ang Ⅱ组(1×10-6mol/L),MTT及流式结果显示:与正常组比较,Ang Ⅱ可以降低原代心肌细胞活性,诱导心肌细胞发生凋亡(P＜0.05);荧光定量PCR结果显示:与正常组比较,Ang Ⅱ可以促进促凋亡基因Bax、Caspase-3的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2的表达(P＜0.05).②以心肌细胞株H9c2为研究对象,鼠血清为介质,分为正常组(10％正常鼠血清)、Ang Ⅱ组(1×10-6mol/L+10％正常鼠血清)、中药组(1×10-6mol/L+10％中药鼠血清),MTTT、流式及DAPI结果显示:与正常组比较,Ang Ⅱ可降低H9c2细胞活性,诱导H9c2发生凋亡(P＜0.05),加参方可干预Ang Ⅱ作用(P＜0.05).③以心肌成纤维细胞为研究对象,分为无血清组、胎牛血清组、胎牛血清+Brdu组、鼠血清组,MTT检测心肌成纤维细胞活性,结果显示:与无血清组比较,胎牛血清、鼠血清均能促进心肌成纤维细胞增殖,鼠血清促进心肌成纤维细胞增殖更明显.结论:在建立凋亡模型、研究药物的抗凋亡作用的试验中,由于采用鼠血清培养原代心肌细胞,心肌成纤维细胞增殖明显,使原代心肌细胞的纯度明显降低,进而影响实验结果,含药血清并不适合作为中药媒介与原代心肌细胞相结合进行研究.
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和营安心方中人参皂苷Rg1与丹参酮Ⅱ A的含量测定及其抗氧化作用研究
目的:建立一种同时测定和营安心方中人参皂苷Rgl与丹参酮ⅡA含量的HPLC方法,并对大鼠心肌细胞抗氧化机制进行探讨.方法:采用传统煎煮法提取,HPLC法测定含量[Krosmosil C18柱(4.6mm×200mm,5μm);流动相为乙腈-0.3％磷酸水;检测波长203nm、270nm];采用H2O2建立大鼠胚胎心肌细胞氧化应激损伤模型,分为5组:正常组,模型组,和营安心方高、中、低剂量组,对乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)与丙二醛(MDA)进行含量测定.结果:和营安心方中人参皂苷Rg1与丹参酮ⅡA在0.1125-1.8000μg,0.2250-4.0800μg内呈良好的线性关系,人参皂苷Rg1与丹参酮ⅡA的平均含量为6.58mg/g,14.19mg/g.体外研究表明,和营安心方可使H2O2损伤的心肌细胞MTT代谢率提高,LDH含量减少,NO、MDA含量显著下降,SOD含量显著提高(P＜0.05,P＜0.01).结论:和营安心方对H2O2损伤心肌具有明显的保护作用,其机制可能与和营安心方中人参皂苷Rg1与丹参酮Ⅱ A抑制心肌细胞脂质过氧化作用有关.
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红景天苷对低氧条件下大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:研究红景天苷对模拟不同海拔缺氧条件下大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法:本实验将大鼠按照随机分组方法分成对照组、5000m海拔组、8000m海拔组,按实验设计每组设有生理盐水组和红景天苷组,各组大鼠在进入高海拔模拟实验舱前3d分别行0.9％氯化钠溶液及红景天苷灌胃,置于海拔舱24h.大鼠出舱后及时抽血做血气分析.麻醉后摘取心脏,HE染色显微镜下观察心肌细胞及肌纤维变化,HE法检测不同海拔环境下大鼠心肌细胞凋亡因子Caspase-3基因的表达,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,Western blot检测大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、Cyt-c的表达.结果:随着海拔升高,缺氧程度加剧,凋亡心肌细胞数量增加,Bax表达增加,Bcl-2表达减少,凋亡下游蛋白表达增加,与同海拔下生理盐水组比较,红景天苷组均可明显降低心肌细胞的凋亡,减少Bax表达,增加Bcl-2表达,使凋亡下游蛋白表达减少.结论:红景天苷能够在高海拔下抵抗缺氧,降低心肌细胞凋亡及凋亡下游蛋白的表达,从而保护心肌细胞.
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乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型内向整流钾电流的影响
目的:探讨乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型内向整流钾电流(IK1)的影响.方法:应用全细胞膜片钳技术观察乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型IK1电流密度峰值、Ⅰ-Ⅴ曲线的影响.结果:乌头碱使正常心肌细胞IK1内向电流密度峰值降低,Ⅰ-Ⅴ曲线内向部分明显上移;乌腺金丝桃总黄酮使模型细胞IK1内向电流密度峰值升高,Ⅰ-Ⅴ曲线内向部分明显下移.结论:乌腺金丝桃总黄酮对乌头碱致不同去极化水平的模型细胞IK1内向电流减弱有非常明显的恢复作用,其抗心律失常的机制可能与增强IK1有关.
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中药及小分子化合物促胚胎干细胞及诱导多能干细胞向心肌细胞分化的研究进展
胚胎干细胞(ESCs)具有向多向分化的潜能,诱导多能干细胞(iPSCs)是来源于体细胞重编程的多能细胞,具有类似ESCs的功能特性,并能避免伦理争议.由ESCs/iPSCs分化而来的心肌细胞分化能广泛应用于心血管疾病的机制研究、药物筛选以及移植修复受损心肌等应用性研究.相对于使用转录因子和细胞因子,小分子化合物促ESCs/iPSCs向心肌细胞分化因具有高效、可重复、简便、机制清晰等优势而日益受到重视,文章介绍中药及小分子化合物诱导ESCs/iPSCs向心肌细胞分化的研究进展.
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心脏"阴阳自和"与心肌细胞自噬
心肌细胞自噬是一种心脏处于自组织调控下的稳态(阴阳自和),可以消除受损的细胞器,产生新的营养物质,协助细胞度过缺血期.本文围绕心肌缺血/再灌注(I/R)过程中的心脏阴阳失和时心肌细胞自噬作用进行综述.
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知母宁对阿霉素致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用机制研究
目的:观察知母宁对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用及其NF-κB和JNK信号通路的关系.方法:采用乳鼠心肌细胞培养法,实验分为空白对照组、阿霉素处理组、阿霉素合并知母宁3组.MTT法检测心肌细胞存活率,Western blot法检测NF-κB p65和JNK磷酸化水平.结果:高剂量组知母宁能够显著对抗阿霉素所致心肌细胞损伤,并显著抑制炎症通路NF-κB和细胞凋亡通路JNK的磷酸化水平.结论:知母宁能抑制NF-κB和JNK的磷酸化水平,以对抗阿霉素所引起的心肌细胞损伤.
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加味桃核承气汤及其不同提取物对糖尿病大鼠心肌细胞GluT4 mRNA表达的影响
目的:观察加味桃核承气汤全方及其不同提取物对糖尿病心肌糖代谢的影响.方法:将加味桃核承气汤原方通过水提醇沉、正丁醇、乙酸乙脂不同处理方法制备不同提取物,清洁级SD大鼠用STZ注射复制糖尿病模型,随机分为加味桃核承气汤全方、水提醇沉、正丁醇、乙酸乙脂和达美康、模型、空白7个组,分别用上述药物灌胃治疗8周,采用RT-PCR法检测心肌细胞GluT4 mRNA表达.结果:模型组和各治疗组GluT4 mRNA表达水平普遍低于正常组,其中模型组低,与空白组比较有高度显著性差异,全方组、水提醇沉组、乙酸乙脂组次之,与空白组相比也有显著差异.而正丁醇组和达美康组虽有所下降,但下降幅度不大,与空白组相比差异不显著.结论:加味桃核承气汤及其正丁醇、水提醇沉、乙酸乙脂等不同提取成分均有阻止糖尿病大鼠心肌GluT4 mRNA的表达下降,稳定其表达的作用,以正丁醇提取物效果好.
关键词： 加味桃核承气汤 提取物 糖尿病鼠 心肌细胞 GluT4 mRNA表达 -
复方当归注射液对H2O2所致心肌细胞凋亡的保护作用
目的:探讨复方当归注射液对心肌细胞凋亡的保护作用.方法:体外原代培养心肌细胞分为正常组、模型组及复方当归注射液干预组(高、中、低剂量),每组8个样本；采用过氧化氢( H2O2)制备心肌细胞凋亡模型；运用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率与细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)；测定细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶( SOD)活性.结果:模型组的细胞凋亡率、[Ca2+]i及LDH、MDA水平显著高于正常组(P＜0.01),SOD活性别显著降低(P＜0.01)；复方当归注射液干预组的细胞凋亡率、[Ca2+]i及LDH、MDA水平显著低于模型组(P＜0.01),SOD活性则显著提高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论:复方当归注射液对H2O2所致心肌细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能与其有效清除氧自由基及抑制细胞内钙超载相关.
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益气通络方对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达影响的血清药理学研究
目的：观察益气通络方含药血清对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达的作用。方法：采用流式细胞仪检测缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达强度。结果：1.缺氧24h、再给氧4h组心肌细胞bcl-2阳性表达比率增加，与正常对照组比较具有显著差异(P<0.01)；2.益气通络方低、中、高剂量含药血清组bcl-2阳性表达比率较单纯缺氧再给氧组增高，组间比较呈显著差异(P<0.01)。讨论：缺氧再给氧能诱导心肌细胞bcl-2基因表达，益气通络方含药血清可增强其表达，可能是益气通络方保护缺氧再给氧心肌细胞，发挥抗缺血再灌注损伤的重要机制之一。
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益气活血药对舒张功能不全大鼠心功能及钙转运的干预研究
目的:研究益气活血药对舒张功能不全大鼠心肌细胞心功能及钙转运的干预作用.方法:建立压力负荷致舒张功能不全大鼠模型,按干预因素分为假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组.造模后给药8周检测大鼠心功能,分离心肌细胞,检测心肌细胞收缩、舒张功能及钙瞬变、胞内钙浓度.结果:益气活血组舒张早/晚期峰值血流速度(E/A)较模型组升高;各给药组舒张50％时间(TR50)较模型组均显著降低,其中益气活血组效果明显;活血组、益气活血组钙瞬变衰减常数(Tau)较模型组缩短;益气活血组舒张期钙浓度较模型组降低.结论:益气活血药通过改善心肌细胞钙转运能力,提高心肌细胞舒张功能,改善心脏舒张功能,并降低心衷心肌细胞钙浓度,从而预防心衰室性心律失常的发生.
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大蒜素对乳鼠心肌细胞延迟预处理保护作用及其信号转导机制的研究
目的:研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的延迟保护作用及其部分信号转导机制.方法:采用细胞存活率、乳酸脱氢酶活性、丙二醛含量作为心肌细胞受损指标,观察终浓度为20μg/ml的大蒜素预处理24h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及蛋白激酶抑制剂H-7、丝裂素激活蛋白激酶抑制剂PD 98059对大蒜素预处理作用的影响;并通过免疫印迹技术(Western blot analysis)测定大蒜素预处理24h后,nPKC-ε、热休克蛋白70(HSP70)和核因子-кB(NFкB)的表达情况.结果:大蒜素预处理能显著提高缺氧复氧损伤心肌细胞存活率,减少LDH漏出和MDA生成,H-7、PD 98059可完全取消这种心肌保护作用.大蒜素预处理可明显增加nPKC-ε、HSP70的表达,H-7能抑制此作用,而PD98059仅对HSP70表达有抑制,NF-кB在各组间均无明显表达.结论:大蒜素能够模拟缺血预处理延迟保护作用,其机制涉及PKC及MAPKs信号途径,可能通过活化nPKC-ε,使下游靶蛋白MAPKs磷酸化而诱导HSP70的高度表达产生延迟预处理心肌保护作用.
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参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响
目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响.方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡.MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪栓测凋亡率及践粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达.结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达.结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关.
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β-细辛醚对缺血/再灌注损伤心肌细胞的保护作用
目的 观察β-细辛醚对缺血/再灌注损伤(MI/RI)心肌细胞的保护作用.方法 体外培养原代乳鼠心肌细胞,采用连二亚硫酸钠(Na2S204)诱导心肌细胞MI/RI,测定细胞存活率(MTT法)和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量.结果 在MI/RI模型中,β-细辛醚能显著提高细胞存活率,明显降低培养液中LDH、CK的含量.结论 β-细辛醚对MI/RI心肌细胞具有显著的保护作用.
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益气、活血药对血管紧张素Ⅱ建立的心肌细胞模型的影响
目的研究益气、活血药对心肌细胞模型的影响.方法血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)作用心肌细胞建立模型,用不同剂量的益气、活血药及其配伍复方进行干预.结果益气、活血、益气活血药物均有保护心肌细胞的作用,益气活血复方疗效优于益气药和活血药,且较小剂量益气药与较大剂量的活血药配伍后作用明显(P<0.05).结论在一定条件下,益气药与活血药配伍应用可增强疗效,且存在量效关系.
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心肌活力饮对实验性扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响
目的 观察心肌活力饮对扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响,探讨该药治疗扩张型心肌病的作用机理.方法 60只动物随机分成6组,除正常对照组外,其余各组大鼠分别腹腔注射阿霉素,制造扩张型心肌病模型.各用药组分别予心肌活力饮、黄芪生脉饮灌胃给药.4周后采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡及凋亡相关基因p53和Fas的蛋白表达.结果 模型组心肌细胞的凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01),凋亡促进基因p53和Fas的蛋白表达增高(P<0.05).心肌活力饮(5、10、20 g原药材/kg)组大鼠心肌细胞相关凋亡基因p53和Fas的蛋白表达量比模型组减少(P<0.05或P<0.01),心肌细胞的凋亡率也明显降低(P<0.01).结论 心肌活力饮可以减少实验性扩张型心肌病大鼠心肌细胞的凋亡,并且可能是通过抑制心肌细胞相关凋亡基因p53和Fas的表达而发挥此作用的.
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双参宁心方血清药物化学和抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的实验研究
目的研究双参宁心方(SSNX)主要有效成分及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法利用血药指纹图谱检测来源于SSNX的血中成分,并利用体外心肌细胞缺氧/复氧损伤实验进行验证.结果给药后血清样本中,共检测到15个来源于SSNX的原型成分,其中确定了人参皂苷Rg1、丹酚酸B、延胡索乙素、脱氢紫堇碱4个化学成分.在对心肌细胞缺氧/复氧损伤的实验中,人参皂苷Rg1、脱氢紫堇碱能抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤导致的乳酰脱氢酶升高(P＜0.05),丹酚酸B、延胡索乙素则能显著抑制乳酸脱氢酶的升高(P＜0.01),对心肌细胞具有保护作用.结论提示人参皂苷Rg1、丹酚酸B、延胡索乙素、脱氢紫堇碱可能是SSNX抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的有效物质基础,可用于复方药代动力学的指标检测.
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黄芪注射液对病毒性心肌炎细胞感染模型的影响
目的研究黄芪注射液体外对病毒性心肌炎细胞感染模型的影响.方法以柯萨奇 B3m病毒感染新生SD 大鼠的培养心肌细胞,将黄芪注射液加入培养体系后,观察病毒感染前后细胞病变、搏动情况,检测培养液中心肌酶的改变.结果培养的SD大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇B3m病毒后,逐步出现细胞病变,细胞停止搏动.经黄芪注射液处理后病变减轻,心肌酶水平明显下降.结论黄芪注射液具有良好的抗病毒作用,能显著减轻病毒性心肌炎心肌细胞的损伤.
