129 H1-NMR定量分析银杏叶和银杏制剂中的白果内酯和银杏苦内酯

国产与进口白果内酯治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的比较研究

目的 比较国产和进口白果内酯治疗实验大鼠肺孢子虫肺炎的疗效. 方法 用Wistar 大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型,分别用国产和进口的白果内酯20 mg/kg·d治疗实验大鼠,以免疫抑制大鼠和磺胺治疗大鼠为对照组,通过大鼠体重变化,肺重/体重比值,肺印片的每视野包囊均数等指标考核疗效. 结果 国产和进口白果内酯治疗后两组大鼠的体重均增加,体重差分别为(18.78±16.82) g和(17.85±14.86) g,明显高于免疫抑制对照组(2.50±19.11) g(P<0.05),两试验组间差异无显著性(P>0.05);肺重/体重比值分别为(1.27±0.52)和(1.30±0.62),低于免疫抑制对照组(1.85±0.64)(P<0.05),两试验组间差异无显著性(P>0.05);两试验组肺印片的每视野包囊均数分别为(0.96±0.36)和(0.69±0.19),低于对照组(1.73±0.56)(P<0.05),而国产白果内酯高于进口白果内酯组(P<0.05). 结论 国产与进口白果内酯对大鼠肺孢子虫肺炎均有治疗作用,但国产白果内酯的疗效略差于进口白果内酯.

银杏叶提取物临床药理学研究概述

银杏是一种有多重药理作用的中药，其由黄酮类(24%)、萜类(6％)、酚类、氨基酸类等多种化学成分组成。银杏叶提取物(Egb761)是一种天然的自由基清除剂，是一种标准制剂，其是对银杏的有效成分加以分离、富集后制成的[1-2]。标准制剂Ebg761中的黄酮类有效成分24%的黄酮甙，主要是山奈酚和榭皮素的葡萄糖鼠李糖。萜内脂化合物是银杏叶这一物种所特有的有效成份，可再分为银杏内酯和白果内酯，前者可再分为A、B、C、D4种亚型。本文拟就银杏叶提取物在预防各类疾病中的作用及其可能机制作一综述。

白果内酯在鱼藤酮处理的PC12细胞中抑制α-共核蛋白蛋白寡聚体形成的实验研究

目的 研究白果内酯对鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型是否具有保护作用,对α-共核蛋白(α-synuclein)的表达及聚集是否有影响.方法 使用鱼藤酮对嗜铬细胞瘤株PC12细胞进行处理,建立α-synuclein蛋白高表达的帕金森病细胞模型,白果内酯进行干预,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测α-synuclein蛋白的表达.数据以均数±标准差(±s)表示,应用SPSS 16.0统计软件,多组间比较采用单因素方差分析,两组间独立样本的比较采用LSD-t检验,P<0.05认为差异有统计学意义.结果 1.6 μmol/L鱼藤酮组细胞活性显著低于对照组(t=17.422,P<0.01),细胞凋亡率和α-synuclein蛋白量高于对照组(t=9.141,t=8.392;P均<0.01);10 μmol/L及50 μmol/L 白果内酯组细胞活性均高于鱼藤酮组(t=4.257,t=6.501;P均<0.01),且高剂量者细胞活性更优(t=2.933,P=0.043);10 μmol/L及50 μmol/L白果内酯组细胞凋亡率较鱼藤酮组低(t=4.482,t=4.488,P均<0.01),α-synuclein蛋白的表达量低于鱼藤酮组(t=8.349,t=9.028,P均<0.01),但两剂量间二者均无统计学差异(t=0.831,P=0.45;t=2.178,P=0.095);实验中所显影的α-synuclein蛋白分子量在57 kD左右.结论 白果内酯对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤有保护作用,该保护作用可能通过抑制α-synuclein蛋白寡聚物的形成来实现.

高效液相色谱蒸发光散射测定银杏叶软胶囊中4种萜类内酯的含量

目的:用HPLC-ELSD测定银杏叶软胶囊中银杏内酯A、B、C及白果内酯的含量.方法:色谱柱填料为十八烷基键合硅胶,流动相为四氢呋喃-甲醇-水(11 : 19:70);漂移管温度为109℃,戴气流速为2.9L·min-1.结果:银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在2.994μg～14.970μg、2.967μg～14.835μg、2.955μg～14.775μg5.952μg～29.760μg线性关系良好;银杏内酯A、B、C及白果内酯的平均回收率分别为97.2%、97.5%、97.6%、98.3%.结论:该方法简便、准确、分离效果好;本方法可用于银杏叶软胶囊的质量评价.

LC-MS/MS快速测定不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯的含量

目的 建立银杏叶中银杏内酯和白果内酯的高效液相电喷雾二级质谱(LC-MS/MS)定量分析方法,并对不同采摘时间银杏叶中银杏内酯和白果内酯含量进行测定.方法 银杏叶样品以甲醇-水(1:9)提取,并用乙酸乙酯萃取,采用Phenomenex ODS柱分离,流动相为甲醇-水(60:40),流速0.7mL·min-1.电离方式为电喷雾正离子,采用多反应检测模式(MRM),检测离子分别为m/z 409.4→345.3(银杏内酯A)、m/z 425.3→361.3(银杏内酯B)、m/z 441.4→325.3(银杏内酯C)和m/z327.4→309.3(白果内酯).结果 分析过程仅需8.5min,且无杂质干扰,4种成分回收率为91.79%～101.48%.银杏内酯A,B和白果内酯含量分别在7月18日、8月19日和7月5日采摘的样品达到高.结论 方法快速、准确、选择性好,适合银杏内酯和白果内酯的定量分析,七月份叶子中内酯含量高,为佳采摘时间.

液质联用法测定灯银脑通胶囊中6种有效成分的含量

目的 建立同时测定灯银脑通胶囊中灯盏乙素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1等6种有效成分含量的HPLC-MS/MS方法.方法 选用Phenomenex Luna C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,0.2％甲酸甲醇溶液(A)、0.2％甲酸水溶液(B)梯度洗脱方式洗脱,柱温为30℃,流速为0.3 mL· min-1,分析时间10.0 min;质谱条件选用ESI源-MRM模式,正离子模式检测.建立的方法对3批灯银脑通胶囊进行了测定.结果 灯盏乙素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、人参皂苷Rg1和三七皂苷R16种有效成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,r均不小于0.999 0,提取回收率均在94.8％～108.5％之间.结论 本法准确可靠、结果稳定、专属性强、重现性良好,为灯银脑通胶囊的质量控制提供了很好的依据.

不同pH介质中银杏叶总黄酮醇苷溶出度的考察

银杏叶片的活性成分主要为总黄酮和白果内酯[1],具有改善心脑血管循环,抑制血小板凝聚酶等作用,对于动脉硬化及高血压所致的冠状动脉供血不足、心绞痛、心肌梗死具有良好的治疗作用[2].我国银杏资源十分丰富,目前已有数家药厂或单位的银杏叶片剂投放市场,但临床反映不同厂家片剂的疗效存在差异,本文采用紫外分光光度法,以总黄酮醇苷作为含量测定指标来测定不同厂家的银杏叶片在不同pH的介质中的溶出度.根据不同厂家的银杏叶片剂的体外溶出特性,来反映制剂工艺的稳定性,控制产品的批间差异,为评定和控制药品质量提供依据.

白果内酯对大鼠心血管功能的影响

目的 研究白果内酯(Bilobalide)对大鼠心血管功能的影响.方法 经颈总动脉插管记录麻醉状态大鼠血压和心率变化.实验分为4组:生理盐水组,二甲基亚砜(DMSO)对照组,白果内酯组,心得安组.用MedLab-U/4C501生物信号采集处理系统记录给药前后大鼠收缩压、舒张压及心率变化.结果 DMSO可以快速降低大鼠血压DMSO,使大鼠心率减慢;白果内酯可以可以快速降低大鼠血压、使大鼠心率减慢.DMSO与白果内酯两者对大鼠血压、心率的影响存在差异有统计学意义.结论 白果内酯可以快速降低大鼠血压,使大鼠心率减慢.

白果内酯对谷氨酸兴奋毒性致神经损害的保护作用

目的 观察不同剂量白果内酯对谷氨酸致海马神经元损害的影响,以探讨白果内酯在抗兴奋毒性神经损害中的应用价值.方法 原代培养新生SD大鼠海马神经元,建立谷氨酸诱导的兴奋毒性模型;采用台盼蓝染色、TUNEL染色凋亡神经元测定及乳酸脱氢酶(LDH)活性测定的方法观察不同剂量白果内酯的神经保护作用,并与谷氨酸NMDA(N-甲基-D-天门冬氨酸盐)受体非竞争性拮抗剂MK-801的神经保护作用相比较.结果 在一定剂量范围内,白果内酯可提高谷氨酸损伤的海马神经元细胞的存活率、降低细胞凋亡率、减少细胞中LDH的漏出,具有剂量依赖性,于100 μmol/L剂量下呈现佳神经保护效果,但弱于MK-801(浓度为10 μmol/L).结论 白果内酯对谷氨酸诱导的兴奋毒性神经损害具有保护作用.

银杏叶滴丸中萜类内酯测定方法的改进研究

目的 以银杏叶对照提取物为对照建立银杏叶滴丸中萜类内酯的定量测定方法.方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Diamonsil C18柱(150 nun×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(30∶70),体积流量0.8 mL/min,ELSD检测器,漂移管温度105℃,氮气体积流量3.0 L/min.结果 银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯分别在1 672.2～10 033.2、1 026.4～6 158.4、527.8～3 166.8、2 200.8～13 204.8 ng呈良好的对数线性关系;银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯及总萜类内酯的平均回收率分别为100.3％ (RSD 2.5％)、108.1％ (RSD 3.5％)、116.0％ (RSD 4.9％)、90.4％ (RSD0.6％)及99.3％ (RSD 1.1％).结论 本方法简单易行、可控性强、重复性好,可用于银杏叶滴丸中萜类内酯的定量测定,并为中成药中多指标成分同时测定提供了有效的思路和解决方案.

f2相似因子法评价银杏酮酯缓释微丸大类成分总黄酮和各类成分的体外释放相关性研究

目的 引入f2相似因子法对银杏酮酯(GBE)缓释微丸的大类成分总黄酮和各类成分(包括黄酮类和萜内酯类)的释放曲线进行分析,以能较全面地评价其体外释放.方法 运用紫外分光光度法、高效液相-质谱联用(HPLC-MS)测定GBE缓释微丸中大类成分(总黄酮)和各类成分(槲皮苷、异鼠李素、芦丁、槲皮素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的体外释放率,并进行f2相似因子计算;采用扫描电镜法观察微丸释药前后的微观结构,结合方程拟合分别对微丸中总黄酮和各类成分的释药机制解析,以验证f2相似因子法的可靠性.结果 优化工艺的GBE微丸黄酮类和内酯类的各成分与大类成分总黄酮的f2均大于50,说明大类成分总黄酮与各类成分体外释放曲线具有较好的相关性.释药机制解析进一步验证了该结果的可靠性.结论 f2相似因子法可运用于多组分中药缓释制剂大类成分和各类成分的体外释放评价.

银杏达莫注射液中黄酮类和萜类内酯7种成分的定量测定

目的 建立银杏达莫注射液定量测定方法.方法 黄酮类成分(槲皮素、山柰素和异鼠李素)采用AgelaC18柱(150mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.4％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长360 nm,柱温35℃.内酯类成分(银杏内酯A、B、C及白果内酯)采用Agela C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-四氢呋喃水溶液(10∶75)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,用蒸发光散射检测器检测,柱温30℃.结果 分别取10个批次的银杏达莫注射液,测定7个主要成分的量,槲皮素12.4 μg/mL、山柰素20.8 μg/mL、异鼠李素5.5 μtg/mL、银杏内酯A7.2μg/mL、银杏内酯B 2.6 μg/mL、银杏内酯C 4.7 μg/mL、白果内酯102.0 μg/mL.结论 建立的方法稳定性、重复性、精密度等方面考察均符合要求,可作为银杏达莫注射液质量控制方法.

银杏叶中银杏萜内酯的GC-MS定性定量分析

目的建立银杏叶中银杏内酯A,B,C和白果内酯的定性定量分析方法.方法银杏叶以20%乙醇超声提取,乙酸乙酯萃取,再经酸性氧化铝-活性炭-硅藻土混合柱层析,在100℃以双-三甲基硅烷三氟乙酰胺硅烷化60min后,用HP-5 MS毛细管色谱柱,柱温从180℃程序升温至300℃.采用选择离子监测(SIM)方式,以峰值高的碎片离子作为监视离子进行定量分析.结果银杏内酯A,B,C和白果内酯的保留时间分别为13.7,14.3,15.3和6.8 min,特征(监视)离子(m/x)分别为537,625,713及455(299);平均回收率分别为102.0%,99.4%,96.0%和96.3%,RSD分别为0.54%,2.40%,1.98%和2.43%.结论本方法操作简便、重现性好、专属性强、准确可靠,可作为银杏萜内酯的定性定量分析方法.

基于一测多评的舒血宁注射液定量测定方法研究

目的 采用一测多评法同时测定舒血宁注射液中山柰素、槲皮素、异鼠李素和白果内酯与银杏内酯A、B、C的量,并建立以上实验的方法学考察模式.方法 分别以山柰素和白果内酯为内参物,建立舒血宁注射液中这2种成分与槲皮素、异鼠李素和银杏内酯A、B、C间的相对校正因子(fk/s);采用外标法测定舒血宁注射液中山柰素和白果内酯的量,通过fk/s计算输血宁注射液中其他5种成分的量,并将用一测多评法测定的5批舒血宁注射液的结果与用外标法测定的结果进行t检验.结果 在一定的线性范围内,山柰素与槲皮素及异鼠李素的fk/s分别为1.873、0.324,白果内酯与银杏内酯A、B、C的fk/s分别为2.280、1.659、1.429,且在不同的实验条件下重现性良好;5批舒血宁注射液的一测多评法计算值与外标法测定值经t检验无显著性差异,实验所得的fk/s可信.结论 本实验所建立的fk/s重复性良好,可用于舒血宁注射液中多个成分的定量分析与质量评价.

血脑同步微透析研究大鼠口服银杏酮酯后内酯类成分的血脑分布

目的 研究大鼠口服银杏酮酯(GBE)后内酯类成分在脑部和血液中的药物质量浓度及药物分布系数(AUC脑/AUC血).方法 采用血脑同步微透析方法与高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)技术相结合,通过在大鼠脑部和颈静脉处同步埋置探针,收集大鼠口服GBE后不同时间段的脑部和血液微透析液,用H-PLC-MS/MS对透析液中的内酯类成分进行分析,根据分析结果描绘血药浓度和脑药浓度曲线图,并分别计算各成分在脑部和血液中的药物分布系数.结果 大鼠ig给予GBE混悬液(600 mg/kg)后,通过HPLC-MS/MS技术,血液微透析液中能检测到银杏内酯A、B、C和白果内酯;而脑部微透析液中只能检测到银杏内酯A、B、C,无法检测到白果内酯.各类成分在脑部和血液中的药物分布系数分别为银杏内酯A2.911％、银杏内酯B3.126％、银杏内酯C 0.337％.结论 多点同步微透析技术可以同步检测中药中多种成分在多个效应部位的分布情况,还具有活体连续取样、节省动物、采样量小、组织损伤轻等特点,能较好地为探索多成分中药的效应物质基础提供一定的参考.

HPLC法测定银杏叶片中银杏内酯的含量

银杏萜类内酯是银杏叶中除黄酮类化合物外的另一组具有较强生物活性的化合物,即银杏萜内酯A、B、C、M、J和白果内酯.现代药理研究表明,银杏内酯成分除具有扩张冠状动脉血管、增加脑血流量、改善脑营养及抗菌作用外,还有较强的血小板活化因子抑制作用[1,2],因此具有较高的研究开发价值.文献报道测定银杏叶提取物中的银杏内酯成分有HPLC-UV法[3]、HPLC-ELSD法[4]、HPLC-RID法[5]、GC-MS法[6]及HPLC-MS法[7]等,但对银杏叶片中银杏内酯的测定未见报道,故本实验采用HPLC-RID法对不同厂家生产的银杏叶片中银杏内酯含量进行测定,同时考察了银杏内酯的提取方法,给银杏叶片生产厂家提供了质量控制依据.

国产与进口银杏叶片萜类内酯Beagle犬生物利用度的比较

目的 比较国产与进口银杏叶片在Beagle犬体内的药动学参数和生物利用度.方法 Beagle犬分别ig国产与进口银杏叶片后,取血测定.采用LC-MS检测Beagle犬血浆中银杏叶片萜类内酯(银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯)的含量,绘制血药浓度-时间曲线,采用DAS软件计算药动学参数.结果 Beagle犬ig国产银杏叶片(80 mg/kg)后银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的药-时曲线下面积(AUC0～t)分别为51.64、19.86和72.90 ng·h/mL,而ig进口银杏叶片(80 mg/kg)后三者的药-时曲线下面积(AUC0～t)分别为69.98、24.35和169.60 ng·h/mL.根据2种制剂中3种成分的含量,国产银杏叶片中银杏内酯A、银杏内酯B、白果内酯的相对生物利用度分别为37.77％、33.70％和95.98％.结论 Beagle犬ig国产银杏叶片后的萜类内酯生物利用度显著低于进口银杏叶片.

DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的研究

银杏萜内酯主要包括银杏内酯A、B、C和白果内酯.银杏内酯B是一种很有应用前景的特异性血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂,其专一性高,而银杏内酯A也是一种重要的昆虫拒食素,白果内酯对老年痴呆症和神经系统疾病具有一定疗效[1].目前,银杏萜内酯对心脑血管及外周血管疾病的有效疗效已使他成为药品及保健食品的原料.但目前银杏叶仍是提取银杏萜内酯化合物的主要工业生产来源.银杏萜内酯的提取分离方法报道较多.由于银杏叶中这类化合物含量很低,且具有特定结构,因此,提取分离步骤烦琐,费时且得率低.目前,日本专利及欧洲报道一般采用有机溶剂多级萃取与硅胶吸附-洗脱或活性碳吸附-洗脱与醋酸铅沉淀法相结合的提取方法,但得率低,工艺繁锁[1,2].近几年国内银杏萜内酯的提取分离也有报道,主要采用高效液相制备色谱柱进行分离.

HPLC法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和萜类内酯

目的 采用高效液相色谱法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和总萜类内醋.方法 黄酮醇苷水解后,采用HPLC-UV法测定;萜类内酯用醋酸乙酯萃取后采用HPLC-ELSD法测定.结果 槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在5.104～51.04、5.000～50.00、1.38～13.8 μg/mL呈良好线性关系,平均回收率分别为99.34%、99.25%、101.2%(n=5);银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在0.415～2.075、0.402～2.010、0.426～2.130、0.803～4.015mg/mL呈良好线性关系,平均回收率分别为99.28%、100.1%、101.0%、99.31%(n=5).结论 本实验采用的方法简便快速,结果准确,重现性好,可用于银杏叶粉针中黄酮和内酯类成分的质量控制.