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树突状细胞在肠道黏膜免疫系统中的作用
在针对大量的外环境无害抗原、食物蛋白和共生菌群所引发的免疫耐受与针对入侵病原体引发的免疫反应之间维持一种平衡的状态是肠道黏膜免疫系统内的中心事件.
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环孢素A诱导妊娠失败模型孕鼠外周母-胎免疫耐受
目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)能否诱导妊娠失败模型CBA/J×DBA/2孕鼠外周母-胎免疫耐受.方法分别使用CBA/J×DBA/2及CBA/J×BALB/c作为妊娠失败模型和正常妊娠模型,CBA/J小鼠于妊娠第4天(着床期)腹腔注射不同剂量(0、5、10、15 mg/kg)CsA,妊娠第9天和第14天时分别采用单向混合淋巴细胞反应分析孕鼠外周脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,并用RT-PCR分析细胞IL-2 mRNA含量以研究脾脏细胞母-胎免疫耐受状态;妊娠第14天观察两组的胚胎吸收率.结果(1)于妊娠第4天腹腔注射5、10、15 mg/kg CsA后,妊娠失败模型胚胎吸收率分别下降至2.86%、5.75%及11.24%,明显低于对照组(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.01);而对妊娠成功模型胚胎吸收率无显著性影响(P＞0.05).(2)混合淋巴细胞反应研究显示,于妊娠第4天腹腔注射CsA,可使妊娠第9、14天的妊娠失败模型孕鼠外周脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力显著下降(P均＜0.01);RT-PCR分析显示,孕鼠脾细胞受父系抗原刺激后IL-2转录显著下降(P均＜0.01).结论于孕早期腹腔注射CsA可诱导妊娠失败模型孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的特异性免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平,提示CsA可能成为治疗妊娠失败的有效药物.
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NOD/SCID孕鼠淋巴细胞表型检测和NK细胞活性分析
目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响.方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BALB/c×BALB/c小鼠的生育力特征.分别采用多聚次黄苷酸-胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,poly I:C)或抗asialoGM1单抗(anti-asialo GM1)刺激或抑制NK细胞活性,并分别观察这些因素对妊娠结局的影响.结果 与对照组NOD/SCID小鼠相比,poly I:C处理组NOD/SCID×NOD/SCID小鼠平均每窝产仔数增多,而注射抗asialo GM1单抗则使胚胎吸收率增高,进而平均每窝产仔数显著减少.结论在NOD/SCID小鼠孕期母-胎界面保持适当水平的NK细胞活性对妊娠结局有利.
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重建外周免疫耐受抑制原发性胆汁性肝硬化的实验研究
目的 以原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)自身抗原诱导PBC小鼠重建外周免疫耐受,探索PBC免疫治疗的新途径.方法 将M2蛋白与新生小鼠的脾淋巴细胞及交联剂1-乙基-3(3-二甲基氨阿基)碳化二亚胺(ECDI)共培养,形成抗原负载的淋巴细胞,随后通过尾静脉注入小鼠体内诱导免疫系统对PBC自身抗原的免疫耐受,同时注射聚肌苷酸胞苷酸(polyI:C)诱导PBC病变,对照组注射与牛血清白蛋白(BSA)共培养的脾细胞,16周后观察小鼠的各项实验室指标,分析重建PBC小鼠外周免疫耐受是否能够有效地阻止病变产生或缓解病程.结果 抗线粒体抗体(AMA):免疫耐受组与BSA对照组、模型对照组相比阳性率显著降低,差异有统计学意义(P=0.007,P=0.003);BSA对照组和模型对照组间无明显差异(P=0.74);免疫耐受组、BSA对照组、模型对照组的碱性磷酸酶(AKP)水平分别为(80.5±9.8)U/L、(93.8±15.7)U/L、(92.5±17.7)U/L;其中BSA组和模型组差异无统计学意义(P=0.83),而免疫耐受组低于BSA组(P=0.0095)和模型对照组(P=0.029);免疫耐受组、BSA对照组、模型对照组的胆管阳性浸润率分别为42.67%±12.30%、57.07%±11.35%、51.53%±9.96%;其中免疫耐受组阳性浸润率低于模型对照组,差异有统计学意义(P=0.039),同时显著低于BSA对照组(P=0.0024),而且BSA对照组和模型对照组比较差异无统计学意义(P=0.167).结论 本实验通过重建外周免疫耐受,在一定程度上抑制了PBC小鼠的病变程度,为今后进一步研究PBC的免疫治疗提供思路.
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抗CD4单抗诱导免疫耐受防治自身免疫性心肌炎的研究
目的 探讨体内注射CD4单克隆抗体诱导大鼠对猪心肌肌凝蛋白产生免疫耐受及这种免疫耐受对自身免疫性心肌炎大鼠的治疗作用.方法 分别于第0、7天给予Lewis大鼠体内注射猪心肌肌凝蛋白诱导自身免疫性心肌炎的产生.分别于第-2、-1、0、1天注射CD4单克隆抗体诱导免疫耐受.初次免疫后18 d,检测免疫耐受的诱导情况及其对心肌炎大鼠的作用.结果 同非治疗组鼠相比较,抗体治疗组鼠心功能明显改善;没有明显的心肌变性、坏死、炎症细胞浸润及纤维化;抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显下降;血清抗心肌肌凝蛋白自身抗体明显降低;血清TH1细胞因子IFN-γ、IL-2的水平显著下调;TH2细胞因子IL-6、IL-10的水平没有改变或者被上调.结论 CD4单抗能够诱导机体对猪心肌肌凝蛋白产生免疫耐受,通过免疫耐受的诱导阻止了自身免疫性心肌炎大鼠心功能的紊乱和心肌的损伤.
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腺病毒载体介导的CTLA4-Ig基因转移促进异基因小鼠皮肤移植耐受
目的探讨CTLA4-Ig重组腺病毒(AdCTLA4-Ig)促进"脾细胞(spleen cells, SP)+环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)"系统诱导移植耐受的作用及其机制. 方法 BALB/c(H-2d)小鼠经尾静脉注射C57BL/6(H-2b,B6)小鼠脾细胞和AdCTLA4-Ig颗粒,48 h后腹腔注射环磷酰胺,并同天进行皮肤移植,于耐受25?d时对受体小鼠进行混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)等耐受状态的检查. 结果 B6小鼠的皮肤移植物在耐受的BALB/c小鼠中存活期特异延长.MLR和DTH检验证明BALB/c小鼠对B6小鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第三者ICR小鼠的脾细胞仍表现出强烈免疫应答. 结论 AdCTLA4-Ig颗粒可以明显促进"细胞+环磷酰胺"诱导的异基因皮肤移植耐受;克隆排除和克隆无能是耐受诱导的主要因素.
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未成熟树突状细胞诱导实验性自身免疫性重症肌无力耐受的试验研究
目的探讨未成熟树突状细胞(iDC)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的影响. 方法用小剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)体外诱导骨髓前体细胞,获得的iDC用乙酰胆碱受体(AChR)负载后皮下接种同基因大鼠,3周后通过体外试验观察脾细胞对AChR的增殖反应,同时用AChR和完全弗氏佐剂(CFA)免疫大鼠,观察免疫7周后MG相关指标的改变. 结果小剂量GM-CSF诱导所获得的iDC与成熟DC(mDC)相比,其表面MHCⅡ和共刺激分子CD80、CD86的表达低,摄取 dextran-FITC的能力强但刺激同种T细胞增殖的能力弱.接种iDC、mDC、AChR负载的mDC的大鼠和对照组一样,体外脾细胞对AChR的刺激均强烈增殖,用AChR和CFA免疫后,产生明显的MG症状,重复电刺激出现明显衰减,血清AChRAb滴度明显增高,神经肌肉接头呈现典型的MG样改变;而接种AChR负载的iDC的大鼠脾细胞对AChR的刺激呈现明显的增殖抑制但对卵清蛋白的刺激仍强烈增殖,MG相关指标均未见明显改变. 结论骨髓前体细胞经小剂量GM-CSF诱导产生了iDC,AChR负载的iDC可诱导EAMG耐受.
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人外周血CD123+髓系树突状细胞的体外诱导及生物学特性研究
树突状细胞(DC)是功能强大的专职抗原提呈细胞,根据其表面标记,DC分为髓系DC(myeloid-DC,mDC)和浆细胞样DC(plasmacytoid-DC,pDC)两个大的亚群,前者主要用于抗肿瘤免疫治疗,后者主要参与免疫耐受.
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CTLA4Ig诱导T细胞对氧化修饰低密度脂蛋白无能的体外研究
目的 在体外诱导T细胞对氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)的免疫无能,以期预防免疫损伤在动脉粥样硬化(AS)发病中的作用,为防治AS提供新的思路.方法 分离外周血单个核细胞诱导树突状细胞(DC).分别加入LPS、LDL、ox-LDL等刺激48 h,与同种异体淋巴细胞行混合淋巴细胞反应(MLR).ox-LDL组的MLR中,分别加入不同浓度的CTLA4Ig,以MTY法检测T细胞的增殖.流式细胞仪检测MLR中T细胞活化和T细胞凋亡.ELISPOT检测MLR中T细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-4的情况.结果 ox-LDL组MTT中的刺激指数(SI)明显高于LDL组(DC:T-1:5,1.6717±0.3152 vs 1.4250±0.2874,P<0.05;DC:T=1:10,1.5458±0.2748 vs 1.3352士0.2991,P<0.05);应用CTLA4Ig后,SI较未应用时明显降低(CTLA4Ig 1.25 Ixg/ml,0.96±0.30 vs 1.64±0.33,P<0.01;CTLA4Ig0.62μg/ml,1.12±0.33 vs 1.64±0.33,P<0.05;CTLA4Ig 0.31μg/ml,1.29±0.28vs 1.64±0.33,P<0.05);CTLA4Ig可明显减少T细胞CD25的表达(CTLA4Ig 1.25μg/ml,11.26士0.58 vs 14.25±1.02,P<0.05;CTLA4Ig 10μg/ml,8.42±0.45,P<0.01),增加T细胞的凋亡(CTLA4Ig 1.25μg/ml,12.54±3.69 vs 6.09±2.24,P<0.05;CTLA4Ig 10μg/ml,26.87±5.06 vs 6.09±2.24,P<0.01).ELISPOT表明,CTLA4Ig可减少IL-2(CTLA4Ig 1.25μg/ml,386±42 vs 534±54,P<0.05;CTLA4Ig 10μg/ml,230±27 vs 534±54,P<0.01)和IFN-γ(CTLA4Ig 1.25μg/ml,445±48 v8672±46,P<0.05;CTLA4Ig 10μg/ml,193±39 vs 672±46,P<0.01)的ELISPOT计数,增加IL-4的ELISPOT计数(CTLA4Ig 1.25μg/ml,401±32 vs 332±41,P<0.05;CTLA4Ig 10μg/ml,453±57 vs332±41,P<0.05).结论 CTLA4Ig可在体外诱导T细胞对ox-LDL的免疫无能;CTLA4Ig通过抑制T细胞活化、诱导T细胞凋亡和促进TH1/TH2免疫偏移等机制,诱导T细胞免疫无能.
关键词： 动脉粥样硬化 免疫耐受 树突状细胞 氧化修饰低密度脂蛋白 -
寡肽VLPALPQ对小鼠妊娠耐受的免疫调节作用
目的 观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VLPALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制.方法 在BALB/c×C57BL/6小鼠孕7.5 d注射dsRNA以建立诱发性流产模型,孕期多次腹腔注射VLPALPQ进行干预,对照组以PBS代替.分别计算孕9 d和13 d胚胎吸收率,并用4色流式细胞术分析外周血和胎盘中多种淋巴细胞亚群及CD45+细胞内IL-12的变化.结果 VLPALPQ处理组孕9 d时胚胎吸收率较诱发性流产组有明显下降(P＜0.05),孕13 d时下降更为显著(P＜0.01).与此相应,外周血和胎盘中CD45+细胞内IL-12的表达均显著下降(P＜0.01),胎盘中活化型淋巴细胞比率也显著下降.另外,孕13 d时共刺激因子CD86的表达也明显减少.结论 VLPALP可通过抑制免疫细胞的活性,减弱IL-12的表达,阻断dsRNA所引起的TH1型免疫反应的增强,从而降低小鼠的流产率.
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可溶性MOG35-55对实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用分析
目的 探讨可溶性髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)预防和治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的机制.方法 通过临床评分、免疫组化、细胞计数等方法,评价腹腔注射可溶性MOG35-55的治疗效果,卵清白蛋白(OVA)作为对照;运用过继转移试验、Transwell试验、流式细胞术,分析体内、体外MOG35-55、OVA对MOG-T细胞迁移、脾脏抗原提呈细胞(APCs)活化的作用.结果MOG35-55抑制中枢神经系统(CNS)淋巴细胞浸润,预防EAE;MOG35-55抑制MOG-T细胞向CNS迁移,抑制外周淋巴器官萎缩;MOG35-55诱导脾脏APCs活化,活化APCs可招募MOG-T细胞、影响MOG-T细胞迁移.结论 MOG35-55通过诱导脾脏APCs活化、APC-T相互作用,抑制MOG-T细胞向CNS迁移,预防EAE.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫耐受 抗原提呈细胞 细胞迁移 -
大鼠胚胎胸腺和后肾原基联合异种移植与诱导免疫耐受的初步研究
目的 将大鼠胚胎胸腺与后肾原基联合移植至无胸腺裸小鼠,探讨联合移植能否重建受体细胞免疫功能并诱导受者对异种供者器官的特异性免疫耐受的关系.方法 从受孕第15天(E15)的Lewis大鼠胚胎中提取胸腺、后肾原基,分别植入BALB/c裸小鼠腹腔右肾包膜下及大网膜内.移植后第10周,行胸腺、后肾移植物的形态学检查及移植后肾的功能检测；并进行外周血T淋巴细胞流式细胞学检测、单向混合淋巴细胞反应(MLR)及皮肤移植试验.结果 移植后第10周,移植胸腺及后肾形态发育良好.移植后肾显示一定的排泄功能,联合移植受体双肾切除后的生存时间明显延长(P＜0.05).联合移植受体的外周血T淋巴细胞重建良好；其淋巴细胞对胸腺供体来源的Lewis大鼠脾细胞的刺激呈特异性低反应(P＜0.01)；且胸腺供体来源的大鼠移植皮片平均存活时间明显大于C57BL/6小鼠、BN大鼠移植皮片存活时间(P＜0.01).结论 E15 Lewis大鼠胚胎胸腺、后肾原基联合移植至细胞免疫缺陷的裸小鼠,移植物可生长分化形成器官并发挥功能,受体裸小鼠能重建免疫功能,并有可能诱导对同源供体器官的特异性异种移植免疫耐受.
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花粉症患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量和功能变化研究
目的 检测花粉症患者在发作期外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)数量和功能变化,探讨Tregs在花粉症患者病情发生、发展中的作用.方法 收集20例确诊为花粉症患者(花粉症组),20例尘螨过敏哮喘患者(尘螨过敏哮喘组)和20例健康儿童(健康对照组)外周血,流式细胞术检测外周血中单个核细胞(PBMC)中的CD4+CD25+Treg数量.采用磁珠分选技术分选花粉症组患者和健康对照组儿童的CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T细胞(Teff),采用MTT法检测CD4+CD25+Treg对自身CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用;提取各组PBMCs的总RNA,RT-PCR法检测TGF-β1、Foxp3 mRNA的表达水平.结果 本研究共入组花粉症患者20例,男9例,女11例,平均年龄(10.3±4.3)岁;尘螨过敏哮喘患者20例,男10例,女10例,平均年龄(11.5±3.8)岁;健康对照组儿童20例,男12例,女8例,平均年龄(12.1±4.6)岁.在季节发作期内,花粉症患者外周血Treg数量[(1.82±0.82)％]显著低于尘螨过敏哮喘组[(2.96±1.34)％]以及健康对照组[(5.78±2.29)％],差异均有统计学意义(P均<0.05).花粉症组外周血Foxp3 mRNA基因表达水平为(0.46±0.25),均低于尘螨过敏哮喘组(0.64±0.31)和健康对照组(1.04±0.21),差异均有统计学意义.花粉症组、尘螨过敏哮喘组患者外周血TGF-β1 mRNA基因表达水平分别为0.34±0.27和0.43±0.31,与健康对照组(0.99±0.34)相比均显著降低.花粉症组外周血CD4+CD25+Treg对自身Teff增殖的抑制率为(17.1±8.4)％,显著性低于尘螨过敏哮喘组[(21.4±9.1)％]和健康对照组[(36.0±13.9)％],差异具有统计学意义(P均<0.05).结论 花粉季节发作期内Tregs数量降低和功能缺陷可能是花粉症患者病情发生发展的重要诱因之一.
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慢性HBV感染者外周血CD4+CD25high调节性T细胞初步分析
目的 分析不同临床乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的水平及其与各种临床指标的关系.方法 采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者(HBsAb+组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐受期组10例)及12例健康成人外周血标本,流式细胞仪分析外周血中CD4+CD25high Treg含量,ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,RT-PCR法检测HBV DNA载量,同时进行肝脏生化功能检测,并进行统计学分析.结果 HBV慢性感染者[(12.35±6.48)个/μl;(1.82 4-0.87)%)]及健康成人外周血标本[(8.91±3.11)个/μl,(1.35±0.39)%]中CD4+CD25highTreg绝对计数和其占CD4+T细胞百分含量差异均无统计学意义(P＞0.05);分组分析发现,免疫耐受期组CD4+CD25highTreg占CD4T细胞百分含量高于HBsAb+组、活动肝炎组及健康对照组(P＜0.05);免疫耐受期组CD4+CD25highTreg绝对计数高于健康对照组(P＜0.05);余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).分析CD4+CD25highTreg含量与临床指标间相关性发现,CD4+CD25highTreg占CD4+T细胞百分含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈负相关(r=-0.418,P=0.038),与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.344,P=0.021),与HBV DNA水平无相关性(r=0.118,P＞0.05);CD4+CD25highTreg绝对计数与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.360,P=0.015),与ALT水平及HBV DNA水平无相关性(r=-0.211,r=-0.060,P＞0.05).结论 CD4+CD25highTreg在HBV慢性感染的免疫发病机制中可能发挥一定作用.
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系统性红斑狼疮患者PDCD-1表达及其与发病相关性的研究
程序性细胞死亡-1(programmed cell death-1, PDCD-1)分子,是相对分子质量(Mr)55×103的免疫球蛋白超家族Ⅰ型跨膜糖蛋白,是一种重要的下调型共刺激因子,共刺激信号的平衡在保持自身免疫耐受中起到了重要的作用.系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是自身免疫疾病的原型,机体丧失了正常的免疫耐受平衡,淋巴细胞异常活化,不能正确识别自身组织导致疾病发生.在对瑞典和冰岛SLE家族易感基因研究中发现编码PDCD-1的2q37.3位点与SLE发病有很强的相关性[1].
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免疫失耐受在ITP自身抗体产生机制中的研究进展
原发免疫性血小板减少症( primary immune thrombocytopenia, ITP)是一种器官特异性自身免疫出血性疾病。虽然ITP的病因至今还不明确,但一般认为对血小板自身抗原的免疫耐受丧失是ITP发病的根本原因。维持免疫耐受的机制主要包括自身反应性淋巴细胞的清除(凋亡)、受体编辑、克隆诱导无能和调节性免疫细胞的抑制作用等,调控机制一旦失效,将导致自身反应性淋巴的过度活化及增殖,终导致靶向血小板和巨核细胞表面糖蛋白的自身抗体的产生。对ITP自身抗体产生机制的深入认识为其更好地诊断治疗提供理论依据。
关键词： 原发免疫性血小板减少症 自身抗体 免疫耐受 -
调节性B细胞与免疫相关性疾病的关系
近些年来，人们发现B细胞除具有产生各种抗体、发挥体液调节作用之外，还存在一种类似于调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的、可以调节免疫应答的细胞亚群--调节性 B 细胞（ regulatory B cell， Breg ）。近研究表明，与 Treg 的亚型（ Tr1、Tr3、T FoxP3＋）相对应， Breg 亦具有 Br1、Br3、B FoxP3＋亚型［1］。 Breg通过产生抑制性细胞因子（白细胞介素-10， IL-10；转化生长因子-β， TGF-β）或分泌抑制性抗体影响其他免疫细胞，在免疫调节中发挥作用［2］。 Breg与免疫耐受、自身免疫性疾病、过敏性疾病、肿瘤、感染等具有重要关系，本文将对Breg与免疫相关性疾病的关系做一综述。
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OX40/OX40L在诱导移植免疫耐受中的研究进展
OX40(CD134)是T细胞表面的一种共刺激分子,其与抗原提呈细胞(antigen presen-ting cell,APC)表面的OX40L(CD252)结合,参与T细胞活化第二信号的传导,对T细胞的增殖、分化、存活、迁移具有重要的意义.通过阻断OX40/OX40L共刺激途径理论上可抑制免疫功能,在诱导T细胞克隆无能进而诱导免疫耐受中存在着不可忽视的潜能.本文就OX40/OX40L在诱导移植免疫耐受中的研究进展做一综述.
关键词： OX40/OX40L 器官移植 免疫耐受 -
调节性B淋巴细胞研究进展
免疫系统依赖于一系列的调节机制来控制免疫应答的强度,包括调节性T淋巴细胞、抑制性细胞因子和抑制性膜分子等.近年研究发现,在某些条件下,B淋巴细胞同样可以发挥一定的免疫调节作用.同调节性T淋巴细胞相似,调节性B淋巴细胞介导的免疫抑制对维持免疫耐受有重要作用.调节性B淋巴细胞通过直接同T淋巴细胞接触或者分泌抑制性的细胞因子来抑制有害的免疫应答.目前调节性B淋巴细胞的研究引起了各国研究者的广泛关注,近年已经有许多研究论文和综述发表~([1-4]),现概要介绍其现状和发展近况.
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NK细胞免疫调节功能的前沿问题--"NK-reg"是否存在
免疫系统通过识别自我和非我保护机体免受外来病原体的侵袭,同时又通过对自身抗原的免疫耐受来防止自身免疫性疾病的发生.不适当的免疫应答,如对自身抗原产生应答,对外来病原体产生免疫耐受或应答过强,均会对机体造成严重损伤.
